一种芦根及其制剂的薄层鉴别方法与流程

1.本发明涉及中药材鉴定领域，具体涉及一种芦根及其制剂的薄层鉴别方法。


背景技术：

2.芦根为禾本科植物芦苇phragmites communis trin.的新鲜或干燥根茎。全年均可采挖，除去芽、须根及膜状叶，鲜用或晒干，具有清热泻火，生津止渴，除烦，止呕，利尿的功效，用于治疗热病烦渴，肺热咳嗽，肺痈吐脓，胃热呕哕，热淋涩痛。
3.薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术。对于芦根的薄层鉴别相关研究国内少有报道，主要是中国药典和各省中药标准中有对芦根进行薄层鉴别的方法，如中国药典对芦根薄层鉴别的方法介绍为“取本品粉末(鲜品干燥后粉碎)1g，加三氯甲烷10ml，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取芦根对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点”，但是该方法在显色过程中需要使用显色剂(磷钼酸)，过程较为繁琐，因此，需要提供一种操作简单的芦根薄层鉴别方法。


技术实现要素：

4.因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的芦根薄层鉴别方法较为繁琐的缺陷，从而提供一种芦根及其制剂的薄层鉴别方法。
5.为此,本发明提供一种芦根及其制剂的薄层鉴别方法，包括以下步骤：
6.制备对照药材溶液：将芦根对照药材加入水中，煎煮，取煎煮液，干燥，然后再加入甲醇进行超声，制得对照药材溶液；
7.制备供试品溶液：将待测芦根饮片加入水中，煎煮，取煎煮液，将煎煮液干燥，然后再加入甲醇进行超声，制得饮片供试品溶液；或
8.将待测芦根标准汤剂冻干粉和/或待测芦根配方颗粒分别加入甲醇中，进行超声，制得标准汤剂供试品溶液和/或配方颗粒供试品溶液；
9.鉴别：分别吸取对照药材溶液和供试品溶液，点于薄层板上，以展开剂展开，然后显色。
10.其中，芦根饮片、芦根标准汤剂冻干粉、芦根标准配方颗粒可以根据行业内的普通制备方法制备得到。
11.进一步地，对照药材溶液制备过程中，芦根对照药材与水的质量比为1：20～30，煎煮时间为30～50min，甲醇的质量浓度为10％～100％，甲醇的加入量为每1g芦根对照药材加入10ml～15ml甲醇，超声时间为30min～120min。
12.进一步地，饮片供试品溶液制备过程中，待测芦根饮片与水的质量比为1：20～30，
煎煮时间为30～50min，甲醇的质量浓度为10％～100％，甲醇的加入量为每1g待测芦根饮片加入10ml～15ml甲醇，超声时间为30min～120min。
13.进一步地，标准汤剂供试品溶液和/或配方颗粒供试品溶液制备过程中，每1g待测芦根标准汤剂冻干粉和/或待测芦根配方颗粒中分别加入15ml～25ml质量浓度为10％～100％的甲醇，超声时间为30min～90min。
14.进一步地，所述展开剂为体积比为5～7:1～2:1～2的环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶液。
15.进一步地，鉴别时，对照药材溶液和饮片供试品溶液的点样量为15ul，标准汤剂供试品溶液和配方颗粒供试品溶液的点样量为5ul。
16.进一步地，在365nm波长下进行显色。
17.进一步地，所述薄层板为硅胶g薄层板。
18.进一步地，所述芦根饮片为芦根饮片粉末。
19.本发明技术方案，具有如下优点：
20.1.本发明提供的芦根及其制剂的薄层鉴别方法，不需要使用显色剂，直接在365nm波长下可以显色，克服了现有技术对芦根进行薄层鉴别时需要先喷涂显色剂才能有效显色的缺陷，方法简单，同时还克服了现有的薄层鉴别方法得到的图谱斑点信息少、个别斑点分离效果较差的缺陷，而且本方法不使用有毒溶剂，通过水煎煮的方式提取芦根中水溶性的大极性物质，，利用水溶性物质对芦根进行鉴别，对水煎煮类芦根中药制剂，如标准汤剂、配方颗粒、饮片，鉴别专属性强，特别是对于芦根配方颗粒，现有技术中没有用薄层鉴别的方式对芦根配方颗粒进行鉴别的方法，本技术方案可以通过薄层鉴别的方式对芦根配方颗粒进行有效鉴别，弥补了芦根配方颗粒薄层鉴别的空白，对提高芦根配方颗粒的质量控制、保证产品质量具有重大意义。针对芦根中药制剂不同的剂型，选择合适的有效成分提取方法，在进行薄层鉴别时，可以与对照药材在相应位置显相同颜色斑点；该方法操作简便、专属性强，所使用的溶剂无毒害、不环境污染、不会对操作人员的身体健康造成伤害，易于推广使用。
21.2.本发明提供的芦根及其制剂的薄层鉴别方法，展开剂为体积比为5～7:1～2:1～2的环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸混合溶液，能够使溶液中的成分有效分离，rf值(比移值，指从基线至展开斑点中心距离与从基线至展开剂前沿的距离的比值)适中、斑点信息丰富明显、图谱清晰不拖尾、重现性好。
附图说明
22.为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
23.图1是本发明实施例1的薄层色谱图；
24.图2是本发明实施例2的薄层色谱图；
25.图3是本发明实施例3的薄层色谱图；
26.图4a和图4b是本发明实验例1的薄层色谱图；
27.图5是本发明实验例2常温下的薄层色谱图；
28.图6是本发明实验例2低温下的薄层色谱图；
29.图7是本发明实验例3湿度为75％的薄层色谱图；
30.图8是本发明实验例3湿度为20％的薄层色谱图；
31.图9是本发明实验例4薄层板为青岛海洋化工有限公司的薄层色谱图；
32.图10是本发明实验例4薄层板为烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂的薄层色谱图；
33.图11是本发明实验例5不同批次样品薄层鉴别图；
34.图12a-12d是本发明实验例6用不同浓度甲醇提取芦根样品中有效成分的薄层色谱图。
具体实施方式
35.提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
36.实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
37.仪器：camag薄层成像系统(瑞士卡玛(中国)技术支持中心)，jy20002电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)，kq-300db超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，默克硅胶g。
38.试药：芦根对照药材(121107-201706，中国食品药品检定研究院)、芦根饮片(购于河北省保定市安国市，批号20190401189；河北省保定市安平县，批号y904221)、芦根标准汤剂冻干粉、芦根配方颗粒
39.试剂：氢氧化钠、盐酸、乙酸乙酯均为分析纯。
40.实施例1
41.(1)芦根标准汤剂冻干粉制备：将芦根饮片(批号20190401189)浸泡30分钟，煎煮二次，一煎加入饮片量9倍的水，煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；二煎加入饮片量6倍的水，煎煮15分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，在50℃下浓缩至料液比1:1，冷冻干燥，即得。
42.(2)芦根配方颗粒制备：将芦根饮片(批号20190401189)浸泡30分钟，煎煮二次，一煎加入饮片量9倍的水，煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；二煎加入饮片量6倍的水，煎煮15分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液并于≤90℃下减压浓缩得到清膏，滤过，喷雾干燥，加5％糊精，混匀，干法制粒，整粒，即得。
43.(3)对照药材溶液的制备
44.称取芦根对照药材2.0g至三角瓶中加水50ml，煎煮40min，取煎煮液，干燥，加40％甲醇20ml超声处理(功率250w，频率40khz)30min，即得对照药材溶液。
45.(4)供试品溶液的制备
46.将芦根饮片(批号20190401189)制成粉末，并取粉末2.0g至三角瓶中加水50ml，煎
煮40min，取煎煮液，干燥，加40％甲醇20ml超声处理(功率250w，频率40khz)30min，即得饮片供试品溶液；
47.称取1.0g芦根标准汤剂冻干粉至三角瓶中，加40％甲醇20ml超声处理(功率250w，频率40khz)30min，即得标准汤剂供试品溶液；
48.称取1.0g芦根配方颗粒至三角瓶中，加40％甲醇20ml超声处理(功率250w，频率40khz)30min，即得配方颗粒供试品溶液。
49.(5)薄层鉴别分别吸取对照药材溶液、饮片供试品溶液15μl，标准汤剂供试品溶液、配方颗粒供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶g板上，在20cm
×
10cm的双槽展开缸中，以体积比为5:1:1的环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂展开，取出、晒干，不喷涂任何显色剂，直接置于波长为365nm的紫外灯下检视。
50.实验结果如图1所示，图中1为对照药材溶液、2-3为饮片供试品溶液、4为标准汤剂供试品溶液、5-6为配方颗粒供试品溶液。供试品溶液与对照药材溶液在相应的位置上，显相同颜色的斑点。
51.实施例2
52.(1)芦根标准汤剂冻干粉制备：将芦根饮片(批号y904221)浸泡30分钟，煎煮二次，一煎加入饮片量9倍的水，煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；二煎加入饮片量6倍的水，煎煮15分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，在50℃下浓缩至料液比1:1，冷冻干燥，即得。
53.(2)芦根配方颗粒制备：将芦根饮片(批号y904221)浸泡30分钟，煎煮二次，一煎加入饮片量9倍的水，煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；二煎加入饮片量6倍的水，煎煮15分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液并于≤90℃下减压浓缩得到清膏，滤过，喷雾干燥，加5％糊精，混匀，干法制粒，整粒，即得。
54.(3)对照药材溶液的制备
55.称取芦根对照药材2.0g至三角瓶中加水40ml，煎煮30min，取煎煮液，干燥，加10％甲醇30ml超声处理(功率250w，频率40khz)30min，即得对照药材溶液。
56.(4)供试品溶液的制备
57.称取芦根饮片(批号y904221)制成粉末，并取粉末2.0g至三角瓶中加水40ml，煎煮30min，取煎煮液，干燥，加10％甲醇30ml超声处理(功率250w，频率40khz)30min，即得饮片供试品溶液；
58.称取1.0g芦根标准汤剂冻干粉至三角瓶中，加10％甲醇25ml超声处理(功率250w，频率40khz)60min，即得标准汤剂供试品溶液；
59.称取1.0g芦根配方颗粒至三角瓶中，加10％甲醇25ml超声处理(功率250w，频率40khz)60min，即得配方颗粒供试品溶液。
60.(5)薄层鉴别分别吸取对照药材溶液、饮片供试品溶液15μl，标准汤剂供试品溶液、配方颗粒供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶g板上，在20cm
×
10cm的双槽展开缸中，以体积比为7:2:2的环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂展开，取出、晒干，不喷涂任何显色剂，直接置于波长为365nm的紫外灯下检视。
61.实验结果如图2所示，图中1为对照药材溶液、2-3为饮片供试品溶液、4为标准汤剂供试品溶液、5-6为配方颗粒供试品溶液。供试品溶液与对照药材溶液在相应的位置上，显
相同颜色的斑点。
62.实施例3
63.(1)芦根标准汤剂冻干粉制备：将芦根饮片(批号y904221)浸泡30分钟，煎煮二次，一煎加入饮片量9倍的水，煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；二煎加入饮片量6倍的水，煎煮15分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，在50℃下浓缩至料液比1:1，冷冻干燥，即得。
64.(2)芦根配方颗粒制备：将芦根饮片(批号y904221)浸泡30分钟，煎煮二次，一煎加入饮片量9倍的水，煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；二煎加入饮片量6倍的水，煎煮15分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液并于≤90℃下减压浓缩得到清膏，滤过，喷雾干燥，加5％糊精，混匀，干法制粒，整粒，即得。
65.(3)对照药材溶液的制备
66.称取芦根对照药材2.0g至三角瓶中加水60ml，煎煮50min，取煎煮液，将煎煮液旋转干燥，加纯甲醇30ml超声处理(功率250w，频率40khz)30min，即得对照药材溶液。
67.(4)供试品溶液的制备
68.称取芦根饮片(批号y904221)制成粉末，并取粉末2.0g至三角瓶中加水60ml，煎煮50min，取煎煮液，干燥，加纯甲醇30ml超声处理(功率250w，频率40khz)30min，即得饮片供试品溶液；
69.称取1.0g芦根标准汤剂冻干粉至三角瓶中，加100％甲醇15ml超声处理(功率250w，频率40khz)90min，即得标准汤剂供试品溶液；
70.称取1.0g芦根配方颗粒至三角瓶中，加100％甲醇15ml超声处理(功率250w，频率40khz)90min，即得配方颗粒供试品溶液。
71.(5)薄层鉴别分别吸取对照药材溶液、饮片供试品溶液15μl，标准汤剂供试品溶液、配方颗粒供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶g板上，在20cm
×
10cm的双槽展开缸中，以体积比为7:2:2的环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂展开，取出、晒干，不喷涂任何显色剂，直接置于波长为365nm的紫外灯下检视。
72.实验结果如图3所示，图中1为对照药材溶液、2-3为饮片供试品溶液、4为标准汤剂供试品溶液、5-6为配方颗粒供试品溶液。供试品溶液与对照药材溶液在相应的位置上，显相同颜色的斑点。
73.实验例1不同点样量考察
74.按照实施例1所述的方法制备对照药材溶液、饮片供试品溶液、标准汤剂供试品溶液和配方颗粒供试品溶液，分别吸取对照药材溶液、饮片供试品溶液、标准汤剂供试品溶液和配方颗粒供试品溶液各5、10、15、20ul，分别点于同一硅胶g板上，在20cm
×
10cm的双槽展开缸中，以体积比为5:1:1的环已烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂展开，取出、晒干，不喷涂任何显色剂，直接置于波长为365nm的紫外灯下检视。实验结果见图4a和图4b。图4a中色谱1-4分别对应于点样量为5、10、15、20ul的对照药材溶液、色谱5-8分别对应于点样量为5、10、15、20ul的标准汤剂供试品溶液，图4b中色谱1-4分别对应于点样量为5、10、15、20ul的饮片供试品溶液，色谱5-8分别对应于点样量为5、10、15、20ul的配方颗粒供试品溶液，由图4a和图4b可以看出，对照药材溶液、饮片供试品溶液的点样量为15ul时，展开情况较好，标准汤剂供试品溶液、配方颗粒供试品溶液的点样量为5ul时，展开情况较好。
75.实验例2不同温度考察
76.按照实施例1所述的方法制备对照药材溶液和供试品溶液，分别吸取上述对照药材溶液和供试品溶液点于同一硅胶g板上，按实施例1的薄层色谱条件，分别在常温25℃和低温4℃条件下展开，取出，晒干，不喷涂任何显色剂，直接置于365mn下检视，实验结果见图5和图6。由图5和图6可见，常温和低温条件下，供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点。且供试品色谱斑点分离效果较好。实验结果表明，温度对供试品溶液薄层鉴别无影响，说明该薄层鉴别方法耐用性良好。图中色谱1对应于对照药材溶液、色谱2-3对应于饮片供试品溶液、色谱4对应于标准汤剂供试品溶液、色谱5-6对应于配方颗粒供试品溶液。
77.实验例3不同湿度考察
78.按照实施例1所述的方法制备对照药材溶液和供试品溶液，分别吸取上述对照药材溶液和供试品溶液点于同一硅胶g板上，按实施例1的薄层色谱条件，分别在75％和20％不同湿度条件下展开，取出，晒干，不喷涂任何显色剂，直接置于365mn下检视，实验结果见图7和图8。由图7和图8可见，高湿和低湿条件下，供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点。不同湿度下供试品色谱斑点分离效果较好。实验结果表明，温度对供试品溶液薄层鉴别无影响，说明该薄层鉴别方法耐用性良好。图中色谱1对应于对照药材溶液、色谱2-3对应于饮片供试品溶液、色谱4对应于标准汤剂供试品溶液、色谱5-6对应于配方颗粒供试品溶液。
79.实验例4不同薄层板的比较
80.按照实施例1所述的方法制备对照药材溶液和供试品溶液，分别吸取上述对照药材溶液和供试品溶液点于不同厂家(青岛海洋化工有限公司、烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂)硅胶g薄层板上，按实施例1的薄层色谱条件展开，取出，晒干，不喷涂任何显色剂，直接置于365mn下检视；薄层色谱图见图9和图10，其中图9为在青岛海洋化工有限公司的硅胶g薄层板上的实验结果，图10为在烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂的硅胶g薄层板上的实验结果。由图9-10可知，两个不同厂家生产的硅胶g薄层板对芦根供试品均能起到很好的分离效果。且供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。实验结果说明，该薄层鉴别方法有较好的耐用性。
81.实验例5不同批次样品薄层鉴别对比
82.按照实施例1和实施例2的方法制备对照药材溶液和不同批次的供试品溶液，然后按实施例1的色谱条件进行展开，取出，晒干，不喷涂任何显色剂，直接置于365mn下检视，结果如图11所示，图中色谱1对应于对照药材溶液，色谱2、3分别对应于批号为20190401189、y904221的芦根饮片制备的饮片供试品溶液；色谱4、5对应于标准汤剂供试品溶液，其中，色谱4对应的标准汤剂供试品溶液中所用的标准汤剂由批号为20190401189的芦根饮片制备得到，色谱5对应的标准汤剂供试品溶液中所用的标准汤剂由批号为y904221的芦根饮片制备得到；色谱6、7配方颗粒供试品溶液，其中，色谱6对应的配方颗粒供试品溶液中所用的配方颗粒由批号为20190401189的芦根饮片制备得到，色谱7对应的配方颗粒供试品溶液中所用的配方颗粒由批号为y904221的芦根饮片制备得到。实验结果表明，供试品色谱中，各批次供试品溶液在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，重复性较好。
83.实验例6不同浓度甲醇提取效果的考察
84.称取1.0g/份的芦根配方颗粒(制备方法同实施例1)4份，分别放入三角瓶中，在三角瓶中分别加入20ml的质量浓度为10％、40％、70％、90％和纯甲醇，超声处理(功率250w，频率40khz)30min，得到不同甲醇含量的配方颗粒供试品溶液；
85.称取1.0g/份的芦根标准汤剂冻干粉(制备方法同实施例1)4份，分别放入三角瓶中，在三角瓶中分别加入20ml的质量浓度为10％、40％、70％、90％和纯甲醇，超声处理(功率250w，频率40khz)30min，得到不同甲醇含量的标准汤剂供试品溶液；
86.将芦根饮片(批号20190401189)制成粉末，称取1.0g/份的粉末4份，分别放入三角瓶中，三角瓶中分别加水25ml，煎煮40min，取煎煮液，干燥，分别加入20ml的质量浓度为10％、40％、70％、90％和纯甲醇，超声处理(功率250w，频率40khz)30min，得到不同甲醇含量的饮片供试品溶液；
87.分别称取1.0g/份的芦根对照药材4份，分别放入三角瓶中，三角瓶中分别加水25ml，煎煮40min，取煎煮液，干燥，分别加入20ml的质量浓度为10％、40％、70％、90％和纯甲醇，超声处理(功率250w，频率40khz)30min，得到不同甲醇含量的对照药材溶液。
88.进行薄层鉴别，鉴别方法同实施例1。
89.结果如图12a-12d所示，图12a中色谱1-5分别对应于质量浓度为10％、40％、70％、90％和纯甲醇的对照药材溶液，图12b中色谱1-5分别对应于质量浓度为10％、40％、70％、90％和纯甲醇的标准汤剂供试品溶液，图12c中色谱1-5分别对应于质量浓度为10％、40％、70％、90％和纯甲醇的饮片供试品溶液，图12d中色谱1-5分别对应于质量浓度为10％、40％、70％、90％和纯甲醇的配方颗粒供试品溶液，由图可以看出，使用10％～100％甲醇溶液提取配方颗粒、芦根标煎冻干粉、芦根饮片、芦根对照药材中有效成分时，进行薄层鉴别，得到的色谱最好斑点清晰、分离效果好。
90.显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。