用于体外鉴别心衰型胸腔积液的生物标志物及检测方法、应用

本发明属于生物医药，具体涉及一种用于体外鉴别心衰型胸腔积液的生物标志物及检测方法、应用。

背景技术：

1、胸腔积液是临床常见体征，可由多种疾病引发。引发胸腔积液的常见病因共四个，分别是恶性肿瘤、心衰、肺炎和结核。由于各型胸腔积液的治疗原则大不相同，因此准确的病因学诊断是胸腔积液规范化管理的第一步，也是最重要的一步。

2、区分hf相关胸腔积液和非心衰相关胸腔积液极为关键，因为hf相关胸腔积液无需进一步开展侵入性检查，仅采用全身性治疗(如利尿、抗心衰)即可，而结核性胸腔积液(tpe)、肺炎旁胸腔积液(ppe)和恶性胸腔积液(mpe)则需要进行侵入性的检查才能确诊。传统的诊断hf相关胸腔积液的方法比较主观，需要结合患者的病史、体征、影像学检查(心脏彩超)和实验室检查。在众多的诊断手段中，检测胸水中的生物标志物具有快速、简便、成本低和微创等优势，因此广泛应用于hf相关胸腔积液的诊断。

3、目前，临床上最常用于心衰相关胸腔积液的诊断方法是通过测量 nt-probnp（氨基末端b型利钠肽前体）和bnp（b型利钠肽）。这些生物标志物通过血液或胸水中的浓度变化来评估心衰的可能性。nt-probnp或bnp测定：样本经过处理后，将血清或胸水与特定的抗体结合，通过化学反应生成可测量的信号。检测信号强度与目标物质浓度成正比，最终得出bnp或nt-probnp的浓度值。该方法需要通过特定的化学检测仪器进行，检测nt-probnp比较昂贵，并且受到年龄、肾功能等因素的影响。

4、即便采用了上述所有方法，部分患者仍然难以诊断，此时需要对患者进行治疗性诊断，即先让患者接受抗利尿治疗，然后观察患者对利尿剂治疗的反应性来确定患者的胸腔积液是否由心衰新发。但是这种治疗性诊断的方案本身存在一定缺陷：不仅会延误患者的诊断，还需要考虑治疗带来的潜在损伤。因此，仍然有必要进一步探索新的心衰相关胸腔积液的诊断手段。

5、需要说明的是，在上述背景技术部分公开的信息仅用于加强对本发明的背景的理解，因此可以包括不构成对本领域普通技术人员已知的现有技术的信息。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种用于体外鉴别心衰型胸腔积液的生物标志物及检测方法、应用。本发明要解决的技术问题通过以下技术方案实现：

2、第一方面，本发明提供了一种用于体外鉴别心衰型胸腔积液的生物标志物，所述生物标志物由胸水中游离mir-142-5p和/或mir-155-5p组成。

3、在本发明的一个实施例中，所述体外鉴别的样本为胸水样本，该胸水样本取自具有胸腔积液指征受试者。

4、第二方面，本发明提供了一种检测上述生物标志物的试剂在制备用于体外鉴别心衰型胸腔积液的产品中的应用。

5、在本发明的一个实施例中，所述产品为用于体外鉴别心衰型胸腔积液的试剂盒。

6、在本发明的一个实施例中，所述试剂盒包含用于检测胸水样本中mir-142-5p浓度的第一检测试剂，和/或用于检测胸水样本中mir-155-5p浓度的第二检测试剂。

7、在本发明的一个实施例中，所述第一检测试剂包括mir-142-5p的特异性上游引物序列、第一内参序列和mir-142-5p的荧光探针；

8、所述第二检测试剂包括mir-155-5p的特异性上游引物序列、第二内参序列和mir-155-5p的荧光探针；

9、所述mir-142-5p的特异性上游引物序列编号为seq id no.1；

10、所述mir-155-5p的特异性上游引物序列编号为seq id no.2。

11、在本发明的一个实施例中，所述第一内参序列和所述第二内参序列均为snrnau6。

12、第三方面，本发明提供了一种上述生物标志物的检测方法，包括以下步骤：

13、获取离体样本；

14、提取所述离体样本中的总rna；

15、对所述总rna中的mirna进行逆转录形成cdna混合库；

16、向所述cdna混合库中加入生物标志物mir-142-5p的特异性上游引物序列和mir-155-5p的特异性上游引物序列，进行qpcr扩增，获得扩增曲线和ct值；所述mir-142-5p的特异性上游引物序列编号为seq id no.1；所述mir-155-5p的特异性上游引物序列编号为seqid no.2；

17、根据所述扩增曲线和ct值计算样本中mir-142-5p和/或mir-155-5p的相对表达量。

18、在本发明的一个实施例中，所述离体样本为胸水样本，该胸水样本取自具有胸腔积液指征受试者。

19、与现有技术相比，本发明的有益效果有：

20、1、本发明通过采用mir-142-5p和/或mir-155-5p作为生物标志物，用于体外鉴别心衰型胸腔积液，该生物标志物直接来源于胸水样本，能够有效辅助临床医生对胸腔积液患者进行病因学诊断，具有重要的应用价值。

21、2、本发明提供的检测试剂和试剂盒包含特异性的引物序列，能够特异性地识别和扩增mir-142-5p和mir-155-5p，减少了非特异性扩增带来的假阳性结果。

22、以下将结合附图及实施例对本发明做进一步详细说明。

1.一种用于体外鉴别心衰型胸腔积液的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物由mir-142-5p和/或mir-155-5p组成。

2.根据权利要求1所述的用于体外鉴别心衰型胸腔积液的生物标志物，其特征在于，所述体外鉴别的样本为胸水样本。

3.检测权利要求2所述生物标志物的试剂在制备用于体外鉴别心衰型胸腔积液的产品中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品为用于体外鉴别心衰型胸腔积液的试剂盒。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包含用于检测胸水样本中mir-142-5p浓度的第一检测试剂，和/或用于检测胸水样本中mir-155-5p浓度的第二检测试剂。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述第一检测试剂包括mir-142-5p的特异性上游引物序列、第一内参序列和mir-142-5p的荧光探针；

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述第一内参序列和所述第二内参序列均为snrna u6。

8.一种权利要求1所述生物标志物的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.根据权利要求8所述的生物标志物的检测方法，其特征在于，所述离体样本为胸水样本。