一种鳜鱼脊髓组织细胞系及其构建方法与应用与流程

技术特征：
1.一种鳜鱼脊髓组织细胞系，其特征在于，于2021年08月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为cctcc no：c2021226，名称为：鳜鱼脊髓组织细胞系ssc。2.权利要求1所述的鳜鱼脊髓组织细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、脊髓组织的处理：取鳜鱼脊髓组织并进行消毒、切块，处理后浸泡待用；步骤2、原代培养：取步骤1处理后的鳜鱼脊髓组织经胰酶消化液消化后进行原代培养；步骤3、传代培养：原代培养细胞汇合度达60
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90％时进行传代培养，每5
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7天传代一次。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述的步骤1中取鳜鱼脊髓组织并进行消毒、切块，处理后浸泡待用具体为：取鲜活鳜鱼，用75％酒精对鳜鱼进行消毒，无菌条件下解剖取脊髓组织，切块，浸泡于漂洗液进行漂洗。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述的步骤1中所述的漂洗液为含有400iu/ml青霉素、400μg/ml链霉素的hbss溶液。5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述的步骤2中取步骤1处理后的鳜鱼脊髓组织经胰酶消化液消化后进行原代培养具体为：将步骤1得到的脊髓组织加入胰酶消化液，在室温下消化20
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30min，消化后收集细胞悬液；将细胞悬液加入1
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2ml含血清的培养液终止消化，并用100μm滤网过滤，吸取滤液1200rpm离心5min，弃上清，沉淀中加入增值培养液重悬，重悬后，置于24
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28℃恒温培养箱进行培养，每2
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3天按半量换液方式更换增值培养液。6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述的胰酶消化液为0.5％trypsin
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edta(10x)；所述的增值培养液为含有20％胎牛血清、100iu/ml青霉素、100μg/ml链霉素的l15培养液。7.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述的步骤3中原代培养细胞汇合度达60
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90％时进行传代培养，每5
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7天传代一次具体为：原代培养细胞长至汇合度达60
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90％时，加入胰蛋白酶消化，用传代培养液悬起细胞，然后接种于培养瓶内在24
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28℃培养箱中培养，每5
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7天传代一次。8.根据权利要求7所述的构建方法，所用传代培养液为含有10
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15％胎牛血清、100iu/ml青霉素、100μg/ml链霉素的l
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15培养液。9.权利要求1所述的鳜鱼脊髓组织细胞系在鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、鳜鱼蛙虹彩病毒、鳜鱼弹状病毒分离、培养、检测和疫苗制备中的应用。

技术总结
本发明公开了一种鳜鱼脊髓组织细胞系及其构建方法与应用，该鳜鱼脊髓组织细胞系，于2021年08月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C2021226，名称为：鳜鱼脊髓组织细胞系SSC。上述的鳜鱼脊髓组织细胞系可应用于鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、鳜鱼蛙虹彩病毒、鳜鱼弹状病毒分离、培养、检测和疫苗制备中。本发明为分离、鉴定鱼类病毒及病毒疫苗制备提供重要研究平台和实验材料。制备提供重要研究平台和实验材料。制备提供重要研究平台和实验材料。


技术研发人员：潘晓艺 沈锦玉 蔺凌云 姚嘉赟 尹文林 巩金鹏 刘忆瀚
受保护的技术使用者：浙江省淡水水产研究所
技术研发日：2021.10.11
技术公布日：2021/12/7