检测单体C反应蛋白的多肽或其变体、融合蛋白、生物材料、试剂盒、方法和应用与流程

本申请涉及生物检测，具体涉及检测单体c反应蛋白的多肽或其变体、融合蛋白、生物材料、试剂盒、方法和应用。

背景技术：

1、c-反应蛋白（c-reactive protein, crp）是一种由肝脏合成并分泌的典型急性时相反应蛋白。在生理状态下，crp以五个相同亚基通过非共价键组成的盘状五聚体结构（pentameric crp, pcrp）存在于血液循环中。当机体受到感染、炎症或组织损伤等刺激时，其浓度在数小时内迅速升高，已被广泛用作炎症的非特异性临床标志物。

2、然而，近年来的研究揭示，当pcrp暴露于受损细胞膜、活化血小板、微颗粒或淀粉样聚集物等特定微环境时，可解离为单体形式（monomeric crp, mcrp）。伴随这一构象转变，crp的二级结构丢失，三级结构发生显著重排，导致其暴露出新的抗原表位并获得强烈的促炎活性。研究证实，mcrp能够激活血小板、白细胞及内皮细胞，展现出显著的促炎与促血栓形成特性。此外，在缺血/再灌注损伤、阿尔茨海默病、心血管疾病以及肾移植急性排斥反应等病理状态下，均观察到mcrp的局部沉积或尿液中的特异性排出。上述发现提示，相较于传统检测的总crp，mcrp作为疾病标志物可能具有更优的病理机制相关性和临床特异性。

3、目前，临床及科研领域针对crp的检测已发展出多种免疫学技术。然而，现有的商品化检测方法及其核心原料（如单克隆抗体）主要针对天然五聚体crp（pcrp）或总crp设计，其检测对象并非mcrp。由于mcrp与pcrp在构象上存在显著差异，且两者在临床样本中可能共存，传统的抗体检测方法面临以下固有局限。

4、一方面是特异性不足与交叉反应风险：基于传统方法制备的单克隆抗体难以完全区分pcrp与mcrp的构象差异，存在交叉反应的可能，这严重限制了检测方法对mcrp的特异性和定量准确性。另一方面是制备周期与成本高昂：高特异性单克隆抗体的开发依赖于动物免疫、杂交瘤细胞筛选及大规模生产，整个过程周期漫长、成本高昂，且批次间稳定性难以控制。

5、鉴于上述问题，本领域亟需开发一种能够特异性识别mcrp独特构象表位的新型识别分子，以满足日益增长的临床诊断和科研需求，克服传统抗体法在构象区分上的技术瓶颈。

技术实现思路

1、基于此，本申请至少提供一种检测单体c反应蛋白的多肽或其变体、融合蛋白、生物材料、试剂盒、方法和应用。

2、在本申请的第一方面，提供一种特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体，所述多肽的氨基酸序列如seq id no: 1所示。

3、在本申请的第二方面，提供一种融合蛋白，其氨基酸序列包括如第一方面所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体的氨基酸序列，以及如下所示异源功能序列中的一种或多种：

4、生物素、亲和标签、固相载体结合结构域和信号肽。

5、在本申请的第三方面，提供一种生物材料，所述生物材料选自（a）核酸分子、（b）重组表达载体或（c）重组细胞；

6、（a）核酸分子：所述核酸分子编码如第一方面所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体或第二方面所述的融合蛋白；

7、（b）重组表达载体：所述重组表达载体的核苷酸序列包括（b）核酸分子的核苷酸序列；

8、（c）重组细胞：所述重组细胞携带（b）核酸分子，或包括（c）重组表达载体，或表达如第一方面所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体或如第二方面所述的融合蛋白。

9、在本申请的第四方面，提供一种用于检测单体c反应蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括如第一方面所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体；和/或，第二方面所述的融合蛋白。

10、在本申请的第五方面，提供一种非诊断目的的检测单体c反应蛋白的方法，所述方法包括将如第一方面所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体或如第二方面所述的融合蛋白与待测样品接触，检测所述多肽或其变体或所述融合蛋白与所述待测样品中单体c反应蛋白的结合情况。

11、在本申请的第六方面，提供如第一方面所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体或如第二方面所述的融合蛋白在制备用于检测单体c反应蛋白的产品中的应用。

12、本申请发明人创造性地筛选得到肽适配体，不仅可以单独使用，还可以与传统抗体联合使用。当联合使用时，不仅能够实现对样本中mcrp的高特异性捕获与鉴别，有效排除pcrp的干扰，还具备良好的定量分析性能。

1.特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如seq id no: 1所示。

2.如权利要求1所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体，其特征在于，所述变体相较于所述多肽符合如下（1）~（3）所示条件中的至少一项：

3.如权利要求1或2所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体，其特征在于，所述变体包括氨基酸序列如seq id no: 2所示的肽段。

4.融合蛋白，其特征在于，其氨基酸序列包括如权利要求1~3中任一项所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体的氨基酸序列；

5.生物材料，其特征在于，所述生物材料选自（a）核酸分子、（b）重组表达载体或（c）重组细胞；

6.用于检测单体c反应蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1~3中任一项所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体；和/或，如权利要求4所述的融合蛋白。

7.如权利要求6所述的用于检测单体c反应蛋白的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括固相载体；所述特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体或所述融合蛋白固定于所述固相载体上；和/或，

8.非诊断目的的检测单体c反应蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括将如权利要求1~3中任一项所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体或如权利要求4所述的融合蛋白与待测样品接触，检测所述多肽或其变体或所述融合蛋白与所述待测样品中单体c反应蛋白的结合情况。

9.如权利要求8所述的非诊断目的的检测单体c反应蛋白的方法，其特征在于，所述方法为夹心法酶联免疫检测方法，包括以下步骤：

10.如权利要求1~3中任一项所述的特异性结合单体c反应蛋白的多肽或其变体或如权利要求4所述的融合蛋白在制备用于检测单体c反应蛋白的产品中的应用。