一种具有抗疲劳作用的乳清六肽及其制备和应用的制作方法

本发明涉及生物，具体涉及一种具有抗疲劳作用的乳清来源六肽及其制备方法和应用。

背景技术：

1、疲劳是一种由高强度运动或劳动引起的生理机能暂时下降的状态，表现为体力透支、精力不济、运动耐力下降及代谢产物（如乳酸、血尿素氮）的积累。长期慢性疲劳不仅影响生活质量，更是多种慢性疾病的重要诱因。随着现代生活节奏加快，亚健康人群日益增多，开发安全有效的抗疲劳产品具有巨大的市场前景。

2、目前市场上的抗疲劳成分主要集中在咖啡因、牛磺酸、肌酸及一些植物提取物上。然而，化学类抗疲劳成分长期使用可能带来神经兴奋过度、代谢负担等副作用。因此，寻找天然来源、无兴奋剂、无依赖性的抗疲劳活性物质成为研究热点。

3、生物活性肽（bioactive peptides）因其来源广泛、易于吸收、生物活性多样等优势受到广泛关注。研究表明，一些食源性小分子肽能够通过调节能量代谢、清除自由基或减少代谢废物堆积来发挥抗疲劳作用。例如乳清肽，乳清蛋白是奶酪加工过程中的副产物，富含多种具有生物活性的蛋白组分，以乳清蛋白为原料经酶解制得的小分子肽混合物（即乳清肽），已有文献报道其具有缓解疲劳的潜力。

4、梳理现有技术可以发现，针对乳清蛋白来源抗疲劳肽的研究主要存在以下不足：专利文献cn102178932b公开了一种缓解人体疲劳、增强免疫力的制剂，其采用浓缩乳清蛋白粉、脱脂乳粉、乳清蛋白肽、西洋参提取物、牛磺酸等多种原料复配制成颗粒剂，该制剂在增强免疫的同时还可以起到缓解体力疲劳的功能，但采用多种原料的复合配方，成分复杂，质量控制难度大。专利文献cn113801908b公开了一种乳清蛋白源缓解体力疲劳功能肽及其制备方法，采用三种蛋白酶对乳清蛋白进行分步酶解，获得具有缓解体力疲劳功能的多肽混合物。但获得的产物为多种肽段的混合物，批次间一致性难以保证，不利于工业化生产的质量控制。

5、因此，从乳清肽中筛选并解析出具有高效抗疲劳活性的特定肽段，并阐明其作用机制，对于开发新一代天然抗疲劳制剂具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于从乳清蛋白酶解产物中筛选鉴定具有抗疲劳功效的天然小分子生物活性肽，将其应用于开发缓解体力疲劳的相关产品。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明利用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶对乳清蛋白进行分步酶解，利用lc-ms/ms肽谱分析技术对乳清蛋白酶解产物中的多肽序列进行解析，再进行分子对接技术探究肽段与过氧化物酶体增殖物激活受体α（pparα）的相互作用，筛得六肽ssgyin（sn6），氨基酸序列为ser-ser-gly-tyr-ile-asn。进一步人工合成六肽sn6，功能验证发现该肽段具有抗疲劳功效。

4、因此，本发明提供了一种生物活性肽sn6，所述生物活性肽sn6的氨基酸序列为ser-ser-gly-tyr-ile-asn。

5、本发明还提供了所述生物活性肽sn6的制备方法，作为本发明的一种具体实施方式，所述生物活性肽sn6可以通过固相合成法制备，具体的，采用fmoc固相合成策略，以fmoc保护的氨基酸为原料，选用wang树脂作为固相载体，依次引入天冬酰胺、异亮氨酸、酪氨酸、甘氨酸、丝氨酸、丝氨酸残基，使肽链从c端向n端延伸，固相合成六肽sn6。

6、作为本发明的另一种具体实施方式，所述生物活性肽sn6可以通过基因工程法制备。

7、作为本发明的另一种具体实施方式，所述生物活性肽sn6可以通过对乳清蛋白定向酶解制得，具体的，所述定向酶解的方法包括：按照水与乳清蛋白质量比10：1混合，调节ph至8.0±0.2，加入占乳清蛋白总重量1.0%的碱性蛋白酶，酶解30 min；随后加入占乳清蛋白总重量1.0%的胰蛋白酶，继续酶解60 min；最后加入占乳清蛋白总重量0.5%的风味蛋白酶，酶解30 min；酶解结束后，加热灭酶，5500r/min~6500r/min条件下离心20 min，收集上清液，随后将料液糖度浓缩至25°bx后进行喷雾干燥获得乳清肽粉末，制得的乳清肽中含有六肽sn6。所述碱性蛋白酶酶活≥150 u/mg；所述胰蛋白酶酶活≥20 u/mg；所述风味蛋白酶酶活≥60 u/mg。

8、本发明还提供了所述的生物活性肽sn6在制备抗疲劳产品中的应用。

9、本发明研究表明，所述的生物活性肽sn6具有抗疲劳的作用，在地塞米松造模的疲劳模型中，给予六肽sn6干预可以显著改善疲劳状态，恢复运动能力。机理研究推测，六肽sn6通过激活pparα介导的脂代谢通路发挥抗疲劳作用。因此，可以将六肽sn6应用于制备抗疲劳的相关产品。

10、进一步的，所述疲劳包括糖皮质激素引起的运动能力下降。所述糖皮质激素可以为但不限于地塞米松。

11、进一步的，所述产品可以为但不限于用于缓解体力疲劳的保健食品或药物。

12、本发明的另一个目的是提供一种缓解体力疲劳的制剂，所述制剂包括作为活性成分的所述生物活性肽sn6。

13、本发明可以以生物活性肽sn6作为唯一的发挥抗疲劳作用的活性成分，也可以与其他发挥抗疲劳功效的活性物质组合，按照制剂制备方法制成相应制剂。

14、本发明还提供了所述的制剂在制备缓解体力疲劳的保健食品中的应用，所述保健食品还包括食品学上可接受的辅料。所述食品学上可接受的辅料为能够递送本发明有效剂量活性物质，不干扰活性物质的生物活性的食品级辅料。

15、进一步的，所述保健食品的剂型为片剂、胶囊、口服液、颗粒剂、饮料、粉剂。

16、本发明还提供了所述的制剂在制备缓解体力疲劳的药物中的应用，所述药物还包括药学可接受的载体。所述药学上可接受的载体为能够递送本发明有效剂量活性物质，不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或受试者无毒副作用的任何制剂或载体介质。

17、进一步的，所述药学上可接受的载体为填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂或润滑剂中的一种或多种。

18、进一步的，所述药物的制剂形式可以为但不限于口服制剂。具体的，制剂形式可以为但不限于口服液、胶囊、微胶囊粉、片剂、颗粒或者乳液。

19、本发明具备的有益效果：

20、本发明提供了一种新的具有抗疲劳功效的生物活性肽ssgyin。功能验证该肽段具有显著改善疲劳状态，恢复运动能力的作用。食源性生物活性肽安全性好。因此，可以将其应用于制备缓解体力疲劳的相关产品。本发明为缓解体力疲劳提供新的方法和理论基础，具有良好的市场前景和应用潜力。

1.一种生物活性肽sn6，其特征在于，所述生物活性肽sn6的氨基酸序列为ser-ser-gly-tyr-ile-asn。

2.如权利要求1所述的生物活性肽sn6的制备方法，其特征在于，所述生物活性肽sn6通过固相合成法或基因工程法制备，或者对乳清蛋白定向酶解制得。

3.如权利要求1所述的生物活性肽sn6在制备抗疲劳产品中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述疲劳包括糖皮质激素引起的运动能力下降。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品为用于缓解体力疲劳的保健食品或药物。

6.一种缓解体力疲劳的制剂，其特征在于，所述制剂包括作为活性成分的如权利要求1所述的生物活性肽sn6。

7.如权利要求6所述的制剂在制备缓解体力疲劳的保健食品中的应用，其特征在于，所述保健食品还包括食品学上可接受的辅料。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述保健食品的剂型为片剂、胶囊、口服液、颗粒剂、饮料、粉剂。

9.如权利要求6所述的制剂在制备缓解体力疲劳的药物中的应用，其特征在于，所述药物还包括药学可接受的载体。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物的制剂形式为口服制剂。