一种人骨巨细胞瘤异种移植细胞库及其构建方法与应用

本发明属于生物组织工程，涉及一种人骨巨细胞瘤异种移植细胞库及其构建方法与应用。

背景技术：

1、骨巨细胞瘤是一种常见的骨肿瘤，发病率较高，其研究对于肿瘤学领域具有重要意义。

2、专利cn110402895a提供了一种骨肉瘤异种移植小鼠模型的构建方法，通过复苏保存在液氮环境中的骨肉瘤患者肿瘤组织块，将其异种原位移植进免疫缺陷小鼠体内，以实现更真实地模拟肿瘤生长环境。然而，该方法主要聚焦于骨肉瘤模型的构建，对于骨巨细胞瘤的特异性和复杂性考虑不足。

3、此外，骨巨细胞瘤的异种移植模型构建，特别是能够保留肿瘤活性和一致性的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建，在现有技术中尚存在空白。

4、另一专利cn103911342a涉及一种人骨巨细胞瘤小鼠动物模型及其构建方法，通过将从人骨巨细胞瘤组织分离培养的原代细胞注射到裸小鼠的胫骨内，成功构建了人骨巨细胞瘤骨损伤小鼠动物模型，但该方法在模型的持续稳定性、一致性以及高通量应用方面存在局限性，难以满足大规模研究和药物筛选的需求。

5、基于以上分析，现有技术中虽有关于骨肉瘤和骨巨细胞瘤动物模型构建的报道，但在构建能够稳定传代、保持肿瘤特性的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库方面仍存在技术空白和挑战，亟需创新方法以填补这一领域的需求，推动骨巨细胞瘤相关研究的深入发展。

技术实现思路

1、本发明的目的就是为了克服现有技术的局限，极大地方便肿瘤相关研究的开展，从而提供一种人骨巨细胞瘤异种移植细胞库及其构建方法与应用。

2、本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

3、本发明的技术方案之一为提供一种人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建方法，包括如下步骤：

4、s1、获取离体的人骨巨细胞瘤组织，冲洗去除人骨巨细胞瘤组织表面杂质，修剪得到人骨巨细胞瘤组织移植块，并将人骨巨细胞瘤组织移植块预先填充穿刺针套管内；

5、s2、以穿刺针针头在小鼠右侧皮下穿刺，沿皮下扩张作一隧道，将s1步骤填充有人骨巨细胞瘤组织移植块的穿刺针沿隧道进行移植，构建得到f0代人骨巨细胞瘤异种移植小鼠模型；

6、s3、监测并获取s2步骤构建得到的f0代人骨巨细胞瘤异种移植小鼠模型中的人骨巨细胞瘤组织，重复s1和s2步骤多次，得到fn代人骨巨细胞瘤异种移植小鼠模型，n为重复次数；

7、s4、监测并获取s3步骤构建得到的fn代人骨巨细胞瘤异种移植小鼠模型中的人骨巨细胞瘤组织，胰酶消化后得到人骨巨细胞瘤细胞，冻存得到人骨巨细胞瘤异种移植细胞库。

8、在一些具体实施方式中，于s1步骤，冲洗工艺为：将人骨巨细胞瘤组织浸泡在含青霉素和链霉素双抗的pbs缓冲液中。

9、在一些具体实施方式中，于s2步骤，所述小鼠为4-6周龄、雌性、体重为16~18 g的npsg小鼠。

10、在一些具体实施方式中，于s2步骤，人骨巨细胞瘤组织移植块的体积为1-2mm3。

11、在一些具体实施方式中，于s3步骤，获取的人骨巨细胞瘤组织的体积为1000-1500mm3。

12、在一些具体实施方式中，于s3步骤，监测的指标包括：

13、（1）f0代人骨巨细胞瘤异种移植小鼠模型中的人骨巨细胞瘤组织与s1步骤人骨巨细胞瘤组织的病理切片是否一致；

14、（2）f0代人骨巨细胞瘤异种移植小鼠模型体重下降是否超过10%。

15、在一些具体实施方式中，于s4步骤，胰酶消化的工艺为：将f3代人骨巨细胞瘤异种移植小鼠模型中的人骨巨细胞瘤组织剪碎后，用含有双抗的pbs缓冲液冲洗，离心弃上清，加入0.25%胰蛋白-edta消化液浸没，于37℃水浴消化15~60 min，终止消化后过滤得到人骨巨细胞瘤细胞。

16、在一些具体实施方式中，于s4步骤，过滤的工艺为：将消化后的细胞悬液倒入70m无菌细胞筛网进行过滤，离心后收集沉淀，即为人骨巨细胞瘤细胞。

17、本发明的技术方案之二为提供一种人骨巨细胞瘤异种移植细胞库，由上述技术方案之一所述的构建方法构建得到。

18、本发明的技术方案之三为提供一种如上述技术方案之二所述的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库在肿瘤发病机制研究、药物敏感性测试中的应用。

19、与现有技术相比，本发明具有以下优点：

20、（1）本发明提供了一种人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建方法，技术操作简便，整体缩短了后续开展人骨巨馏细胞的体内及体外实验时获取人骨巨细胞瘤的构建时间。

21、（2）本发明人骨巨细胞瘤异种移植细胞库中的细胞无支原体污染，经复苏后仍百分之百保留活性和肿瘤特性，便于开展人骨巨细胞瘤相关研究。

1.一种人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建方法，其特征在于，于s1步骤，冲洗工艺为：将人骨巨细胞瘤组织浸泡在含青霉素和链霉素双抗的pbs缓冲液中。

3.根据权利要求1所述的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建方法，其特征在于，于s2步骤，所述小鼠为4-6周龄、雌性、体重为16~18 g的npsg小鼠。

4.根据权利要求1所述的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建方法，其特征在于，于s2步骤，人骨巨细胞瘤组织移植块的体积为1-2 mm3。

5.根据权利要求1所述的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建方法，其特征在于，于s3步骤，获取的人骨巨细胞瘤组织的体积为1000-1500 mm3。

6.根据权利要求1所述的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建方法，其特征在于，于s3步骤，监测的指标包括：

7.根据权利要求1所述的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建方法，其特征在于，于s4步骤，胰酶消化的工艺为：将f3代人骨巨细胞瘤异种移植小鼠模型中的人骨巨细胞瘤组织剪碎后，用含有双抗的pbs缓冲液冲洗，离心弃上清，加入0.25%胰蛋白-edta消化液浸没，于37℃水浴消化15~60 min，终止消化后过滤得到人骨巨细胞瘤细胞。

8.根据权利要求1所述的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库的构建方法，其特征在于，于s4步骤，过滤的工艺为：将消化后的细胞悬液倒入70 m无菌细胞筛网进行过滤，离心后收集沉淀，即为人骨巨细胞瘤细胞，冻存得到人骨巨细胞瘤异种移植细胞库。

9.一种人骨巨细胞瘤异种移植细胞库，其特征在于，由权利要求1~8任一所述的构建方法构建得到。

10.一种如权利要求9所述的人骨巨细胞瘤异种移植细胞库在肿瘤发病机制研究、药物敏感性测试中的应用。