信号肽相关序列及其在蛋白质合成中的应用的制作方法

技术特征：
1.一种核酸构建物，该核酸构建物包含编码信号肽的第一核苷酸序列，其与编码外源蛋白的第二核苷酸序列可操作地连接，第一核苷酸序列的3
′
端在第二核苷酸序列的上游，且第一核苷酸序列选自编码以下信号肽的核苷酸序列：氨基酸序列为kthivssvtttl或kthivssvtttlllgsil的信号肽。2.根据权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于：所述的可操作地连接为直接连接或通过连接序列连接。3.根据权利要求2所述的核酸构建物，其特征在于：所述的连接序列为seq id no.：25所示的核苷酸序列。4.一种信号肽，其特征在于：其氨基酸序列由权利要求1中的第一核苷酸序列编码产生。5.一种载体或载体组合，其特征在于，所述的载体或载体组合含有权利要求1
‑
3任一所述的核酸构建物。6.一种基因工程细胞，其特征在于，所述基因工程细胞的基因组的一个或多个位点整合有权利要求1
‑
3任一所述的核酸构建物，或者所述基因工程细胞中含有权利要求5所述的载体或载体组合；所述基因工程细胞选自原核细胞、中国仓鼠卵巢细胞、昆虫细胞、兔网织红细胞、酵母细胞、或其组合。7.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含的试剂选自下组中的一种或多种：(a)权利要求1
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3任一所述的核酸构建物；(b)权利要求5所述的载体或载体组合；和(c)权利要求6所述的基因工程细胞。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，其还包括(d)体外生物合成体系。9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述体外生物合成体系选自下组：酵母体外生物合成体系、中国仓鼠卵巢细胞体外生物合成体系、昆虫细胞体外生物合成体系、hela细胞体外生物合成体系、或其组合。10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述的酵母体外生物合成体系为克鲁维酵母体外生物合成体系。11.一种如权利要求1
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3任一所述的核酸构建物、权利要求4所述的信号肽、权利要求5所述的载体或载体组合、权利要求6所述的基因工程细胞或权利要求7
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9任一所述试剂盒在体外蛋白合成体系中的应用。12.一种体外蛋白合成方法，其特征在于，其包括以下步骤：(i)提供一体外生物合成体系，所述体外生物合成体系含有权利要求1
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3任一所述的核酸构建物；(ii)在适合的条件下，孵育步骤(i)的体外生物合成体系一段反应时间，从而合成所述外源蛋白。13.根据权利要求12所述的体外蛋白合成方法，其特征在于，合适的条件为反应温度为20
‑
37℃，反应时间为1
‑
72h。14.根据权利要求12所述的体外蛋白合成方法，其特征在于，所述方法还包括：(iii)分离或检测所述外源蛋白。

技术总结
本发明提供了信号肽相关序列及其在蛋白质合成中的应用，具体地，本发明提供了具有提高蛋白表达效果的信号肽及其编码序列，将信号肽编码序列与外源蛋白的编码序列可操作的相连形成的核酸构建物，可显著提高外源蛋白合成的效率，并简化目标外源蛋白的表达与纯化过程。同时，本发明提供与其相应的载体或载体组合、基因工程细胞、试剂盒，从而能够应用于蛋白质合成中。质合成中。质合成中。


技术研发人员：郭敏 于雪
受保护的技术使用者：康码（上海）生物科技有限公司
技术研发日：2018.08.07
技术公布日：2021/11/21