蛆激酶制备方法及其用途与流程

技术特征：
1.蛆激酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：a.原料蝇蛆洗净，加入匀浆剂后进行匀浆；b.对匀浆液进行离心，收集上清液a；c.在上清液a中加入硫酸铵饱和度达到25％
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35％，静置，析出蛋白沉淀，离心，收集上清液b；d.在上清液b中补充硫酸铵至65％
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75％饱和度，静置，离心，弃上清，收集沉淀；e.沉淀用蒸馏水溶解，得到溶液c；f.对溶液c进行透析或超滤，除去溶液c中盐离子，至电导率小于200μs/cm，得到溶液d；g.调节溶液d为ph 4
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8，得到溶液e；h.溶液e用滤膜过滤，进行层析，目标蛋白吸附在离子交换层析柱上；i.用洗脱液洗脱层析柱，收集有活性的洗脱峰溶液f；j.对溶液f进行透析或超滤，除去溶液f中盐离子，得到溶液g；k.溶液g浓缩，冷冻干燥，得到蛆激酶粗品。2.蛆激酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：a.原料蝇蛆洗净，加入匀浆剂后进行匀浆；b.对匀浆液进行离心，收集上清液a；c.在上清液a中加入硫酸铵饱和度达到25％
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35％，静置，析出蛋白沉淀，离心，收集上清液b；d.在上清液b中补充硫酸铵至65％
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75％饱和度，静置，离心，弃上清，收集沉淀；e.沉淀用蒸馏水溶解，得到溶液c；f.对溶液c进行透析或超滤，除去溶液c中盐离子，至电导率小于200μs/cm，得到溶液d；g.调节溶液d为ph 4
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8，得到溶液e；h.溶液e用滤膜过滤，进行层析，目标蛋白吸附在离子交换层析柱上；i.用洗脱液洗脱层析柱，收集有活性的洗脱峰溶液f；j.对溶液f进行透析或超滤，除去溶液f中盐离子，得到溶液g；l.蛆激酶的精制：将步骤j获得的溶液g平衡至ph6.5
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8，利用含有丝氨酸蛋白酶吸附配体的填料对溶液g中蛆激酶进行亲和吸附，利用洗脱液洗脱，获得有活性的洗脱液h；m:对溶液h进行透析或超滤，除去溶液h中盐离子，得到溶液i；n：将溶液i浓缩，冷冻干燥，得到蛆激酶精制品。3.根据权利要求1或2所述的蛆激酶的制备方法，步骤a中所述原料选自家蝇属(例如家蝇和市蝇)幼虫、丽蝇科(例如金蝇属大头金蝇、绿蝇属丝光绿蝇)幼虫、厕蝇属(夏厕蝇、元厕蝇)幼虫；匀浆剂选自蒸馏水和pbs缓冲液。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的蛆激酶的制备方法，步骤g中，采用柠檬酸缓冲液或pbs缓冲液调节ph。5.根据权利要求1
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4中任一项所述的蛆激酶的制备方法，步骤h中，所述层析柱选自cm
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52、deae
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32和deae
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52。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的蛆激酶的制备方法，步骤i中，所述洗脱液选自nacl pbs、kcl pbs。7.根据权利要求2
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6中任一项所述的蛆激酶的制备方法，步骤k、n中，溶液g的浓缩方法
包括利用超滤装置截留2000
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50000分子量的物质，进行浓缩，或利用分子量大于12000的peg进行浓缩。8.根据权利要求2
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7中任一项所述的蛆激酶的制备方法，步骤l的亲和层析填料接枝有选自以下任意一种的配体：苯甲脒、对氨基苯甲脒、对氨基苯脒盐酸盐、精氨酸、慈菇蛋白酶抑制剂、大豆胰蛋白酶抑制剂和卵黏蛋白。9.蛆激酶，其根据权利要求1
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8中任一项所述的方法制备。10.根据权利要求1
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8中任一项所述的方法制备的蛆激酶在制备溶栓药物、抗栓药物中的用途。

技术总结
本发明提供蛆激酶的制备方法，所述方法包括蝇蛆的预处理、盐析、透析或超滤、离子交换层析柱层析、洗脱，以获得蛆激酶粗制品。所述方法还包括采用含有丝氨酸蛋白吸附配体的填料进行亲和层析、洗脱，从而获得蛆激酶精制品。本发明获得的蛆激酶具有将纤维蛋白及纤维蛋白原降解的高活力，为溶栓药物的开发和利用提供了坚实的基础。坚实的基础。


技术研发人员：刘灿 刘秋荻 马彤瑶 马兰青 荣龙 张凯欣 戴隆海 雷梦 孙祎振 郭蓓 孙媛霞
受保护的技术使用者：刘灿
技术研发日：2021.10.14
技术公布日：2021/12/7