一种抗人CD22的抗体及其应用的制作方法

本发明属于生物，具体涉及一种抗人cd22的抗体及其应用。

背景技术：

1、自身免疫性疾病（autoimmune disease, aid）是一组由机体免疫耐受机制缺陷、免疫系统稳态失衡引发的慢性、迁延性、系统性炎症性疾病，其核心病理特征为机体免疫系统错误识别自身组织抗原，持续激活自身反应性b淋巴细胞、t淋巴细胞及固有免疫细胞，诱发级联式免疫炎症反应，进而对全身多组织、多器官产生持续性病理性损伤，具有发病率高、致残率高、复发率高、根治难度大的临床特点。

2、b淋巴细胞作为适应性免疫系统的核心效应细胞，在aid的发生、发展及病情迁延过程中发挥不可或缺的核心调控作用，其致病机制具有多维度、多层次的特点。其一，活化的b细胞可大量分泌致病性自身抗体，形成免疫复合物沉积于肾脏、关节、皮肤、血管等组织，诱发局部炎症浸润与组织坏死；其二，b细胞可作为专职抗原呈递细胞（apc），通过表面mhcⅱ类分子呈递自身抗原，协同共刺激分子激活初始t细胞与记忆t细胞，放大适应性免疫应答；其三，异常活化的b细胞可大量分泌il-6、tnf-α、ifn-γ、il-1β等促炎细胞因子及多种趋化因子，招募中性粒细胞、巨噬细胞等固有免疫细胞浸润病灶，构建持续性炎症微环境，形成免疫紊乱的恶性循环；其四，年龄相关b细胞、浆母细胞、记忆性自身反应性b细胞等异常亚群在aid患者体内特异性扩增，打破机体免疫耐受平衡，是疾病复发与难治的关键诱因。

3、临床上常见的自身免疫性疾病包括系统性红斑狼疮（systemic lupuserythematosus, sle）、i型糖尿病（type i diabetes mellitus, tidm）、类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, ra）、强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis, as）、干燥综合征（sjögren's syndrome, ss）等，各类疾病虽病灶部位与临床表现不同，但均存在b细胞异常活化、增殖及功能紊乱的共性病理基础。目前业界普遍认为，aid的发病机制是遗传易感基因、环境诱因（病毒/细菌感染、化学药物、紫外线照射、内分泌紊乱）、免疫调控网络异常三者协同作用的结果，其具体分子调控网络尚未完全阐明，临床尚无根治手段。

4、现阶段aid临床治疗体系以对症干预、抑制炎症、延缓病情进展为核心，主流治疗药物涵盖非甾体抗炎药、糖皮质激素、传统改善病情抗风湿药（conventional dmards）、靶向合成dmards（如jak抑制剂、tyk2抑制剂）及新型生物制剂等。但现有治疗方案存在明显局限性：传统药物特异性差、全身副作用显著，长期使用易引发骨质疏松、肝肾功能损伤、免疫力低下等并发症；小分子靶向药物存在耐药性高发、靶点单一的问题；已上市生物制剂多靶向通用炎症通路，无法精准靶向致病核心的b细胞亚群。近年来，靶向b细胞及其关键调控通路的免疫治疗技术快速发展，抗cd19 car-t细胞治疗、抗baff/april单克隆抗体、b细胞耗竭疗法等，在难治性、复发性自身免疫性疾病的临床研究中展现出突破性疗效，证实b细胞靶向干预是aid精准治疗的核心发展方向。

5、cd22（siglec-2）是唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素（siglecs）家族的关键i型跨膜糖蛋白，成熟蛋白分子量约140 kda，特异性表达于b细胞发育的全过程，从祖b细胞、未成熟b细胞、成熟b细胞至活化b细胞均有表达，且在终末分化的浆细胞中表达下调，具有严格的b细胞谱系特异性。cd22胞外段包含7个串联的免疫球蛋白样结构域，可特异性识别并结合细胞表面唾液酸配体；胞内段含有3个保守的免疫受体酪氨酸基抑制基序（itim），是b细胞受体（bcr）信号通路的关键负向调控分子。生理状态下，cd22通过itim结构域招募磷酸酶，抑制bcr介导的钙离子内流、下游erk/nf-κb信号通路活化，调控b细胞增殖、活化、分化及抗体分泌功能，维持机体b细胞免疫耐受稳态。

6、除生理调控功能外，cd22在b细胞源性恶性肿瘤中呈现特征性高表达，是血液系统肿瘤的明星靶点，广泛表达于b细胞急性淋巴细胞白血病（b-all）、非霍奇金淋巴瘤（nhl）、毛细胞白血病（hcl）、弥漫大b细胞淋巴瘤（dlbcl）等恶性肿瘤细胞表面，且表达稳定性显著优于cd19等传统靶点，极少出现靶点缺失、突变及下调现象，为肿瘤靶向治疗提供了稳定、特异的作用位点。同时，在自身免疫性疾病患者体内，异常活化的自身反应性b细胞表面cd22表达异常上调，其负向调控功能缺陷，导致b细胞持续过度活化，进一步加剧免疫紊乱，使cd22成为连接b细胞肿瘤与自身免疫病的双向精准靶点。

7、基于cd22的靶点特异性与功能优势，目前全球已形成单克隆抗体、抗体药物偶联物（adc）、car-t细胞免疫疗法三大主流研发方向，且多款产品已进入临床应用或关键临床阶段。在抗体药物领域，中国抗体制药有限公司研发的舒西利单抗（sm03），是以鼠源亲本抗体rfb4为基础，通过基因重组、嵌合改造及全人源化修饰制备的igg1型抗cd22单克隆抗体，可特异性结合b细胞表面cd22抗原，阻断其异常信号传导并介导b细胞耗竭。该药物针对类风湿关节炎的ⅲ期临床试验已圆满完成，顺利达到主要疗效终点，安全性与有效性得到充分验证，有望成为国内首个获批用于自身免疫病治疗的cd22靶向单抗药物。

8、medchemexpress公司开发的依帕珠单抗（epratuzumab）为全人源化抗cd22单克隆抗体，可特异性结合cd22胞外功能区，诱导cd22磷酸化及内吞降解，抑制b细胞活化增殖、减少自身抗体分泌。多项长期临床扩展研究证实，该抗体对系统性红斑狼疮具有良好的耐受性与持续疗效，可显著降低患者疾病活动评分，减少糖皮质激素依赖，为难治性sle提供了新的治疗选择。在adc药物领域，奥加伊妥珠单抗（besponsa）于2020年12月获nmpa批准上市，是国内首款获批的cd22靶向adc药物，主要用于治疗复发/难治性前体b细胞急性淋巴细胞白血病成年患者。该药物由靶向cd22的特异性单抗与强效细胞毒剂卡奇霉素偶联而成，通过抗体靶向结合肿瘤细胞表面cd22抗原后经内吞作用进入胞内，释放卡奇霉素诱导肿瘤细胞dna双链断裂，触发细胞凋亡，临床客观缓解率（cr）可达80.7%，显著改善了难治性b-all患者的生存预后。

9、在细胞免疫治疗领域，cd19 car-t是目前b细胞肿瘤治疗的经典成熟方案，但临床研究发现，cd19基因缺失、靶点突变、表达下调是导致car-t治疗耐药、复发的核心原因，严重限制了其临床复用率与远期疗效。而cd22靶点表达稳定性高、突变率极低，可有效弥补cd19靶点的缺陷。现阶段，靶向cd19/cd22的双特异性car-t细胞疗法已成为血液肿瘤与自身免疫病研发热点，一项ⅰ期临床研究数据显示，双靶点car-t产品治疗复发/难治性弥漫大b细胞淋巴瘤（r/r dlbcl）的客观缓解率（orr）可达60%，且治疗相关毒性可控，为克服单靶点耐药、提升治疗有效率提供了全新策略。同时，cd22靶向car-t细胞可精准清除体内自身反应性b细胞，从根源上阻断自身免疫反应的持续激活，在重症难治性sle、ra等自身免疫病的临床探索中展现出巨大潜力。

10、血液净化技术作为重症自身免疫病与难治性b细胞肿瘤的辅助治疗手段，可通过血浆置换、免疫吸附、细胞净化等方式，在短时间内快速、高效清除患者外周循环中的致病性自身抗体、炎症因子、循环肿瘤细胞（ctc）及可溶性抗原，快速纠正机体免疫紊乱、降低肿瘤负荷。现有临床研究证实，血液净化与cd22靶向治疗联合应用可产生显著协同增效作用：在cd22单抗、adc或car-t治疗前实施血浆置换或特异性免疫吸附，可清除90%以上的外周血ctc与可溶性cd22抗原，有效减少可溶性抗原与靶向药物的竞争性结合，提升药物对靶细胞的特异性结合效率与杀伤效果；同时可显著降低cd22 car-t治疗引发的细胞因子释放综合征（crs）、免疫效应细胞相关神经毒性综合征（icans）、持续性b细胞再生障碍等严重不良反应，有效清除体内残留病灶，降低疾病复发风险。

11、因此，有必要开发一种亲和力高、靶向性强、免疫原性低的抗人cd22抗体，可广泛应用于b细胞恶性肿瘤、自身免疫性疾病的诊断与治疗。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种抗人cd22的抗体及其应用。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、本发明的第一个方面，提供：一种抗人cd22的抗体，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的互补决定区域cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：yhwms、yidpsggstyyadsvkg和rsaygtywgvvyay；

4、所述轻链可变区的互补决定区域cdr1～cdr3的氨基酸序列分别为：rasqdvssyla、yasnlqs和qqsytlpyt。

5、在一些实例中，所述重链可变区的氨基酸序列为：evqlvesggglvkpggslklscaasgfafsyhwmswvrqtpekclewvayidpsggstyyadsvkgrftisrdnakntlylqmsslksedtamyycarrsaygtywgvvyaywgqgtlvtvsa（seq id no.2）。

6、在一些实例中，所述轻链可变区的氨基酸序列为：diqmtqttsslsaslgdrvtiscrasqdvssylawyqqkpdgtvklliyyasnlqsgvpsrfsgsgsgtdysltisnleqedfatyfcqqsytlpytfgcgtkleik（seq id no.3）。

7、在一些实例中，所述重链的氨基酸序列如seq id no.1所示。

8、在一些实例中，其为单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体、融合fc片段的抗体、同源或异源二价或多价抗体。

9、在一些实例中，所述fc片段选自人源igg1、igg2、igg3或igg4的fc段或其变体、改造体。

10、本发明的第二个方面，提供：编码本发明第一个方面所述抗体的基因。

11、本发明的第三个方面，提供：一种蛋白表达系统，其含有本发明第二个方面所述的基因。

12、本发明的第四个方面，提供：一种免疫吸附剂，包括固相载体，所述固相载体上偶联有本发明第一个方面所述的抗体。

13、在一些免疫吸附剂的实例中，所述固相载体选自壳聚糖、琼脂糖、纤维素、葡聚糖、树脂、纤维素中的至少一种。

14、本发明的第五个方面，提供：本发明第一个方面所述抗体的应用，所述应用包括但不限于：

15、制备靶向cd22的细胞免疫吸附剂；

16、制备靶向cd22的细胞检测试剂；

17、制备cd22检测试剂；

18、制备靶向cd22的抗体偶联物。

19、在一些应用的实例中，所述偶联物为药物，所述b细胞相关疾病选自肿瘤及自身免疫性疾病。

20、在一些应用的实例中，肿瘤包括但不限于多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、胶质母细胞瘤；自身免疫性疾病包括但不限于红斑狼疮、重症肌无力、类风湿性关节炎、 特发性炎症性肌炎、系统性硬化症、原发性干燥综合征。

21、在一些应用的实例中，所述免疫偶联物由纳米抗体和连接在纳米抗体上的偶联物构成，如抗体与小分子组成的adc药物。

22、在一些应用的实例中，所述偶联物为药物。

23、本发明的有益效果是：

24、本发明一些实例的抗人cd22的抗体，可以特异性与人cd22蛋白结合，且结合稳定。

25、本发明一些实例的抗人cd22的抗体，可以用于制备cd22蛋白检测试剂、吸附试剂；制备b细胞引起的相关疾病的治疗或辅助治疗。

26、本发明的一些实例，通过将该抗人cd22的抗体偶联吸附柱，经过体外血液循环，针对性地吸附血液中的b细胞，能够快速降低致病因子水平，迅速减少循环中异常活化或致病的 b 细胞及其产生的抗体、细胞因子等致病因子，从而快速缓解症状。其次针对性强，可以相对特异性地针对 b 细胞进行清除，减少对其他细胞类型的影响。而且能够为其他治疗争取时间，在疾病急性发作或严重阶段，有助于稳定病情，为后续的免疫调节治疗或其他针对性治疗创造有利条件。不仅如此，还能够改善免疫失衡，调整免疫系统的失衡状态，有助于恢复免疫稳态。最后，可在必要时重复进行，以维持治疗效果，安全性高。