具有降尿酸能力的罗伊氏粘液乳杆菌及其应用的制作方法
本发明属于微生物领域,具体涉及具有降尿酸能力的罗伊氏粘液乳杆菌及其应用。
背景技术:
1、高尿酸血症(hyperuricemia,hua)是指因嘌呤代谢紊乱导致血清尿酸浓度超过正常范围的疾病。目前,其治疗方法主要包括饮食疗法、药物疗法以及生物疗法。其中,生物疗法因副作用低且经济高效已被公众广泛接受。研究发现部分乳酸菌具有高效降低尿酸的能力,如短促生乳杆菌
levilactobacillus brevisdm9218和干酪乳酪杆菌
lacticaseibacillus caseipa-3能够降解嘌呤等中间代谢产物,从而改善高尿酸血症状况。
2、罗伊氏粘液乳杆菌是一种革兰氏阳性杆状细菌,广泛分布于各类食品(尤其是肉制品与奶制品)以及多种哺乳动物的肠道中。它不仅是哺乳动物肠道微生物中的优势菌种之一,也是人类肠道中最常见的微生物之一。目前,该菌种已被公认为一种重要的新型益生乳酸菌,具有极高的理论研究和生产应用价值。在食品、医药及保健品领域展示出较好的应用潜力。
3、公开号为cn116286528a的中国专利申请,公开了一株罗伊氏粘液乳杆菌ckcc11157,但是,罗伊氏粘液乳杆菌ckcc11157的菌悬液对黄嘌呤氧化酶的抑制率仅为26.78%,罗伊氏粘液乳杆菌ckcc11157的代谢物对黄嘌呤氧化酶的抑制率仅为18.36%,可见,该菌株对于黄嘌呤氧化酶抑制率较低。
4、公开号为cn116585362a的中国专利申请,公开了一株罗伊氏粘液乳杆菌hcs02-001,但是,该罗伊氏粘液乳杆菌hcs02-001对于肌苷降解率仅为29.03%,鸟苷的降解率仅为26.47%。可见,该菌株对于肌苷以及鸟苷的降解率较低。
技术实现思路
1、现有技术中存在的问题是:现有技术中缺少能快速降解鸟苷和肌苷以及体外抑制黄嘌呤氧化酶活性的罗伊氏粘液乳杆菌,导致现有技术中的罗伊氏粘液乳杆菌普遍存在降尿酸能力不足的问题,这限制了罗伊氏粘液乳杆菌在降尿酸药品领域的应用。
2、针对上述现有技术中存在的问题,本发明提供了具有降尿酸能力的罗伊氏粘液乳杆菌及其应用,具体技术方案如下所示:
3、技术方案1:一种罗伊氏粘液乳杆菌,其特征在于,所述罗伊氏粘液乳杆菌为:罗伊氏粘液乳杆菌(
limosilactobacillus reuteri)amcc 12149,保藏编号为cctcc no:m20242932。
4、技术方案2:根据技术方案1所述的罗伊氏粘液乳杆菌,其特征在于,所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的
phes基因序列如seq id no.3所示,优选地,具有抑制黄嘌呤氧化酶活性的能力、和/或具有降解嘌呤化合物的能力,更优选地,所述嘌呤化合物包括鸟苷和/或肌苷、和/或具有疏水性、和/或具有自凝聚能力。
5、技术方案3:一种罗伊氏粘液乳杆菌,其特征在于,所述罗伊氏粘液乳杆菌为:罗伊氏粘液乳杆菌(
limosilactobacillus reuteri)amcc 10930,保藏编号为cctcc no:m2025224。
6、技术方案4:根据技术方案3所述的罗伊氏粘液乳杆菌,其特征在于,所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的
phes基因序列如seq id no.4所示,优选地,具有抑制黄嘌呤氧化酶活性的能力、和/或具有降解嘌呤化合物的能力,
7、更优选地,所述嘌呤化合物包括鸟苷和/或肌苷、和/或具有疏水性、和/或具有自凝聚能力。
8、技术方案5:根据技术方案1或2所述的罗伊氏粘液乳杆菌,其特征在于,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌体对黄嘌呤氧化酶活性的抑制率为大于等于40.00%,优选为43.00%-50.00%;
9、和/或罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌体对鸟苷的降解速率为大于等于49.00μg/ml·min,优选为49.00-115.00 μg/ml·min,更优选为70.00-115 .00μg/ml·min,进一步优选地,所述鸟苷的浓度大于等于10mmol/l;
10、和/或罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌体对肌苷的降解速率为大于等于45.00μg/ml·min,优选为45.00-101.00 μg/ml·min,更优选为64.00-101.00 μg/ml·min,进一步优选地,所述肌苷的浓度大于等于10 mmol/l;
11、和/或罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌体的疏水性为大于等于35%,优选地,大于等于35.00%且小于等于45.00%,其中,所述疏水性是指在mrs液体培养基中培养后的菌液进行固液分离后保留罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌体细胞沉淀,将罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌体细胞沉淀经缓冲液重悬后得到od600= 1的菌悬液,将所述菌悬液与二甲苯混合后静置3 h后检测得到的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌体的疏水性,
12、和/或罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌体的自凝聚率为大于等于20.00%,其中,自凝聚率是指将在mrs液体培养基中培养后的菌液进行固液分离后保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬得到菌悬液,其中,测定所述菌悬液的上清液od600值,作为上清液初始od600值。将所述菌悬液静置培养4-24 h后测定上清液od600值,作为上清液培养4-24h后的od600值,然后根据公式:自凝聚率(%)=(1-at/a0)×100%,at表示为上清液培养4-24h后的od600值;a0表示为上清液初始od600值,计算得到的数值即为自凝聚率。
13、优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌体的4 h自凝聚率为大于等于20.00%,更优选地,大于等于20.00%且小于等于25.00%,其中,所述4 h自凝聚率是指将在mrs液体培养基中培养后的菌液进行固液分离后保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬得到菌悬液,其中,测定所述菌悬液的上清液od600值,作为上清液初始od600值。将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬后静置培养4 h后测定上清液od600值,作为上清液培养4h后的od600值,然后根据公式:自凝聚率(%)=(1-at/a0)×100%,at表示为上清液培养4h后的od600值;a0表示为上清液初始od600值,计算得到的数值即为4 h自凝聚率。
14、优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌体的12 h自凝聚率为大于等于30.00%,更优选地,大于等于30.00%且小于等于37.00%,其中,所述12h自凝聚率是指将在mrs液体培养基中培养后的菌液进行固液分离后保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬得到菌悬液,其中,测定所述菌悬液的上清液od600值,作为上清液初始od600值。将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬后静置培养12 h后测定上清液od600值,作为上清液培养12h后的od600值,然后根据公式:自凝聚率(%)=(1-at/a0)×100%,at表示为上清液培养12h后的od600值;a0表示为上清液初始od600值,计算得到的数值即为12 h自凝聚率。
15、优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌体的24 h自凝聚率为大于等于57.00%,更优选地,大于等于57.00%且小于等于60.00%,其中,所述24 h自凝聚率是指将在mrs液体培养基中培养后的菌液进行固液分离后保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬得到菌悬液,其中,测定所述菌悬液的上清液od600值,作为上清液初始od600值。将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬后静置培养24 h后测定上清液od600值,作为上清液培养24h后的od600值,然后根据公式:自凝聚率(%)=(1-at/a0)×100%,at表示为上清液培养24h后的od600值;a0表示为上清液初始od600值,计算得到的数值即为24 h自凝聚率。
16、技术方案6:根据技术方案3或4所述的罗伊氏粘液乳杆菌,其特征在于,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的菌体对黄嘌呤氧化酶活性的抑制率为大于等于52.00%,优选为52.00-60.00%;
17、和/或所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌体,对鸟苷的降解速率为大于等于46.00μg/ml·min,优选为46.00-136.00 μg/ml·min,更优选为69.00-136.00μg/ml·min,进一步优选地,所述鸟苷的浓度大于等于10 mmol/l;
18、和/或罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌体,对肌苷的降解率为大于等于44.00μg/ml·min,优选为44.00-131.00μg/ml·min,更优选为66.00-131.00μg/ml·min,进一步优选地,所述肌苷的浓度大于等于10mmol/l;
19、和/或罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的菌体的疏水性为大于35%,优选地,大于等于35.00%且小于等于45.00%,其中,所述疏水性是指在mrs液体培养基中培养后的菌液进行固液分离后保留罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌体细胞沉淀,将罗伊氏粘液乳杆菌amcc10930菌体细胞沉淀经缓冲液重悬后得到od600= 1的菌悬液,将所述菌悬液与二甲苯混合后静置3 h后检测得到的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌体的疏水性,
20、和/或罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌体的自凝聚率为大于等于24.00%,其中,所述自凝聚率是指将在mrs液体培养基中培养后的菌液进行固液分离后保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬得到菌悬液,其中,测定所述菌悬液的上清液od600值,作为上清液初始od600值。将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬后静置培养4-24 h后测定上清液od600值,作为上清液培养4-24h后的od600值,然后根据公式:自凝聚率(%)=(1-at/a0)×100%,其中,at表示为上清液培养4-24h后的od600值;a0表示为上清液初始od600值,计算得到的数值即为自凝聚率。
21、优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌体的4 h自凝聚率为大于等于24.00%,更优选地,大于等于24.00%且小于等于30.00%,其中,所述4 h自凝聚率是指将在mrs液体培养基中培养后的菌液进行固液分离后保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬得到菌悬液,其中,测定所述菌悬液的上清液od600值,作为上清液初始od600值。将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬后静置培养4 h后测定上清液od600值,作为上清液培养4h后的od600值,然后根据公式:自凝聚率(%)=(1-at/a0)×100%,其中,at表示为上清液培养4h后的od600值;a0表示为上清液初始od600值,计算得到的数值即为4 h自凝聚率。
22、优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌体的12 h自凝聚率为大于等于50.00%,更优选地,大于等于50.00%且小于等于55.00%,其中,所述12h自凝聚率是指将在mrs液体培养基中培养后的菌液进行固液分离后保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬得到菌悬液,其中,测定所述菌悬液的上清液od600值,作为上清液初始od600值。将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬后静置培养12 h后测定上清液od600值,作为上清液培养12h后的od600值,然后根据公式:自凝聚率(%)=(1-at/a0)×100%,其中,at表示为上清液培养12h后的od600值;a0表示为上清液初始od600值,计算得到的数值即为12 h自凝聚率。
23、和/或罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌体的24 h自凝聚率为大于等于65.00%,更优选地,大于等于65.00%且小于等于70.00%,其中,所述24 h自凝聚率是指将在mrs液体培养基中培养后的菌液进行固液分离后保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬得到菌悬液,其中,测定所述菌悬液的上清液od600值,作为上清液初始od600值。将菌体细胞沉淀经缓冲液重悬后静置培养24 h后测定上清液od600值,作为上清液培养24h后的od600值,然后根据公式:自凝聚率(%)=(1-at/a0)×100%,其中,at表示为上清液培养24h后的od600值;a0表示为上清液初始od600值,计算得到的数值即为24 h自凝聚率。
24、技术方案7:技术方案1-6中任一项所述的罗伊氏粘液乳杆菌在制备菌剂、胞外代谢物和胞内代谢物中的应用。
25、技术方案8:一种胞外代谢物的制备方法,其特征在于,所述胞外代谢物包括罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149胞外代谢物和罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930胞外代谢物中的一种或两种组合,
26、其中,所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149胞外代谢物通过包括如下步骤的方法制备得到:将技术方案1或2或5所述的罗伊氏粘液乳杆菌进行扩大培养得到;
27、或所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930胞外代谢物通过包括如下步骤的方法制备得到:将技术方案3或4或6所述的罗伊氏粘液乳杆菌进行扩大培养得到。
28、技术方案9:根据技术方案8所述的制备方法,其特征在于,在扩大培养罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149后还包括:将所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149进行扩大培养后所得的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌液进行固液分离后保留上清液,得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149胞外代谢物;即具体包括如下步骤:罗伊氏粘液乳杆菌amcc12149胞外代谢物通过包括如下步骤的方法制备得到:将所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149进行扩大培养得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌液;将所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌液固液分离后保留上清液,得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149胞外代谢物;优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌液中罗伊氏粘液乳杆菌amcc12149的浓度为1.0 × 109- 1.0 × 1012cfu/ml;
29、或在扩大培养罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930后还包括:将所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930进行扩大培养后所得的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌液进行固液分离后保留上清液,得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930胞外代谢物;即具体包括如下步骤:所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930胞外代谢物通过包括如下步骤的方法制备得到:将所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930进行扩大培养得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌液;将所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌液固液分离后保留上清液,得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc10930胞外代谢物;优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的菌液中罗伊氏粘液乳杆菌amcc10930的浓度为1.0 × 109- 1.0 × 1012cfu/ml,
30、优选地,所述固液分离为离心分离,
31、更优选地,扩大培养所用的培养基包括胰蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、乙酸钠、酵母浸粉、七水合硫酸镁、一水合硫酸锰、柠檬酸氢二铵、磷酸氢二钾和吐温80,
32、进一步更优选地,所述培养基中还包括水,每l所述的培养基中胰蛋白胨含量为10-20 g、和/或牛肉膏含量为10-20 g、和/或葡萄糖含量为5-20 g、和/或乙酸钠含量为2-4g、和/或酵母浸粉含量为5-10 g、和/或七水合硫酸镁含量为0.1-0.2 g、和/或一水合硫酸锰含量为0.05-0.1 g、和/或柠檬酸氢二铵含量为0.2-0.4 g、和/或磷酸氢二钾含量为0.2-0.4g、和/或吐温80含量为0.5-1 ml,其余为水。
33、技术方案10:一种胞外代谢物,其特征在于,通过技术方案8或9所述的制备方法制备得到,其中,所述胞外代谢物是指经培养后的罗伊氏粘液乳杆菌细胞分泌到细胞外部(即培养液/上清液)的所有代谢产物,
34、优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的胞外代谢物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制率为大于等于92%,优选地,大于等于92.00%且小于等于95.00%;
35、或罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的胞外代谢物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制率为大于等于82%,优选地,大于等于82.00%且小于等于85.00%。
36、技术方案11:一种胞内代谢物的制备方法,其特征在于,所述胞内代谢物包括罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149胞内代谢物和罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930胞内代谢物中的一种或两种组合,
37、其中,所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149胞内代谢物通过包括如下步骤的方法制备得到:将技术方案1或2或5所述的罗伊氏粘液乳杆菌进行扩大培养得到;
38、或所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930胞内代谢物通过包括如下步骤的方法制备得到:将技术方案3或4或6所述的罗伊氏粘液乳杆菌进行扩大培养得到。
39、技术方案12:根据技术方案11所述的制备方法,其特征在于,在扩大培养罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149后还包括:将所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149进行扩大培养后所得的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌液进行固液分离保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀与缓冲液混合、破碎菌体细胞和固液分离后保留上清液制得;即具体包括如下步骤:所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc12149胞内代谢物通过包括如下步骤的方法制备得到:将所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149进行扩大培养、固液分离保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀与缓冲液混合、破碎菌体细胞和固液分离后保留上清液制得;
40、或在扩大培养罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930后还包括:将所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930进行扩大培养后所得的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌液进行扩大培养、固液分离保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀与缓冲液混合、破碎菌体细胞和固液分离后保留上清液制得;即具体包括如下步骤:所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc10930胞内代谢物通过包括如下步骤的方法制备得到:将所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930进行扩大培养、固液分离保留菌体细胞沉淀,将菌体细胞沉淀与缓冲液混合、破碎菌体细胞和固液分离后保留上清液制得,优选地,所述固液分离为离心分离;
41、优选地,扩大培养所用的培养基中的组分包括胰蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、乙酸钠、酵母浸粉、七水合硫酸镁、一水合硫酸锰、柠檬酸氢二铵、磷酸氢二钾和吐温80,进一步更优选地,所述培养基中还包括水,每l所述的培养基中胰蛋白胨含量为10-20 g、和/或牛肉膏含量为10-20g、和/或葡萄糖含量为5-20 g、和/或乙酸钠含量为2-4 g、和/或酵母浸粉含量为5-10 g、和/或七水合硫酸镁含量为0.1-0.2 g、和/或一水合硫酸锰含量为0.05-0.1 g、和/或柠檬酸氢二铵含量为0.2-0.4 g、和/或磷酸氢二钾含量为0.2 -0.4g、和/或吐温80含量为0.5-1 ml,其余为水。
42、优选地,所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的胞内代谢物的制备方法包括如下步骤:(1)将技术方案1或2或5所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149进行扩大培养得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的悬液;(2)将步骤(1)得到的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌液固液分离后保留沉淀,得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌体沉淀;(3)将步骤(2)得到的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌体沉淀进行重悬,得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌悬液,优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌悬液浓度为1.0 × 109- 1.0 ×1012cfu/ml;(4)将罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的菌悬液经破碎处理和固液分离后保留上清液,得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的胞内代谢物,优选地,所述破碎处理为超声波破碎处理、和/或所述固液分离为离心分离。
43、或所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的胞内代谢物的制备方法包括如下步骤:(1)将技术方案3或4或6所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930进行扩大培养得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的菌液;(2)将步骤(1)得到的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的菌液固液分离后保留沉淀,得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的菌体沉淀;(3)将步骤(2)得到的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的菌体沉淀进行重悬,得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的菌悬液,优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的菌悬液浓度为1.0 × 109- 1.0 ×1012cfu/ml;(4)将罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的菌悬液经破碎处理和固液分离后保留上清液,得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的胞内代谢物,优选地,所述破碎处理为超声波破碎处理、和/或所述固液分离为离心分离。
44、技术方案13:一种胞内代谢物,其特征在于,通过技术方案11或1.12所述的制备方法制备得到,其中,所述胞内代谢物是指经培养后的罗伊氏粘液乳杆菌细胞内部存在的所有参与代谢反应的小分子代谢物,
45、优选地,罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149的胞内代谢物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制率为大于等于73%,优选地,抑制率为73%-80%;
46、或罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930的胞内代谢物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制率为大于等于46%,优选地,抑制率为46%-50%。
47、技术方案14:一种菌剂的制备方法,其特征在于,所述菌剂包括罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌剂和罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌剂中的一种或两种组合,
48、其中,所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌剂通过包括如下步骤的方法制备得到:将技术方案1或2或5所述的罗伊氏粘液乳杆菌进行扩大培养得到;
49、或所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌剂通过包括如下步骤的方法制备得到:将技术方案3或4或6所述的罗伊氏粘液乳杆菌进行扩大培养得到。
50、技术方案15:根据技术方案14所述的制备方法,其特征在于,在扩大培养罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149后还包括:将所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149进行扩大培养后所得的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌液进行固液分离保留菌体细胞沉淀后制得;即具体包括如下步骤:所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌剂通过将技术方案1或2或5所述的罗伊氏粘液乳杆菌进行扩大培养、固液分离保留菌体细胞沉淀制得;
51、或在扩大培养罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930后还包括:将所述的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930进行扩大培养后所得的罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌液进行固液分离保留菌体细胞沉淀后制得;即具体包括如下步骤:罗伊氏粘液乳杆菌amcc10930菌剂通过将技术方案3或4或6所述的罗伊氏粘液乳杆菌进行扩大培养、固液分离保留菌体细胞沉淀制得,
52、优选地,所述扩大培养所用的培养基中的组分包括:包括胰蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、乙酸钠、酵母浸粉、七水合硫酸镁、一水合硫酸锰、柠檬酸氢二铵、磷酸氢二钾和吐温80,进一步更优选地,所述培养基中还包括水,每l所述的培养基中胰蛋白胨含量为10-20 g、和/或牛肉膏含量为10-20g、和/或葡萄糖含量为5-20 g、和/或乙酸钠含量为2-4 g、和/或酵母浸粉含量为5-10 g、和/或七水合硫酸镁含量为0.1-0.2 g、和/或一水合硫酸锰含量为0.05-0.1 g、和/或柠檬酸氢二铵含量为0.2-0.4 g、和/或磷酸氢二钾含量为0.2 -0.4g、和/或吐温80含量为0.5-1 ml,其余为水。
53、优选地,在得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌剂之前,还包括将罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌体细胞沉淀进行洗涤和干燥;
54、在得到罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌剂之前,还包括将罗伊氏粘液乳杆菌amcc10930菌体细胞沉淀进行洗涤和干燥,
55、优选地,干燥方式为真空冷冻干燥,
56、更优选地,真空冷冻干燥的温度为-85至-80℃、和/或真空冷冻干燥的真空度为0-2pa、和/或真空冷冻干燥的时间为40-48h,进一步更优选地,真空冷冻干燥之前还包括在-45至-40℃预冻3-4h,
57、更优选地,真空冷冻干燥所用的冻干保护剂的组分包括脱脂奶粉、麦芽糊精、海藻糖和谷氨酸钠,进一步更优选地,脱脂奶粉、麦芽糊精、海藻糖和谷氨酸钠的重量比为2-4:9-11:5-7:1-3。
58、技术方案16:一种菌剂,其特征在于,包括技术方案1或2或5所述的罗伊氏粘液乳杆菌和技术方案3或4或6所述的罗伊氏粘液乳杆菌中的一种或两种组合,其中,所述菌剂是指将所述罗伊氏粘液乳杆菌以活菌形式收集而得的菌体即为菌剂,所述菌剂的活菌数为1×109-1×1012cfu/g。
59、优选地,所述菌剂包括技术方案1或2或5所述的菌剂和技术方案3或4或6所述的菌剂中的一种或两种组合。
60、更优选地,所述菌剂通过技术方案14或15中任一项所述的制备方法制备得到,
61、更优选地,所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 12149菌剂的活菌数为1×109-1×1012cfu/g、或所述罗伊氏粘液乳杆菌amcc 10930菌剂的活菌数为1×109-1×1012cfu/g。
62、技术方案17:技术方案1-6中任一项所述的罗伊氏粘液乳杆菌、或技术方案10所述的胞外代谢物、或技术方案13所述的胞内代谢物、或技术方案16所述的菌剂在制备药品中的应用。
63、技术方案18:根据技术方案17所述的应用,其中,所述药品为具有降尿酸功能的药品。
64、技术方案19:技术方案1-6中任一项所述的罗伊氏粘液乳杆菌、或技术方案10所述的胞外代谢物、或技术方案13所述的胞内代谢物、或技术方案16所述的菌剂在制备缓解高尿酸血症的药品中的应用。
65、技术方案20:技术方案1-6中任一项所述的罗伊氏粘液乳杆菌、或技术方案10所述的胞外代谢物、或技术方案13所述的胞内代谢物、或技术方案16所述的菌剂在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂、或在降解嘌呤化合物、或在辅助降解嘌呤化合物中的应用,优选地,所述嘌呤化合物包括鸟苷和/或肌苷。
66、本发明有益效果:
67、本发明提供的罗伊氏粘液乳杆菌具有快速降解鸟苷和肌苷的能力,具备高效的体外抑制黄嘌呤氧化酶活性的能力,还具有较好的疏水性和凝聚力,具有在胃肠道中持续存在并发挥降尿酸作用的潜力,因此,本发明提供的罗伊氏粘液乳杆菌具有用作辅助降尿酸功能的药品的潜力。
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