一种用于生物合成(E)-10-十六碳烯醇的蛋白及方法与流程

本发明涉及酶学领域，特别涉及一种用于生物合成(e)-10-十六碳烯醇的蛋白及方法。

背景技术：

1、(e)-10-十六碳烯醇是一种重要的长链不饱和脂肪醇，主要用于信息素制备等领域。目前主要依靠化学合成，该方法存在原料价格昂贵、反应条件苛刻、成工艺复杂、选择性低、副产物多以及产率偏低等问题，导致最终产品价格高。

技术实现思路

1、本发明之一提供了cpunfarv蛋白，其氨基酸序列如seq id no. 6所示。

2、本发明之二提供了编码如本发明之一所述cpunfarv蛋白的核酸。

3、在一个具体实施方式中，所述核酸的碱基序列如seq id no. 5所示。

4、本发明之三提供了一种合成(e)-10-十六碳烯醇的方法，其包括使根据本发明之一所述的cpunfarv蛋白在酵母菌中被表达来合成所述(e)-10-十六碳烯醇；或通过本发明之二所述的核酸在所述酵母菌中表达根据本发明之一所述的cpunfarv蛋白来合成所述(e)-10-十六碳烯醇。

5、在一个具体实施方式中，所述酵母菌为酿酒酵母（

saccharomyces cerevisiae）。

6、在一个具体实施方式中，所述酵母菌为inv

sc1或inv

sc1

δole1/δelo1酵母菌株。

7、在一个具体实施方式中，在培养所述酵母菌时，向培养基中加入(z)-9-十八碳烯酸甲酯。

8、在一个具体实施方式中，培养所述酵母菌分两步进行：

9、1）繁殖为主的阶段：将所述酵母菌在含有(z)-9-十八碳烯酸甲酯的液体培养基中培养，得到发酵液，将发酵液离心得到菌体沉淀物；

10、2）诱导为主的阶段：将所述菌体沉淀物用液体培养基悬浮，得到酵母悬浮液，向所述酵母悬浮液中加入(z)-9-十八碳烯酸甲酯和底物，继续培养，从而使所述酵母合成(e)-10-十六碳烯醇，其中，所述底物为(e)-10-十六碳烯酸和/或(e)-10-十六碳烯酸甲酯。

11、在一个具体实施方式中，所述(z)-9-十八碳烯酸甲酯在所述培养基中的终浓度为0.1至0.5毫摩尔/升，所述底物在所述培养基中的终浓度为0.1至0.5毫摩尔/升。

12、在一个具体实施方式中，所述(z)-9-十八碳烯酸甲酯在所述培养基中的终浓度为0.25毫摩尔/升，所述(e)-10-十六碳烯酸甲酯在所述培养基中的终浓度为0.25毫摩尔/升。

13、在一个具体实施方式中，繁殖为主的阶段使用的培养基为含葡萄糖的sc-u培养基。

14、在一个具体实施方式中，诱导为主的阶段使用的培养基为含半乳糖的sc-u培养基。

15、本发明的有益效果：本发明发现将氨基酸序列如seq id no. 6所示的蛋白在酵母中表达，以简单脂肪酸或脂肪酸酯为底物，可以高效、特异性地合成(e)-10-十六碳烯醇，且不产生顺式异构体副产物利用酵母合成(e)-10-十六碳烯醇的发酵过程简单、绿色无污染，纯化简单方便，不对环境造成污染，且提取纯度高（yi-han xia , ya-nan zhang, bao-jian ding, hong-lei wang, christer löfstedt. multi-functional desaturases intwo spodoptera moths with δ11 and δ12 desaturation activities. 2019.)，这种合成方法摆脱了对化学合成路径的依赖，可以降低合成成本，同时减少环境污染。

1. cpunfarv蛋白，其氨基酸序列如seq id no. 6所示。

2.编码如权利要求1所述cpunfarv蛋白的核酸。

3. 根据权利要求2所述的核酸，其特征在于，所述核酸的碱基序列如seq id no. 5所示。

4.一种合成(e)-10-十六碳烯醇的方法，其包括使根据权利要求1所述的cpunfarv蛋白在酵母菌中被表达来合成所述(e)-10-十六碳烯醇；或通过权利要求2或3所述的核酸在所述酵母菌中表达根据权利要求1所述的cpunfarv蛋白来合成所述(e)-10-十六碳烯醇。

5. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述酵母菌为酿酒酵母（saccharomyces cerevisiae）。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述酵母菌为invsc1或invsc1δole1/δelo1酵母菌株。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在培养所述酵母菌时，向培养基中加入(z)-9-十八碳烯酸甲酯。

8.根据权利要求4至7中任意一项所述的方法，其特征在于，培养所述酵母菌分两步进行：

9. 根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述(z)-9-十八碳烯酸甲酯在所述培养基中的终浓度为0.1至0.5毫摩尔/升，所述底物在所述培养基中的终浓度为0.1至0.5毫摩尔/升。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，繁殖为主的阶段中使用的培养基为含葡萄糖的sc-u培养基；和/或