一株嗉囊粘液乳杆菌CCRCGPYL001及其应用的制作方法

本发明属于微生物领域，具体涉及一株嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillusingluviei）及其应用。

背景技术：

1、青贮饲料的品质在很大程度上取决于乳酸菌的代谢活动，乳酸菌通过将可溶性糖转化为乳酸，降低ph值，抑制腐败菌生长，从而保存饲料的营养价值。禾本科饲料作物的细胞壁富含纤维素和半纤维素，与木质素交织形成的复合结构严重阻碍了营养物质的利用。因此，选育兼具高效产酸能力和木质纤维素降解活性的乳酸菌菌株，对于提升青贮饲料品质具有重要意义。

2、大熊猫主食竹（常见种类包括冷箭竹、拐棍竹、白夹竹等）的竹笋作为幼嫩组织，富含蛋白质、糖类等营养物质，是微生物生长和代谢的理想基质。竹笋内部及表面定殖着丰富的微生物群落，乳酸菌是其中常见的微生物类群，已有多项研究从竹笋中分离获得了多种乳酸菌菌株。竹笋中的乳酸菌长期适应于植物组织内部的微环境，部分菌株具备在低氧条件下生长代谢的能力，这使得来源于竹笋的乳酸菌菌株在厌氧发酵体系中具有潜在的应用价值。

3、嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）（曾用名lactobacillusingluviei）的益生功能已被广泛报道，包括耐酸耐胆盐、抑菌、抗氧化等特性，但这些功能分散于不同菌株中，未见任何单一菌株同时具备上述多种功能，更未见该菌种具备木质纤维素降解能力、eps或gaba生产能力的报道，也未见该菌种在青贮饲料中的应用。

4、目前尚未见以大熊猫主食竹竹笋为分离源的嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）及其在青贮饲料制备中应用的报道，也未见该菌种同时具备半纤维素酶、纤维素酶和木质素降解酶三种酶活性定量数据及eps、gaba产量数据的报道。本发明首次从大熊猫主食竹竹笋中获得嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillusingluviei）菌株ccrcgpyl001，并首次发现该菌种兼具木质纤维素降解能力、eps和gaba生产能力及多重益生特性，为青贮饲料添加剂的开发提供了全新的微生物资源。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题为：为了分离筛选具有降解纤维素功能的益生乳酸菌，并将其应用于玉米青贮制备中，本发明的目的之一是提供一株具有降解纤维素功能的益生乳酸菌，另一个目的是提供该菌株的应用。

2、本发明的技术方案为：一株嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）ccrcgpyl001，该菌株于2024年09月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no：65223，保藏单位地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院实验大楼5楼。

3、含有嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）ccrcgpyl001的微生物菌剂。

4、上述所述的嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）ccrcgpyl001或微生物菌剂在制备青贮饲料中的应用。

5、进一步地，所述青贮饲料为玉米青贮饲料。

6、进一步地，所述制备方法为：将蜡熟期的全株玉米接种上述所述的嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）ccrcgpyl001或微生物菌剂，进行青贮发酵。

7、进一步地，所述制备方法包括如下步骤：

8、（1）将新鲜蜡熟期的全株玉米自然晾晒萎蔫至含水量60%~65%，切碎至2~3 cm；

9、（2）向步骤（1）处理后的萎蔫玉米上均匀喷洒嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）ccrcgpyl001的菌液，接种量不低于1×108 cfu/g，真空包装后青贮30~90 d，发酵温度为25~35℃。

10、与现有技术相比，本发明所具有的优点和有益效果是：

11、本发明以大熊猫主食竹竹笋为分离源，筛选获得一株嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）菌株ccrcgpyl001。该菌株首次定量证实同时具备半纤维素酶、纤维素酶和木质素降解酶三种酶活性，填补了现有技术中该菌种木质纤维素降解能力的研究空白。同时，该菌株具有优异的产酸能力、耐酸、耐胆盐、耐人工肠液、耐人工胃液等多重益生特性，对金黄色葡萄球菌、肠道致病性大肠杆菌、肠炎沙门氏菌、铜绿假单胞菌等病原菌具有显著的抑菌效果，自聚集率达36.85%，对病原菌的共聚集率最高达24.74%，dpph自由基清除率为37.23%，羟基自由基清除率为58.85%，不产生溶血现象，对临床常用抗生素敏感。该菌株还具备产胞外多糖和γ-氨基丁酸的能力。以该菌株制备的微生物菌剂应用于玉米青贮饲料发酵后，乳酸含量提升93.7%，可溶性碳水化合物（wsc）含量增长165.7%，ph值从4.89降至4.35，氨态氮含量从2.58 g/kg降至2.15 g/kg，干物质含量提升13.6%，粗蛋白含量提升21.6%，青贮品质得到全面改善。

12、上述多重性能在单一嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）菌株中的集中出现，构成了本发明相对于现有技术的预料不到的技术效果。具体如下：（1）现有技术虽已报道该菌种的多种益生特性，但从未涉及木质纤维素降解能力，本发明首次在该菌种中定量证实了三种木质纤维素降解酶活性；（2）现有技术未涉及该菌种eps和gaba的产量数据，本发明首次提供了定量数据；（3）现有技术未涉及该菌种在青贮饲料中的应用，本发明首次成功将其应用于青贮并取得了显著的发酵改善效果。上述预料不到的技术效果详见实施例相关数据。

13、保藏信息如下：

14、嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei），其菌株号是ccrcgpyl001，该菌株已于2024年09月27日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no：65223，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

1.一株嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）ccrcgpyl001，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no：65223。

2.含有权利要求1所述的一株嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）ccrcgpyl001的微生物菌剂。

3.权利要求1所述的嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）ccrcgpyl001或权利要求2所述的微生物菌剂在制备青贮饲料中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述青贮饲料为玉米青贮饲料。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述制备的方法为将蜡熟期的全株玉米接种权利要求1所述的嗉囊粘液乳杆菌（limosilactobacillus ingluviei）ccrcgpyl001或权利要求2所述的微生物菌剂，进行青贮发酵。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述制备的方法包括以下步骤：