一种含天麻浆液的蜜环菌培养基及其制备方法与应用、及蜜环菌菌液及其应用与流程

本申请属于蜜环菌培养，具体而言，涉及一种含天麻浆液的蜜环菌培养基及其制备方法与应用、及蜜环菌菌液及其应用。

背景技术：

1、蜜环菌为天麻生长的专性共生菌，其培养效率与活性直接决定天麻栽培的产量和品质，目前蜜环菌培养主要分为固体基质培养和液态培养基培养两种方式，固体基质以阔叶树木材、麦麸、玉米芯等为主，液态培养基则以葡萄糖、马铃薯、蛋白胨等化学试剂为核心营养源。

2、但现有培养方式均存在显著缺陷：固体基质培养周期长、营养释放慢、菌材利用率低；传统液态培养基为人工合成配方，与蜜环菌-天麻天然共生环境适配性差，培养的蜜环菌定殖速度慢，且化学试剂增加制备成本，部分还会轻微抑制蜜环菌活性。

3、因此，亟需一种能大幅缩短蜜环菌的培养周期，还能显著提高蜜环菌与天麻的共生适配性和定殖速度的培养基。

技术实现思路

1、本申请的目的是提供一种含天麻浆液的蜜环菌培养基及其制备方法与应用、及蜜环菌菌液及其应用，不仅能大幅缩短蜜环菌的培养周期、提升菌丝活性和繁殖速度，还能显著提高蜜环菌与天麻的共生适配性和定殖速度，同时培养基制备工艺简单。

2、为达上述目的，本申请提供了一种含天麻浆液的蜜环菌培养基，以1l蜜环菌培养基体积计量，包括以下原料：天麻浆液20vol%~60vol%，葡萄糖2g/l~15g/l，磷酸二氢钾1g/l~5g/l，硫酸镁0.1g/l~3g/l，维生素b1 0.05g/l~0.1g/l，以及余量的无菌水；其中，天麻浆液为天麻与无菌水按照浆液比1:1~1.5混合后打浆得到。

3、进一步的，1l蜜环菌培养基中，包括以下原料：天麻浆液30vol%~50vol%，葡萄糖5g/l~10g/l，磷酸二氢钾2g/l~3g/l，硫酸镁1g/l~1.5g/l，维生素b1 0.05g/l~0.1g/l，以及余量的无菌水；其中，天麻浆液为天麻与无菌水按照浆液比1:1~1.2混合后打浆得到。本申请中的，葡萄糖5g/l~10g/l是指在1l培养基中含有5g~10g的葡萄糖，其余原料以此例举，所有组分配制完成后，以水补充到1l体积。

4、更进一步的，1l蜜环菌培养基中，包括以下原料：天麻浆液40vol%，葡萄糖10g/l，磷酸二氢钾2g/l，硫酸镁1.5g/l，维生素b1 0.08g/l，以及余量的无菌水；其中，天麻浆液为天麻与无菌水按照浆液比1:1.1混合后打浆得到。

5、进一步的，蜜环菌培养基的ph值为6.0~6.5。

6、进一步的，天麻浆液通过以下方法制备得到：将新鲜的天麻块茎，洗净后沥干后切块，按照料液比加入无菌水后6000rpm~10000rpm打浆5min~10min，过80目无菌筛后，得到天麻浆液。其中，新鲜的天麻是指颜色自然呈蜡质光泽，表皮无褶皱；常温在采摘2天内为新鲜。

7、本申请还提供了一种含天麻浆液的蜜环菌培养基的制备方法，包括以下步骤：将天麻块茎与无菌水混合后经打浆处理与过筛处理，得到天麻浆液；称取蜜环菌培养基的剩余原料，与天麻浆液混合均匀，使用食品级盐酸或磷酸调节体系ph值至6.0~6.5，得到培养基初产品；将培养基初产品进行高压蒸汽灭菌处理，冷却后制得。

8、进一步的，高压蒸汽灭菌处理的温度为120℃~125℃，压力为0.1mpa~0.2mpa，时间为20min~30min。冷却后的温度为25℃~30℃。

9、本申请还提供了一种含天麻浆液的蜜环菌培养基在培养蜜环菌中的应用方法，包括以下步骤：

10、在无菌条件下，将活化的蜜环菌母种按照5%~8%的接种量接入蜜环菌培养基中，在恒温摇床中进行振荡培养，培养至培养基中蜜环菌菌丝干重≥8g/l、菌丝活性≥95%时停止培养，得到蜜环菌菌液；其中，恒温摇床的培养条件包括：温度24℃~26℃、摇床转速为160r/min~180r/min、培养时间为5d~7d。其中，活化是指将休眠的蜜环菌恢复成生长旺盛、活力更强的状态；一般采用pda固体平板活化，若菌丝弱、生长慢，可进行二次活化。然后将固体活化好的菌种，切5块~10块接入不含琼脂的蜜环菌液体培养基中摇床培养。

11、本申请还提供了根据上述方法培养得到的蜜环菌菌液，蜜环菌菌液中菌丝干重≥8g/l、菌丝活性≥95%。

12、本申请还提供了一种蜜环菌菌液在天麻栽培中的应用，蜜环菌菌液直接用于天麻栽培的拌种以及土壤浇灌中，或将蜜环菌菌液制备成固体菌剂后用于天麻菌床铺设。优选的，拌种过程中蜜环菌菌液与无菌水的体积比为1:1，混合后用量为30ml/kg~50ml/kg天麻种。土壤浇灌过程中，按照蜜环菌菌液与水1:10的比例稀释后按照150ml/m2~180ml/m2的用量进行浇灌。天麻菌床铺设过程中，制备的固体菌剂一般采用1.5kg/m2~2.05kg/m2的用量。

13、综上，本申请具有以下有益效果：

14、本申请的含天麻浆液的蜜环菌培养基，基于蜜环菌与天麻的专性共生特性，以天麻鲜品打浆后的浆液作为蜜环菌培养基的核心营养源，天麻组织中天然含有的多糖、氨基酸以及矿物质等营养物质与蜜环菌营养需求高度契合，从而形成了与蜜环菌生长高度适配的天然营养体系，从原料本源上匹配蜜环菌的生长需求，进一步提升了蜜环菌培养的适配性。

15、并且，本申请的天麻浆液替代了传统液态培养基中的部分化学试剂和固体基质，减少了人工合成化学试剂的使用，规避了部分化学试剂对蜜环菌活性的轻微抑制作用，同时优化天麻浆添加比例、辅助营养成分及发酵培养条件，从而实现了蜜环菌的快速生长，进而大幅缩短了蜜环菌的培养周期。

1.一种含天麻浆液的蜜环菌培养基，其特征在于，以1l体积的蜜环菌培养基计量，包括以下原料：天麻浆液20vol%~60vol%，葡萄糖2g/l~15g/l，磷酸二氢钾1g/l~5g/l，硫酸镁0.1g/l~3g/l，维生素b1 0.05g/l~0.1g/l，以及余量的无菌水；

2.根据权利要求1所述含天麻浆液的蜜环菌培养基，其特征在于，包括以下原料：天麻浆液30vol%~50vol%，葡萄糖5g/l~10g/l，磷酸二氢钾2g/l~3g/l，硫酸镁1g/l~1.5g/l，维生素b1 0.05g/l~0.1g/l，以及余量的无菌水；

3.根据权利要求1或2所述含天麻浆液的蜜环菌培养基，其特征在于，所述蜜环菌培养基的ph值为6.0~6.5。

4.根据权利要求1或2所述含天麻浆液的蜜环菌培养基，其特征在于，所述天麻浆液通过以下方法制备得到：于采摘后2天内，将天麻块茎洗净后沥干后切块，按照料液比加入无菌水后以6000rpm~10000rpm转速打浆5min~10min，过80目无菌筛后，得到所述天麻浆液。

5.一种根据权利要求1-4任一项所述含天麻浆液的蜜环菌培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述高压蒸汽灭菌处理的温度为120℃~125℃，压力为0.1mpa~0.2mpa，时间为20min~30min。

7.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述冷却后的温度为25℃~30℃。

8.一种根据权利要求1-4任一项所述含天麻浆液的蜜环菌培养基在培养蜜环菌中的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.一种根据权利要求8所述方法培养得到的蜜环菌菌液，其特征在于，所述蜜环菌菌液中菌丝干重≥8g/l、菌丝活性≥95%。

10.一种根据权利要求9所述蜜环菌菌液在天麻栽培中的应用，其特征在于，所述蜜环菌菌液直接用于天麻栽培的拌种以及土壤浇灌中，或将所述蜜环菌菌液制备成固体菌剂后用于天麻菌床铺设。