新型抗BCMA嵌合抗原受体、其核酸序列及其制备方法与流程

本发明涉及新的嵌合抗原受体多肽(car)，其中，所述car包含胞外抗原结合结构域，所述胞外抗原结合结构域包含结合b细胞成熟抗原(bcma)多肽的抗体或其抗体片段。本发明还涉及编码本发明的car的核酸分子、表达本发明的car的遗传修饰的免疫细胞和所述细胞在治疗各种医学病症中的用途。

背景技术：

1、car-t细胞疗法是一种过继免疫治疗，其已经彻底改变了血液恶性肿瘤的治疗格局。它涉及对患者自身的t细胞进行修饰和重编程以增强其抗癌能力。治疗开始于从患者分离t细胞，然后对其进行基因工程改造以在其表面表达嵌合抗原受体(car)。car是具有抗原结合以及t细胞活化能力的重组受体。它通常由源自抗体的单链可变片段(scfv)组成，所述单链可变片段通过铰链区和跨膜结构域与共刺激和细胞内信号传导结构域连接。这些car被设计为识别和结合癌细胞上存在的特异性抗原。修饰的t细胞进一步扩增以达到期望的剂量，并最终输注回患者体内，其中car-t细胞识别并结合癌细胞，从而将其消灭。重新编程的t细胞可以增殖并作为活体药物在患者中存留数年。因此，该技术相比于化学疗法和抗体疗法具有多项优势。

2、car-t细胞疗法在血液恶性肿瘤的治疗中，特别是在患有复发性或难治性疾病的患者中取得了显著成效。在临床试验中，car-t细胞疗法已在b细胞淋巴瘤和白血病患者中证明具有高反应率和持久的缓解效果。近期，这一研究范围已经扩展到多发性骨髓瘤领域。合适的靶抗原的选择在确定car-t细胞疗法的成功中起关键作用。由于多发性骨髓瘤的血浆b细胞具有低水平的cd19表达，为b细胞白血病和淋巴瘤开发的抗cd19 car-t细胞对骨髓瘤未能产生令人鼓舞的疗效。因此，获得在骨髓瘤细胞上高表达并且在正常组织上最低程度表达的抗原对于确保car-t细胞选择性攻击癌细胞而不伤害健康细胞至关重要。

3、b细胞成熟抗原(bcma)作为肿瘤坏死因子受体超家族17 (tnfrsf17)的成员，目前正被研究作为多发性骨髓瘤的潜在抗原。bcma选择性地在浆细胞上表达，且与正常浆细胞相比在恶性浆细胞上具有更高的表达水平。由于bcma只在浆母细胞和分化的浆细胞表面表达，而不在其它造血干细胞和正常组织细胞上表达，因此它被认为是理想的靶抗原。

4、us20120082661a1和us20190359726a1涉及识别b细胞成熟抗原(bcma)并结合初始b细胞、浆细胞和/或记忆b细胞的抗体。

5、目前有多项正在进行的试验，旨在评价针对bcma的car-t细胞治疗多发性骨髓瘤的功效。迄今为止，已经报道了范围为63%至95%的总响应率(orr) [

mailankody, s., et

al., jcarh125, anti-bcma car-t cell therapy for relapsed/refractory multiple

myeloma: initial proof of concept results from a phase 1/2 multicenter study

(evolve). 2018. 132: p. 957; roex, g., et al., safety and clinical efficacy

of bcma car-t cell therapy in multiple myeloma. 2020. 13(1): p. 1-14; wang,

b.-y., et al., long-term follow-up of a phase 1, first-in-human open-label

study of lcar- b38m, a structurally differentiated chimeric antigen receptor

t (car-t) cell therapy targeting b- cell maturation antigen (bcma), in

patients (pts) with relapsed/refractory multiple myeloma (rrmm). 2019,

american society of hematology washington, dc]。

6、考虑到大多数适于早期试验的患者先前在多次化疗方案中失败，包括在一些病例中干细胞移植，并且具有较低的存活机会，这些发现是值得注意的。两种抗bcma car-t产品，即idecabtagene vicleucel和ciltacabtagene autoleucel在临床研究中表现卓越，最终获得usfda批准用于治疗r/r多发性骨髓瘤的成人患者。考虑到car-t细胞反应取得的显著成功，全球多个研究团队将其焦点转移到car上，将其作为改善既往被视为致命情况的预后首选方案，同时探索其在治疗时间线早期阶段的应用价值。这标志着在对抗这种疾病的斗争中取得了重大进展。

7、局限性

8、尽管在血液恶性肿瘤的治疗中展现出前景，但car-t细胞疗法确实存在若干局限性。严重且危及生命的毒性反应，例如crs和神经毒性，被认为是car-t细胞有效疗法的一些常见障碍。这进一步需要特殊的重症监护病房、额外的诊断和药物管理。目前临床上开发的大多数car利用源自鼠单克隆抗体(mab)的scfv。全面的文献调查表明，car设计中非人成分的存在，例如来源于鼠单克隆抗体的结构域，已被证实具有免疫原性，这可能导致患者最终排斥治疗性细胞[

khan, a., et al., immunogenicity of car-t cell therapeutics:

evidence, mechanism and mitigation. 2022]。

9、为了获得有效的治疗反应，所产生的car-t细胞必须长期存活而不引发毒性。此外，这种事件限制了治疗的总体临床结果，并使得重复给药变得困难。开发防止复发和提高长期缓解率的策略仍然是持续的挑战。另外，取决于副作用的严重程度，单剂量car-t细胞疗法花费高达100万美元或更多。这也成为有效实施的重大障碍，限制了低收入和中等收入国家(lmic)患者的获得机会。解决这些局限性并进一步优化car-t细胞疗法对于最大化其潜能并使其成为更广泛可及的和有效的血液恶性肿瘤治疗选择将是至关重要的。

10、b细胞恶性肿瘤例如多发性骨髓瘤是不可治愈的血液疾病。目前的治疗通常能使病情缓解，但几乎所有患者最终都复发并死亡。car-t细胞疗法已经成为一种有前景的治疗血液恶性肿瘤包括多发性骨髓瘤的治疗方式。然而，已经发现若干局限性，这阻碍了其广泛应用和有效性。因此，有必要开发价格合理、疗效更高且毒性更低的car-t治疗。本发明的发明人意外地开发出了一种新的嵌合抗原受体多肽(car)，该car包含胞外抗原结合结构域，所述胞外抗原结合结构域包含结合b细胞成熟抗原(bcma)多肽的抗体或其抗体片段，并且其能改善现有技术的上述缺陷。

11、发明目的

12、本发明的目的是克服上述现有技术的缺点。

13、本发明的一个目的是提供抗bcma嵌合抗原受体多肽(car)。

14、本发明的一个目的是提供鼠抗bcma嵌合抗原受体多肽(mcar)。

15、本发明的另一个目的是提供编码本发明的鼠抗bcma car的核酸分子、表达本发明的car的遗传修饰的免疫细胞以及所述细胞在治疗各种医学病症中的用途。

16、本发明的另一个目的是提供人源化的抗bcma嵌合抗原受体多肽(hcar)。

17、本发明的又一个目的是提供编码本发明的人源化抗bcma car的核酸分子、表达本发明的car的遗传修饰的免疫细胞以及所述细胞在治疗各种医学病症中的用途。

18、本发明的另一个目的是提供包含本发明的抗bcma car的试剂盒。

19、本发明的另一个目的是提供包含本发明的抗bcma car的药物组合物。

20、本发明的另一个目的是提供根据本发明的抗bcma car在制备用于预防和/或治疗受试者(例如人)中的各种医学病症的药物中的用途。

技术实现思路

1、根据本发明的一个方面，提供了编码抗bcma嵌合抗原受体(car)的重组核酸分子。

2、根据本发明的另一方面，提供了抗bcma car多肽。

3、根据本发明的另一方面，提供了包含编码抗bcma嵌合抗原受体(car)的核酸分子的载体。

4、根据本发明的另一方面，提供了一种融合重组蛋白，其包含与抗体(fc)的恒定区融合的抗bcma结合结构域(scfv)。

5、根据本发明的另一方面，提供了抗bcma结合结构域(scfv)的接头。

6、根据本发明的又一方面，提供了包含载体或表达抗bcma car多肽的免疫细胞。

7、根据本发明的另一方面，提供了包含本发明的抗bcma car的试剂盒。

8、根据本发明的又一方面，提供了一种药物组合物，其包含重组核酸分子或car多肽或载体或免疫细胞，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，和任选地一种或多种另外的药学活性多肽和/或化合物。

9、根据本发明的另一方面，提供了制备抗bcma car的方法。

10、根据本发明的另一方面，提供了治疗患有bcma表达相关疾病的受试者的方法。