一种片姜黄配方颗粒的质量控制方法与流程

1.本发明涉及中药制备领域，具体涉及一种片姜黄配方颗粒的质量控制方法。


背景技术：

2.片姜黄为姜科植物温郁金的干燥根茎，味辛、苦，性温，归脾、肝经。具破血行气、通经止痛之功效，临床用于血滞经闭，行经腹痛，风湿痹痛，肩臂疼痛，跌打损伤。临床上应用广泛，常用于治疗类风湿关节炎、骨关节炎导致的关节疼痛等，其主要含有倍半萜类、单萜类、姜黄素类化合物。现代药理研究表明其有抗炎镇痛、抗氧化、抗肿瘤、抗血栓凝血等作用，其药理作用主要与其含有的倍半萜类化合物有密切的相关性。
3.中药汤剂是临床用药的主要形式，其发挥疗效的基础是标准汤剂中成分，因此对标准汤剂中的成分的种类及量进行控制，更符合临床的要求，可保证用药的有效性。中药配方颗粒是以传统中药饮片为原料，经过提取、浓缩、干燥、制粒等生产工艺，加工制成的一种统一规格、统一剂量、统一质量标准的新型配方用药。它是以中药标准汤剂为基础，在中医理论指导下使用，与传统中药汤剂相比，具有服用方便、易贮藏、便携带、质量可控等特点。片姜黄配方颗粒作为临床常用品种，故建立其水溶性成分质量控制方法具有重要的研究意义。
4.目前对于片姜黄含量测定及特征图谱方面的质控研究较少，未查阅到对片姜黄配方颗粒的质控研究报道，部分学者采用hplc对片姜黄药材及饮片特征图谱方法进行了建立，多选用吉马酮为指标成分，但吉马酮极性较小，水溶性较差，在标准汤剂中几乎不溶出，因此现有技术中公开的该方法仅适用于片姜黄药材及半成品检测，其作为片姜黄配方颗粒质量指标有待商榷。


技术实现要素：

5.因此，本发明提供一种针对片姜黄配方颗粒的质量控制方法，具体为：采用质量评价的新指标成分对片姜黄配方颗粒的质量进行控制，即，本发明选用以含量较高且相对稳定的莪术烯醇作为片姜黄配方颗粒的质量评价指标成分，结合其他指标成分进行共同控制，实现片姜黄配方颗粒的整体质量控制，判断更加准确、客观、符合临床用药需求。
6.一种片姜黄配方颗粒的质量控制方法，包括采用高效液相色谱法获得供试品溶液的特征图谱，该特征图谱中以莪术烯醇的色谱峰为参照峰s，计算出各个特征峰与参照峰s的相对保留时间，其中至少具有3个特征峰的相对保留时间在规定值的
±
10％以内，所述规定值为：0.28、0.76、1.25。
7.所述的高效液相色谱法的色谱条件为：
8.色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；检测波长：240～270nm；以乙腈为流动相a，以0.05％～0.15％质量浓度的磷酸溶液为流动相b，按以下梯度洗脱程序进行洗脱：
[0009][0010][0011]
对照药材参照物溶液的制备：取片姜黄对照药材约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入溶剂25ml，称定重量，预处理，取出，放冷，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，作为对照药材参照物溶液。
[0012]
对照品参照物溶液的制备：另取莪术烯醇对照品适量，精密称定，加溶剂制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品参照物溶液。
[0013]
供试品溶液：取供试品，加入溶剂混合均匀后，称定重量，预处理，冷却后再称定重量，用溶剂补足减失的重量，摇匀，过滤后获得滤液，滤液即为供试品溶液。
[0014]
所述预处理为超声处理，超声处理的时间为20～60min，超声处理的功率为250w、频率为40khz，供试品溶液浓度为0.1g/25ml～0.4g/25ml，具体为0.004～0.016g/ml，溶剂为质量浓度为30％～100％的甲醇或30％～100％的乙醇。
[0015]
所述高效液相色谱法中色谱柱的柱温38～42℃；流速0.38～0.42ml/min，理论板数按莪术烯醇计算应均不低于3000。
[0016]
本发明还包括对片姜黄配方颗粒中质量评价指标成分的定量控制，本发明中的质量评价指标成分包括但不限于莪术烯醇，因此，本发明中质量评价指标成分的定量控制包括但不限于：控制莪术烯醇在片姜黄配方颗粒中的含量不低于4.5mg/g。
[0017]
所述莪术烯醇的含量采用高效液相色谱法进行测定，检测时采用莪术烯醇作为对照品，对照品溶液的制备方法为：采用对照品莪术烯醇加入溶剂配制成对照品溶液。
[0018]
所述溶剂为质量浓度30％～100％的甲醇或质量浓度30％～100％的乙醇。
[0019]
所述莪术烯醇的含量检测所用的高效液相色谱法的检测波长为260nm，所述特征图谱检测所用的高效液相色谱法的检测波长为240nm。
[0020]
采用不同浓度的莪术烯醇作为对照品，以莪术烯醇色谱峰的峰面积为纵坐标，莪术烯醇的浓度为横坐标，绘制标准曲线；求得莪术烯醇的回归方程为y＝4542.0025x 1445.5373，r＝1.0000，其线性范围为6.844μg/ml～219.010μg/ml，根据供试品获得的莪术烯醇色谱峰的峰面积，进而计算出莪术烯醇在片姜黄配方颗粒中的含量。
[0021]
本发明技术方案，具有如下优点：
[0022]
1.本发明提供的质量控制方法，其并未采用现有文献报道的吉马酮为指标成分进行质控，而是深入对片姜黄配方颗粒的成分进行研究，采用能够更好地转移到片姜黄标准
汤剂中的莪术烯醇作为指标成分进行质控，同时还对特征图谱中特征峰进行标注，对标注的特征峰与莪术烯醇的特征峰的相对保留时间进行控制，当特征图谱中标注的特征峰的相对保留时间在规定值的
±
10％以内，进而实现了通过莪术烯醇和其他质量评价指标成分的共同控制，达到片姜黄配方颗粒的整体质量控制的目的，本发明对片姜黄配方颗粒的质量判断更加准确、客观、符合临床用药需求；
[0023]
并且，通过本发明的方法还能有效实现物质传递过程的质量控制，具体为：可以有效实现配方颗粒制备过程中中间品(提取液、浓缩液、干燥物)的质量控制，有效使最终制备得到的片姜黄配方颗粒的成分能够与标准汤剂冻干粉基本一致。
[0024]
2.本发明进一步优化获得特征图谱的色谱条件，包括流动相的优化，以及梯度洗脱程序的优化，能够有效改善峰形，提高色谱峰分离度，并且能达到检测更加高效、灵敏、准确的效果，节约检测时间以及检测成本。
[0025]
3.本发明还同时针对其含量较高的莪术烯醇进行了定量控制，即，控制莪术烯醇在片姜黄配方颗粒中的含量不低于4.5mg/g。本发明在保证转移率较高成分种类的基础上又针对重点成分进行控制，符合临床用药的质控需求，可保证临床用药的有效性，具有显著的进步。
附图说明
[0026]
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]
图1是本发明实施例1中其中一批片姜黄标准汤剂冻干粉与莪术烯醇对照品的对照图谱。
[0028]
图2是本发明实施例1中检测波长为240nm时获得的片姜黄标准汤剂冻干粉的标准特征图谱。
[0029]
图3是合格和不合格两批次工艺制备出的片姜黄配方颗粒的特征图谱对比图。
[0030]
图4是对比例1中一批片姜黄标准汤剂冻干粉与对照药材参照物溶液的对照图谱。
[0031]
图5是本发明实施例5中检测波长为270nm时获得的片姜黄标准汤剂冻干粉的标准特征图谱。
[0032]
图6是本发明实施例1中合格的片姜黄配方颗粒的制备过程中各个步骤所得的中间产物的特征图谱。
具体实施方式
[0033]
实施例1
[0034]
一种片姜黄配方颗粒的质量控制方法，包括采用高效液相色谱法获得供试品溶液的特征图谱，该特征图谱中以莪术烯醇的色谱峰为参照峰s，计算出各个特征峰与参照峰s的相对保留时间，其中至少具有3个特征峰的相对保留时间在规定值的
±
10％以内，所述规定值为：0.28、0.76、1.25。
[0035]
本实施例中该高效液相色谱法的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充
剂，waters beh c18色谱柱，色谱柱的柱长为100mm，柱内径为2.1mm，粒径为1.7μm；以乙腈为流动相a，0.1％磷酸为流动相b，按下表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为240nm；柱温40℃；流速0.4ml/min。理论板数按莪术烯醇计算应均不低于3000。
[0036]
表1
[0037][0038]
本发明中对照药材参照物溶液的制备过程为：取片姜黄对照药材约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)40分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得，作为对照药材参照物溶液。
[0039]
本发明中对照品参照物溶液的制备过程为：另取莪术烯醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品参照物溶液。
[0040]
本发明中供试品溶液的制备过程为：取供试品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250w，频率40khz)40分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0041]
本发明中片姜黄标准汤剂的制备工艺为：取片姜黄饮片适量，浸泡30分钟，一煎加入饮片量8倍水，武火(500w)煮沸后，文火煎煮30分钟，趁热过滤，迅速冷却，备用；二煎加饮片量6倍水，武火煮沸后，文火(200w)煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却；合并滤液获得片姜黄标准汤剂。
[0042]
片姜黄标准汤剂冻干粉的制备工艺为：采用片姜黄标准汤剂在50℃条件下浓缩，浓缩至料液比约为1:1(相对密度为1.05-1.10)时，冷冻干燥，即得。
[0043]
本实施例中采用20批片姜黄饮片制备得到的片姜黄标准汤剂冻干粉作为供试品进行测定，获得姜黄标准汤剂冻干粉的特征图谱，其中一个批次的片姜黄标准汤剂冻干粉与莪术烯醇对照品的对照图谱如图1所示。根据获得的片姜黄标准汤剂冻干粉的特征图谱使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012.1版本)，得出标准特征图谱，并进行共有峰的标识，共标识4个共有峰，同时与对照药材参照物色谱中的4个特征峰保留时间相对应，如图2所示。其中，峰3为莪术烯醇所对应的参照峰s，20批片姜黄标准汤剂的4个共有峰的相对保留时间的检测结果如表2所示。
[0044]
表2
[0045][0046][0047]
通过表2可知：各特征峰相对保留时间差异较小，均在
±
10％范围内，符合质量控制要求。
[0048]
同时对各特征峰的相对峰面积进行了测定，检测结果如下表3所示。
[0049]
表3
[0050][0051][0052]
通过表3可知：相对峰面积的差异较大，其rsd值为25.3％～67.0％，因此，对相对峰面积不做质量控制。
[0053]
采用相同的检测方法对取得的3批片姜黄饮片制备得到的片姜黄配方颗粒进行测定，结果如下表4所示。3批片姜黄饮片制备得到的片姜黄配方颗粒的具体工艺如下：
[0054]
取片姜黄饮片，提取两次，一煎加8～10倍水，提取1.5小时，同时收集挥发油，药液150目滤布趁热过滤，二煎加8～10倍水，提取1.5小时，同时收集挥发油，药液150目滤布趁热过滤，两煎药液合并，获得提取液，70℃减压浓缩，至密度为1.05-1.10(60℃)获得浓缩液，取挥发油适量，用β-环糊精包合，包合物与浓缩液混合，加辅料适量，喷雾干燥获得干燥物，进风温度为160℃-180℃，干法制粒，即得。
[0055]
表4
[0056][0057]
通过表4可知：片姜黄配方颗粒三批生产验证的特征图谱中均呈现4个特征峰，以峰3(莪术烯醇)为s峰，计算各特征峰的相对保留时间，均在规定值
±
10％范围内。
[0058]
采用如下不合格工艺制备一批片姜黄配方颗粒：
[0059]
取片姜黄饮片，提取两次，一煎加8～10倍水，提取1.5小时，同时收集挥发油，药液150目滤布趁热过滤，二煎加8～10倍水，提取1.5小时，同时收集挥发油，药液150目滤布趁热过滤，两煎药液合并，70℃减压浓缩，至密度为1.05-1.10(60℃)，取挥发油适量，与浓缩液混合，加辅料适量，喷雾干燥，进风温度为160℃-180℃，干法制粒，即得。
[0060]
该工艺与合格工艺主要区别为挥发油未进行包合，与浓缩液直接喷雾干燥。采集该不合格工艺取得的片姜黄配方颗粒的特征图谱，其中，批号为kl190617-611930-02的片姜黄配方颗粒与该不合格工艺制备得到的片姜黄配方颗粒的特征图谱对比图如图3所示。同时，对批号为kl190617-611930-02的片姜黄配方颗粒的制备过程中各个步骤所得的中间产物(提取液、浓缩液、挥发油以及干燥物)进行检测，获得的特征图谱对比图如图6所示。
[0061]
通过图3的对比可知，挥发油未包合所制成的片姜黄配方颗粒图谱中特征峰4缺失。通过图6可知：图谱中的4号峰为挥发油成分，由于提取过程中挥发油提取不完全，提取液中仍含有少量挥发油，故提取液呈现4个特征峰，但在浓缩过程中造成挥发油损失，故浓缩液图谱中4号峰缺失，加入挥发油包合物干燥后，干燥物图谱中又重新呈现4个特征峰，见图6，因此，本发明的质量控制方法能够有效实现片姜黄配方颗粒的质量控制，使其成分能够与标准汤剂基本一致。
[0062]
实施例2
[0063]
本实施例采用常规的方法对特征图谱的精密度、重复性和稳定性进行验证，具体如下：
[0064]
取6份供试品溶液，获得其特征图谱，以莪术烯醇峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算rsd。结果各特征峰的相对保留时间rsd在0.0％～0.1％范围内，相对峰面积的rsd在0.2％～2.4％范围内，表明该特征图谱的重复性较好。
[0065]
采用waters uplc h-class，tuv检测器，取供试品溶液，获得其特征图谱，以莪术烯醇峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算rsd。结果采用waters uplc h-class，tuv检测器获得的特征图谱中，各特征峰的相对保留时间一致，相对峰面积的rsd在0.2％～2.4％范围内。不同仪器间相对保留时间rsd范围是0.4％～1.4％，相对峰面积
rsd％范围是2.2％～7.0％，表明该特征图谱的在不同仪器间相对保留时间、相对峰面积符合分析要求。
[0066]
取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12、24h按上述优选的方法测定，获得其特征图谱，以莪术烯醇峰为参照峰，计算其相对峰面积和相对保留时间。并计算rsd。结果各特征峰的相对保留时间rsd在0.0％～0.1％范围内，相对峰面积的rsd在0.4％～1.1％范围内，表明溶液中特征成分在24小时稳定性较好。
[0067]
实施例3
[0068]
本实施例提供了片姜黄配方颗粒的质量控制方法，其除了实施例1中记载的特征图谱的质量控制以外，还包括对片姜黄配方颗粒中质量评价指标成分的定量控制，包括控制莪术烯醇在片姜黄配方颗粒中的含量不低于4.5mg/g。
[0069]
本实施例中采用的色谱条件与实施例1基本相同，不同点仅仅在于检测波长调整为260nm后进行检测。
[0070]
采用本实施例的色谱条件，先进行莪术烯醇标准曲线的绘制，得到求得莪术烯醇的回归方程为y＝4542.0025x 1445.5373，r＝1.0000，其线性范围为6.844μg/ml～219.010μg/ml。
[0071]
然后采用本实施例的检测方法进行20批次片姜黄标准汤剂冻干粉的检测，然后将检测结果代入莪术烯醇的回归方程计算获得莪术烯醇含量的百分比含量，然后折算成片姜黄配方颗粒的莪术烯醇含量，检测结果和折算后结果如表5所示。
[0072]
表5
[0073]
[0074][0075]
通过上述表5可知：20批片姜黄标准汤剂冻干粉中莪术烯醇的含量范围为0.50％～2.31％。折算后片姜黄配方颗粒中莪术烯醇的含量范围为0.20％～0.92％。由此可知：上述20批片姜黄标准汤剂冻干粉中只有18批达到了莪术烯醇在片姜黄配方颗粒中的含量要求，满足质控标准；而批号为190916-250000-20、190916-650000-24的两批次片姜黄标准汤剂冻干粉折算成配方颗粒中莪术烯醇的含量不满足质控需求。
[0076]
采用相同的检测方法对取得的3批片姜黄饮片制备得到的片姜黄配方颗粒进行测定，检测得到莪术烯醇的含量范围的结果如下表6所示。
[0077]
表6
[0078][0079]
通过表6可知：根据以上测定结果可知，三批片姜黄配方颗粒莪术烯醇含量分别为0.53％、0.72％、0.47％，在标准含量范围内，表明该片姜黄配方颗粒与标准汤剂具有较好的一致性，符合要求。
[0080]
实施例4
[0081]
本实施例提供了对莪术烯醇含量检测方法的准确度、重复性、中间精密度、线性和稳定性进行验证的过程，具体如下：
[0082]
准确度：取莪术烯醇对照品适量，精密称定，加70％甲醇制成每1ml含有61.81μg的对照品溶液。取重复性项下已知含量的样品(190617-611930-02，莪术烯醇含量为1.521％)6份，每份约0.1g，精密称定，精密加入对照品溶液25ml(1.5452mg莪术烯醇)，按上述方法制备供试品，测定莪术烯醇的含量，并计算回收率。结果所测得的回收率范围为94.97％～96.28％，平均回收率为95.6％，rsd值为0.5％，符合方法学验证回收率要求，表明利用该方法测得的结果准确。
[0083]
重复性：取6份供试品溶液，测定莪术烯醇的含量，所测得的莪术烯醇的平均含量为1.521％，其rsd为0.3％，符合方法学验证重复性要求。
[0084]
中间精密度：不同分析人员不同时间不同仪器waters uplc h-class液相色谱仪(tuv检测器)进行中间精密度试验。取6份供试品溶液，测定莪术烯醇的含量。结果中间精密度试验所测得的莪术烯醇平均含量为1.510％，rsd值为0.7％，与重复性试验检测结果的rsd为0.5％，符合方法学验证精密度要求。
[0085]
线性：取莪术烯醇对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含莪术烯醇219.010μg的对照品溶液，作为线性1；吸取对照品溶液5ml置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，作为线性2；吸取线性2溶液5ml置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，作为线性3；重复上述操作，依次作为线性4、线性5、线性6。精密吸取上述续滤液1μl，注入超高效液相色谱仪，按正文方法测定莪术烯醇色谱峰峰面积，以莪术烯醇色谱峰的峰面积为纵坐标，莪术烯醇的浓度为横坐标，绘制标准曲线，求得莪术烯醇的回归方程为y＝4542.0025x 1445.5373，r＝1.0000，其线性范围为6.844μg/ml～219.010μg/ml。
[0086]
稳定性：按正文方法制备供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h按上述方法进行测定，记录莪术烯醇峰峰面积的变化情况，24小时内莪术烯醇的峰面积rsd值为0.5％，表明莪术烯醇的含量在24h内稳定。
[0087]
实施例5
[0088]
本实施例提供了不同检测波长下获得的标准图谱，本实施例中的检测波长为270nm，其他条件与实施例1完全相同，本实施例获得的标准图谱如图5所示。
[0089]
对比例1
[0090]
本实施例提供了一种采用吉马酮为指标成分进行质量控制的方法，具体如下：
[0091]
采用与实施例1相同的色谱条件进行质量控制时，其中一个批次的片姜黄标准汤剂冻干粉与对照药材参照物溶液的对照图谱如图4所示，通过图4可知，片姜黄标准汤剂冻干粉的特征图谱中并没有吉马酮所对应的特征峰。
[0092]
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。