两亲性化合物、以及使用了其的医疗用树脂组合物和药品添加剂的制作方法

1.本发明涉及两亲性化合物、以及使用了其的医疗用树脂组合物和药品添加剂。


背景技术：

2.近年来，正在积极地进行基于给药系统(即，药物释放系统(dds：drug delivery system))的制剂(dds制剂)的开发。最近的dds制剂包括：主动靶向疗法中的分子靶向治疗药、以及通过被动靶向疗法中的纳米科技而使药物易于聚集至靶细胞的制剂。
3.作为该被动靶向疗法中利用的物质，广泛使用聚乙二醇(peg：polyethylene glycol)。
4.例如，将利用peg对脂质体、高分子胶束进行修饰而得到的peg修饰脂质体作为长期血中滞留性脂质体而用于药物载体，并向其中封入有阿霉素的制剂(doxil(注册商标))等在临床上得以利用。
5.peg因其骨架结构单纯而柔软性高。此外，由于具有能够水合多个水分子的特性，因此，通过利用peg对药物颗粒、载体进行修饰，从而在颗粒表层形成厚重的水合层。利用该水合层使其与血清蛋白、细胞的相互作用受到抑制，其结果可知：药物的血中(体内)滞留时间被大幅延长(潜伏化：stealth化)。
6.像这样，可期待利用peg进行了修饰的药品今后在新型制剂化技术中也承担重要的一翼，现在也有多种药物正在临床试验中。然而，近年来有报告称：利用peg进行了表面修饰的脂质体、高分子胶束会产生因其反复给药(多次给药)而导致药物的潜伏性消失的现象(accelerated blood clearance：abc现象)(非专利文献1)。
7.该abc现象意味着存在药理效果随着多次给药而降低、诱导出预料不到的副作用的可能性。因此，还预料到今后这种peg化药品在应用疾病的种类、药物给药方式(给药量/给药次数/给药频率)方面存在制约，强烈期望克服该课题。
8.至今为止，进行了想要通过使用代替peg的修饰剂制作修饰化药品来抑制abc现象产生的尝试。例如报告有如下技术：作为代替peg的聚合物，将聚乙烯基吡咯烷酮(pvp)用作修饰剂，对蛋白质药物赋予潜伏性(非专利文献2)。
9.现有技术文献
10.非专利文献
11.非专利文献1：j.pharmacol.exp.ther.,292(3):1071
‑
1079(2000)
12.非专利文献2：biomaterials,25(16):3259
‑
3266(2004)


技术实现要素：

13.发明要解决的问题
14.本发明人等主要以在作为药物载体的长期血中滞留性脂质体等中的应用为前提，推进了分子内具有亲水性部分和疏水性部分的两亲性化合物的开发。并且，本发明人等在
此时的研究中发现：pvp对聚丙烯(pp)等塑料显示高吸附性。此处，通常使用聚丙烯(pp)作为注射器的针筒的构成材料。因此，若设想例如将聚合物修饰化脂质体用作药物载体来构成注射液、预充注射器的情况；将利用聚合物对蛋白质进行修饰而得的产物用作有效成分来构成注射液、预充注射器的情况，则有可能产生如下问题：包含有效成分的脂质体借助pvp而吸附在针筒的内壁，脂质体内含的一部分有效成分未被给药而残留在针筒内等。此外，以往公知的peg修饰脂质体还存在向细胞内的吸收效率降低的问题。
15.因而，本发明的目的在于，对于可在作为药物载体的长期血中滞留性脂质体等中应用的两亲性化合物而言，提供能够抑制向细胞内的吸收效率降低且降低对塑料的吸附性的手段。
16.用于解决问题的方案
17.本发明人等鉴于上述课题而进行了深入研究。其结果发现：通过使用下述两亲性化合物而能够解决上述课题，从而完成了本发明。所述两亲性化合物在分子内包含碳原子数为8以上的烃基和含有下述结构单元的部位(本说明书中也简称为“部位(i)”)，所述结构单元源自分子内具有2个以上的羟基且结构单元的碳原子之中构成侧链的碳原子的数量为2～10的单体。
18.即，根据本发明的一个形态，提供一种两亲性化合物，其具有碳原子数为8以上的烃基和包含结构单元(a)的部位(i)，所述结构单元(a)源自分子内具有2个以上的羟基且结构单元的碳原子之中构成侧链的碳原子的数量为2～10的单体(a)。
19.发明的效果
20.根据本发明，对于可在作为药物载体的长期血中滞留性脂质体等中应用的两亲性化合物而言，能够抑制向细胞内的吸收效率降低，且降低对塑料的吸附性。
附图说明
21.图1是将使用制造例4中制作的两亲性化合物(聚合物)(2w/v％或4w/v％的pbs溶液)进行了修饰的脂质体的粒径与无修饰的脂质体对比而示出的图表。
22.图2是示出在制造例1～7和比较制造例1中制作的两亲性化合物(聚合物)各自的2w/v％pbs溶液的存在下培养的小鼠成纤维细胞(l929细胞)的细胞存活率的图。
23.图3是将在使用制造例1～7和比较制造例1中制作的两亲性化合物(聚合物)各自的2w/v％pbs溶液进行了修饰的脂质体的存在下培养的小鼠成纤维细胞(l929细胞)的细胞存活率与无修饰的脂质体对比而示出的图表。
24.图4是将使用制造例4中制作的两亲性化合物(聚合物)的2w/v％pbs溶液进行了修饰的内含荧光物质的修饰脂质体向hepg2细胞中的吸收量的测定结果与无修饰脂质体和peg修饰脂质体对比而示出的图。
具体实施方式
25.本发明的一个方式是一种两亲性化合物，其具有碳原子数为8以上的烃基和包含结构单元(a)的部位(i)，所述结构单元(a)源自分子内具有2个以上的羟基且结构单元的碳原子之中构成侧链的碳原子的数量为2～10的单体(a)。
26.具有这种构成的两亲性化合物的部位(i)与pvp相比，对pp等塑料的吸附性更低。
因此，该化合物既能够在作为药物载体的长期血中滞留性脂质体等中应用，又能够降低对塑料的吸附性。其结果，例如，能够降低将使用该化合物进行了修饰的脂质体作为药物载体并包含在其中的有效成分残留在针筒内的风险。此外，能够显著地抑制在被peg修饰的脂质体中观察到的向细胞内的吸收效率的降低。
27.本发明的两亲性化合物在用于例如上述用途时能够发挥出优异性能的机理尚未完全明确，但可推测其机理是疏水性的吸附。需要说明的是，该机理基于推测，本发明完全不限定于该机理。
28.以下，说明本发明的优选实施方式。需要说明的是，本发明不仅仅限定于以下的实施方式。进而，将以下记载的本发明的各个优选方式组合两个以上而得的方式也是本发明的优选形态。
29.本说明书中，表示范围的“x～y”是指“x以上且y以下”，“重量”与“质量”视作同义词。此外，本说明书中，“(甲基)丙烯酸酯”是指丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯，“(甲基)丙烯酸”是指丙烯酸或甲基丙烯酸，丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯可以分别单独使用，也可以组合使用。进而，只要没有特别记载，则操作和物性等的测定在室温(20～25℃)/相对湿度为40～50％的条件下进行测定。
30.<两亲性化合物>
31.本形态的两亲性化合物具有部位(i)和碳原子数为8以上的烃基，所述部位(i)包含具有规定结构的结构单元(a)。以下，针对这些构成要素进行详细说明。
32.(部位(i))
33.首先，本发明的两亲性化合物具有包含结构单元(a)的部位(i)，所述结构单元(a)源自分子内具有2个以上的羟基且结构单元的碳原子之中构成侧链的碳原子的数量为2～10的单体(a)。在优选实施方式中，部位(i)由具有结构单元(a)的聚合物形成，所述结构单元(a)源自分子内具有2个以上的羟基且结构单元的碳原子之中构成侧链的碳原子的数量为2～10的单体(a)。此处，本说明书中，“源自单体(p)的结构单元(q)”(p表示任意且适当的符号，有时也不记载(p))代表性地是指：“单体(p)”(或简写为“单体”)所具有的聚合性不饱和双键中的一个键因聚合而断裂，形成构成聚合物的至少一部分的单元(q)(q表示任意且适当的符号，有时也不记载(q))。上述“源自单体(p)的结构单元”只要是如上所述地与单体(p)(或简写为“单体”)发生聚合而形成的结构单元(下述示出的具体例中，为通式(q)所示的结构单元)相同的结构，则也可以为通过其它制法而形成的结构单元。例如，对于将羟基被保护的单体(a)进行聚合而形成的结构单元，可以实施脱保护处理而形成结构单元(a)。例如，可以将(2
‑
甲基
‑2‑
乙基
‑
1,3
‑
二氧戊环
‑4‑
基)甲基(甲基)丙烯酸酯或缩水甘油基醚(甲基)丙烯酸酯进行聚合后，再进行水解而形成源自甘油(甲基)丙烯酸酯的结构单元。
34.分子内具有2个以上的羟基且结构单元的碳原子之中构成侧链的碳原子的数量为2～10的单体(a)优选为乙烯基单体，更优选为(甲基)丙烯酸类单体。此外，单体(a)可以为单官能单体，也可以为多官能单体，优选包含单官能单体，更优选由单官能单体组成。
35.此处，对于作为单体(a)的(甲基)丙烯酸类单体，可适当地使用甘油单(甲基)丙烯酸酯(别名：(甲基)丙烯酸2,3
‑
二羟基丙酯)、(甲基)丙烯酸1,2
‑
二羟基乙酯、(甲基)丙烯酸2,2
‑
二羟基乙酯、(甲基)丙烯酸二羟基丁酯、三羟甲基丙烷单(甲基)丙烯酸酯、季戊四醇单(甲基)丙烯酸酯、二季戊四醇单(甲基)丙烯酸酯等(甲基)丙烯酸酯。这些之中，从工业获取
的容易度、反应性的高度出发，优选为甘油单丙烯酸酯(glma)或甘油单甲基丙烯酸酯(glmma)。通过将这些(甲基)丙烯酸类单体(a)进行聚合，从而该单体(a)中包含的烯属双键发生断裂而生成结构单元(a)。需要说明的是，单体(a)可以仅单独使用1种，也可以组合使用两种以上。
36.此外，源自单体(a)的结构单元的碳原子之中构成侧链的碳原子的数量为2～10，但本说明书中，“侧链”是指该结构单元中包含的除主链之外的部分。并且，“主链”是指：通过结构单元相连而构成的聚合物中的连续键合的碳原子链之中碳原子数最大的链。其中，例外的是：单体(a)为甲基丙烯酸系单体时，该单体中的构成不饱和双键的碳原子上键合的甲基不构成主链也不构成侧链。需要说明的是，如上所述，源自单体(a)的结构单元的碳原子之中构成侧链的碳原子的数量为2～10，该碳原子的数量优选为3～8，更优选为4～6。
37.此处，结构单元(a)优选包含下述化学式(1)所示的结构单元。
[0038][0039]
式(1)中，r1表示氢原子或甲基，优选为氢原子。此外，x表示
‑
c(＝o)
‑
o
‑
、
‑
c(＝o)
‑
nh
‑
、
‑
o
‑
、
‑
ch2o
‑
或
‑
ch2ch2o
‑
，优选为
‑
c(＝o)
‑
o
‑
。
[0040]
上述化学式(1)所示的结构单元之中，r1为氢原子、x为
‑
c(＝o)
‑
o
‑
的结构单元源自作为单体(a)的甘油单丙烯酸酯(glma)。此外，上述化学式(1)所示的结构单元之中，r1为甲基、x为
‑
c(＝o)
‑
o
‑
的结构单元源自作为单体(a)的甘油单甲基丙烯酸酯(glmma)。
[0041]
构成两亲性化合物的部位(i)之中，源自分子内具有2个以上的羟基且结构单元的碳原子之中构成侧链的碳原子的数量为2～10的单体(a)的结构单元(a)所占的比例例如为1～100质量％，优选为20～100质量％，更优选为50～100质量％，进一步优选为60～100质量％，尤其优选为80～100质量％，特别优选为90～100质量％，最优选为100质量％。如果结构单元(a)的比例为上述范围内的值，则能够起到本发明的作用效果。
[0042]
构成两亲性化合物的部位(i)包含除结构单元(a)之外的结构单元(以下也简称为“结构单元(b)”)时，结构单元(b)可以源自任意的自由基聚合性单体(以下，将通过共聚而形成结构单元(b)的单体也称为“单体(b)”)。构成两亲性化合物的部位(i)包含结构单元(b)时，结构单元(b)在部位(i)中所占的比例例如为99质量％以下，优选为80质量％以下，更优选为50质量％以下，进一步优选为40质量％以下，尤其优选为20质量％以下，特别优选为10质量％以下。
[0043]
作为单体(b)，可列举出例如除单体(a)之外的含羟基的(甲基)丙烯酸酯、含聚氧亚烷基的单体、(甲基)丙烯酸烷氧基烷基酯、乙烯基单体、环氧烷烃、烷氧基聚氧亚烷基二醇、环状化合物、氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)等。此外，这些单体(b)可以仅单独使用1种，也可以组合使用两种以上。
[0044]
作为前述含羟基的(甲基)丙烯酸酯，可列举出例如丙烯酸2
‑
羟基乙酯、甲基丙烯酸2
‑
羟基乙酯等羟基烷基的碳原子数为2～4的(甲基)丙烯酸羟基烷基酯等。
[0045]
作为前述含聚氧亚烷基的不饱和单体，可列举出例如下述化学式(2)所示的单体
等。
[0046][0047]
式(2)中，r2、r3和r4各自独立地表示氢原子或甲基，r5表示碳原子数2～18的亚烷基，r6表示氢原子或碳原子数1～20的烃基，x表示碳原子数1～5的亚烷基、
‑
co
‑
基、或者在r2r4c＝cr3‑
基为乙烯基时表示单键，m为
‑
(r5o)
‑
基的平均加成摩尔数，表示1～300的数。需要说明的是，式(2)中，(r5o)
m
由两种以上的r5o构成时，两种以上的r5o可以为无规、嵌段、交替中的任意键合形态。
[0048]
式(2)中，r6为氢原子或碳原子数1～20的烃基。r6之中，优选为氢原子和碳原子数1～20的烃基，更优选为碳原子数1～10的烃基，进一步优选为碳原子数1～3的烃基，进一步优选为碳原子数1或2的烃基。烃基之中，优选为烷基或烯基，更优选为碳原子数1～20的烷基，进一步优选为碳原子数1～10的烷基，更进一步优选为碳原子数1～3的烷基。
[0049]
式(2)中，式子
‑
r5o
‑
所示的氧亚烷基为碳原子数2～18的氧亚烷基。作为氧亚烷基，可列举出例如氧亚乙基、氧亚丙基、氧亚丁基、氧亚异丁基、氧
‑1‑
亚丁基、氧
‑2‑
亚丁基等。这些氧亚烷基之中，优选为碳原子数2～8的氧亚烷基，更优选为氧亚乙基、氧亚丙基、氧亚丁基等碳原子数2～4的氧亚烷基，进一步优选为氧亚乙基。
[0050]
化学式(2)中，m为式子
‑
r5o
‑
所示的氧亚烷基的平均加成摩尔数。平均加成摩尔数是指含聚氧亚烷基的不饱和单体1摩尔中的氧亚烷基的摩尔数的平均值。m的下限值优选为2以上、更优选为4以上、进一步优选为8以上。m的上限值优选为100以下、更优选为50以下。
[0051]
x表示碳原子数1～5的亚烷基、
‑
co
‑
基、或者在r2r4c＝cr3‑
基为乙烯基时表示单键。这些基团之中，优选为
‑
co
‑
基。
[0052]
作为含聚氧亚烷基的不饱和单体，可列举出例如不饱和醇聚亚烷基二醇加成物、聚亚烷基二醇酯单体、(烷氧基)聚亚烷基二醇单马来酸酯等。
[0053]
不饱和醇聚亚烷基二醇加成物是对具有不饱和基团的醇加成聚亚烷基二醇链而得的化合物。作为不饱和醇聚亚烷基二醇加成物，可列举出例如聚乙二醇单乙烯基醚、聚乙二醇单烯丙基醚、聚乙二醇单(2
‑
甲基
‑2‑
丙烯基)醚、聚乙二醇单(2
‑
丁烯基)醚、聚乙二醇单(3
‑
甲基
‑3‑
丁烯基)醚、聚乙二醇单(3
‑
甲基
‑2‑
丁烯基)醚、聚乙二醇单(2
‑
甲基
‑3‑
丁烯基)醚、聚乙二醇单(2
‑
甲基
‑2‑
丁烯基)醚、聚乙二醇单(1,1
‑
二甲基
‑2‑
丙烯基)醚、聚乙烯聚丙二醇单(3
‑
甲基
‑3‑
丁烯基)醚、甲氧基聚乙二醇单(3
‑
甲基
‑3‑
丁烯基)醚等。
[0054]
聚亚烷基二醇酯系单体是不饱和基团与聚亚烷基二醇链通过酯键键合而得的单体。
[0055]
作为前述聚亚烷基二醇酯系单体，优选为例如对醇加成1～300摩尔的碳原子数2～18的氧亚烷基而得的烷氧基聚亚烷基二醇与(甲基)丙烯酸形成的酯化物。烷氧基聚亚烷基二醇之中，优选以氧亚乙基作为主成分。作为前述醇，可列举出例如甲醇、乙醇、1
‑
丙醇、2
‑
丙醇、1
‑
丁醇、2
‑
丁醇、1
‑
戊醇、2
‑
戊醇、3
‑
戊醇、1
‑
己醇、2
‑
己醇、3
‑
己醇、辛醇、2
‑
乙基
‑1‑
己醇、壬醇、月桂醇、鲸蜡醇、硬脂醇等碳原子数1～30的脂肪族醇；环己醇等碳原子数3～30的脂环族醇；(甲基)烯丙醇、3
‑
丁烯
‑1‑
醇、3
‑
甲基
‑3‑
丁烯
‑1‑
醇等碳原子数3～30的不饱和
醇等。作为前述酯化物，可列举出例如甲氧基聚乙二醇单(甲基)丙烯酸酯、甲氧基(聚乙二醇聚丙二醇)单(甲基)丙烯酸酯、甲氧基(聚乙二醇聚丁二醇)单(甲基)丙烯酸酯、甲氧基(聚乙二醇聚丙二醇聚丁二醇)单(甲基)丙烯酸酯等。聚亚烷基二醇酯系单体之中，例如，优选为甲氧基聚乙二醇单甲基丙烯酸酯等(烷氧基)聚亚烷基二醇单(甲基)丙烯酸酯。
[0056]
作为前述(甲基)丙烯酸烷氧基烷基酯，可列举出例如(甲基)丙烯酸甲氧基甲酯、(甲基)丙烯酸甲氧基乙酯、(甲基)丙烯酸甲氧基丙酯、(甲基)丙烯酸乙氧基甲酯、(甲基)丙烯酸乙氧基乙酯、(甲基)丙烯酸乙氧基丙酯等烷氧基的碳原子数为1～4、烷基的碳原子数为1～4的(甲基)丙烯酸烷氧基烷基酯等。这些(甲基)丙烯酸烷氧基烷基酯可以分别单独使用，也可以组合使用两种以上。
[0057]
作为前述乙烯基单体，可列举出例如(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯酸甲酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸丙酯、(甲基)丙烯酸正丁酯、(甲基)丙烯酸异丁酯、(甲基)丙烯酸叔丁酯、(甲基)丙烯酸2
‑
乙基己酯、(甲基)丙烯酸正月桂酯、(甲基)丙烯酸正硬脂酯、(甲基)丙烯酸二氨基甲酯、(甲基)丙烯酸二氨基乙酯、二甲基氨基(甲基)丙烯酸酯、二乙基氨基(甲基)丙烯酸酯、(甲基)丙烯酸缩水甘油酯、苯乙烯、氮丙啶类、2
‑
(甲基)丙烯酰氧基甲基磷酸胆碱、2
‑
(甲基)丙烯酰氧基乙基磷酸胆碱、(甲基)丙烯酸四氢糠酯、异丙基丙烯酰胺、乙烯醇、乙烯基甲酰胺、乙烯基异丁基丙烯酰胺、(甲基)丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、乙烯基乙酰胺、n
‑
乙烯基吡咯烷酮等。
[0058]
作为前述环氧烷烃，可列举出例如环氧乙烷、环氧丙烷等碳原子数2～4的环氧烷烃等。
[0059]
作为前述烷氧基聚氧亚烷基二醇，可列举出例如聚乙二醇、聚丙二醇、甲氧基聚乙二醇、乙氧基聚乙二醇、甲氧基聚丙二醇、乙氧基聚丙二醇等具有碳原子数1～4的烷氧基和碳原子数1～4的氧亚烷基、且氧亚烷基的加成摩尔数为2～30的烷氧基聚氧亚烷基二醇等。
[0060]
作为环状化合物，可列举出例如l
‑
交酯等交酯类；ε
‑
己内酯等内酯类；三甲基碳酸酯、环状氨基酸、吗啉
‑
2,5
‑
二酮等。
[0061]
部位(i)由包含结构单元(a)的聚合物形成时，构成该聚合物的聚合物可以具有通过使相同种类或不同种类的聚合物彼此键合而得到的嵌段共聚物的构成。
[0062]
从对针筒内壁的吸附性等观点出发，上述聚合物的数均分子量(mn)优选为1000以上，更优选为2000以上，进一步优选为3000以上。此外，从体外排出性等观点出发，上述聚合物的数均分子量(mn)优选为90000以下，更优选为30000以下，进一步优选为15000以下。需要说明的是，上述聚合物的数均分子量(mn)的值是指：在后述实施例中，针对制造例1～7中得到的聚合物根据mn的测定方法进行测定时的值。此处，在后述实施例中，由于测定了两亲性化合物的数均分子量(mn)，因此，能够通过从该测定值减去除部位(i)(聚合物)之外的部位的分子量而算出部位(i)(聚合物)的mn值。如果能够算出准确的值，则可以仅使用部位(i)(聚合物)，并通过相同的方法来求出mn值。
[0063]
从两亲性化合物(聚合物)对脂质体的修饰性等观点出发，上述聚合物的分子量分布([重均分子量(mw)/数均分子量(mn)]的值)优选为1～5，更优选为1～3，进一步优选为1～2，进一步优选为1～1.5，进一步优选为1～1.3。
[0064]
构成部位(i)的聚合物可通过将包含单体(a)和根据需要的单体(b)的单体组合物进行聚合来获得。作为使上述单体组合物发生聚合的方法，可列举出例如自由基聚合法、原
子移动自由基聚合法、可逆性加成断裂链转移(raft)聚合法等所代表的活性自由基聚合法、离子聚合法、开环聚合法、配位聚合法、缩聚法等，本发明不仅仅限定于所述例示。
[0065]
使单体组合物发生聚合时，可以使用溶剂。作为溶剂，可列举出例如苯、甲苯、二甲苯等芳香族系溶剂；甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇等醇系溶剂；二氯乙烷、二氯甲烷等含卤素原子的溶剂；二乙基醚、丙二醇甲基醚、二丙二醇甲基醚、乙基溶纤剂、丁基溶纤剂等醚系溶剂；乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸溶纤剂等酯系溶剂；丙酮、甲乙酮、甲基异丁基酮、二丙酮醇等酮系溶剂；二甲基甲酰胺等酰胺系溶剂等有机溶剂；水。这些溶剂可以分别单独使用，也可以组合使用两种以上。溶剂的量可以考虑聚合条件、单体组合物的组成、所得聚合物的浓度等来适当决定。
[0066]
使单体组合物发生聚合时，为了调整聚合物的分子量或导入烃基，可以使用链转移剂。
[0067]
作为链转移剂，可列举出例如硫代乙酸钠、硫代乙酸钾等硫代乙酸碱金属盐；半胱氨酸、半胱胺、巯基乙醇、硫代甘油、巯基乙酸、巯基丙酸、2
‑
巯基丙酸、3
‑
巯基丙酸、硫代乙酸、硫代苹果酸、2
‑
巯基乙磺酸、它们的钠盐、钾盐等亲水性硫醇系链转移剂；2
‑
氨基丙烷
‑1‑
醇等伯醇、异丙醇等仲醇、亚磷酸、次磷酸和它们的盐(例如次磷酸钠、次磷酸钾等)、亚硫酸、亚硫酸氢、连二亚硫酸、焦亚硫酸和它们的盐(例如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、连二亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钾、亚硫酸氢钾、连二亚硫酸钾、焦亚硫酸钾等)等非硫醇系的链转移剂；丁硫醇、辛硫醇、癸硫醇、十二硫醇、十六硫醇、十八硫醇、硫代胆甾醇、环己基硫醇、硫代苯酚、巯基乙酸辛酯、2
‑
巯基丙酸辛酯、3
‑
巯基丙酸辛酯、巯基丙酸
‑2‑
乙基己酯、辛酸
‑2‑
巯基乙酯、1,8
‑
二巯基
‑
3,6
‑
二氧杂辛烷、癸烷三硫醇、十二烷基硫醇等疏水性硫醇系链转移剂等。此外，进行可逆性加成断裂链转移(raft)聚合时，作为链转移剂，需要使用可逆性加成断裂链转移(raft)剂。作为这种raft剂，可列举出4
‑
氰基
‑4‑
(苯基硫代羰基硫基)戊酸、2
‑
氰基
‑2‑
丙基硫代苯甲酸酯、2
‑
氰基
‑2‑
丙基十二烷基三硫代碳酸酯、4
‑
氰基
‑4‑
[(十二烷基磺酰基硫代羰基)磺酰基]戊酸、2
‑
(十二烷基硫基硫代羰基硫基)
‑2‑
甲基丙酸、氰基甲基十二烷基硫代碳酸酯、氰基甲基甲基(苯基)硫代氨基甲酸酯、双(硫代苯甲酰基)二硫醚、双(十二烷基磺酰基硫代羰基)二硫醚等。这些链转移剂可以分别单独使用，也可以组合使用两种以上。
[0068]
链转移剂的量根据单体组合物所包含的单体种类、聚合温度等聚合条件、作为目标的聚合物的分子量等来适当设定即可，没有特别限定。其中，获得数均分子量为数千～数万的聚合物时，相对于单体100质量份，链转移剂的量优选为0.1～20质量份、更优选为0.5～15质量份。
[0069]
使单体组合物发生聚合时，可以使用聚合引发剂。
[0070]
作为聚合引发剂，可列举出例如偶氮异丁腈、2,2
’‑
偶氮双(4
‑
二甲氧基
‑
2,4
‑
二甲基戊腈)、4,4
’‑
偶氮双(4
‑
氰基戊酸)、2,2
’‑
偶氮双[2
‑
甲基
‑
n
‑
[1,1
‑
双(羟基甲基)
‑2‑
羟基乙基]丙酰胺]、2,2
’‑
偶氮双[n
‑
(2
‑
羟基乙基)
‑2‑
甲氧基丙酰胺]、2,2
’‑
偶氮双(2
‑
甲基
‑2‑
丙烯基丙酰胺)、2,2
’‑
双(2
‑
咪唑啉
‑2‑
基)[2,2
’‑
偶氮双丙烷]二盐酸盐、2,2
’‑
偶氮双(丙烷
‑2‑
甲脒)二盐酸盐、2,2
’‑
偶氮双[n
‑
(2
‑
羧基乙基)
‑2‑
甲基丙脒]、2,2
’‑
偶氮双[2
‑
[1
‑
(2
‑
羟基乙基)
‑2‑
咪唑啉
‑2‑
基]丙烷二盐酸盐、2,2
’‑
偶氮双(2,4
‑
二甲基戊腈)、2,2
’‑
偶氮双(2
‑
甲基丁腈)、过氧化
‑2‑
乙基己酸叔丁酯、2,2
’‑
偶氮双异丁腈、过氧化苯甲酰、二叔丁
基过氧化物、过氧化环己酮、过氧化乙酰丙酮等自由基聚合引发剂；溴甲基苯、1
‑
(溴甲基)
‑4‑
甲基苯、2
‑
溴异丁酸乙酯、2
‑
溴异丁酸羟基乙酯、双[2
‑
(2
’‑
溴异丁酰氧基)乙基]二硫醚、2
‑
溴异丁酸
‑
10
‑
十一碳烯基酯、4
‑
(1
‑
溴乙基)苯甲酸等活性自由基聚合引发剂等。这些聚合引发剂可以分别单独使用，也可以组合使用两种以上。
[0071]
聚合引发剂的量根据所得聚合物的期望物性等来适当设定即可，通常，相对于单体100质量份，聚合引发剂的量优选为0.001～20质量份，更优选为0.005～10质量份。
[0072]
使单体组合物发生聚合时的聚合条件根据聚合方法来适当设定即可，没有特别限定。聚合温度优选为室温～200℃、更优选为40～140℃。此外，使单体组合物发生聚合时的气氛优选为氮气、氩气等非活性气体。反应时间以单体的聚合反应完结的方式适当设定即可。
[0073]
如上那样操作，优选通过使单体组合物发生聚合，从而能够得到构成部位(i)的聚合物。此处，所得聚合物可以在其末端具有官能团。若构成部位(i)的聚合物在其末端具有官能团，则能够容易地借助该官能团来修饰药物等、或借助该官能团而与后述规定的烃基相连。但是，构成部位(i)的聚合物在其末端也可以不具有官能团。需要说明的是，本发明的两亲性化合物在分子内具有碳原子数为8以上的烃基和部位(i)(包含聚合物)，但构成部位(i)的聚合物在其末端具有官能团时，该官能团可以仅存在于该聚合物的单个末端，也可以存在于两个末端。此外，存在于上述聚合物末端的官能团可以位于部位(i)与后述规定烃基相键合的一侧，也可以位于与其相反侧。
[0074]
作为构成部位(i)的聚合物可具有的官能团，优选为阴离子性官能团、阳离子性官能团、非离子性官能团和两性官能团。该官能团优选为反应性官能团。作为适合的反应性官能团，可列举出
‑
sh基、式子
‑
coom(m表示氢原子或碱金属原子)所示的基团、羟基、烯丙基、环氧基、醛基、
‑
nh2基、conh
‑
基等。作为前述m，可列举出例如钠原子、钾原子等碱金属原子。聚合物在其末端具有官能团时，该官能团的数量没有特别限定，优选为1～6个，更优选为1～4个，进一步优选为1～2个。
[0075]
为了向构成部位(i)的聚合物的末端导入官能团，可以使用用于向该聚合物中导入官能团的含官能团化合物。作为用于向该聚合物的末端导入官能团的含官能团化合物，可列举出例如硫代乙酸钠、硫代乙酸钾等硫代乙酸碱金属盐；半胱氨酸、半胱胺、巯基乙醇、硫代甘油、巯基乙酸、巯基丙酸、2
‑
巯基丙酸、3
‑
巯基丙酸、硫代乙酸、硫代苹果酸、2
‑
巯基乙磺酸、它们的钠盐、钾盐等硫醇系链转移剂；4,4
’‑
偶氮双(4
‑
氰基戊酸)、2,2
’‑
偶氮双[2
‑
甲基
‑
n
‑
[1,1
‑
双(羟基甲基)
‑2‑
羟基乙基]丙酰胺]、2,2
’‑
偶氮双[n
‑
(2
‑
羟基乙基)
‑2‑
甲氧基丙酰胺]、2,2
’‑
偶氮双(2
‑
甲基
‑2‑
丙烯基丙酰胺)、2,2
’‑
双(2
‑
咪唑啉
‑2‑
基)[2,2
’‑
偶氮双丙烷]二盐酸盐、2,2
’‑
偶氮双(丙烷
‑2‑
甲脒)二盐酸盐、2,2
’‑
偶氮双[n
‑
(2
‑
羧基乙基)
‑2‑
甲基丙脒]、2,2
’‑
偶氮双[2
‑
[1
‑
(2
‑
羟基乙基)
‑2‑
咪唑啉
‑2‑
基]丙烷二盐酸盐、过氧化环己酮、过氧化乙酰丙酮等导入有官能团的聚合引发剂等。这些含官能团化合物可以分别单独使用，也可以组合使用两种以上。需要说明的是，上述含官能团化合物之中包括属于上述链转移剂、聚合引发剂的化合物，属于链转移剂、聚合引发剂的含官能团化合物可以仅出于链转移剂或聚合引发剂以及含官能团化合物之中的一种目的来使用，也可以出于两种目的来使用。
[0076]
此外，使用活性聚合引发剂作为聚合引发剂时，可以通过使在使用该活性聚合引
发剂而制备的聚合物的末端存在的卤素原子与含官能团化合物发生反应，从而向该聚合物的末端导入官能团。作为这种能够与卤素原子发生反应而向上述聚合物的末端导入官能团的含官能团化合物，可列举出例如乙二胺、丙二胺等胺化合物；乙烷二硫醇、丙烷二硫醇、十六烷二硫醇等二硫醇化合物；以烯丙基硫醇等为首的半胱氨酸、半胱胺、巯基乙醇、硫代甘油、巯基乙酸、巯基丙酸、2
‑
巯基丙酸、3
‑
巯基丙酸、硫代乙酸、硫代苹果酸、2
‑
巯基乙磺酸、它们的钠盐、钾盐等硫醇化合物等。
[0077]
用于向聚合物的末端导入官能团的含官能团化合物的量根据构成聚合物的单体(结构单元)的种类、聚合温度等聚合条件、作为目标的聚合物的分子量等来适当设定即可，没有特别限定。获得数均分子量为数千～数万的聚合物时，相对于单体100质量份，链转移剂的量优选为0.1～20质量份、更优选为0.5～15质量份。
[0078]
作为向构成部位(i)的聚合物的末端导入官能团的方法，可列举出例如：
[0079]
(1)在作为聚合引发剂的导入有前述官能团的聚合引发剂的存在下，将单体组合物进行聚合而得到聚合物的方法；
[0080]
(2)在作为链转移剂的导入有前述官能团的链转移剂的存在下，将单体组合物聚合而得到聚合物的方法；
[0081]
(3)使存在于聚合物末端的卤素原子与含官能团化合物发生反应的方法等，本发明不仅仅限定于所述例示。
[0082]
(烃基)
[0083]
本发明的两亲性化合物的特征在于，在上述“包含源自分子内具有2个以上的羟基的单体(a)的结构单元(a)的部位(i)”的基础上，还具有碳原子数为8以上的烃基。该烃基的具体构成没有特别限定。
[0084]
作为一例，上述烃基优选为具备在水溶液中通过疏水性相互作用而形成分子彼此的集合体这一性能的有机化合物中包含的基团。作为这种有机化合物，可列举出烃、疏水性聚合物、脂质和其它有机分子等。
[0085]
作为烃，可列举出碳原子数8～50的脂肪族烃或碳原子数8～50的芳香族烃。即，本发明的优选实施方式中，烃基的碳原子数为8～50，更优选为8～40，进一步优选为8～30，特别优选为8～20。
[0086]
作为碳原子数8～50的脂肪族烃的例子，可列举出例如辛烷、壬烷、癸烷、十一烷、十二烷、十三烷、十四烷、十五烷、十六烷、十七烷、十八烷、十九烷、二十烷等直链状烷烃、它们的支链烷烃、它们的环状烷烃等，优选为直链状烷烃。
[0087]
此外，作为碳原子数8～50的芳香族烃的例子，可列举出例如2
‑
苯基乙烷、1,3,5
‑
三甲基苯、萘、蒽、荧光素、它们的位置异构体等。
[0088]
作为疏水性聚合物，可列举出：可形成上述部位(i)的结构单元的乙烯基单体之中，以侧链具有碳原子数为8以上的烃基的物质作为主成分进行聚合而得的聚合物。
[0089]“脂质”是指：具备长链脂肪酸或烃链、在水中为难溶性且易溶于有机溶剂的有机化合物。“脂质”可进一步大致分类为磷脂、糖脂、鞘脂、甾醇类、中性脂质、饱和或不饱和的脂肪酸等。
[0090]
磷脂大致分为甘油磷脂和鞘磷脂。作为甘油磷脂的代表物，可列举出磷脂酰胆碱(pc)、磷脂酰丝氨酸(ps)、磷脂酰肌醇(pi)、磷脂酰甘油(pg)、磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酸
(pa)。另一方面，作为鞘磷脂的代表物，可列举出神经鞘髓磷脂。作为磷脂的具体例，可列举出以下的(a)～(i)所述的脂质。
[0091]
(a)磷脂酰胆碱类
[0092]
作为磷脂酰胆碱类的具体例，可列举出二棕榈酰基磷脂酰胆碱(dppc)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(dmpc)、二油酰基磷脂酰胆碱(dopc)、二月桂酰基磷脂酰胆碱(dlpc)、二癸酰基磷脂酰胆碱(ddpc)、二辛酰基磷脂酰胆碱(dopc)、二己酰基磷脂酰胆碱(dhpc)、二丁酰基磷脂酰胆碱(dbpc)、二反油酰基磷脂酰胆碱、二亚油酰基磷脂酰胆碱、二花生四烯酰基磷脂酰胆碱、二芥酰基磷脂酰胆碱(depc)、二庚酰基磷脂酰胆碱、二己酰基磷脂酰胆碱、双十七碳酰基磷脂酰胆碱、二山嵛酰基磷脂酰胆碱、桐酰基磷脂酰胆碱、氢化卵磷脂酰胆碱(hepc)、氢化大豆磷脂酰胆碱(hspc)、1
‑
棕榈酰基
‑2‑
花生四烯酰基磷脂酰胆碱、1
‑
棕榈酰基
‑2‑
油酰基磷脂酰胆碱、1
‑
棕榈酰基
‑2‑
亚油酰基磷脂酰胆碱、1
‑
棕榈酰基
‑2‑
肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱、1
‑
棕榈酰基
‑2‑
硬脂酰基磷脂酰胆碱、1
‑
硬脂酰基
‑2‑
棕榈酰基磷脂酰胆碱、1,2
‑
二肉豆蔻酰基酰胺
‑
1,2
‑
脱氧磷脂酰胆碱、1
‑
肉豆蔻酰基
‑2‑
棕榈酰基磷脂酰胆碱、1
‑
肉豆蔻酰基
‑2‑
硬脂酰基磷脂酰胆碱、二
‑0‑
十六烷基磷脂酰胆碱、反式二反油酰基磷脂酰胆碱、二棕榈酰基磷脂酰胆碱、正十八烷基
‑2‑
甲基磷脂酰胆碱、正十八烷基磷脂酰胆碱、1
‑
月桂基丙二醇
‑3‑
磷酸胆碱、erythro
‑
n
‑
二十四烷基鞘磷脂酰胆碱(erythro
‑
n
‑
lignoceroylsphingo phosphatidylcholine)和棕榈酰基
‑
(9
‑
顺式
‑
十八碳酰基)
‑3‑
sn
‑
磷脂酰胆碱等。
[0093]
(b)磷脂酰丝氨酸类
[0094]
作为磷脂酰丝氨酸类的具体例，可列举出二硬脂酰基磷脂酰丝氨酸(dsps)、二肉豆蔻酰基磷脂酰丝氨酸(dmps)、二月桂酰基磷脂酰丝氨酸(dlps)、二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸(dpps)、二油酰基磷脂酰丝氨酸(dops)、溶血磷脂酰丝氨酸、桐酰基磷脂酰丝氨酸和1,2
‑
二
‑
(9
‑
顺式
‑
十八碳酰基)
‑3‑
sn
‑
磷脂酰丝氨酸等。
[0095]
(c)磷脂酰肌醇类
[0096]
作为磷脂酰肌醇类的具体例，可列举出二棕榈酰基磷脂酰肌醇(dppi)、二硬脂酰基磷脂酰肌醇(dspi)和二月桂酰基磷脂酰肌醇(dlpi)等。
[0097]
(d)磷脂酰甘油类
[0098]
作为磷脂酰甘油类的具体例，可列举出二棕榈酰基磷脂酰甘油(dppg)、二硬脂酰基磷脂酰甘油(dspg)、二油酰基磷脂酰甘油(dopg)、二月桂酰基磷脂酰甘油(dlpg)、二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(dmpg)、溶血磷脂酰甘油、氢化大豆磷脂酰甘油(hspg)、氢化卵磷脂酰甘油(hepg)和心磷脂(二磷脂酰甘油)等。
[0099]
(e)磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)类
[0100]
作为磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)类的具体例，可列举出二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(dppe)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(dspe)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(dope)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺(dlpe)、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(dmpe)、二癸酰基磷脂酰乙醇胺(ddpe)、n
‑
戊二酰基磷脂酰乙醇胺(ngpe)、溶血磷脂酰乙醇胺、n
‑
(7
‑
硝基
‑
2,1,3
‑
苯酰氧基二唑
‑4‑
基)
‑
1,2
‑
二油酰基
‑
sn
‑
磷脂酰乙醇胺、桐酰基磷脂酰乙醇胺、n
‑
琥珀酰基二油酰基磷脂酰乙醇胺和1
‑
十六烷基
‑2‑
棕榈酰基甘油磷脂酰乙醇胺等。需要说明的是，在后述制造例7中，可以将属于具有马来酰亚胺基的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(dspe)衍生物的二硬脂酰基n
‑
(3
‑
马
来酰亚胺
‑1‑
氧代丙基)
‑
l
‑
α
‑
磷脂酰乙醇胺(日油公司制、coatsome(注册商标)fe
‑
8080ma3)用作脂质的原料。像这样同时具有用于与部位(i)相连的马来酰亚胺基、琥珀酰亚胺基等官能团以及碳原子数为8以上的各种烃基的磷脂酰乙醇胺类(和其它脂质衍生物)也可与其同样地使用。
[0101]
(f)磷脂酸类
[0102]
作为磷脂酸类的具体例，可列举出二棕榈酰基磷脂酸(dppa)、二硬脂酰基磷脂酸(dspa)、二肉豆蔻酰基磷脂酸(dmpa)和二油酰基磷脂酸(dopa)等。
[0103]
(g)鞘磷脂
[0104]
作为鞘磷脂的具体例，可列举出例如神经鞘髓磷脂、二棕榈酰基神经鞘髓磷脂、二硬脂酰基神经鞘髓磷脂、神经酰胺氨乙基膦酸、神经酰胺磷酰基乙醇胺和神经酰胺磷酰基甘油等。
[0105]
糖脂大致分为甘油糖脂和鞘糖脂。作为糖脂，可列举出以下(a)～(c)记载的脂质。
[0106]
(a)甘油糖脂
[0107]
作为甘油糖脂的具体例，可列举出二糖基二甘油酯、糖基二甘油酯、二半乳糖苷二甘油酯、半乳糖苷二甘油酯、磺酸核糖基二甘油酯、(1,3)
‑
d
‑
甘露糖基(1,3)二甘油酯、二半乳糖苷甘油酯、二半乳糖苷二月桂酰基甘油酯、二半乳糖苷二肉豆蔻酰基甘油酯、二半乳糖苷二棕榈酰基甘油酯、二半乳糖苷二硬脂酰基甘油酯、半乳糖苷甘油酯、半乳糖苷二月桂酰基甘油酯、半乳糖苷二肉豆蔻酰基甘油酯、半乳糖苷二棕榈酰基甘油酯、半乳糖苷二硬脂酰基甘油酯和二半乳糖苷二酰基甘油等。
[0108]
(b)鞘糖脂
[0109]
作为鞘糖脂的具体例，可列举出神经酰胺(脑苷脂)、半乳糖苷神经酰胺、乳糖神经酰胺、二半乳糖苷神经酰胺、神经节苷脂gm1、神经节苷脂gm2、神经节苷脂gm3、硫苷脂、神经酰胺寡聚己糖苷和红细胞糖苷。
[0110]
(c)其它糖脂
[0111]
作为其它糖脂，可列举出神经酰胺寡聚己糖苷、棕榈基糖苷、硬脂基葡糖苷、肉豆蔻基葡糖苷、烷基糖苷、氨基苯基糖苷、胆甾醇基麦芽苷、胆甾醇基葡糖苷、3
‑
胆甾醇基
‑6’‑
(糖基硫代)己醚糖脂和葡糖苷类等。
[0112]
甾醇类的最具代表性的物质为胆甾醇。除了胆甾醇之外，甾醇类可列举出例如胆甾醇琥珀酸、二氢胆甾醇、羊毛甾醇、二氢羊毛甾醇、链甾醇、豆甾醇、谷甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇、酵母甾醇、麦角甾醇、campersterol、岩藻甾醇、22
‑
酮甾醇、20
‑
羟基甾醇、7
‑
羟基胆甾醇、19
‑
羟基胆甾醇、22
‑
羟基胆甾醇、25
‑
羟基胆甾醇、7
‑
脱氢胆甾醇、5α
‑
胆甾
‑7‑
烯
‑
3β
‑
醇、表胆甾醇、脱氢麦角甾醇、硫酸胆甾醇、半琥珀酸胆甾醇、苯二甲酸胆甾醇、磷酸胆甾醇、戊酸胆甾醇、胆甾醇半琥珀酸酯、3βn
‑
(n’,n
’‑
二甲基氨基乙烷)
‑
氨甲酰基胆甾醇、胆甾醇乙酸酯、胆甾醇油酸酯、胆甾醇基亚油酸脂、胆甾醇基肉豆蔻酸酯、胆甾醇基棕榈酸酯、胆甾醇基花生酸酯、粪甾烷醇、胆甾醇酯、胆甾醇基磷酰胆碱和3,6,9
‑
三氧杂辛烷
‑1‑
醇
‑
胆甾醇基
‑
3e
‑
醇等。
[0113]
作为中性脂质，可列举出例如二甘油酯(例如二油精、二棕榈酸甘油酯)和混合辛酸
‑
癸酸二甘油酯、三酰基甘油(三油精、三棕榈酸甘油酯、三肉豆蔻甘油酯、三月桂酸甘油酯、三癸酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三己酸甘油酯等)、鲨烯、生育酚和胆甾醇等。
[0114]
作为饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸，可列举出例如辛酸、壬酸、癸酸、十一碳烯酸、月桂酸、十三碳烯酸、肉豆蔻酸、十五碳烯酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、十九碳烯酸、花生酸、十二碳烯酸、十四碳烯酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、二十碳烯酸、芥酸、二十二碳五烯酸等碳原子数5～30的饱和或不饱和的脂肪酸。
[0115]
关于其它的有机分子(天然化合物、化学合成化合物均可)，在具有碳原子数为8以上的烃基的情况下，均可用作本发明的两亲性化合物中的碳原子数为8以上的烃基的供给源。可列举出例如作为脂溶性维生素的维生素a(视黄醇)、维生素d(钙化醇)、维生素e(生育酚)、维生素k和它们的衍生物。此外，由一条或多条长链烷基链(碳原子数为8以上)构成的有机分子(例如二烷基甘油等)、富勒烯c60等碳分子也可用作碳原子数为8以上的烃基的供给源。
[0116]
此处，本发明的优选实施方式中，碳原子数为8以上的(优选碳原子数为8～50的)烃基优选直接或借助二价键合基团而与包含结构单元(a)的部位(i)键合，或者以与该部位(i)直接键合或借助二价键合基团与包含结构单元(a)的部位(i)键合的脂质(例如磷脂)的一部分的形式存在。
[0117]
碳原子数为8以上的烃基也可以与构成部位(i)的聚合物同样地在其末端具有官能团。若碳原子数为8以上的烃基在其末端具有官能团，则能够借助该官能团来修饰药物等。但是，碳原子数为8以上的烃基在其末端也可以不具有官能团。需要说明的是，碳原子数为8以上的烃基在其末端具有官能团时，该官能团可以仅存在于碳原子数为8以上的烃基的单个末端，也可以存在于两个末端。此外，在碳原子数为8以上的烃基的末端存在的官能团可以位于碳原子数为8以上的烃基与部位(i)相键合的一侧，也可以位于与其相反侧。
[0118]
从体外排出性等观点出发，碳原子数为8以上的烃基的分子量优选为5000以下，优选为2000以下，更优选为1000以下。优选为100以上，更优选为150以上。此处，两亲性化合物的分子量之中，“碳原子数为8以上的烃基”的分子量所占的比例优选为0.2～20％，更优选为0.5～15％，进一步优选为1～10％。
[0119]
此外，本发明中，碳原子数为8以上的烃基以脂质的一部分的形式存在于两亲性化合物中的情况下，该脂质的分子量优选为2000以下，更优选为1000以下。此处，碳原子数为8以上的烃基以脂质的一部分的形式存在于两亲性化合物中的情况下，两亲性化合物的分子量之中，该脂质的分子量所占的比例优选为2～50％，更优选为5～35％，进一步优选为10～20％。
[0120]
上述二价键合基团是将部位(i)和碳原子数为8以上的烃基键合的基团，其结构没有特别限定，可以包含在部位(i)的一部分结构中。作为这种二价键合基团，具体而言，可例示出
‑
s
‑
、
‑
s
‑
c(＝s)
‑
、
‑
s
‑
c(＝s)
‑
s
‑
、
‑
s
‑
c(＝s)
‑
n(
‑
r
a
)
‑
、
‑
s
‑
c(＝s)
‑
o
‑
、
‑
s
‑
r
b
‑
c(＝o)
‑
o
‑
、
‑
s
‑
r
b
‑
c(＝o)
‑
n(
‑
r
a
)
‑
、
‑
s
‑
r
b
‑
o
‑
、
‑
s
‑
r
b
‑
o
‑
c(＝o)
‑
、
‑
o
‑
、
‑
o
‑
c(＝o)
‑
、
‑
n(
‑
r
a
)
‑
c(＝o)
‑
和包含它们的二价键合基团。此处，上述r
a
为氢原子或碳原子数1～30的烃基。上述r
b
为碳原子数1～30的烃基。需要说明的是，从脂质(包括脂质的改性物)中去除一个氢原子和一个碳原子数为8以上的烃基而得的残基也是上述二价键合基团的优选形态之一。上述二价键合基团的分子量优选为5000以下、更优选为2000以下、进一步优选为1000以下。
[0121]
此处，作为借助二价键合基团将碳原子数为8以上的烃基与部位(i)连接的方法，可列举出：在链转移剂和/或聚合引发剂的存在下将单体组合物进行聚合而得到构成部位
(i)的聚合物时，作为上述链转移剂和/或聚合引发剂，使用在分子内包含可构成包含碳原子数为8以上的烃基的部位的结构的链转移剂、聚合引发剂的方法。尤其是，通过使用具有与碳原子数8以上的烃基键合的硫醇基(
‑
sh基)的链转移剂来进行单体组合物的聚合，从而能够得到碳原子数为8以上的烃基借助硫醚键(
‑
s
‑
)与部位(i)键合而成的两亲性化合物(参照后述制造例1～6)。
[0122]
此外，作为借助二价键合基团将碳原子数为8以上的烃基与部位(i)连接的其它方法，首先，在链转移剂的存在下将单体组合物进行聚合而得到构成部位(i)的聚合物时，作为上述链转移剂，通过使用可逆性加成断裂链转移(raft)剂来进行raft聚合，从而向构成部位(i)的聚合物的末端导入硫醇基(
‑
sh基)。接着，使同时具有碳原子数为8以上的烃基和能够与硫醇基(
‑
sh基)反应的官能团(例如马来酰亚胺基等)的化合物与上述硫醇基(
‑
sh基)发生反应。由此，能够借助硫醚键(
‑
s
‑
)将碳原子数为8以上的烃基与部位(i)连接(参照后述制造例7)。该方法在碳原子数为8以上的烃基以脂质或其它有机分子的一部分的形式存在于两亲性化合物中的情况下特别有用。
[0123]
本发明的两亲性化合物中，构成部位(i)的聚合物或碳原子数为8以上的烃基以聚合物的一部分的形式存在于化合物中时的该聚合物可以具有交联结构。作为使上述聚合物发生交联的方法，可列举出例如化学交联法、物理交联法等。作为化学交联法，可列举出例如：使用环氧化合物、氧化淀粉、戊二醛、甲醛、辛二亚氨酸二甲酯、碳二亚胺、琥珀酰亚胺化合物、二异氰酸酯化合物、酰叠氮、抗菌素(reuterin)、三(羟基甲基)膦、抗坏血酸铜、葡萄糖赖氨酸、光氧化剂等化学交联剂使聚合物发生交联的方法；通过热脱水处理、紫外线照射、电子射线照射、伽马射线照射等使聚合物发生化学交联的方法等。此外，作为物理交联法，可列举出例如利用盐使聚合物发生交联的方法；利用静电相互作用使聚合物发生交联的方法；利用氢键使聚合物发生交联的方法；利用疏水性相互作用使聚合物发生交联的方法等。上述交联方法可以仅单独使用1种，也可以组合使用两种以上。
[0124]
本发明的两亲性化合物的数均分子量(mn)优选为1000以上、更优选为2000以上，且优选为100000以下、更优选为50000以下。
[0125]
<两亲性化合物的用途>
[0126]
本发明的两亲性化合物的生物相容性高，因此可适用于医疗用途。即，根据本发明的其它形态，可提供包含本发明的两亲性化合物的医疗用树脂组合物。该医疗用树脂组合物可以由本发明的两亲性化合物组成，也可以进一步包含其它成分。作为其它成分，可列举出例如水、生理盐水、药学上可接受的有机溶剂、胶原、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、羧基乙烯基聚合物、羧甲基纤维素钠盐、聚丙烯酸钠、藻酸钠、水溶性葡聚糖、羧甲基淀粉钠、果胶、甲基纤维素、乙基纤维素、黄原胶、阿拉伯树胶、酪朊、明胶、琼脂、二甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、链烷烃、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、磷酸缓冲生理盐水、生物体内分解性聚合物、无血清培养基、可接受作为药物添加物使用的表面活性剂、在生物体内可接受的生理ph缓冲液等。这些添加剂可以分别单独使用，也可以组合使用两种以上。
[0127]
本发明的两亲性化合物或医疗用树脂组合物可适合地用作药品添加剂。作为药品添加剂，可列举出例如用于保持药物等的载体等。作为用本发明的两亲性化合物或医疗用树脂组合物保持药物等的方法，可列举出例如通过使构成两亲性化合物的部位(i)或碳原
子数为8以上的烃基所具有的官能团与药物等键合而使载体与药物等发生复合化的方法；将两亲性化合物或医疗用树脂组合物与药物等以呈现均匀组成的方式进行混合的方法；将药物等的颗粒用两亲性化合物或医疗用树脂组合物进行覆盖的方法；使脂质与两亲性化合物或医疗用树脂组合物的混合物颗粒化，并在所得颗粒的内部包含药物等的方法；通过将用脂质体内包药物等而得的颗粒用两亲性化合物或医疗用树脂组合物进行覆盖，从而使两亲性化合物或医疗用树脂组合物的外皮内部包含该颗粒的方法；通过将药物等与脂质体的混合物的颗粒用两亲性化合物或医疗用树脂组合物进行覆盖，从而使两亲性化合物或医疗用树脂组合物的外皮内部包含该颗粒的方法；通过用两亲性化合物或医疗用树脂组合物使药物等胶束化，从而内包药物等的方法；通过用两亲性化合物和构成脂质体的脂质使药物等脂质体化，从而内包药物等的方法等，本发明不仅仅限定于所述例示。
[0128]
上述脂质体可通过如下方法等进行制备：例如，使脂质溶解于叔丁醇等溶剂后，进行冻结干燥的方法；通过将溶解有药物的溶液添加至脂质中而使脂质发生溶胀，利用超声波使其分散后，向所得分散体中添加聚乙二醇
‑
磷脂酰乙醇胺等的方法等。
[0129]
脂质体优选用阳离子化剂进行了阳离子化。作为阳离子化剂，可适当选择并使用现有公知的物质。脂质体可通过例如使氢化大豆卵磷脂、胆甾醇、3,5
‑
双十五硅烷氧基苯甲脒盐酸盐等溶解于叔丁醇等溶剂，并使所得脂质混合溶液进行冻结来获得。构成脂质体的脂质在生物体内是稳定的。作为该脂质，可同样地使用作为碳原子数为8以上的烃基的供给源而如上例示的物质。
[0130]
需要说明的是，上述例子中列举了脂质体，但可以使用例如乳液、纳米颗粒、微粒、高分子化合物等来代替脂质体。
[0131]
作为药物，可以使用生物学上或药理学上为活性的药物。作为药物，可列举出例如抗肿瘤剂、抗癌剂、抗生素、抗病毒剂、抗癌效果增强剂、免疫增强剂、免疫调节剂、免疫恢复剂、辐射线增敏剂、辐射线防护剂、抗组胺剂、抗炎症剂、淤血去除药、抗真菌剂、抗关节炎药、抗哮喘药、血管新生抑制剂、酶剂、抗氧化剂、激素、血管紧张肽转换酶抑制剂、平滑肌细胞的增殖剂、平滑肌细胞的游走抑制剂、血小板聚集抑制剂、化学媒介的游离抑制剂、血管内皮细胞的增殖促进剂、血管内皮细胞的增殖抑制剂、干扰素、白介素、菌落刺激因子、细胞因子、肿瘤坏死因子、粒细胞巨噬细胞菌落刺激因子、粒细胞菌落刺激因子、巨噬细胞菌落刺激因子、干细胞因子、β型转化增殖因子、肝细胞增殖因子、血管内皮细胞增殖因子、促红细胞生成素、疫苗、蛋白质、粘蛋白、肽、多糖类、脂多糖类、糖链、表达反义(antisense)、核糖酶、圈套(decoy)、核酸、抗体等。这些药物可以分别单独使用，也可以组合使用两种以上。
[0132]
作为投与药物的对象，可列举出人、猴、鼠、家畜等哺乳动物，本发明不仅仅限定于所述例示。
[0133]
通过注射来投与药物时，可通过例如点滴等静脉内注射、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、皮内注射、肿瘤内注射等而将药物注射至体内。此处，如上所述，本发明的两亲性化合物的亲水性部位与pvp相比，对pp等塑料的吸附性低。因此，该化合物既能够在作为药物载体的长期血中滞留性脂质体中应用等，又能够降低对塑料的吸附性。其结果，可降低例如使用该化合物进行了修饰的脂质体中内包的有效成分残留在针筒内的风险。因此，本发明的两亲性化合物或医疗用树脂组合物的适合用途之一是作为用于以脂质体等形态保持药物等的载体使用的药品添加剂。并且，该药品添加剂优选添加至以注射剂的形态进
行给药的药品中。
[0134]
本发明的两亲性化合物或医疗用树脂组合物所保持的药物量因药物的给药对象、药物种类等而异，无法一概而论。通常，相对于本发明的两亲性化合物或医疗用树脂组合物中包含的固体成分100g，药物量优选为1μg～50g左右。
[0135]
实施例
[0136]
以下，列举出实施例来具体说明本发明，但本发明不限定于它们。
[0137]
[聚合物的平均分子量的测定]
[0138]
后述制造例1～7和比较制造例1中制造的聚合物的数均分子量通过凝胶渗透色谱(gpc)进行测定。此时，测定条件如下所示。
[0139]
〔聚合物的数均分子量的测定条件(制造例1～7中得到的聚合物)〕
[0140]
·
测定设备：东曹公司制、型号：hlc
‑
8320gpc
[0141]
·
分子量柱：东曹公司制、将型号：tskgel superawm
‑
h和superaw2500这两根进行串联
[0142]
·
洗脱液：添加有10mmol/l溴化锂的二甲基甲酰胺
[0143]
·
标准曲线用标准物质：聚苯乙烯
[0144]
·
测定用溶液的制备：使聚合物溶解于二甲基甲酰胺而制备聚合物的浓度为0.2质量％的溶液，使用将该溶液用过滤器过滤后的滤液。
[0145]
〔聚合物的数均分子量的测定条件(比较制造例1中得到的聚合物)〕
[0146]
·
测定设备：东曹公司制、型号：hlc
‑
8320gpc
[0147]
·
分子量柱：东曹公司制、将型号：tskgelα
‑
m与α
‑
2500这两根串联
[0148]
·
洗脱液：0.2m硝酸钠水溶液80vol％与乙腈20vol％的混合溶液
[0149]
·
标准曲线用标准物质：聚乙二醇
[0150]
·
测定用溶液的制备：使聚合物溶解于洗脱液而制备聚合物的浓度为0.2质量％的溶液，使用将该溶液用过滤器过滤后的滤液。
[0151]
[两亲性化合物(聚合物)的制造例]
[0152]
通过下述方法来制造具有聚合物形态的两亲性化合物。
[0153]
(制造例1)
[0154]
向带有三向阀的舒伦克瓶中投入甘油单丙烯酸酯1.0g、4
‑
氰基
‑4‑
(十二烷基磺酰基硫代羰基)磺酰基戊酸酯0.071g、2,2
’‑
偶氮双异丁腈0.022g、乙醇1.8g和水0.2g。接着，进行瓶内部的氮气置换，以70℃搅拌1小时。通过将所得反应液滴加至二乙基醚中进行纯化，从而得到末端含有烷基(正十二烷基)的聚甘油单丙烯酸酯。所得两亲性化合物(聚合物)的数均分子量为2200。其中，碳原子数为8以上的烃基(正十二烷基)的分子量为169.3。
[0155]
(制造例2)
[0156]
向带有三向阀的舒伦克瓶中投入甘油单丙烯酸酯1.0g、4
‑
氰基
‑4‑
(十二烷基磺酰基硫代羰基)磺酰基戊酸酯0.043g、2,2
’‑
偶氮双异丁腈0.013g、乙醇1.8g和水0.2g。接着，进行瓶内部的氮气置换，以70℃搅拌1小时。通过将所得反应液滴加至二乙基醚中进行纯化，从而得到末端含有烷基(正十二烷基)的聚甘油单丙烯酸酯。所得两亲性化合物(聚合物)的数均分子量为10900。其中，包含碳原子数为8以上的烃基的部位(正十二烷基)的分子量为169.3。
[0157]
(制造例3)
[0158]
向带有三向阀的舒伦克瓶中投入甘油单丙烯酸酯1.0g、1
‑
十八硫醇0.098g、2,2
’‑
偶氮双异丁腈0.021g、乙醇2.25g和水0.25g。接着，进行瓶内部的氮气置换，以80℃搅拌3小时。通过将所得反应液滴加至二乙基醚中进行纯化，从而得到末端含有烷基(正十八烷基)的聚甘油单丙烯酸酯。所得两亲性化合物(聚合物)的数均分子量为4100。其中，碳原子数为8以上的烃基(正十八烷基)的分子量为253.5。
[0159]
(制造例4)
[0160]
向带有三向阀的舒伦克瓶中投入甘油单丙烯酸酯1.0g、1
‑
十八硫醇0.049g、2,2
’‑
偶氮双异丁腈0.014g、乙醇1.8g和水0.2g。接着，进行瓶内部的氮气置换，以80℃搅拌3小时。通过将所得反应液滴加至二乙基醚中进行纯化，从而得到末端含有烷基(正十八烷基)的聚甘油单丙烯酸酯。所得两亲性化合物(聚合物)的数均分子量为8600。其中，碳原子数为8以上的烃基(正十八烷基)的分子量为253.5。
[0161]
(制造例5)
[0162]
向带有三向阀的舒伦克瓶中投入甘油单甲基丙烯酸酯1.0g、1
‑
十八硫醇0.045g、2,2
’‑
偶氮双异丁腈0.013g、乙醇1.6g和正丁醇0.4g。接着，进行瓶内部的氮气置换，以80℃搅拌3小时。通过将所得反应液的溶液部滴加至二乙基醚中进行纯化，从而得到末端含有烷基(正十八烷基)的聚甘油单甲基丙烯酸酯。所得两亲性化合物(聚合物)的数均分子量为4100。其中，碳原子数为8以上的烃基(正十八烷基)的分子量为253.5。
[0163]
(制造例6)
[0164]
向带有三向阀的舒伦克瓶中投入甘油单甲基丙烯酸酯1.0g、1
‑
十八硫醇0.045g、2,2
’‑
偶氮双异丁腈0.013g、乙醇1.6g和正丁醇0.4g。接着，进行瓶内部的氮气置换，以80℃搅拌3小时。通过使所得反应液的沉降部溶解于乙醇1.0g，并进一步滴加至二乙基醚中进行纯化，从而得到末端含有烷基(正十八烷基)的聚甘油单甲基丙烯酸酯。所得两亲性化合物(聚合物)的数均分子量为14000。其中，碳原子数为8以上的烃基(正十八烷基)的分子量为253.5。
[0165]
(制造例7)
[0166]
向带有三向阀的舒伦克瓶中投入甘油单甲基丙烯酸酯1.0g、4
‑
氰基
‑4‑
(苯基硫代羰基硫基)戊酸0.022g、2,2
’‑
偶氮双(2,4
‑
二甲基戊腈)0.016g、乙醇0.8g和正丁醇0.2g。接着，进行瓶内部的氮气置换，以50℃搅拌30分钟。将所得反应液滴加至二乙基醚中进行纯化。投入所得聚合物0.2g、丙胺0.25g、水1.0g，并在室温下整夜搅拌，进行冻结干燥，由此得到末端导入有硫醇基的聚甘油单甲基丙烯酸酯。所得聚合物的数均分子量为5200。
[0167]
其后，向10ml螺管中投入上述得到的聚合物0.0165g、二硬脂酰基
‑
n
‑
(3
‑
马来酰亚胺
‑1‑
氧代丙基)
‑
l
‑
α
‑
磷脂酰乙醇胺(日油公司制、coatsome(注册商标)fe
‑
8080ma3)0.0276g、三乙胺75μl、氯仿0.06g和甲醇0.4g。接着，在室温下整夜反应后，滴加至二乙基醚中进行纯化，由此得到末端含有脂质的聚甘油单甲基丙烯酸酯。所得两亲性化合物(聚合物)的数均分子量为6000。其中，碳原子数为8以上的烃基的供给源、即脂质部分的分子量为约954。
[0168]
(比较制造例1)
[0169]
向带有三向阀的舒伦克瓶中投入n
‑
乙烯基
‑2‑
吡咯烷酮1.0g、十八硫醇0.064g、2,
2
’‑
偶氮双异丁腈0.018g、乙醇1.6g和正丁醇0.4g。接着，进行瓶内部的氮气置换，以80℃搅拌3小时。通过将所得反应液滴加至二乙基醚中进行纯化，从而得到末端含有烷基(正十八烷基)的聚乙烯基吡咯烷酮。所得两亲性化合物(聚合物)的数均分子量为12000。其中，碳原子数为8以上的烃基(正十八烷基)的分子量为253.5。
[0170]
[脂质体的制作]
[0171]
将氢化的源自大豆的磷脂酰胆碱(avanti polar lipids公司)17.6mg和胆甾醇(东京化成工业公司)4.7mg溶解于20ml甲醇后，投入至200ml容量的茄型烧瓶中，在65℃的水浴中进行蒸发，形成脂质膜。向其中添加包含20w/v％葡萄糖的pbs 3ml，加盖密封，以65℃进行30分钟的温浴，使其水合而制成脂质悬浮液。将该脂质悬浮液转移至微量试管中，添加4倍量的pbs后，以15000
×
g离心分离20分钟，使所形成的脂质体沉淀。在离心分离后，去掉上清，重新添加pbs 1ml并使其再次悬浮，将由此得到的物质用加热至65℃的挤出机(孔尺寸为0.1μm)进行整粒，得到以脂质当量计为12.9mg/ml的脂质体悬浮液。脂质体悬浮液的浓度测定使用lab assay(商标)磷脂(富士胶片和光纯药公司)，测定步骤基于附带的操作手册。
[0172]
[两亲性化合物(聚合物)对脂质体的修饰]
[0173]
将上述制造例4中制作的两亲性化合物(聚合物)、即末端含有烷基(正十八烷基)的聚甘油单丙烯酸酯(数均分子量为8600)以达到2w/v％或4w/v％的方式溶解于pbs，制备浓度不同的聚合物溶液。将该聚合物溶液分别与上述制备的脂质体悬浮液以等体积进行混合，以10℃静置60分钟，使两亲性化合物对脂质体进行修饰。此处可推测：通过向构成脂质体的脂双层中插入含有末端烷基的聚合物的烷基部分，从而得到脂质体表面被该聚合物的亲水性部位修饰(覆盖)那样的结构。另一方面，将混合等体积的pbs来代替聚合物溶液并进行反应而得的物质作为对照区。其后，以15000
×
g离心分离20分钟，去除上清，去除未反应的两亲性化合物，将所形成的沉淀用pbs进行再悬浮。利用zetasizer nano zs(malvern panalytical公司)来测定各脂质体的粒径。其结果，如图1所示那样，对照区中的脂质体的粒径为160.6
±
5.2nm。与此相对，用2w/v％和4w/v％的聚合物溶液进行了修饰的脂质体的粒径分别为174.8
±
6.5nm和174.6
±
5.5nm，可确认到由使用两亲性化合物的修饰导致的粒径增大。
[0174]
[使用了培养细胞的两亲性化合物(聚合物)的细胞毒性试验]
[0175]
使用以10w/v％的最终浓度添加有胎牛血清(fbs)(ds pharma biomedical公司)的dmem培养基(nacalai tesque公司)，进行作为小鼠成纤维细胞的l929细胞(ds pharma biomedical公司)的培养。以成为5.0
×
103细胞/cm2的方式播种至100mm细胞培养皿(bd falcon公司)中，在37℃、5％co2的条件下进行培养。将在100mm细胞培养皿中培养至70％融合状态的l929细胞用0.25w/v％胰蛋白酶/50mm edta溶液进行处理，添加前述血清添加dmem培养基，使胰蛋白酶反应停止，得到l929细胞悬浮液。使用0.4w/v％台盼蓝溶液(富士胶片和光纯药公司)，测定l929细胞悬浮液中的细胞数。将细胞悬浮液以每孔的细胞数达到2.5
×
103细胞的方式播种至96孔板(thermo fisher science公司)中，在37℃、5％co2的条件下培养24小时。24小时后，分别从各孔中去除培养基50μl后，将使制造例1～7和比较制造例1中制作的两亲性化合物(聚合物)以达到2w/v％的方式溶解于pbs而得到的聚合物溶液分别在各孔中添加50μl，在37℃、5％co2的条件下孵育24小时。在孵育后，分别向各孔中添
加细胞增殖试剂盒ii(xtt)(sigma aldrich公司)试剂51μl，在37℃、5％co2的条件下孵育3小时。其后，利用酶标仪sh
‑
9000(corona electric公司)测定吸光度。测定步骤基于试剂盒附带的操作手册。根据添加pbs来代替聚合物溶液并进行了试验的孔的测定值和添加有各样品的孔的测定值，由下式算出l929细胞的存活率。
[0176]
(存活率)[％]＝(添加有各样品的孔的测定值)
÷
(添加有pbs的孔的测定值)
×
100
[0177]
其结果，如图2所示那样，任意聚合物溶液均未对l929细胞的存活率造成明显差异，观察不到显著的细胞毒性。
[0178]
[使用了培养细胞的两亲性化合物(聚合物)修饰脂质体的细胞毒性试验]
[0179]
使用以10w/v％的最终浓度添加有胎牛血清(fbs)(ds pharma biomedical公司)的dmem培养基(nacalai tesque公司)，进行作为小鼠成纤维细胞的l929细胞(ds pharma biomedical公司)的培养。以成为5.0
×
103细胞/cm2的方式播种至100mm细胞培养皿(bd falcon公司)中，在37℃、5％co2的条件下进行培养。将在100mm细胞培养皿中培养至70％融合状态的l929细胞用0.25w/v％胰蛋白酶/50mm edta溶液进行处理，添加前述血清添加dmem培养基，使胰蛋白酶反应停止，得到l929细胞悬浮液。使用0.4w/v％台盼蓝溶液(富士胶片和光纯药公司)，测定l929细胞悬浮液中的细胞数。将细胞悬浮液以每孔的细胞数达到2.5
×
103细胞的方式播种至96孔板(thermo fisher science公司)中，在37℃、5％co2的条件下培养24小时。24小时后，分别从各孔中去除培养基50μl。接着，按照前述“两亲性化合物(聚合物)对脂质体的修饰”一项的记载，分别添加使用上述制造例1～7和比较制造例1中制作的两亲性化合物(聚合物)的2w/v％溶液而得到的修饰脂质体悬浮液或无修饰脂质体悬浮液(均为5mg
‑
脂质/ml)50μl，在37℃、5％co2的条件下孵育24小时。孵育后，分别向各孔中添加细胞增殖试剂盒ii(xtt)(sigma aldrich公司)试剂51μl，在37℃、5％co2的条件下孵育3小时。其后，利用酶标仪sh
‑
9000(corona electric公司)测定吸光度。测定步骤基于试剂盒附带的操作手册。根据添加pbs来代替修饰脂质体悬浮液并进行了试验的孔的测定值和添加有各样品的孔的测定值，由下式算出l929细胞的存活率。
[0180]
(存活率)[％]＝(添加有各样品的孔的测定值)
÷
(添加有pbs的孔的测定值)
×
100
[0181]
其结果，如图3所示那样，修饰有任意两亲性化合物(聚合物)的脂质体均未对l929细胞的存活率造成显著差异，观察不到显著的细胞毒性。
[0182]
[两亲性化合物(聚合物)对塑料表面的吸附试验]
[0183]
将上述制造例4和制造例6以及比较制造例1中制作的两亲性化合物(聚合物)分别以达到1w/v％的方式溶解于pbs，制备聚合物溶液。将该聚合物溶液4.5ml和聚丙烯(pp)制微粉(平均粒径为5微米)1.5g投入至螺口瓶中，用搅拌器搅拌30分钟。搅拌后，由gpc的峰面积对各聚合物溶液的聚合物浓度进行定量。根据初始的聚合物浓度(c0)和试验后的聚合物浓度(c
t
)，使用下式来算出每1g微粉的聚合物的吸附量。将结果示于下述表1。
[0184]
(对微粉的吸附量)[mg/g]＝(c
t
‑
c0)
÷
(微粉[g])
[0185]
[表1]
[0186][0187]
由表1所示的结果可知：与部位(i)由pvp形成的两亲性化合物(聚合物)相比，部位(i)由glmma或glma形成的两亲性化合物(聚合物)对聚丙烯(pp)制微粉的吸附明显少。
[0188]
[内封有荧光物质的脂质体的制作]
[0189]
将氢化的源自大豆的磷脂酰胆碱(avanti polar lipids公司)17.6mg和胆甾醇(东京化成工业公司)4.7mg溶解于20ml甲醇后，投入至200ml容量的茄型烧瓶中，在65℃的水浴中进行蒸发，形成脂质膜。向其中添加包含20w/v％葡萄糖和0.02％w/v荧光素异硫代氰酸酯(fitc)的pbs 3ml，加盖密封，以65℃进行30分钟的温浴，使其水合而制成脂质悬浮液。将该脂质悬浮液转移至微量试管中，添加4倍量的pbs后，以15000
×
g离心分离20分钟，使所形成的脂质体沉淀。在离心分离后，去掉上清，重新添加pbs 1ml并使其再次悬浮，将由此得到的物质用加热至65℃的挤出机(孔尺寸为0.1μm)进行整粒，得到以脂质当量计为13.7mg/ml的脂质体悬浮液。脂质体悬浮液的浓度测定使用lab assay(商标)磷脂(富士胶片和光纯药公司)，测定步骤基于附带的操作手册。
[0190]
[peg修饰脂质体的制作]
[0191]
将氢化的源自大豆的磷脂酰胆碱(avanti polar lipids公司)12.9mg、胆甾醇(东京化成工业公司)3.4mg和peg
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磷脂(日油公司制、sunbright(注册商标)dspe
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020cn)3.76mg溶解于20ml甲醇后，投入至200ml容量的茄型烧瓶中，在65℃的水浴中进行蒸发，形成脂质膜。向其中添加包含20w/v％葡萄糖和0.02％w/vfitc的pbs 3ml，加盖密封，以65℃进行30分钟的温浴，使其水合而制成脂质悬浮液。将该脂质悬浮液转移至微量试管中，添加4倍量的pbs后，以15000
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g离心分离20分钟，使所形成的脂质体沉淀。在离心分离后，去掉上清，重新添加pbs 1ml并使其再次悬浮，将由此得到的物质用加热至65℃的挤出机(孔尺寸为0.1μm)进行整粒，得到以脂质当量计为9.7mg/ml的脂质体悬浮液。脂质体悬浮液的浓度测定使用lab assay(商标)磷脂(富士胶片和光纯药公司)，测定步骤基于附带的操作手册。
[0192]
[使用了培养细胞的两亲性化合物(聚合物)修饰脂质体的细胞吸收试验]
[0193]
使用以10w/v％的最终浓度添加有胎牛血清(fbs)(ds pharma biomedical公司)的mem培养基(nacalai tesque公司)，进行作为人肝癌细胞株的hepg2细胞(ds pharma biomedical公司)的培养。以成为5.0
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103细胞/cm2的方式播种至100mm细胞培养皿(bd falcon公司)中，在37℃、5％co2的条件下进行培养。将在100mm细胞培养皿中培养至70％融合状态的hepg2细胞用0.25w/v％胰蛋白酶/50mm edta溶液进行处理，添加前述血清添加mem培养基，使胰蛋白酶反应停止，得到hepg2细胞悬浮液。使用0.4w/v％台盼蓝溶液(富士胶片和光纯药公司)，测定hepg2细胞悬浮液中的细胞数。将细胞悬浮液以每孔的细胞数达到4
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104细胞的方式播种至24孔板(thermo fisher science公司)中，在37℃、5％co2的条件下培养48小时。48小时后，从各孔中去除培养基，加入未添加血清的mem培养基500μl。接
着，按照前述“两亲性化合物(聚合物)对脂质体的修饰”一项的记载，分别添加使用上述制造例4中制作的两亲性化合物(聚合物)的2w/v％溶液而得到的内封有荧光物质的修饰脂质体悬浮液、或者按照[peg修饰脂质体的制作]一项的记载而制作的peg修饰脂质体、或者无修饰脂质体悬浮液(均为5mg
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脂质/ml)50μl，在37℃或4℃、5％co2的条件下孵育3小时。在孵育后，去除各孔的培养基，用pbs清洗2次后，添加包含0.02w/v的triton x
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100的0.2mol/l氢氧化钠水溶液350μl，将细胞溶解，利用酶标仪sh
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9000(corona electric公司)来测定溶解液的荧光强度。根据以4℃进行了孵育的孔和以37℃进行了孵育的孔的测定值，由下式算出脂质体向hepg2细胞的吸收量。
[0194]
(吸收量)[
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]＝(以37℃进行了孵育的孔的测定值)
‑
(以4℃进行了孵育的孔的测定值)
[0195]
接着，由下式算出其与无修饰脂质体的吸收量之比。
[0196]
(吸收量之比)[％]＝(各修饰脂质体的吸收量)
÷
(无修饰脂质体的吸收量)
×
100
[0197]
其结果，如图4所示那样，peg修饰脂质体与无修饰脂质体相比，向细胞中的吸收量显著减少，与此相对，修饰有两亲性化合物(聚合物)的脂质体与无修饰脂质体相比，吸收量未观察到显著差异。
[0198]
本技术基于2019年3月29日申请的日本专利申请号2019
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067826号，将其公开内容通过参照而整体援引至此。