肺泡上皮细胞体外模型及其构建方法和应用与流程

本申请属于生物医学，具体涉及肺泡上皮细胞体外模型及其构建方法和应用。

背景技术：

1、急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ards）是一种由多种肺内或肺外因素引发的、以弥漫性肺泡上皮与毛细血管内皮损伤、肺泡-毛细血管屏障通透性显著增加、富含蛋白的肺水肿液渗出及严重低氧血症为特征的临床危重症。尽管自1967年首次被描述以来，ards的定义和诊疗标准不断演进，但其高发病率、高死亡率以及高度异质性的病理生理机制，仍使其成为重症医学领域亟待攻克的重大难题。

2、目前的研究普遍认为，ards的病理微环境具有复杂的炎症因子网络激活、氧化应激增强、凝血功能紊乱以及上皮-内皮屏障破坏等多重特征。然而，传统肺上皮细胞损伤模型（如仅采用脂多糖单一刺激）往往难以全面模拟上述动态且交互作用的病理微环境，导致体外实验结果与临床实际存在显著脱节，严重制约了对ards发病机制的深入解析及有效治疗策略的开发。

技术实现思路

1、基于此，本申请一个或者多个实施例提供肺泡上皮细胞体外模型及其构建方法和应用。包括如下技术方案：

2、本申请的一个或者多个实施例提供一种肺泡上皮细胞体外模型的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：

3、对所述mle-12细胞进行刺激培养，构建肺泡上皮细胞体外模型；

4、刺激培养采用的刺激培养基中添加有急性呼吸窘迫综合征动物模型的肺泡灌洗液。

5、在本申请的一些实施方式中，所述肺泡灌洗液在所述刺激培养基中的添加量为15%~25%(v/v)。

6、在本申请的一些实施方式中，所述刺激培养基包括所述肺泡灌洗液和基础培养基，所述基础培养基包括dmem/f12培养基和dmem培养基中的一种或者多种。

7、在本申请的一些实施方式中，刺激培养的时间为16小时~32小时。

8、在本申请的一些实施方式中，所述肺泡灌洗液来源于急性呼吸窘迫综合征鼠模型。

9、在本申请的一些实施方式中，所述构建方法满足如下（a1）至（a2）所示条件中的一个或者多个：

10、（a1）在所述mle-12细胞的细胞融合度达到60%~70%的条件下用所述刺激培养基进行刺激培养；

11、（a2）在温度为36.5℃~37.5℃或/和4.7%~5.3%(v/v)co2的条件下进行刺激培养。

12、在本申请的一些实施方式中，所述构建方法还包括通过增殖培养获得mle-12细胞的步骤。

13、在本申请的一些实施方式中，增殖培养满足如下（b1）至（b3）所示条件中的一个或者多个：

14、（b1）在温度为36.5℃~37.5℃或/和4.7%~5.3%(v/v)co2的条件下进行增殖培养；

15、（b2）增殖培养的初始培养体系中接种有1×105/2ml~3×105/2ml的mle-12细胞；

16、（b3）增殖培养的增殖培养基包括胎牛血清和dmem/f12培养基；可选地，所述胎牛血清在所述增殖培养基中的添加量为1%~3%(v/v)。

17、本申请的一个或者多个实施例提供一种所述的构建方法构建的肺泡上皮细胞体外模型。

18、本申请的一个或者多个实施例提供一种所述的肺泡上皮细胞体外模型作为靶细胞在治疗急性呼吸窘迫综合征的药物的筛选中的应用或者在急性呼吸窘迫综合征机制研究中的应用。

19、相对于传统技术，本申请的有益效果包括：

20、本申请通过采用ards动物模型的balf刺激mle-12细胞从而构建肺泡上皮细胞体外模型，该肺泡上皮细胞体外模型能够高度模拟ards病理状态下肺泡上皮细胞的活化表型，基于此，该模型能够用于有效开展ards病理机制及治疗药物筛选的研究。

1.肺泡上皮细胞体外模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的肺泡上皮细胞体外模型的构建方法，其特征在于，所述肺泡灌洗液在所述刺激培养基中的添加量为15%~25%(v/v)。

3.根据权利要求1所述的肺泡上皮细胞体外模型的构建方法，其特征在于，所述刺激培养基包括所述肺泡灌洗液和基础培养基，所述基础培养基包括dmem/f12培养基和dmem培养基中的一种或者多种。

4.根据权利要求1所述的肺泡上皮细胞体外模型的构建方法，其特征在于，刺激培养的时间为16小时~32小时。

5.根据权利要求1所述的肺泡上皮细胞体外模型的构建方法，其特征在于，所述肺泡灌洗液来源于急性呼吸窘迫综合征鼠模型。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的肺泡上皮细胞体外模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法满足如下（a1）至（a2）所示条件中的一个或者多个：

7.根据权利要求1至5中任一项所述的肺泡上皮细胞体外模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法还包括通过增殖培养获得mle-12细胞的步骤。

8.根据权利要求7所述的肺泡上皮细胞体外模型的构建方法，其特征在于，增殖培养满足如下（b1）至（b3）所示条件中的一个或者多个：

9.权利要求1至8中任一项所述的构建方法构建的肺泡上皮细胞体外模型。

10.权利要求9所述的肺泡上皮细胞体外模型作为靶细胞在治疗急性呼吸窘迫综合征的药物的筛选中的应用或者在急性呼吸窘迫综合征机制研究中的应用。