一种核受体蛋白体外液相透析复性的方法与流程

技术特征：
1.一种锌离子辅助的核受体蛋白体外透析复性方法，其特征包括以下步骤：(1)通过原核表达的方式，表达携带his标签的核受体蛋白(pparγ)。(2)菌体破碎裂解后，收集包涵体，通过2m-4m梯度尿素洗脱，除去大部分的杂蛋白和黏连蛋白。(3)使用8m尿素溶解最终包涵体组分，置于透析袋中，进行锌离子辅助的梯度透析。(4)使用超滤技术对透析复性完成后蛋白液进行浓缩。(5)镍柱纯化目的蛋白，透析除去咪唑，保存于storage buffer中。(6)对复性纯化后核受体蛋白进行生物学活性的评估与测定。2.根据权利要求1所述的，用于透析复性的renaturation buffer的组分，其特征在于需要8种复性renaturation buffer，且每种buffer中皆含有10μm znso4。3.根据权利要求1所述的，用于透析复性的renaturation buffer的组分，其特征在于，renaturation buffer1-3中尿素的梯度为4m，2m及1m。4.根据权利要求1所述的，用于透析复性的renaturation buffer的组分，其特征在于，renaturation buffer 4-6中精氨酸(arginine)的梯度为，0.5m，0.25m及0.1m。5.根据权利要求1所述的，用于透析复性的renaturation buffer的组分，其特征在于renaturation buffer 4-7中含有10％的glycerol。6.根据权利要求1所述的，用于贮存最终蛋白的storage buffer为50mm tris，150mm nacl，ph＝8.0。

技术总结
本发明属于生物技术领域的蛋白质复性方法，针对核受体蛋白的结构特性，以锌离子辅助的梯度透析复性方法，实现对全长核受体蛋白的完全复性，恢复其生物学活性。本发明根据核受体蛋白复性过程中的不同状态，优化透析复性液的组分梯度，使得在不同的复性阶段，以较合适的盐离子强度，稳定剂及中间态抑制剂浓度帮助核受体蛋白进行折叠。此外，针对核受体蛋白DNA结合区(DNA binding domain，DBD)高疏水性的结构特点，引入10μM的硫酸锌，帮助复性过程中DBD区域形成正确的锌指结构，减小因热力学不稳定而导致的蛋白质折叠失败。相比以往的针对核受体蛋白的复性方法，该种方法可实现全长蛋白质(非蛋白截短体)的完全复性，操作方法简单，得率可达30％以上。复性获得的核受体蛋白具备天然活性，可用于后续生物学功能分析及结构生物学相关应用。构生物学相关应用。


技术研发人员：沈萍萍 杨南飞 郑薇 樊继强 王婧悦
受保护的技术使用者：南京大学
技术研发日：2020.06.02
技术公布日：2021/12/6