一种人血白蛋白的制备方法及其应用与流程

本发明属于人血白蛋白制备，尤其涉及一种人血白蛋白的制备方法及其应用。

背景技术：

1、血清白蛋白由人体肝脏合成，是血浆中含量最高的蛋白质，约占血浆蛋白总含量的50%~60%，具有维持血浆胶体渗透压、运输、结合和转运多种载体、抗氧化、调节凝血功能及维持毛细血管通透性等生理功能。临床上可以用于多种疾病的治疗，如：失血创伤、烧伤引起的休克；脑水肿及损伤引起的颅压升高；肝硬化及肾病引起的水肿或腹水；低蛋白血症的防治；新生儿高胆红素血症；用于心肺分流术、烧伤的辅助治疗、血液透析的辅助治疗和成人呼吸窘迫综合征等等。

2、目前国内外普遍采用chon氏低温乙醇法从健康人血浆中分离纯化人血白蛋白，但制备获得的人血白蛋白制剂多聚体含量较高，且经过室温存放后多聚体含量随时间逐渐升高，而正常人体血液中并不存在白蛋白多聚体，其含量直接影响临床用药的安全有效，故产品需放置于低温条件下保存和运输，对保存和运输非常不方便，且产生了非常大的运输保存成本。

3、jen-jen lin等（jen-jen lin, jeffrey d. meyer, john f.et al.aggregation of human serum albumin during a thermal viral inactivation step.[j] international journal of biological macromolecules,45.2009,91~96）的研究发现聚集现象是由一类热不稳定的蛋白质的解折叠所引起的，研究强调天然存在的蛋白质复杂混合物中，任何热不稳定的物质能够引发更稳定蛋白质的聚集。因此，降低人血白蛋白初始多聚体的含量，减少室温存放过程中多聚体含量随时间逐渐升高，对实现人血白蛋白可常温保存具有重要作用。

4、目前公布的可降低人血白蛋白多聚体的方法包括凝胶色谱层析法、深层过滤法等方法，均存在一定的局限性，凝胶色谱层析法成本高，步骤多，深层过滤法必须将温度将至-9℃以下，容易使白蛋白产生共沉淀，明显降低白蛋白收率，且其去除效果不明显。如cn110590935 a提供了一种人血白蛋白去除多聚体工艺，在低温乙醇制备人血白蛋白之后增加离子交换层析工艺和二次巴氏病毒灭活工艺将多聚体含量由2.0%降低至0.67%以下，但生产步骤多，凝胶色谱层析成本高。cn116589559a在低温乙醇制备人血白蛋白过程中添加大豆异黄酮，并增加fractogel emd deae层析获得人血白蛋白，多聚体含量为1.6%~2.1%，该方法工艺流程复杂。cn103394076 a通过生产过程控制在组分ⅴ精制中采用zetaplus深层滤芯过滤，降低了激肽释放酶原激活剂（pka）的含量，同时将多聚体含量降低至3%。cn95118471将组分iv上清液降温至-9~-10℃条件下加入0.25%硅藻土进行深层过滤，再调整ph值4.8±0.1，乙醇浓度提高至42%，再降温至-10~-12℃沉淀组分ⅴ，组分ⅴ在乙醇12%，ph4.5~4.7，温度-2~-3℃，硅藻土0.25%，静置2小时后深滤，该专利说明可以将多聚体含量降低至＜1.5%，但该方法收率低，收率为26.4g/l，低于行业28g/l~30g/l的水平，同时该专利并未提供多聚体数据。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种人血白蛋白的制备方法。

2、本发明的目的之二在于提供所述制备方法在降低人血白蛋白多聚体含量中的应用。

3、为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

4、本发明提供了一种人血白蛋白的制备方法，包括如下步骤：

5、取低温乙醇法分离的组分ⅳ上清液，调节ph为6.0~6.1，降温至-7.5~-8.5℃，第一次添加陶瓷羟基磷灰石吸附，吸附后使用深层滤板进行第一次低温深滤，得组分ⅳ深滤液；

6、组分ⅳ深滤液调节ph为4.75~4.80，降温至-10~-11℃，得白蛋白沉淀；

7、将白蛋白沉淀于蛋白复溶缓冲液中溶解，调节ph至4.6~4.7，第二次添加陶瓷羟基磷灰石，静置后添加硅藻土，再使用深层滤板进行第二次低温深滤，得人血白蛋白低温深滤液；

8、人血白蛋白低温深滤液调节ph至中性，超滤浓缩后，得人血白蛋白。

9、优选的，第一次添加陶瓷羟基磷灰石的量为组分ⅳ上清液质量的0.1%~1.5%。

10、优选的，第二次添加陶瓷羟基磷灰石的量为白蛋白沉淀溶解后溶液质量的0.1%~0.2%。

11、优选的，硅藻土添加量为白蛋白沉淀溶解后溶液质量的0.25%~0.35%。

12、优选的，蛋白复溶缓冲液为含有2.5mol/l乙醇、20~100mmol/l氯化钙和50~150mmol/l氯化钠的水溶液。

13、优选的，第一次低温深滤的温度为-7.5~-8.5℃。

14、优选的，第二次低温深滤的温度为-2.5~-3.5℃。

15、优选的，所述人血白蛋白溶于辛酸钠溶液制得人血白蛋白制剂，所述辛酸钠溶液的浓度为35~45mmol/l。

16、优选的，白蛋白沉淀与蛋白复溶缓冲液的比例为1g：5~6ml。

17、本发明还提供了所述制备方法在降低人血白蛋白多聚体含量中的应用。

18、相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：

19、本发明提供了一种人血白蛋白的制备方法，本发明制备工艺简单易操作，可快速降低多聚体含量，使人血白蛋白中的多聚体含量由2.5%~3.0%降低至0.8%以下，同时不降低人血白蛋白收率，使收率为28.4g/l~29.3g/l，同时可提高人血白蛋白的纯度（≥98.5%），具有降低激肽释放酶原激活剂（pka）含量（pka＜10）的作用。本发明制得的人血白蛋白制品可室温下保存36个月以上，同时满足了人血白蛋白室温保存的技术需求、临床用药安全和有效控制生产成本。

1.一种人血白蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第一次添加陶瓷羟基磷灰石的量为组分ⅳ上清液质量的0.1%~1.5%。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第二次添加陶瓷羟基磷灰石的量为白蛋白沉淀溶解后溶液质量的0.1%~0.2%。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，硅藻土添加量为白蛋白沉淀溶解后溶液质量的0.25%~0.35%。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，蛋白复溶缓冲液为含有2.5mol/l乙醇、20~100mmol/l氯化钙和50~150mmol/l氯化钠的水溶液。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第一次低温深滤的温度为-7.5~-8.5℃。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第二次低温深滤的温度为-2.5~-3.5℃。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述人血白蛋白溶于辛酸钠溶液制得人血白蛋白制剂，所述辛酸钠溶液的浓度为35~45mmol/l。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，白蛋白沉淀与蛋白复溶缓冲液的比例为1g：5~6ml。

10.权利要求1~9任意一项所述制备方法在降低人血白蛋白多聚体含量中的应用。