一种病毒密度梯度离心纯化装置的制作方法

技术特征：
1.一种病毒密度梯度离心纯化装置，其特征在于，所述的装置包括环形管路和连续流密度梯度离心机，所述的连续流密度梯度离心机包括连续流密度梯度离心转子(1)；在所述的环形管路上依次设有第一管口(2)、第三管口(3)、第二管口(4)和第四管口(5)，所述的第一管口与第三管口之间的管路上设有第一阀门(6)，所述的第三管口与第二管口之间的管路上设有第二阀门(7)，所述的第二管口与第四管口之间的管路上设有第三阀门(8)，所述的第四管口与第一管口之间的管路上设有第四阀门(9)；所述的第一管口通过第一管道(10)与所述的连续流密度梯度离心转子的上端相连，所述的第二管口通过第二管道(11)与所述的连续流密度梯度离心转子的下端相连，所述的第三管口通过第三管道(12)与第一瓶体(13)相连，所述的第四管口通过第四管道(14)与第二瓶体(15)相连；所述的第一管道上设有第五阀门(16)，所述的第二管道上设有第六阀门(17)；所述的第三管道上设有液体输送装置(18)。2.如权利要求1所述的装置，其特征在于，所述的环形管路为菱形管路。在另一优选例中，所述的第一管口(2)、第三管口(3)、第二管口(4)和第四管口(5)分别位于菱形管路的四个菱角处。3.如权利要求1所述的装置，其特征在于，所述液体输送装置为双向输送装置。4.如权利要求1所述的病毒密度梯度离心纯化装置的用途，其特征在于，用于通过密度梯度离心对含狂犬病病毒的物料进行纯化。5.一种狂犬病病毒密度梯度离心纯化方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)提供一连续流密度梯度离心转子，所述连续流密度梯度离心转子被配置为围绕所述连续流密度梯度离心转子的中心轴旋转离心，并且所述连续流密度梯度离心转子设有用于容纳物料的内腔，所述内腔的体积为v0，在底部设有物料入口，顶部设有物料出口；(2)通过所述物料入口，在所述连续流密度梯度离心转子的内腔中注入缓冲溶液，然后注入体积v1的55-65％(wt％)蔗糖溶液；(3)对所述连续流密度梯度离心转子以t1进行离心，从而在所述连续流密度梯度离心转子的内腔形成蔗糖梯度溶液；其中，t1为3000-7000rpm；(4)以t2离心条件下，以流速f1，将含狂犬病病毒的物料从所述物料入口注入内腔，其中，f1为90-240ml/min；其中，t2为30000-40000rpm；(5)当含狂犬病病毒的物料注入操作结束后，在t2离心条件下，缓冲溶液从以流速f2从所述物料入口注入内腔，从而使得狂犬病病毒富集于所述蔗糖梯度溶液中，形成富含狂犬病病毒的梯度离心层；其中，f2为90-240ml/min；(6)对所述连续流密度梯度离心转子的离心速度进行降速，从而使得转速为0rpm；(7)从所述连续流密度梯度离心转子的底部物料入口，收集所述富含狂犬病病毒的梯度离心层，从而获得纯化的狂犬病病毒。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，v1/v0＝0.4-0.6。7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法使用如权利要求1所述的病毒密度梯度离心纯化装置进行。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：
1.所述的含狂犬病病毒的物料；2.制备蔗糖密度梯度；2.1、在连续流密度梯度离心转子(1)处于0rpm时，将缓冲溶液加入到第一瓶体(13)中，关闭第一阀门(6)和第三阀门(8)，开启输送装置(18)，缓冲溶液依次经第三管道(12)、第三管口(3)和第二管口(4)之间的管路、第二管道(11)、连续流密度梯度离心转子(1)、第一管道(10)、第一管口(2)和第四管口(5)之间的管路、和第四管道(14)，流出至第二瓶体(15)，使缓冲液充满连续流密度梯度离心转子(1)和整个管路系统；2.2、打开第一阀门(6)和第三阀门(8)，关闭第五阀门(16)和第六阀门(17)，开启输送装置(18)，第一瓶体(13)中的缓冲溶液经第三管道(12)后，分别经第三管口(3)、第二管口(4)至第四管口(5)之间的管路和第三管口(3)、第一管口(2)至第四管口(5)之间的管路，从第四管道(14)流出至第二瓶体(15)；2.3、打开第五阀门(16)和第六阀门(17)，关闭第一阀门(6)和第三阀门(8)，开启输送装置(18)，缓冲溶液依次经第三管道(12)、第三管口(3)和第二管口(4)之间的管路、第二管道(11)、连续流密度梯度离心转子(1)、第一管道(10)、第一管口(2)和第四管口(5)之间的管路、和第四管道(14)，流出至第二瓶体(15)；2.4、打开第一阀门(6)和第三阀门(8)，关闭第二阀门(7)和第四阀门(9)，开启输送装置(18)(蠕动泵)，缓冲溶液依次经第三管道(12)、第三管口(3)和第一管口(2)之间的管路、第一管道(10)、连续流密度梯度离心转子(1)、第二管道(11)、第二管口(4)和第四管口(5)之间的管路、和第四管道(14)，流出至第二瓶体(15)；2.5、打开第二阀门(7)和第四阀门(9)，将第一瓶体(13)中的缓溶液替换成55-65％(wt％)蔗糖溶液，关闭第五阀门(16)和第六阀门(17)，开启输送装置(18)，第一瓶体(13)中的蔗糖溶液依次经第三管道(12)后，分别经第三管口(3)、第二管口(4)至第四管口(5)之间的管路和第三管口(3)、第一管口(2)至第四管口(5)之间的管路，从第四管道(14)流出至第二瓶体(15)；2.6、打开第五阀门(16)和第六阀门(17)，关闭第一阀门(6)和第三阀门(8)，开启输送装置(18)，蔗糖溶液依次经第三管道(12)、第三管口(3)和第二管口(4)之间的管路、第二管道(11)，进入到连续流密度梯度离心转子(1)中，从而使蔗糖溶液进入到连续流密度梯度离心转子(1)中并与转子(1)中的缓冲液接触，蔗糖溶液进入到连续流密度梯度离心转子的体积为v1；2.7打开第一阀门(6)和第三阀门(8)，关闭第六阀门(17)，连续流密度梯度离心转子(1)以t1的速度进行转动离心，使得连续流密度梯度离心转子(1)中的缓冲溶液和蔗糖溶液形成纵向的密度梯度，在连续流密度梯度离心转子(1)离心转动过程中，溶解在缓冲液和蔗糖溶液中气体会在连续流密度梯度离心转子(1)转动过程中产生，且产生的气泡出现在连续流密度梯度离心转子(1)的上端和下端；2.8、保持连续流密度梯度离心转子(1)以t1转动离心，将第一瓶体(13)中的55-65％(wt％)蔗糖溶液替换成缓冲溶液，关闭第五阀门(16)和第六阀门(17)，开启输送装置(18)，第一瓶体(13)中的缓冲溶液依次经第三管道(12)后，分别经第三管口(3)、第二管口(4)至第四管口(5)之间的管路和第三管口(3)、第一管口(2)至第四管口(5)之间的管路，从第四管道(14)流出至第二瓶体(15)；
2.9依次除去连续流密度梯度离心转子(1)的下端和上端的气泡；2.9.1除去连续流密度梯度离心转子(1)的下端的气泡，具体步骤如下：保持连续流密度梯度离心转子(1)在以t1转动离心过程中，打开第五阀门(16)和第六阀门(17)，关闭第二阀门(7)和第四阀门(9)，开启输送装置(18)，缓冲溶液依次经第三管道(12)、第三管口(3)和第一管口(2)之间的管路、第一管道(10)、连续流密度梯度离心转子(1)、第二管道(11)、第二管口(4)和第四管口(5)之间的管路、和第四管道(14)，流出至第二瓶体(15)，从而将密度梯度离心转子(1)下端的气泡推出除去；2.9.2除去连续流密度梯度离心转子(1)的上端的气泡，具体步骤如下：保持连续流密度梯度离心转子(1)在以t1转动离心过程中，打开第二阀门(7)和第四阀门(9)，关闭第一阀门(6)和第三阀门(8)，开启输送装置(18)，缓冲溶液依次经第三管道(12)、第三管口(3)和第二管口(4)之间的管路、第二管道(11)、连续流密度梯度离心转子(1)、第一管道(10)、第一管口(2)和第四管口(5)之间的管路、和第四管道(14)，流出至第二瓶体(15)，从而将密度梯度离心转子(1)上端的气泡推出除去；3.进样：3.1将连续流密度梯度离心转子(1)的离心速度在从t1上升至t2，保持连续流密度梯度离心转子(1)以t2转动离心，将第一瓶体(13)中缓冲溶液替换成含狂犬病病毒的物料，打开第一阀门(6)和第三阀门(8)，关闭第五阀门(16)和第六阀门(17)，开启输送装置(18)，第一瓶体(13)中的含狂犬病病毒的物料依次经第三管道(12)后，分别经第三管口(3)、第二管口(4)至第四管口(5)之间的管路和第三管口(3)、第一管口(2)至第四管口(5)之间的管路，从第四管道(14)，流出至第二瓶体(15)；3.2保持连续流密度梯度离心转子(1)在以t2转动离心，打开第五阀门(16)和第六阀门(17)，关闭第一阀门(6)和第三阀门(8)，开启输送装置(18)，含狂犬病病毒的物料依次经第三管道(12)、第三管口(3)和第二管口(4)之间的管路和第二管道(11)，从连续流密度梯度离心转子(1)的下端进入到连续流密度梯度离心转子(1)中，含狂犬病病毒的物料的进样速度为f1；3.3保持连续流密度梯度离心转子(1)在以t2转动离心，打开第一阀门(6)和第三阀门(8)，关闭第五阀门(16)和第六阀门(17)，将第一瓶体(13)中的含狂犬病病毒的物料替换成缓冲溶液，开启输送装置(18)，第一瓶体(13)中的缓冲溶液依次经第三管道(12)后，分别经第三管口(3)、第二管口(4)至第四管口(5)之间的管路和第三管口(3)、第一管口(2)至第四管口(5)之间的管路，从第四管道(14)，流出至第二瓶体(15)；3.4打开第五阀门(16)和第六阀门(17)，关闭第一阀门(6)和第三阀门(8)，保持连续流密度梯度离心转子(1)在以t2转动离心，同时，在连续流密度梯度离心转子(1)离心过程中，开启输送装置(18)，缓冲液依次经第三管道(12)、第三管口(3)和第二管口(4)之间的管路和第二管道(11)，从连续流密度梯度离心转子(1)的下端进入到连续流密度梯度离心转子(1)中，缓冲液的进液速度为f2，连续流密度梯度离心转子(1)在以t2转动离心，含狂犬病病毒的物料在连续流密度梯度离心转子(1)中因分子量的不同分布在不同的纵向蔗糖梯度层中；4、收样：关闭第六阀门(17)，将连续流密度梯度离心转子1降速至0转，连续流密度梯度离心转
子1中的纵向的密度梯度，形成横向的密度梯度，收集所述富含狂犬病病毒的梯度离心层，从而获得纯化的狂犬病病毒。9.一种纯化的狂犬病病毒，其特征在于，所述的纯化的狂犬病病毒是用如权利要求5所述的方法制备的。10.一种如权利要求9所述的纯化的狂犬病病毒的用途，其特征在于，用于制备抗狂犬病病毒的疫苗。

技术总结
本发明涉及一种病毒密度梯度离心纯化装置。具体地，本发明提供一种病毒密度梯度离心纯化装置，所述的装置包括环形管路和连续流密度梯度离心机，所述的连续流密度梯度离心机包括连续流密度梯度离心转子。本发明所述的病毒密度梯度离心纯化装置在用于蔗糖密度梯度纯化病毒过程中，能够简单方便及时将连续流密度梯度离心转子中的气泡去除，尤其能够将蔗糖密度梯度中气泡去除，从而避免气泡引起转子的震动和转子内部蔗糖密度梯度的分布，从而能够制备高质量的病毒疫苗。备高质量的病毒疫苗。


技术研发人员：安祺 刘珍珍 田大勇
受保护的技术使用者：北京赛尔富森生物科技有限公司
技术研发日：2020.04.30
技术公布日：2021/11/2