一种用于肝脏纤维化诊断的生物标志物及其应用

本发明涉及生物医药领域。具体地，本发明涉及一种肝脏纤维化诊断的生物标志物及其应用。

背景技术：

1、肝脏纤维化是各种慢性肝病发展的重要病理过程，被认为是肝硬化的早期阶段。主要肝脏疾病包括病毒性肝炎、酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝病等，推算我国有超过4亿慢性肝病患者，慢性肝病大多会发生肝纤维化，而纤维化又是肝硬化、肝癌等严重致死性疾病的必经病变过程。肝脏纤维化的早期诊断和及时治疗对于减缓疾病进展至关重要，但目前肝脏纤维化的负担日渐加重，已成为严重的公共卫生问题，防治肝纤维化刻不容缓。如何有效预防和治疗肝脏纤维化，特别是寻找精准的血浆学诊断标志物，已成为当下研究的重点。

2、肝脏纤维化的发病率呈现上升趋势，对人民健康构成严重威胁。肝纤维化的诊断需要结合病史、症状、体格检查和多种实验室辅助检查，其中血浆标志物被广泛应用于纤维化程度评估和预后预测等方面。

3、目前，用于肝脏纤维化的生物标志物检测主要集中在大分子，例如透明质酸(ha)、层粘连蛋白(ln)、iii型前胶原(pciii)和iv型胶原(iv-c)。这些标志物的检测方法通常采用免疫学方法，其特异性和精确度有待提高，尚无法完全满足临床需求。此外，这些生物标志物的结果易受到病人个体差异、样本保存条件以及药物等多重因素的影响。

4、目前针对肝纤维化的标志物尚不明确，因此迫切需要进一步寻找特异性强、灵敏度高且稳定的血浆学标志物，以推动肝纤维化的早期诊断和个性化治疗。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于肝脏纤维化诊断的血浆生物标志物及其应用。

2、在本发明的第一方面，提供了一种生物标志物的基因、mrna、cdna、蛋白质或其检测试剂的用途，用于制备一试剂盒或试剂，所述的试剂盒或试剂用于(a)诊断肝脏纤维化；(b)对肝脏纤维化进行早期诊断；和/或(c)对肝脏纤维化进行严重程度的诊断；其中所述生物标志物为ccn5。

3、在另一优选例中，所述检测试剂或试剂盒用于检测待测样品中所述生物标志物的表达水平。

4、在另一优选例中，所述的表达水平包括蛋白表达量或mrna表达量。

5、在另一优选例中，所述ccn5基因包括野生型ccn5基因和突变型ccn5基因。

6、在另一优选例中，所述肝脏纤维化选自下组：病毒型肝炎肝硬化、酒精性肝硬化、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、自身免疫性肝病、胆汁淤积性肝病、药物性肝损伤、心源性肝硬化等。

7、在另一优选例中，所述的生物标志物来源于血液、血浆、或血清样品。

8、在另一优选例中，与一参考值进行比较，所述生物标志物中的各生物标志物的水平(如含量)增加，则表明待测对象患有肝脏纤维化。

9、在另一优选例中，所述的生物标志物用于评估待测对象患有肝脏纤维化的诊断。

10、本发明的第二方面提供了一种用于肝脏纤维化诊断的试剂盒，所述试剂盒包含一检测试剂，所述检测试剂用于检测本发明第一方面所述的生物标志物的基因、mrna、cdna、或蛋白、或其组合。

11、在另一优选例中，所述检测试剂包括抗体、引物、探针、测序文库、核酸芯片(如dna芯片)或蛋白质芯片。

12、在另一优选例中，所述检测试剂包括检测ccn5 mrna或cdna的核酸试剂。

13、在另一优选例中，所述的蛋白包括全长蛋白或蛋白片段。

14、在另一优选例中，所述诊断试剂或试剂盒含有一种或多种选自下组的检测试剂：

15、(a)ccn5的特异性抗体、ccn5的特异性结合分子；和/或

16、(b)特异性扩增ccn5 mrna或ccn5 cdna的引物或引物对、探针或芯片。

17、在另一优选例中，所述的检测试剂偶联有或带有可检测标记。

18、在另一优选例中，所述可检测标记选自下组：生色团、化学发光基团、荧光团、同位素或酶。

19、在另一优选例中，所述ccn5的特异性抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。

20、在另一优选例中，通过rt-pcr或免疫组织化学检测样品中的ccn5蛋白的表达水平。

21、在另一优选例中，所述ccn5的基因、mrna、cdna、或蛋白来源于患有肝脏纤维化或慢性肝脏病的受试者。

22、在另一优选例中，所述受试者为人或非人哺乳动物。

23、在另一优选例中，所述检测是针对离体样本的检测；较佳地，所述离体样本选自下组：血液、血浆、血清、或其组合。

24、在另一优选例中，所述的试剂盒含有肝脏纤维化生物标志物的基因、mrna、cdna和/或蛋白作为对照品或质控品。

25、在另一优选例中，所述的试剂盒还包括标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于(a)判断肝脏纤维化的发生风险，和/或(b)对肝脏纤维化治疗效果进行评价。

26、在另一优选例中，所述的说明书记载了来源于肝脏纤维化患者和/或健康对照者的如本发明第一方面所述生物标志物的水平的参考数据集。

27、在另一优选例中，所述肝脏纤维化生物标志物的检测可定量检测。

28、在另一优选例中，所述肝脏纤维化选自下组：病毒型肝炎肝硬化、酒精性肝硬化、非酒精性脂肪性肝病(nafld)、自身免疫性肝病、胆汁淤积性肝病、药物性肝损伤、心源性肝硬化。

29、在本发明的第三方面，提供了一种检测方法，包括步骤：

30、(a)提供一检测样本，所述检测样本是血液、血浆、或血清样品；

31、(b)检测所述检测样本中ccn5的表达量，记为c1；和

32、(c)将ccn5浓度c1与对照参比值c0进行比较；

33、当c1/c0＞1时，则判断所述检测对象肝脏纤维化的发生风险高或肝脏纤维化程度高。

34、在另一优选例中，当c1/c0≥1.5，较佳地≥2，较佳地≥3时，则判断所述检测对象肝脏纤维化的发生风险高或肝脏纤维化程度高。

35、在另一优选例中，所述检测的样本为血浆，如果检测对象的肝脏纤维化的检测结果满足以下条件时，则提示所述对象的肝脏纤维化发生风险高或肝脏纤维化程度高：c1≥2ng/ml，优选≥2.5ng/ml，更优选≥3ng/ml。

36、在另一优选例中，所述方法是体外方法。

37、在另一优选例中，所述方法是非诊断和非治疗性的。

38、在本发明的第四方面，提供了一种肝脏纤维化诊断设备，所述设备包括：

39、(a)输入模块，所述输入模块被配置为用于输入某一对象生物样本的ccn5数据；

40、(b)处理模块，所述处理模块被配置为用于处理肝脏纤维化生物标志物数据，并给出发生风险的评估结果；其中，所述处理包括：对于输入的ccn5的表达水平c1与对照参比值c0进行比较；

41、其中，则当c1显著高于c0时，则提示该对象的肝脏纤维化发生风险高或肝脏纤维化程度高；当c1不显著高于c0时，则提示该对象肝脏纤维化发生风险不高或或肝脏纤维化程度不高；和

42、(c)输出模块，所述输出模块被配置为用于输出所述的评估结果。

43、在另一优选例中，所述设备还包括检测模块，所述检测模块被配置为用于检测ccn5的转录或表达水平。

44、在另一优选例中，所述设备还包括存储模块，所述存储模块被配置为用于存储预先设定的标志物的阈值和比较结果值。

45、在另一优选例中，所述设备还包括控制模块，所述控制模块被配置为控制各模块的运行。

46、在另一优选例中，所述检测模块选自下组：elisa分析仪、pcr测序仪、测序仪、或其组合。

47、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。