一种大花五味子三萜类化合物及其制备方法和应用

本发明属于天然产物化学，公开了一种大花五味子三萜类化合物及其制备方法和应用。

背景技术：

1、炎症反应和氧化应激是机体在应对外源性刺激及内源性病理损伤过程中产生的两类关键生理病理应答机制，与衰老进程、心血管疾病、神经退行性疾病、代谢性疾病以及皮肤光损伤等多种疾病的发生与发展密切相关。

2、活性氧（reactive oxygen species，ros）过量积累可导致细胞内氧化还原稳态失衡，进而诱发脂质过氧化、蛋白质损伤及dna损伤，从而加速机体衰老并促进炎症反应的发生。此外，紫外线辐射是引起皮肤光老化和氧化损伤的重要环境因素，其可通过诱导表皮及真皮层中活性氧的大量产生而导致细胞损伤和炎症反应。因此，从天然资源中发掘兼具抗氧化、抗紫外损伤及抗炎多重活性的天然活性成分，已成为新药研发及功能性产品开发领域的重要方向。

3、大花五味子（

schisandra grandiflora）为五味子科五味子属多年生落叶藤本植物，常生长于海拔1800～3100 m的山地林缘及灌木丛环境中。五味子属植物在民间和传统医药中具有悠久的应用历史，其中大花五味子的干燥果实作为常用药材，常用于敛肺止汗、益气生津、补肾安神，在治疗久咳虚喘、津伤口渴、心悸失眠等症方面具有较高的药用价值。近年来，五味子属植物因其富含结构多样的木脂素类及三萜类次生代谢产物而受到天然产物化学领域的广泛关注，然而针对大花五味子中三萜类活性成分的系统分离及多效药理学评价尚鲜有报道，其活性物质基础尚待深入挖掘。

技术实现思路

1、鉴于此，本发明的目的在于提供一种大花五味子三萜类化合物，具有式（i）所示结构：

2、式（i）。

3、本发明的另一目的在于提供一种大花五味子三萜类化合物的制备方法，包括以下步骤：

4、（1）提取：以大花五味子干燥果实为原料，采用乙醇于室温下冷浸提取，固液分离后收集提取液，减压浓缩得到乙醇浸膏，将乙醇浸膏分散于水中制得混悬液；

5、（2）分级萃取：先向步骤（1）所得混悬液中加入与混悬液等体积的石油醚萃取分层，收集下层水相萃取液，重复萃取3~4次，合并所有水相萃取液；再向合并后的水相萃取液中加入与水相萃取液等体积的乙酸乙酯萃取分层，收集上层乙酸乙酯萃取液，重复萃取3~4次；

6、（3）第一次硅胶柱色谱分离：将步骤（2）所得乙酸乙酯部位浸膏经硅胶柱色谱，采用石油醚-乙酸乙酯为洗脱体系梯度洗脱，收集组分fr.2；

7、（4）聚酰胺柱色谱分离：将步骤（3）所得组分fr.2经聚酰胺柱色谱，采用乙醇水溶液梯度洗脱，收集组分fr.2-1；

8、（5）第二次硅胶柱色谱分离：将步骤（4）所得组分fr.2-1经硅胶柱色谱，采用二氯甲烷-甲醇为洗脱体系梯度洗脱，收集组分fr.2-1-3；

9、（6）ods反相柱色谱分离：将步骤（5）所得组分fr.2-1-3经ods反相柱色谱，采用甲醇-水为洗脱体系梯度洗脱，收集组分fr.2-1-3-17；

10、（7）半制备高效液相色谱纯化：将步骤（6）所得组分fr.2-1-3-17经半制备高效液相色谱，采用甲醇-水为流动相等度洗脱，收集目标峰洗脱液，浓缩得到粗品；所得粗品经半制备高效液相色谱，采用乙腈-水为流动相等度洗脱，浓缩得到所述大花五味子三萜类化合物。

11、作为优选，步骤（1）中，所述乙醇的体积分数为95%；所述冷浸提取的原料与乙醇的质量体积比为1 kg：(2～4) l；所述冷浸提取的时间为60～84 h。

12、作为优选，步骤（3）中，所述石油醚-乙酸乙酯洗脱体系的梯度洗脱体积比区间为20:1～0:1。

13、作为优选，步骤（3）中，所述组分fr.2为石油醚与乙酸乙酯体积比为2:1时的洗脱组分。

14、作为优选，步骤（4）中，所述乙醇水溶液的梯度洗脱体积分数区间为30%～90%。

15、作为优选，步骤（4）中，所述组分fr.2-1为乙醇体积分数为30%时的洗脱组分。

16、作为优选，步骤（5）中，所述二氯甲烷-甲醇洗脱体系的梯度洗脱体积比区间为100:1～0:1。

17、作为优选，步骤（5）中，所述组分fr.2-1-3为二氯甲烷与甲醇体积比为50:1时的洗脱组分。

18、作为优选，步骤（6）中，所述甲醇-水洗脱体系的梯度洗脱体积比区间为10:90～95:5。

19、作为优选，步骤（6）中，所述ods反相柱色谱的洗脱流速为15 ml/min；所述组分fr.2-1-3-17为甲醇与水体积比为50:50时的洗脱组分。

20、作为优选，步骤（7）中，所述甲醇-水流动相中甲醇与水的体积比为43:57，所述半制备高效液相色谱的洗脱流速为8 ml/min，目标峰保留时间为14 min；所述乙腈-水流动相中乙腈与水的体积比为28:72。

21、本发明的再一目的在于提供一种大花五味子三萜类化合物在制备抗炎产品中的应用。

22、作为优选，所述抗炎产品为用于治疗或预防由一氧化氮介导的炎症性疾病的药物、保健品或功能性产品。

23、本发明的又一目的在于提供一种大花五味子三萜类化合物在制备抗应激产品中的应用。

24、作为优选，所述抗应激产品为提高机体抗氧化应激和/或抗紫外辐射应激耐受能力的药物、保健品或功能性产品。

25、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

26、（1）本发明从大花五味子干燥果实中分离得到全新化合物arisandilactone f，经体外细胞、线虫活体活性验证，该化合物同时具备抗氧化应激、抗紫外光损伤及抗炎活性，能够抑制炎症关键介质一氧化氮（no）的释放，延长应激下线虫存活时长，可开发为抗炎、抗衰老、抗光损伤的药物、保健食品或皮肤功能性制剂，应用场景广阔。

27、（2）本发明采用石油醚-乙酸乙酯分级萃取体系，石油醚预先脱除油脂、色素等低极性杂质，随后在乙酸乙酯相富集目标化合物，大幅降低后续色谱分离负荷，有效解决五味子提取物杂质复杂、分离难度大的问题。

28、（3）本发明全程采用硅胶、聚酰胺、ods等通用型商用色谱填料，原料易得、采购成本低；配套石油醚、乙酸乙酯、甲醇、乙醇等常规有机溶剂，溶剂沸点适中、便于蒸馏回收；整套工艺流程条件温和，无需高温、高压或特殊反应设备，操作简便、安全可控，工艺稳定性强，具备工业化生产的潜力。

29、（4）本发明通过多级柱色谱梯度洗脱搭配两步半制备hplc精细纯化，逐级去除极性相近的同源杂质，最终获得高纯度单体化合物，无需复杂衍生化处理，产物结构稳定，便于后续活性制剂开发与药理深度研究。

1.一种大花五味子三萜类化合物，其特征在于，具有式（i）所示结构：

2.权利要求1所述的大花五味子三萜类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的大花五味子三萜类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，所述乙醇的体积分数为95%；所述冷浸提取的原料与乙醇的质量体积比为1 kg：(2～4)l；所述冷浸提取的时间为60～84 h。

4.根据权利要求2所述的大花五味子三萜类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述组分fr.2为石油醚与乙酸乙酯体积比为2:1时的洗脱组分。

5.根据权利要求2所述的大花五味子三萜类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述组分fr.2-1为乙醇体积分数为30%时的洗脱组分。

6.根据权利要求2所述的大花五味子三萜类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述组分fr.2-1-3为二氯甲烷与甲醇体积比为50:1时的洗脱组分。

7.根据权利要求2所述的大花五味子三萜类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述ods反相柱色谱的洗脱流速为15 ml/min；所述组分fr.2-1-3-17为甲醇与水体积比为50:50时的洗脱组分。

8.根据权利要求2所述的大花五味子三萜类化合物的制备方法，其特征在于，步骤（7）中，所述甲醇-水流动相中甲醇与水的体积比为43:57，所述半制备高效液相色谱的洗脱流速为8 ml/min，目标峰保留时间为14 min；所述乙腈-水流动相中乙腈与水的体积比为28:72。

9.权利要求1所述的大花五味子三萜类化合物在制备抗炎产品中的应用。

10.权利要求1所述的大花五味子三萜类化合物在制备抗应激产品中的应用。