一种脂肪间充质干细胞因子复合物促进头发再生的方法与流程

1.本发明涉及细胞培养技术领域，具体为一种脂肪间充质干细胞因子复合物促进头发再生的方法。


背景技术：

2.干细胞是一类具有自我复制能力及多向分化潜能的未分化或低分化的细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。随着蛋白提取、纯化和细胞培养技术的不断发展，科学家发现，脂肪中存在大量高质量、具有再生潜能的间充质干细胞。
3.脂肪间充质干细胞具有高度增殖和分化的潜力及自我更新能力，同时还能分泌有利于头发生长的生长因子，包括血管内皮生长因子(vegf)、角质细胞生长因子(kgf)、肝细胞生长因子(hgh)、转化生长因子β(tgf
‑
β)、胰岛素样生长因子(igf)和血小板源性生长因子(pdgf)等。
4.如何通过改良传统干细胞培养方法，进而制造生产大量脂肪间充质干细胞分泌物的生长因子，已成为当下需要解决的一个课题。


技术实现要素：

5.(一)解决的技术问题
6.针对现有技术的不足，本发明公开了一种脂肪间充质干细胞因子复合物促进头发再生的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
7.(二)技术方案
8.为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种脂肪间充质干细胞因子复合物促进头发再生的方法，包括：
9.s1：收集脂肪样本；
10.s2：分离纯化干细胞，分离收集的脂肪样本中的脂肪间充质干细胞并进行纯化；
11.s3：种植培养干细胞，纯化获得的脂肪间充质细胞，用培养基接种培养，将脂肪间充质干细胞种植于细胞工厂中，经过3
‑
4次传代培养，得到充足的脂肪间充质干细胞，将该脂肪间充质干细胞接种至细胞工厂中，细胞数为6万个/ml，通过改变脂肪间充质干细胞的生长环境，促进细胞因子的分泌，37℃，5％co2的生长环境下将脂肪间充质干细胞培养至50％左右，37℃，5％o2、5％co2、90％n2的生长环境下将脂肪间充质干细胞培养至90％左右，然后收集培养上清液；
12.s4：收集提取分泌物，通过离心机进行高速离心，然后进行过滤最终获得复合因子。
13.优选的，所述收集提取分泌物过程中培养获得的分泌物至少包括血管内皮生长因子(vegf)、角质细胞生长因子(kgf)、肝细胞生长因子(hgh)、转化生长因子β(tgf
‑
β)、胰岛素样生长因子(igf)和血小板源性生长因子(pdgf)等。
14.优选的，所述血管内皮生长因子(vegf)介于378.56
±
124.23pg/ml、角质细胞生长
因子(kgf)介于423.46
±
136.78pg/ml、肝细胞生长因子(hgh)介于1312.11
±
18.36pg/ml、转化生长因子β(tgf
‑
β)介于1988.23
±
220.36pg/ml、胰岛素样生长因子(igf)介于783.56
±
56.23pg/ml和血小板源性生长因子(pdgf)介于48.56
±
23.53pg/ml等。
15.优选的，所述种植培养干细胞过程中所用的培养基的组分如下所示：以无酚红的a—mem为基准，添加5％血小板裂解物。
16.优选的，所述分离纯化干细胞过程包括如下步骤：
17.s1：脂肪样本清洗，将脂肪样本中的血液清洗干净；
18.s2：脂肪样本离心，将脂肪样本进行离心，并去除上清液；
19.s3：脂肪样本剪碎，将脂肪样本剪碎；
20.s4：加入胶原酶，加入胶原酶消化脂肪样本；
21.s5：过滤离心，将消化的混合液过滤至离心管进行离心；
22.s6：再次清洗离心，去除上清液，清洗细胞沉淀物，再次进行离心；
23.s7：pbs分散并过滤离心，将细胞沉淀物以pbs分散，然后过滤离心。
24.本发明公开了一种脂肪间充质干细胞因子复合物促进头发再生的方法，其具备的有益效果如下：
25.1、该脂肪间充质干细胞因子复合物促进头发再生的方法，通过将纯化获得的脂肪间充质细胞，用培养基接种培养，将脂肪间充质干细胞种植于细胞工厂中，经过3
‑
4次传代培养，得到充足的脂肪间充质干细胞，将该脂肪间充质干细胞接种至细胞工厂中，细胞数为6万个/ml，通过改变脂肪间充质干细胞的生长环境，促进细胞因子的分泌，37℃，5％co2的生长环境下将脂肪间充质干细胞培养至50％左右，37℃，5％o2、5％co2、90％n2的生长环境下将脂肪间充质干细胞培养至90％左右，然后收集培养上清液，通过离心机进行高速离心，然后进行过滤最终获得复合因子，从而可以对复合因子进行量产，大大提高了复合因子的生产速度。
26.2、该脂肪间充质干细胞因子复合物促进头发再生的方法，将脂肪样本中的血液清洗干净，并进行离心，去除上清液，然后脂肪样本剪碎加入胶原酶消化脂肪样本，将消化的混合液过滤至离心管进行离心，去除上清液，清洗细胞沉淀物，再次进行离心，然后将细胞沉淀物以pbs分散，并过滤离心即可得到纯化的干细胞。
27.3、该脂肪间充质干细胞因子复合物促进头发再生的方法，血管内皮生长因子(vegf)、角质细胞生长因子(kgf)、肝细胞生长因子(hgh)、转化生长因子β(tgf
‑
β)、胰岛素样生长因子(igf)和血小板源性生长因子(pdgf)等，在头发发育过程中会增大毛囊的大小，刺激内皮细胞分化；还具有促进细胞增殖、促进局部血管生成、改善血管微环境和毛囊周围环境、抑制细胞凋亡、修复内皮损伤等作用；以及通过延长毛囊生长周期，促使更多毛囊进入生长期让毛发再生。
附图说明
28.图1为本发明流程示意图；
29.图2为本发明分离纯化干细胞流程示意图。
具体实施方式
30.本发明实施例公开一种脂肪间充质干细胞因子复合物促进头发再生的方法，
31.请参照附图1，包括：
32.s1：收集脂肪样本；
33.s2：分离纯化干细胞，分离收集的脂肪样本中的脂肪间充质干细胞并进行纯化；
34.s3：种植培养干细胞，纯化获得的脂肪间充质细胞，用培养基接种培养，将脂肪间充质干细胞种植于细胞工厂中，经过3
‑
4次传代培养，得到充足的脂肪间充质干细胞，将该脂肪间充质干细胞接种至细胞工厂中，细胞数为6万个/ml，通过改变脂肪间充质干细胞的生长环境，促进细胞因子的分泌，37℃，5％co2的生长环境下将脂肪间充质干细胞培养至50％左右，37℃，5％o2、5％co2、90％n2的生长环境下将脂肪间充质干细胞培养至90％左右，然后收集培养上清液；
35.s4：收集提取分泌物，通过离心机进行高速离心，然后进行过滤最终获得复合因子。
36.收集提取分泌物过程中培养获得的分泌物至少包括血管内皮生长因子(vegf)、角质细胞生长因子(kgf)、肝细胞生长因子(hgh)、转化生长因子β(tgf
‑
β)、胰岛素样生长因子(igf)和血小板源性生长因子(pdgf)等；
37.血管内皮生长因子(vegf)、角质细胞生长因子(kgf)、肝细胞生长因子(hgh)、转化生长因子β(tgf
‑
β)、胰岛素样生长因子(igf)和血小板源性生长因子(pdgf)等，在头发发育过程中会增大毛囊的大小，刺激内皮细胞分化；还具有促进细胞增殖、促进局部血管生成、改善血管微环境和毛囊周围环境、抑制细胞凋亡、修复内皮损伤等作用；以及通过延长毛囊生长周期，促使更多毛囊进入生长期让毛发再生。
38.血管内皮生长因子(vegf)介于378.56
±
124.23pg/ml、角质细胞生长因子(kgf)介于423.46
±
136.78pg/ml、肝细胞生长因子(hgh)介于1312.11
±
18.36pg/ml、转化生长因子β(tgf
‑
β)介于1988.23
±
220.36pg/ml、胰岛素样生长因子(igf)介于783.56
±
56.23pg/ml和血小板源性生长因子(pdgf)介于48.56
±
23.53pg/ml等。
39.种植培养干细胞过程中所用的培养基的组分如下所示：以无酚红的a—mem为基准，添加5％血小板裂解物。
40.请参照附图2，分离纯化干细胞过程包括如下步骤：
41.s1：脂肪样本清洗，将脂肪样本中的血液清洗干净；
42.s2：脂肪样本离心，将脂肪样本进行离心，并去除上清液；
43.s3：脂肪样本剪碎，将脂肪样本剪碎；
44.s4：加入胶原酶，加入胶原酶消化脂肪样本；
45.s5：过滤离心，将消化的混合液过滤至离心管进行离心；
46.s6：再次清洗离心，去除上清液，清洗细胞沉淀物，再次进行离心；
47.s7：pbs分散并过滤离心，将细胞沉淀物以pbs分散，然后过滤离心。
48.工作原理：首先收集脂肪样本，将脂肪样本中的血液清洗干净，并进行离心，去除上清液，然后脂肪样本剪碎加入胶原酶消化脂肪样本，将消化的混合液过滤至离心管进行离心，去除上清液，清洗细胞沉淀物，再次进行离心，然后将细胞沉淀物以pbs分散，并过滤离心得到纯化的干细胞；
49.纯化获得的脂肪间充质细胞，用培养基接种培养，将脂肪间充质干细胞种植于细胞工厂中，经过3
‑
4次传代培养，得到充足的脂肪间充质干细胞，将该脂肪间充质干细胞接种至细胞工厂中，细胞数为6万个/ml，通过改变脂肪间充质干细胞的生长环境，促进细胞因子的分泌，37℃，5％co2的生长环境下将脂肪间充质干细胞培养至50％左右，37℃，5％o2、5％co2、90％n2的生长环境下将脂肪间充质干细胞培养至90％左右，然后收集培养上清液，通过离心机进行高速离心，然后进行过滤最终获得复合因子；
50.复合因子至少包括血管内皮生长因子(vegf)、角质细胞生长因子(kgf)、肝细胞生长因子(hgh)、转化生长因子β(tgf
‑
β)、胰岛素样生长因子(igf)和血小板源性生长因子(pdgf)等。
51.且血管内皮生长因子(vegf)介于378.56
±
124.23pg/ml、角质细胞生长因子(kgf)介于423.46
±
136.78pg/ml、肝细胞生长因子(hgh)介于1312.11
±
18.36pg/ml、转化生长因子β(tgf
‑
β)介于1988.23
±
220.36pg/ml、胰岛素样生长因子(igf)介于783.56
±
56.23pg/ml和血小板源性生长因子(pdgf)介于48.56
±
23.53pg/ml等，血管内皮生长因子(vegf)、角质细胞生长因子(kgf)、肝细胞生长因子(hgh)、转化生长因子β(tgf
‑
β)、胰岛素样生长因子(igf)和血小板源性生长因子(pdgf)等，在头发发育过程中会增大毛囊的大小，刺激内皮细胞分化；还具有促进细胞增殖、促进局部血管生成、改善血管微环境和毛囊周围环境、抑制细胞凋亡、修复内皮损伤等作用；以及通过延长毛囊生长周期，促使更多毛囊进入生长期让毛发再生。
52.以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。