一种化合物及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于有机化合物技术领域，具体涉及一种化合物及其制备方法和应用。


背景技术：

2.胰腺癌是一种高致死率的恶性消化道肿瘤之一，五年存活率不足10％，且近十年来，胰腺癌的发病率和死亡率成上升趋势。胰腺癌早期无特异性症状，随着胰腺癌的发展，临床先表现出黄斑，体重减轻等症状，因此诊断出时一般都为晚期，这是导致胰腺癌死亡率高的主要原因之一；加之胰腺是位于部腰椎前腹膜后的隐秘消化器官，因此胰腺癌的诊断以及治疗都比较困难。
3.目前，胰腺癌的临床治疗方式主要是化疗，化疗用药物主要是以氟尿嘧啶类药物和吉西他滨为主的单药或与其他药物的联合化疗；由此可见，临床上可用于治疗胰腺癌的药物非常少，且现用药物对于胰腺癌的治疗效果都相当有限；用药过程中，患者还会产生诸多如骨髓抑制、呕吐、头晕、肝脏功能损伤，以及消化道不良反应等副作用。
4.天然产物一直是抗癌药物的重要组成部分，超过一半的已批准抗癌药物是天然产物。近些年，中药在癌症治疗中取得了不错的临床疗效。因此研究者将目光聚焦到中药上，期望从中药中寻找具有抗胰腺癌活性的天然产物。与传统化疗药物相比，中药中化学成分丰富，结合的靶点也相对较多，这促使中药不易产生耐药性，因此中药在治疗胰腺癌中有其独有的优势。且中药有着丰富的临床案例，其用药安全性方面有充分的保障。
5.近些年，中药结合化疗药物共同治疗胰腺癌取得了良好的临床疗效。以中药辅助治疗，可以明显减轻患者化疗后出现的出现免疫力下降不良反应，调节患者身体状态缓解患者痛苦，显著延长患者生存周期。例如，有学者以小柴胡加味方联合化疗药物治疗胰腺癌患者，发现患者生存期延长，且不良反应减少不良反应程度降低；再例如，中华猕猴桃根[actinidia chinensis planch]是一种猕猴桃科常绿乔木和植物的根部，其具有利尿、促进消化、止呕、止血、通乳等作用，诸多方剂记载中华猕猴桃根治疗消化道肿瘤效果良好。
[0006]
临床治疗胰腺癌药物的副作用较多，中药治疗胰腺癌机制多样，活性成分种类丰富，在治疗胰腺癌方面优势明显，对中药治疗胰腺癌的作用方式进行深入研究具有极高的临床价值和现实意义。具体的，从中药中发现具有抗胰腺癌作用的先导化合物，继而开发成药，是迫切的。但关于中药治疗胰腺癌起到治疗作用的物质基础研究较少，并且已有研究的治疗胰腺癌的中药，效果还不够显著。


技术实现要素：

[0007]
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种化合物，能够有效抑制胰腺癌细胞的增殖活性。
[0008]
本发明还提出一种上述化合物的制备方法。
[0009]
本发明还提出一种具有上述化合物的猕猴桃根提取物。
[0010]
本发明还提出一种具有上述化合物的治疗胰腺癌的药物。
[0011]
本发明还提出一种具有上述猕猴桃根提取物的治疗胰腺癌的药物。
[0012]
根据本发明的一个方面，提出了一种化合物，具有如下式所示结构式：
[0013][0014]
根据本发明的一种优选的实施方式，至少具有以下有益效果：
[0015]
本发明提供的化合物对mp和patu8988t胰腺癌癌细胞的半抑制浓度(ic
50
)约为25mg/l(约50μm)；对panco2胰腺癌细胞的ic
50
约为160mg/l(83μm)；上述数据说明，本发明所提供的化合物具有明显抑制胰腺癌细胞增殖的活性的作用。
[0016]
在本发明的一些实施方式中，所述化合物，干燥状态下为白色粉末。
[0017]
在本发明的一些实施方式中，所述化合物，结晶状态为无定形态。
[0018]
在本发明的一些实施方式中，所述化合物，具有甲醇溶解性。
[0019]
根据本发明的再一个方面，提出了所述化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0020]
s1.以乙酸乙酯为溶剂，获取中华猕猴桃根的粗提液，所述粗提液干燥后，得粗提物；
[0021]
s2.以二氯甲烷和甲醇的混合溶液为洗脱液，对所述粗提物进行硅胶柱层析，经薄层色谱检测产物，合并相似成分,得猕猴桃根提取物；
[0022]
s3.以(7～9):(1～3):(1～3):1的体积比混合二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和水，形成四相体系混合后下层溶液分离，对所述猕猴桃根提取物进行硅胶柱层析，经薄层色谱检测产物，合并相似成分，得到中间组分；
[0023]
s4.对所述中间组分进行中压制备液相分离，得所述化合物。
[0024]
根据本发明的一种优选的实施方式的制备方法，至少具有以下有益效果：
[0025]
本发明所提供的制备方法，具有简单、易操作的优点。本发明提供的制备方法，从猕猴桃根提取物中获取了现已知的13种化合物，以及一种现在未知的化合物。
[0026]
在本发明的一些实施方式中，所述制备方法，还包括在步骤s1之前，依次以石油醚和二氯甲烷对所述中华猕猴桃根进行预处理。
[0027]
在本发明的一些实施方式中，所述预处理的目的是，去除所述中华猕猴桃根中可溶于二氯甲烷和石油醚的部分，以获取成分更加纯净的乙酸乙酯提取物。
[0028]
在本发明的一些实施方式中，步骤s1中，所述中华猕猴桃根，为干燥粉末。
[0029]
在本发明的一些实施方式中，所述中华猕猴桃根的所述干燥粉末，可通过80目筛网。
[0030]
在本发明的一些优选的实施方式中，所述中华猕猴桃根的所述干燥粉末，可通过60目筛网。
[0031]
在本发明的一些实施方式中，步骤s1中，所述粗提液，获取方法为渗漉法。
[0032]
在本发明的一些实施方式中，所述渗漉法，具体操作为，将所述中华猕猴桃根加入渗漉桶形成柱；以乙酸乙酯为洗脱液，对所述中华猕猴桃根进行渗漉提取。
[0033]
在本发明的一些实施方式中，所述渗漉法中，所述乙酸乙酯的洗脱速度为3.5～4.5h/柱体积(即中华猕猴桃根形成的柱的体积)。
[0034]
在本发明的一些实施方式中，所述渗漉法中，所述乙酸乙酯的洗脱速度为4h/柱体积。
[0035]
在本发明的一些实施方式中，所述渗漉法中，所述乙酸乙酯共洗脱7～9个柱体积。
[0036]
在本发明的一些优选的实施方式中，所述渗漉法中，所述乙酸乙酯共洗脱8个柱体积。
[0037]
在本发明的一些实施方式中，步骤s1中，所述干燥，方法为依次进行的旋转蒸发仪回收溶剂和真空干燥。
[0038]
在本发明的一些实施方式中，步骤s2中，获取所述猕猴桃根提取物时，所述二氯甲烷和甲醇的体积比为30
‑
20:1。
[0039]
在本发明的一些优选的实施方式中，步骤s2中，获取所述猕猴桃根提取物时，所述二氯甲烷和甲醇的体积比约为30:1。
[0040]
在本发明的一些实施方式中，步骤s2中，所述硅胶柱层析中所述洗脱液的流速为1～2柱体积/h。
[0041]
在本发明的一些实施方式中，步骤s2中，还包括在所述合并相似成分后，对所得物质进行干燥，即得所述猕猴桃根提取物。
[0042]
在本发明的一些实施方式中，步骤s2中，所得猕猴桃根提取物的状态为白色粉末(下称f2)。
[0043]
所述猕猴桃根提取物占所述粗提物的质量比例为60～62％。
[0044]
所述猕猴桃根提取物占所述粗提物的质量比例约为61％。
[0045]
在本发明的一些实施方式中，步骤s2中，在获取所述猕猴桃根提取物前，还包括以约50:1的体积比形成二氯甲烷与甲醇混合洗脱液，洗脱所述粗提物，经薄层色谱检测产物，合并相似成分,去除溶剂后，得黄色油状提取物(下称f1)。
[0046]
所述f1组分占所述粗提物的质量比例约为6％。
[0047]
在本发明的一些实施方式中，步骤s2中，在获取所述猕猴桃根提取物后，还包括依次以约3:1和1:10体积比的二氯甲烷与甲醇混合洗脱液，洗脱所述粗提物，经薄层色谱检测产物，合并相似成分,去除溶剂后，得褐色粉末状提取物(下称f3)和深褐色粉末状提取物(下称f4)。
[0048]
所述f3组分占所述粗提物的质量比例约为21％；所述f4组分占所述粗提物的质量比例约为7％；由于分离过程中存在损失，因此f1～f4组分质量之和，小于等于所述粗提物的质量。
[0049]
在本发明的一些实施方式中，步骤s3中，所述四相洗脱液中，所述二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比约为8:2:2:1。
[0050]
在本发明的一些实施方式中，步骤s3中，所述硅胶柱层析中所述洗脱液的流速为1～2柱体积/h。
[0051]
在本发明的一些实施方式中，步骤s4中，所述中压制备液相分离中，液相为水和甲醇的混合体系。
[0052]
在本发明的一些实施方式中，所述中压制备液相分离中，所述液相为以(35～45):(55～65)体积比混合的水和甲醇。
[0053]
在本发明的一些优选的实施方式中，所述中压制备液相分离中，所述液相为以约40:60体积比混合的水和甲醇。
[0054]
在本发明的一些优选的实施方式中，所述中压制备液相分离中洗脱液的流速为2
‑
5ml/min。
[0055]
若无特殊说明，本发明所述中压制备采用的色谱柱为agilent公司生产的c18色谱柱(eclipse xdb
‑
c18 semi
‑
prep)，具体的尺寸为：9.4mm(直径)
×
250mm(长度)，5μm(填料粒径)。
[0056]
根据本发明的再一个方面，提出了一种包含所述化合物的猕猴桃根提取物。
[0057]
根据本发明的一种优选的实施方式的制备方法，至少具有以下有益效果：
[0058]
本发明提供的猕猴桃根提取物，对mp、patu8988t和hpac胰腺癌癌细胞的ic
50
约为10g/l；上述数据说明，本发明所提供的猕猴桃根提取物具有明显的抑制胰腺癌细胞增殖活性的作用。
[0059]
在本发明的一些实施方式中，所述猕猴桃根提取物中，还包含有其他13种三萜类化合物。
[0060]
在本发明的一些实施方式中，所述猕猴桃根提取物，为中华猕猴桃根的乙酸乙酯提取物。
[0061]
在本发明的一些实施方式中，所述猕猴桃根提取物中的三萜类化合物，分子式为c
30
h
48
o6。
[0062]
根据本发明的再一个方面，提出了一种治疗胰腺癌的药物，所述治疗胰腺癌的药物，制备原料包括所述化合物。
[0063]
根据本发明的再一个方面，提出了一种治疗胰腺癌的药物，所述治疗胰腺癌的药物，制备原料包括所述猕猴桃根提取物。
附图说明
[0064]
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，其中：
[0065]
图1为本发明实施例2所得化合物的结构式；
[0066]
图2为本发明测试例所得猕猴桃根提取物的质谱总离子流图；
[0067]
图3为本发明测试例所得猕猴桃根提取物的组分的lc
‑
ms分析谱图；
[0068]
图4为本发明实施例2所得化合物的hmbc相关图；
[0069]
图5为本发明实施例2所得化合物的noesy相关图；
[0070]
图6为本发明实施例1所得中华猕猴桃根提取物中含有的14种主要成分的结构式。
具体实施方式
[0071]
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
[0072]
本发明的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0073]
实施例1
[0074]
本实施例制备了一种猕猴桃根提取物，具体过程为：
[0075]
d1.对中华猕猴桃根进行打粉处理，过80目筛，得中华猕猴桃根干燥粉末；
[0076]
d2.采用渗漉法依次石油醚、二氯甲烷洗脱，再用乙酸乙酯对中华猕猴桃根干燥粉末渗漉，收集乙酸乙酯渗漉液，其中提取过程中，石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯的流速均为4h/柱体积，乙酸乙酯的用量为8倍柱体积；
[0077]
d3.用旋转蒸发仪回收步骤d2所得提取液，后用真空干燥箱干燥，得粗提物；
[0078]
d4.将步骤d3所得粗提物进行硅胶柱层析，用二氯甲烷与甲醇体系洗脱，首先以50:1的比例进行洗脱(洗脱液流速1.5柱体积/h)，弃去洗脱液后，再以比例为30：1的洗脱液进行洗脱(洗脱液流速1.5柱体积/h)，所得洗脱液经薄层色谱检测、合并，除去溶剂后，得呈白色粉末状的猕猴桃根提取物。
[0079]
实施例2
[0080]
本实施例制备了一种化合物，具体过程为：
[0081]
t1.对实施例1所得猕猴桃根提取物进行硅胶柱层析，经薄层色谱检测产物，合并相似成分，得到中间组分；其中硅胶柱层析的洗脱液比例为以8:2:2:1的体积比混合的二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇和水，混合均匀后下层溶液分离，洗脱液流速为1.5柱体积/h；
[0082]
t2.对步骤t1所得中间产物进行中压质谱液相分离，即得；其中液相为40:60体积比混合的水和甲醇；洗脱液的流速为2
‑
5ml/min，在该范围内均可实现相似的技术效果。
[0083]
本实施例所得化合物的结构式如图1所示。
[0084]
试验例1
[0085]
本试验例测试了实施例1所制备的猕猴桃根提取物的性能。
[0086]
测试方法为质谱分析，具体检测方法为：色谱柱选择agilent公司生产的c18色谱柱(4.6mm(直径)*250mm(长度)，5μm(填料粒径))。实验以0.12％磷酸
‑
乙腈为流动相，乙腈比例为5％到100％，时间为40min，接着纯乙腈洗脱20min。流动相流速为1.0ml/min，柱温控制为室温，本次实验为25℃，进样量为5μl，波长选择210nm。所得质谱总离子流图如图2所示；猕猴桃根提取物组分的lc
‑
ms分析谱图如图3所示。
[0087]
根据图3所得结果，猕猴桃根提取的质谱分析数据如表1所示。
[0088]
表1猕猴桃根提取物组分的lc
‑
ms分析谱图的峰位分析结果
[0089]
质荷比(m/z)电荷数(z)离子丰度(abund)化学式(formula)离子(ion)
489.3567148241.54c
30
h
48
o5(m h)

490.3603115185.65c
30
h
48
o5(m h)

506.3835186168.52c
30
h
48
o5(m nh4)

507.3866128167.44c
30
h
48
o5(m nh4)

511.33921183167.41c
30
h
48
o5(m na)

512.3424157907.83c
30
h
48
o5(m na)

513.3458111813.46c
30
h
48
o5(m na)

977.70731106904.27c
30
h
48
o5(2m h)

978.7104169735.08c
30
h
48
o5(2m h)

979.7131123955.35c
30
h
48
o5(2m h)

[0090]
通过对图2～3以及表1所得结果分析，发现猕猴桃根提取物的化合物分子式多为c
30
h
48
o5，其相对分子质量多在488左右，进一步的，结合文献调研，发现本发明所得猕猴桃根提取物组分的化合物多为三萜类化合物。
[0091]
另外，中华猕猴桃根三萜类成分具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抑菌、降血糖、保肝等活性，其抗肿瘤作用一直是研究的热点；因此，本发明提供的猕猴桃根的乙酸乙酯提取物，可能具有抗胰腺癌的作用。
[0092]
试验例2
[0093]
本试验例测试了实施例1所制备的猕猴桃根提取物对mp、patu8988t、hpac三种胰腺癌细胞的增殖活性的抑制能力。
[0094]
具体测试方法为：以细胞增殖实验(cck8法)对本发明所得猕猴桃根提取物进行胰腺癌细胞活性评价。以mp、patu8988t、hpac三种胰腺癌细胞作为细胞评价模型，进行三次重复独立细胞实验。其细胞数据如表2所示下：
[0095]
表2实施例1所得猕猴桃根提取物的胰腺癌细胞活性评价结果
[0096][0097]
其中，ic
50
表示半抑制浓度，sd表示标准偏差。
[0098]
由表2数据可知本发明提供的猕猴桃根提取物，对mp、patu8988t、hpac胰腺癌细胞均有抑制增殖的活性，且活性较强，为具有抗胰腺癌活性的化合物。
[0099]
并且，由测试例1对中华猕猴桃根的乙酸乙酯提取物中主要成分的确定，结合测试例2的结果，可知本发明提供猕猴桃根提取物中的起到抗胰腺癌作用的物质基础可能是三萜类化合物群。
[0100]
根据实施例1可知，实施例1步骤d1还获得了中华猕猴桃根的石油醚提取物和二氯甲烷提取物，此外，在获取乙酸乙酯提取物之后，还以步骤d1所用中华猕猴桃根为原料获取了80％乙醇提取物；本测试例还测试了上述石油醚、二氯甲烷和80％乙醇提取物对胰腺癌细胞的抑制作用，结果显示此三种提取物均对hpac胰腺癌细胞无抑制作用。
[0101]
试验例3
[0102]
本测试例确定了实施例2所得化合物的确定结构式，具体测试方法包括如下步骤：
[0103]
第一步，获取了实施例2所得化合物的核磁氢谱(1hnmr谱)，结果显示：实施例2所得化合物具有四个甲基；直接与季碳相连的有三个[δ
h 1.25(3h,s,h
‑
27),1.09(3h,s,h
‑
25),0.88(3h,s,h
‑
26)；δ
c 22.6(c
‑
27),15.9(c
‑
25),16.4(c
‑
26)]；与叔碳直接相连的甲基有一个[δ
h 1.04(3h,d,j＝6.0hz,h
‑
29)；δ
c 15.38(c
‑
29)]；
[0104]
与氧相连的有一个亚甲基[δ
h 3.90(1h,d,j＝10.8hz,h
‑
23a),3.86(1h,d,j＝10.8hz,h
‑
23β)；δ
c 60.75(c
‑
23)]和一对末端烯氢质子信号[δ
h 4.66(1h,brs,h
‑
30a),4.70(1h,brs,h
‑
30b)；δ
c 103.8(c
‑
30)]；
[0105]
同时还具有一个环内烯氢质子信号[δ
h 5.30(1h,t,j＝3.6hz,h
‑
12)]；
[0106]
上述结果提示实施例2所得化合物的基本结构可能为三萜类化合物；
[0107]
此外，1hnmr谱还显示一个醛基质子信号[δ
h 9.70(1h,brs,h
‑
24)；δ
c 206.97(c
‑
24)]；两个与羟基相连的次甲基[δ
h 3.84(1h,ddd,j＝11.2,4.4,2.4hz,h
‑
2),δ
c 65.5(c
‑
2)；δ
h
4.11(1h,d,j＝2.4hz,h
‑
3),δ
c 70.11(c
‑
3)]和一个羧基信号δ
c 179.92(c
‑
28)；
[0108]
综上，1hnmr谱结果提示实施例2所得化合物可能为新的乌苏烷类三萜化合物。
[0109]
第二步，获取了实施例2所得化合物的核磁碳谱(
13
cnmr谱)和dept(无畸变极化转移增强，是一种
13
c核磁共振谱中的一种检测技术)图谱，结果显示：
[0110]
实施例2所得化合物含有一个羧基碳信号δ
c 179.92(c
‑
28)；
[0111]
4个烯烃碳信号[δ
c 103.8(c
‑
30),125.41(c
‑
12),138.21(c
‑
13),153.2c
‑
20]；
[0112]
4个甲基碳信号[δ
c 22.6(c
‑
27),15.9(c
‑
25),16.4(c
‑
26),15.38(c
‑
29)]；
[0113]
共9个季碳信号[δ
c 58.3(c
‑
4),39.5(c
‑
8),37.4(c
‑
10),138.2(c
‑
13),42.0(c
‑
14),47.6(c
‑
17),153.2(c
‑
20),179.9(c
‑
28),206.97(c
‑
24)]；
[0114]
7个叔碳信号[δ
c 65.5(c
‑
2),70.1(c
‑
3),42.0(c
‑
5),47.8(c
‑
9),125.4(c
‑
12),55.2(c
‑
18),37.1(c
‑
19)]；
[0115]
10个仲碳信号[δ
c 40.5(c
‑
1),19.9(c
‑
6),32.8(c
‑
7),23.0(c
‑
11),27.7(c
‑
15),23.9(c
‑
16),31.9(c
‑
21),39.0(c
‑
22),60.7(c
‑
23),103.8(c
‑
30)]；
[0116]
13
cnmr谱和dept谱进一步证明该化合物为带醛基的乌苏烷类三萜化合物。
[0117]
第三步，获取了实施例2所得化合物的hsqc(异核单量子关系)谱图；hsqc谱图数据对质子信号(氢谱)与碳谱信号相互归属，以确定实施例2所得化合物的碳氢信号类型；首先通过hsqc谱归属醛基碳与醛基氢[δ
h 9.70(1h,brs,h
‑
24)；δ
c 206.97(c
‑
24)]；其次归属双键碳氢[δ
h 4.66(1h,brs,h
‑
30a),4.70(1h,brs,h
‑
30b)；δ
c 103.8(c
‑
30)；δ
h 5.30(1h,t,j＝3.6hz,h
‑
12)；δ
c 125.41(c
‑
12)]；后对δc 50.0
‑
80.0的连氧碳以及18位上碳进行信号归属[δ
h 3.84(1h,ddd,j＝11.2,4.4,2.4hz,h
‑
2),δ
c 65.5(c
‑
2)；δh 4.11(1h,d,j＝2.4hz,h
‑
3),δ
c 70.11(c
‑
3)；δ
h 3.90(1h,d,j＝10.8hz,h
‑
23a),3.86(1h,d,j＝10.8hz,h
‑
23b)；δ
c 60.75(c
‑
23)]；δ
h 1.00
‑
2.80由于之间存在多个亚甲基和次甲基质子信号重叠峰，识别度不高。
[0118]
因此进行hmbc(1h的异核多碳相关谱，将1h核和远程耦合的13c核关联起来，通常2～3个键的质子与碳的耦合信息较多)解谱时不以该区域质子信号作为起点；在高场区存在诸多甲基信号，其谱图信号明显且清楚，易于观察以及解析。如[δ
h 1.25(3h,s,h
‑
27),1.09(3h,s,h
‑
25),0.88(3h,s,h
‑
26),1.04(3h,d,j＝6.0hz,h
‑
29)；δ
c 22.6(c
‑
27),15.9(c
‑
25),16.4(c
‑
26),15.38(c
‑
29)]。
[0119]
通过hmbc远程耦合对实施例2所得化合物进行解析。首先对醛基的位置进行分析，谱图显示：δ
h 9.70(h
‑
24)与δ
c 58.3(c
‑
4),70.1(c
‑
3),42.0(c
‑
5)相关，表明醛基碳可能与4号位碳相连；δ
h 4.11(h
‑
3)与δ
c 206.97(c
‑
24)相关可以确定醛基碳与4号位碳相连。δ
h
5.30(h
‑
12)与δ
c 42.0(c
‑
14),47.8(c
‑
9),55.2(c
‑
18)相关；δ
c 15.9(c
‑
25)与δ
c 40.5(c
‑
1),42.0(c
‑
5),47.8(c
‑
9),37.4(c
‑
10)相关；δ
h 3.90(h
‑
23a),3.86(h
‑
23b)与δ
c 58.3(c
‑
4),70.1(c
‑
3),42.0(c
‑
5),206.97(c
‑
24)相关；δ
c 16.4(c
‑
26)与δ
c 32.8(c
‑
7),39.5(c
‑
8),47.8(c
‑
9),42.0(c
‑
14)相关，通过h
‑
25和h
‑
26相关情况可以确定a环和b环的基本结构。δ
h 1.25(h
‑
27)与δ
c 39.5(c
‑
8),138.2(c
‑
13),42.0(c
‑
14),27.7(c
‑
15)相关，通过h
‑
27与c
‑
13相关可以确定27位甲基的质子信号。通过h
‑
27的hmbc信号确定c/d环的基本结构。通过δ
h 2.30(h
‑
18)与δ
c 138.2(c
‑
13),37.1(c
‑
19),47.6(c
‑
17),39.0(c
‑
22),15.38(c
‑
29)，153.2(c
‑
20)相关，确定e环的基本结构。
[0120]
通过j
h
‑
2β/h
‑
3β
＝2.40hz可以得知h
‑
2与h
‑
3为同构型，通过j
h
‑
18/h
‑
19
＝12.4hz可以得出c
‑
18与c
‑
19的构型。c
‑
25为β构型，观察noesy(揭示质子与质子间在空间的相互接近关系)谱的信号发现δ
h 1.09(h
‑
25)与δ
h 3.84(h
‑
2)相关；δ
h 1.09(h
‑
25)与δ
h 3.90(h
‑
23)相关；δ
h 3.84(h
‑
2)与δ
h 3.90(h
‑
23)相关；δ
h 4.11(h
‑
3)与δ
h 3.90(h
‑
23)相关，可以确定c
‑
2和c
‑
3以及c
‑
23的绝对构型。此外通过比较相似化合物的碳谱化学位移确定c
‑
28与c
‑
29的绝对构型。鉴定实施例2所得化合物为(2α,3α,4β)
‑
2,3,23
‑
trihydroxy
‑
24
‑
oxours
‑
12,20(30)
‑
dien
‑
28
‑
oic acid。
[0121]
实施例2所得化合物的hmbc相关图如图4所示；noesy相关图如图5所示。
[0122]
实施例2所得化合物的1h nmr、13c nmr数据如表3所示。
[0123]
表3实施例2所得化合物的1h nmr、13c nmr数据
[0124]
[0125][0126]
采用与实施例2相似的分离方法和本测试例相似的测试方法，得到猕猴桃根提取物中还含有其他13种三萜类物质，其结构式如图6所示，其中图6中的结构式1为本发明所得化合物。
[0127]
试验例4
[0128]
本试验例测试了实施例2所得化合物对mp胰腺癌细胞、patu8988t胰腺癌细胞、panco2胰腺癌细胞的活性抑制试验。具体的测试方法为：以cck8法对所得新化合物进行细胞评价，选用mp胰腺癌细胞、patu8988t胰腺癌细胞、panco2胰腺癌细胞作为细胞评价模型。测试结果如表4所示。
[0129]
表4实施例2所得化合物对胰腺癌细胞的活性抑制试验结果
[0130][0131]
本表格中ic
50
的单位是μm，与表2中ic
50
的单位不同，换算成g/l的单位后，实施例2
所得化合物对mp胰腺癌细胞和patu8988t胰腺癌细胞的ic
50
值约为0.025g/l，说明本发明从中华猕猴桃根中制备的化合物，对胰腺癌细胞增殖活性的抑制能力，更优于实施例1所得猕猴桃根提取物。
[0132]
综合试验例2和试验例4的测试结果可知，本发明所得的猕猴桃根提取物以及从猕猴桃根中制备的化合物，均具有优异的抑制胰腺癌细胞增殖的效果，在制备治疗胰腺药物的制备中，具有良好的应用前景。
[0133]
上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。