磁珠-核酸复合体洗涤液及应用的制作方法

磁珠
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核酸复合体洗涤液及应用
技术领域
1.本发明涉及体外诊断核酸检测领域，具体是一种新的磁珠
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核酸复合体洗涤液以及应用。


背景技术：

2.磁珠法是核酸检测使用的一种核酸自动提取方法。磁珠法是利用外置磁体和试管内的磁珠的磁吸作用，用外置磁体驱动磁珠在试管内运动，实现磁珠
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核酸复合体从裂解液到洗涤液，再从洗涤液到扩增液的运动，从而实现核酸模板自动提取。
3.磁珠法核酸自动提取中，洗涤液除了去除磁珠
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核酸复合体残留的裂解液和样本液，还起到分隔裂解液和扩增液的作用。现有磁珠法核酸自动提取中，存在以下问题：1、容易发生裂解液下渗问题；2、磁珠容易残留在两种液体组分的临界面，即存在磁珠临界损失问题。


技术实现要素：

4.本发明的目的是提供一种磁珠
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核酸复合体洗涤液及应用，以至少在一定程度解决相关技术存在的上述问题。
5.发明人研究发现，使用合适粘度的硅油作为磁珠法核酸自动提取中洗涤液，能够有效分隔裂解液和扩增液同时能够解决磁珠临界损失问题，所以提出本专利申请。本发明采用的技术方案如下：
6.一种磁珠
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核酸复合体洗涤液，所述磁珠
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核酸复合体洗涤液由粘度介于1000～50000cs之间的硅油构成。其中，硅油的粘度可以是1000～50000cs之间的任意数值，例如1000cs、2000cs、2500cs、3000cs、4000cs、5500cs、6000cs、7000cs、8000cs、9000cs、10000cs、12000cs、13000cs、15000cs、16000cs、18000cs、20000cs、21000cs、23000cs、25000cs、28000cs、30000cs、33000cs、35000cs、37000cs、40000cs、43000cs、45000cs、48000cs、49000cs、50000cs。
7.硅油粘度优选介于3000～30000cs之间。
8.硅油粘度还优选介于5000～20000cs之间。
9.本发明还提供了将粘度介于1000～50000cs之间的硅油作为磁珠法全自动提取核酸模板的洗涤液的应用。
10.在上述应用中，所述硅油被填装于试管内的裂解液和扩增液之间。
11.在上述应用中，优选地，所述硅油的深度介于30～60mm之间。
12.与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：
13.经实验，上述粘度区间的硅油作为洗涤液，能够有效的分隔裂解液和扩增液，避免裂解液下渗。而且，不会发生磁珠滞留，能够解决磁珠临界损失问题，避免影响传送到扩增液的核酸模板数量。
附图说明
14.图1为采用常规洗涤液的分隔效果图；
15.图2为采用硅油洗涤液的分隔效果图；
16.图3为采用常规洗涤液的扩增曲线图；
17.图4为采用硅油作为洗涤液的扩增曲线图；
18.图5至图7为采用不同粘度的硅油作为洗涤液的扩增曲线图。
具体实施方式
19.下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。
20.实施例一：磁珠
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核酸复合体洗涤液
21.磁珠
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核酸复合体洗涤液由粘度介于1000～50000cs之间的硅油构成。其中，硅油的粘度可以是1000～50000cs之间的任意数值，例如1000cs、2000cs、2500cs、3000cs、4000cs、5500cs、6000cs、7000cs、8000cs、9000cs、10000cs、12000cs、13000cs、15000cs、16000cs、18000cs、20000cs、21000cs、23000cs、25000cs、28000cs、30000cs、33000cs、35000cs、37000cs、40000cs、43000cs、45000cs、48000cs、49000cs、50000cs。硅油粘度优选介于3000～30000cs之间。硅油粘度还优选介于5000～20000cs之间。
22.其中，硅油的粘度对洗涤效果和分隔效果存在影响。具体影响如下：当粘度过大时，会导致磁珠在硅油中滞留，影响传送到扩增液中的核酸模板数量，进而会导致扩增效果差，结果不稳定；当粘度过小时，硅油无法在试管中长时间停留，硅油上移，裂解液下渗混入扩增液中导致扩增酶变性失活。
23.实施例二：
24.硅油作为磁珠法全自动提取核酸模板的洗涤液的应用。其中，硅油的粘度可以是1000～50000cs之间的任意数值，例如1000cs、2000cs、2500cs、3000cs、4000cs、5500cs、6000cs、7000cs、8000cs、9000cs、10000cs、12000cs、13000cs、15000cs、16000cs、18000cs、20000cs、21000cs、23000cs、25000cs、28000cs、30000cs、33000cs、35000cs、37000cs、40000cs、43000cs、45000cs、48000cs、49000cs、50000cs。硅油粘度优选介于3000～30000cs之间。硅油粘度还优选介于5000～20000cs之间。
25.在上述应用中，所述硅油被填装于试管内的裂解液和扩增液之间，硅油充当洗涤液除去磁珠
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核酸复合体残留的裂解液和样本液。
26.在上述应用中，所述硅油的深度优选介于30～60mm之间。
27.实施例三：常规洗涤液和硅油洗涤液的洗涤效果对比实验
28.常规洗涤液实验：裂解液和洗涤液采用全式金ec601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的md027扩增液，洗涤效果如图1所示。
29.硅油洗涤液实验：
30.裂解液采用全式金ec601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的md027扩增液，洗涤液采用粘度为15000cs的硅油，洗涤效果如图2所示。
31.裂解液采用全式金ec601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的md027扩增液，分别用粘度为5000cs、8000cs、12000cs、20000cs、30000cs、40000cs的硅油作为洗涤液，洗涤效果如图2所示。
32.图1和图2的试管中，上层为裂解液，下层为扩增液，中间为洗涤液。由图1可见，上层裂解液有不同程度的下渗，底部扩增液中、以及洗涤液和扩增液的临界面均有磁珠残留。由图2可见，裂解液没有明显下渗，扩增液内和两层临界面没有磁珠残留。可见，相比常规洗涤液，上述硅油洗涤液具有良好的分隔效果，能够有效避免裂解液下渗混入扩增液导致扩增酶变性失活；同时，磁珠在硅油洗涤液中无滞留，因此不会影响传送到扩增液的核酸模板数量，因此，上述硅油洗涤液替代传统的核酸洗涤液，实现裂解液和扩增液的分隔同时解决了磁珠的临界损失问题。
33.实施例四：扩增效果的对比实验
34.常规洗涤液扩增实验：裂解液和洗涤液采用全式金ec601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的md027扩增液，使用布氏杆菌为比较样本，扩增曲线如图3所示，其中，纵坐标为荧光强度，横坐标为循环数，rox为阴性参照。
35.硅油洗涤液扩增实验：裂解液采用全式金ec601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的md027扩增液，洗涤液采用粘度为15000cs的硅油，使用布氏杆菌为比较样本，扩增曲线如图4所示，其中，纵坐标为荧光强度，横坐标为循环数，rox为阴性参照。
36.对比图3和图4可见，从扩增效果看，硅油对磁珠
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核酸复合物的洗涤效果优于常规洗涤液。
37.实施例五：硅油洗涤液的粘度对扩增效果的对比实验
38.裂解液采用全式金ec601通用型试剂盒，扩增液采用菲鹏公司的md027扩增液，洗涤液分别采用粘度为55000cs的硅油、粘度为15000cs的硅油、粘度为800cs的硅油，使用布氏杆菌为比较样本，扩增曲线对应如图5、图6、图7所示，其中，纵坐标为荧光强度，横坐标为循环数，rox为阴性参照。
39.由图5、图6、图7可见，采用高粘度硅油作为洗涤液，扩增效果差结果不稳定，其原因可能在于高粘度硅油影响磁珠的运动速度，使磁珠在硅油层中滞留无法把核酸模板带到扩增液中。采用低粘度硅油作为洗涤液，无法扩增，其原因可能在于低粘度的硅油无法在反应管中长时间停留会，硅油上移，裂解液下渗混到扩增液中导致扩增酶变性失活。而合适粘度的硅油作为洗涤液，具有良好的扩增效果。
40.上述通过具体实施例对本发明进行了详细的说明，这些详细的说明仅仅限于帮助本领域技术人员理解本发明的内容，并不能理解为对本发明保护范围的限制。本领域技术人员在本发明构思下对上述方案进行的各种润饰、等效变换等均应包含在本发明的保护范围内。