靶向的低效力IL-12Fc融合蛋白及其用途的制作方法

背景技术：

1、白介素-12 (il-12)是强效促炎细胞因子，其由抗原呈递细胞，诸如例如树突状细胞、巨噬细胞和中性粒细胞产生。il-12属于il-12细胞因子家族。il-12细胞因子家族的独特之处在于它们包含异二聚体细胞因子。il-12由alpha- (α-)亚基(由il12a基因编码；本文中也称为“il-12 p35亚基”；前体序列- seq id no: 1 (如图1所示)；成熟序列- seq idno: 2 (如图1所示))和beta- (β-)亚基(由il12b基因编码；本文中也称为“il-12 p40亚基”)；前体序列- seq id no: 3 (如图1所示)；成熟序列- seq id no: 4 (如图1所示)组成，它们组装形成70,000道尔顿(70 kda)二硫键连接的异二聚体。il-12 p35和p40亚基组装后，形成具有生物活性的il-12异二聚体。il-12的受体il-12r是一种i型细胞因子受体，其包含β-1亚基(il-12rβ1 - seq id no: 5 (如图2所示)；胞外结构域- seq id no: 6(如图2所示))和β-2亚基(il-12rβ2 - seq id no: 7 (如图2所示)；胞外结构域- seq idno: 8 (如图2所示))。il-12 p40亚基对il-12rβ1具有结合亲和力，而il-12 p35亚基对il-12rβ2具有结合亲和力。

2、il-12与il-12r的结合导致胞内信号转导子和转录活化子4 (stat4)的磷酸化并且触发信号传导通路，其：(i)诱导th1细胞分化，(ii)增加t细胞和自然杀伤(nk)细胞的活化和细胞毒性能力，(iii)抑制或重新编程免疫抑制细胞，诸如例如肿瘤相关巨噬细胞(tam)和髓系衍生抑制细胞(mdsc)以及(iv)诱导大量干扰素γ (ifnγ)的产生，ifnγ具有细胞抑制性/细胞毒性、抗血管生成性，并且可上调肿瘤细胞上的主要组织相容性复合体(mhc) 1类和mhc 2类分子以实现免疫识别。

3、然而，由于il-12对其受体的高亲和力，使用抗原结合结构域(abd)将野生型il-12靶向至靶细胞通常不成功。代替将“免疫细胞因子”运输到表达由abd结合的抗原的在靶细胞，而是将免疫细胞因子运输到表达高水平il-12r的脱靶细胞。因此，对于开发包含il-12和abd的融合蛋白仍存在未满足的需求，该abd能够将il-12导向到表达由abd结合的抗原的在靶细胞。

技术实现思路

1、在一个方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一il-12亚基结构域，(ii)第一结构域接头，(iii)第二il-12亚基结构域，(iv)第二结构域接头，和(v)第一fc结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a)y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a，(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i)可变重链(vh)结构域，(ii)恒定重链(ch1)结构域，和(iii)第二fc结构域；以及(c)第三单体，其从n末端到c末端包含：(i)可变轻链(vl)结构域，和(ii)恒定轻链(cl)结构域，其中vh结构域和vl结构域形成结合靶抗原的抗原结合结构域(abd)。

2、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

3、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

4、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:26-30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 26-30中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

5、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合选自包括以下的组的靶抗原：(1)人ox40、(2)人lag3、(3)人pd1、(4)人icos、(5)人41bb、(6)人ccr7和(7)人ccr8。

6、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含人pd1，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seqid no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，靶抗原包含人lag3，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seqid no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seq id no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ox40，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seq id no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seq id no:154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq idno: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在又其他实施方案中，靶抗原包含人icos，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no: 117和118；(iii)分别地，seq idno: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在又其他实施方案中，靶抗原包含人41bb，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr7，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr8，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq idno: 82和83；(ii)分别地，seq id no: 113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

7、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合靶抗原的胞外结构域(ecd)。

8、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含seq id no:31-40中的任一者，并且第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含共价键，并且第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

9、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i) vh结构域，(ii) ch1结构域，和(iii)第一fc结构域；(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i) vl结构域，和(ii) cl结构域，其中所述vh结构域和所述vl结构域形成结合第一靶抗原的abd；(c)第三单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二fc结构域，(ii)第一结构域接头，(iii)第一il-12亚基结构域，(iv)第二结构域接头，和(v)第二il-12亚基结构域，其中：(1)所述第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且所述第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者所述第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且所述第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(2)所述变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a。

10、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

11、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

12、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:26-30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 26-30中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

13、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合选自包括以下的组的靶抗原：(1)人ox40、(2)人lag3、(3)人pd1、(4)人icos、(5)人41bb、(6)人ccr7和(7)人ccr8。

14、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含人pd1，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seqid no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，靶抗原包含人lag3，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seqid no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seq id no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ox40，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seq id no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seq id no:154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq idno: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在又其他实施方案中，靶抗原包含人icos，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no: 117和118；(iii)分别地，seq idno: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在又其他实施方案中，靶抗原包含人41bb，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr7，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr8，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq idno: 82和83；(ii)分别地，seq id no: 113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

15、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合靶抗原的胞外结构域(ecd)。

16、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含seq id no:31-40中的任一者，并且第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含共价键，并且第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

17、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一il-12亚基结构域，(ii)第一结构域接头，和(iii)第一fc结构域；(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二il-12亚基结构域，(ii)第二结构域接头，(iii)第二fc结构域，(iv)第三结构域接头，(v) vh结构域，和(vi) ch1结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a；以及(c)第三单体，其从n末端到c末端包含：(i) vl结构域，和(ii) cl结构域，其中vh结构域和vl结构域形成结合靶抗原的abd。

18、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

19、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

20、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:26-30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 26-30中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

21、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合选自包括以下的组的靶抗原：(1)人ox40、(2)人lag3、(3)人pd1、(4)人icos、(5)人41bb、(6)人ccr7和(7)人ccr8。

22、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含人pd1，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seqid no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，靶抗原包含人lag3，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seqid no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seq id no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ox40，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seq id no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seq id no:154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq idno: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在又其他实施方案中，靶抗原包含人icos，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no: 117和118；(iii)分别地，seq idno: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在又其他实施方案中，靶抗原包含人41bb，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr7，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr8，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq idno: 82和83；(ii)分别地，seq id no: 113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

23、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合靶抗原的胞外结构域(ecd)。

24、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头、第二结构域接头和/或第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头、第二结构域接头和/或第三结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，至少一个结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且至少一个结构域接头包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

25、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i) vh结构域，(ii) ch1结构域，(iii)第一fc结构域，(iv)第一结构域接头，和(v)第一il-12亚基结构域；和(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i) vl结构域，(ii)cl结构域，(iii)第二fc结构域，(iv)第二结构域接头，和(v)第二il-12亚基结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d)y40p/k170a和(e) y40e/k170a，并且(3) vh结构域和vl结构域形成结合靶抗原的abd。

26、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

27、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

28、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:26-30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 26-30中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

29、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合选自包括以下的组的靶抗原：(1)人ox40、(2)人lag3、(3)人pd1、(4)人icos、(5)人41bb、(6)人ccr7和(7)人ccr8。

30、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含人pd1，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seqid no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，靶抗原包含人lag3，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seqid no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seq id no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ox40，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seq id no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seq id no:154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq idno: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在又其他实施方案中，靶抗原包含人icos，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no: 117和118；(iii)分别地，seq idno: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在又其他实施方案中，靶抗原包含人41bb，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr7，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr8，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq idno: 82和83；(ii)分别地，seq id no: 113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

31、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合靶抗原的胞外结构域(ecd)。

32、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含seq id no:31-40中的任一者，并且第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含共价键，并且第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

33、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i) vh结构域，(ii) ch1结构域，和(iii)第一fc结构域；和(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i) vl结构域，(ii) cl结构域，(iii)第二fc结构域，(iv)第一结构域接头，(v)第一il-12亚基结构域，(vi)第二结构域接头，和(vii)第二il-12亚基结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a，并且(3) vh结构域和vl结构域形成结合靶抗原的abd。

34、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

35、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

36、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:26-30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 26-30中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

37、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合选自包括以下的组的靶抗原：(1)人ox40、(2)人lag3、(3)人pd1、(4)人icos、(5)人41bb、(6)人ccr7和(7)人ccr8。

38、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含人pd1，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seqid no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，靶抗原包含人lag3，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seqid no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seq id no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ox40，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seq id no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seq id no:154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq idno: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在又其他实施方案中，靶抗原包含人icos，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no: 117和118；(iii)分别地，seq idno: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在又其他实施方案中，靶抗原包含人41bb，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr7，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr8，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq idno: 82和83；(ii)分别地，seq id no: 113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

39、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合靶抗原的胞外结构域(ecd)。

40、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含seq id no:31-40中的任一者，并且第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含共价键，并且第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

41、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其包含第一fc结构域；(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i) vl结构域，和(ii) cl结构域；以及(c)第三单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一il-12亚基结构域，(ii)第一结构域接头，(iii)第二il-12亚基结构域，(iv)第二结构域接头，(v)第二fc结构域，(vi) vh结构域，和(vii) ch1结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a，并且(3) vh结构域和vl结构域形成结合靶抗原的abd。

42、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

43、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

44、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:26-30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 26-30中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

45、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合选自包括以下的组的靶抗原：(1)人ox40、(2)人lag3、(3)人pd1、(4)人icos、(5)人41bb、(6)人ccr7和(7)人ccr8。

46、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含人pd1，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seqid no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，靶抗原包含人lag3，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seqid no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seq id no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ox40，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seq id no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seq id no:154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq idno: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在又其他实施方案中，靶抗原包含人icos，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no: 117和118；(iii)分别地，seq idno: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在又其他实施方案中，靶抗原包含人41bb，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr7，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在又其他实施方案中，靶抗原包含人ccr8，并且abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq idno: 82和83；(ii)分别地，seq id no: 113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

47、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，abd结合靶抗原的胞外结构域(ecd)。

48、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含seq id no:31-40中的任一者，并且第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含共价键，并且第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

49、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一vh (vh1)结构域，(ii)第一ch1结构域，和(iii)第一fc结构域；(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一vl (vl1)结构域，和(ii)第一cl结构域，其中所述vh1结构域和所述vl1结构域形成结合第一靶抗原的第一abd；(c)第三单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二vh (vh2)结构域，(ii)第二ch1结构域，(iii)第二fc结构域，(iv)第一结构域接头，(v)第一il-12亚基结构域，(vi)第二结构域接头，和(vii)第二il-12亚基结构域，其中：(1)所述第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且所述第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者所述第一il-12亚基结构域包含变体il-12p35亚基结构域并且所述第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(2)所述变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b)y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a；以及(d)第四单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二vl (vl2)结构域，和(ii)第二cl结构域，其中所述vh2结构域和所述vl2结构域形成结合第二靶抗原的第二abd。

50、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

51、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

52、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:26-30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 26-30中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

53、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一abd结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

54、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二abd结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

55、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一abd和第二abd两者结合选自包括以下的组的靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。在其他实施方案中，第一abd结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8；并且第二abd结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

56、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人pd1，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seq id no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人lag3，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no:62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seq id no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq idno: 111和112。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ox40，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seq id no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no:130和131；(vii)分别地，seq id no: 154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seqid no: 162和148；(xii)分别地，seq id no: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人icos，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no: 117和118；(iii)分别地，seq id no: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人41bb，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq idno: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ccr7，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ccr8，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 82和83；(ii)分别地，seq id no: 113和114；以及(iii)分别地，seq idno: 115和116。

57、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一abd结合第一靶抗原的ecd。

58、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二abd结合第二靶抗原的ecd。

59、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一abd结合第一靶抗原的ecd，并且第二abd结合第二靶抗原的ecd。

60、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含seq id no:31-40中的任一者，并且第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含共价键，并且第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

61、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一vh (vh1)结构域，(ii)第一ch1结构域，(iii)第一fc结构域，(iv)第一结构域接头，和(v)第一il-12亚基结构域；(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一vl (vl1)结构域，和(ii)第一cl结构域，其中所述vh1结构域和所述vl1结构域形成结合第一靶抗原的第一abd；(c)第三单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二vh (vh2)结构域，(ii)第二ch1结构域，(iii)第二fc结构域，(iv)第二结构域接头，和(v)第二il-12亚基结构域，其中：(1)所述第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且所述第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者所述第一il-12亚基结构域包含变体il-12p35亚基结构域并且所述第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(2)所述变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b)y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a；以及(d)第四单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二vl (vl2)结构域，和(ii)第二cl结构域，其中所述vh2结构域和所述vl2结构域形成结合第二靶抗原的第二abd。

62、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

63、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

64、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:26-30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 26-30中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

65、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一abd结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

66、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二abd结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

67、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一abd和第二abd两者结合选自包括以下的组的靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。在其他实施方案中，第一abd结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8；并且第二abd结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

68、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人pd1，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seq id no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人lag3，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no:62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seq id no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq idno: 111和112。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ox40，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seq id no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no:130和131；(vii)分别地，seq id no: 154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seqid no: 162和148；(xii)分别地，seq id no: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人icos，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no: 117和118；(iii)分别地，seq id no: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人41bb，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq idno: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ccr7，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ccr8，并且第一abd和/或第二abd包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 82和83；(ii)分别地，seq id no: 113和114；以及(iii)分别地，seq idno: 115和116。

69、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一abd结合第一靶抗原的ecd。

70、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二abd结合第二靶抗原的ecd。

71、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一abd结合第一靶抗原的ecd，并且第二abd结合第二靶抗原的ecd。

72、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头和/或第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含seq id no:31-40中的任一者，并且第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含共价键，并且第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

73、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一il-12亚基结构域，(ii)第一结构域接头，(iii)第二il-12亚基结构域，和(iv)第一fc结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b)y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a；和(b)第二单体，其包含：(i)抗靶抗原scfv，其中抗靶抗原scfv包含vh结构域、第二结构域接头和vl结构域，(ii)第三结构域接头和(iii)第二fc结构域，其中抗靶抗原scfv在第二fc结构域的n末端处共价连接至第三结构域接头。

74、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

75、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

76、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的靶抗原：(1)人ox40、(2)人lag3、(3)人pd1、(4)人icos、(5)人41bb、(6)人ccr7和(7)人ccr8。

77、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含人pd1，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seq id no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，靶抗原包含人lag3，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seqid no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在其他实施方案中，靶抗原包含人ox40，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seqid no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seq id no: 154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq id no: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在其他实施方案中，靶抗原包含人icos，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no:117和118；(iii)分别地，seq id no: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在其他实施方案中，靶抗原包含人41bb，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在其他实施方案中，靶抗原包含人ccr7，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在其他实施方案中，靶抗原包含人ccr8，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 82和83；(ii)分别地，seq id no:113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

78、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv结合靶抗原的胞外结构域(ecd)。

79、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv的vh结构域在第二fc结构域的n末端处共价连接至第三结构域接头。在其他实施方案中，抗靶抗原scfv的vl结构域在第二fc结构域的n末端处共价连接至第三结构域接头。

80、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

81、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者。

82、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头和/或第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头和/或第三结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含seq id no:31-40中的任一者，并且第三结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含共价键，并且第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

83、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其包含：(i)抗靶抗原scfv，其中抗靶抗原scfv包含vh结构域、第一结构域接头和vl结构域，(ii)第二结构域接头和(iii)第一fc结构域，其中抗靶抗原scfv在第一fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头；和(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二fc结构域，(ii)第三结构域接头，(iii)第一il-12亚基结构域，(iv)第四结构域接头，和(v)第二il-12亚基结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c)y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a。

84、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

85、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

86、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的靶抗原：(1)人ox40、(2)人lag3、(3)人pd1、(4)人icos、(5)人41bb、(6)人ccr7和(7)人ccr8。

87、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含人pd1，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seq id no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，靶抗原包含人lag3，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seqid no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在其他实施方案中，靶抗原包含人ox40，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seqid no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seq id no: 154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq id no: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在其他实施方案中，靶抗原包含人icos，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no:117和118；(iii)分别地，seq id no: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在其他实施方案中，靶抗原包含人41bb，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在其他实施方案中，靶抗原包含人ccr7，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在其他实施方案中，靶抗原包含人ccr8，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 82和83；(ii)分别地，seq id no:113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

88、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv结合靶抗原的胞外结构域(ecd)。

89、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv的vh结构域在第一fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头。在其他实施方案中，抗靶抗原scfv的vl结构域在第一fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头。

90、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

91、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者。

92、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二结构域接头、第三结构域接头和/或第四结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第二结构域接头、第三结构域接头和/或第四结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，至少一个结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且至少一个结构域接头包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

93、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一il-12亚基结构域，(ii)第一结构域接头，和(iii)第一fc结构域；和(b)第二单体，其包含：(i)第二il-12亚基结构域，(ii)第二结构域接头，(iii)第二fc结构域，其中第二il-12亚基结构域在第二fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头，(iv)第三结构域接头，和(v)抗靶抗原scfv，其中：(1)第二fc结构域在抗靶抗原scfv的n末端处共价连接至第三结构域接头，(2)抗靶抗原scfv包含vh结构域、第四结构域接头和vl结构域，(3)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(4)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a。

94、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

95、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

96、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的靶抗原：(1)人ox40、(2)人lag3、(3)人pd1、(4)人icos、(5)人41bb、(6)人ccr7和(7)人ccr8。

97、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含人pd1，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seq id no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，靶抗原包含人lag3，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seqid no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在其他实施方案中，靶抗原包含人ox40，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seqid no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seq id no: 154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq id no: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在其他实施方案中，靶抗原包含人icos，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no:117和118；(iii)分别地，seq id no: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在其他实施方案中，靶抗原包含人41bb，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在其他实施方案中，靶抗原包含人ccr7，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在其他实施方案中，靶抗原包含人ccr8，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 82和83；(ii)分别地，seq id no:113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

98、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv结合靶抗原的胞外结构域(ecd)。

99、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv的vh结构域在第二fc结构域的n末端处共价连接至第三结构域接头。在其他实施方案中，抗靶抗原scfv的vl结构域在第二fc结构域的n末端处共价连接至第三结构域接头。

100、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

101、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第四结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者。

102、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头、第二结构域接头和/或第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头、第二结构域接头和/或第三结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，至少一个结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且至少一个结构域接头包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

103、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其包含：(i)第一il-12亚基结构域，(ii)第一结构域接头，(iii)第二il-12亚基结构域，其中第一il-12亚基结构域在第二il-12亚基结构域的n末端处共价连接至第一结构域接头，(iv)第二结构域接头，(v)第一fc结构域，其中第二il-12亚基结构域在第一fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头，(vi)第三结构域接头，和(vii)抗靶抗原scfv，其中：(1)第一fc结构域在抗靶抗原scfv的n末端处共价连接至第三结构域接头，(2)抗靶抗原scfv包含vh结构域、第四结构域接头和vl结构域，(3)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(4)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b)y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a；和(b)第二单体，其包含第二fc结构域。

104、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

105、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

106、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的靶抗原：(1)人ox40、(2)人lag3、(3)人pd1、(4)人icos、(5)人41bb、(6)人ccr7和(7)人ccr8。

107、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含人pd1，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seq id no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，靶抗原包含人lag3，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seqid no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seq id no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在其他实施方案中，靶抗原包含人ox40，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq id no: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seqid no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seq id no: 154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq id no: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no: 168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在其他实施方案中，靶抗原包含人icos，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 74和75；(ii)分别地，seq id no:117和118；(iii)分别地，seq id no: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在其他实施方案中，靶抗原包含人41bb，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在其他实施方案中，靶抗原包含人ccr7，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在其他实施方案中，靶抗原包含人ccr8，并且抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 82和83；(ii)分别地，seq id no:113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

108、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv结合靶抗原的胞外结构域(ecd)。

109、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，抗靶抗原scfv的vh结构域在第二fc结构域的n末端处共价连接至第三结构域接头。在其他实施方案中，抗靶抗原scfv的vl结构域在第二fc结构域的n末端处共价连接至第三结构域接头。

110、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

111、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第四结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者。

112、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头、第二结构域接头和/或第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头、第二结构域接头和/或第三结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，至少一个结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且至少一个结构域接头包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

113、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其包含：(i)第一抗靶抗原scfv，其中第一抗靶抗原scfv包含第一vh (vh1)结构域、第一结构域接头和第一vl (vl1)结构域，(ii)第二结构域接头和(iii)第一fc结构域，其中第一抗靶抗原scfv在第一fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头；和(b)第二单体，其包含：(i)第二抗靶抗原scfv，其中第二抗靶抗原scfv包含第二vh (vh2)结构域、第三结构域接头和第二vl (vl2)结构域，(ii)第四结构域接头，(iii)第二fc结构域，其中第二抗靶抗原scfv在第二fc结构域的n末端处共价连接至第四结构域接头，(iv)第五结构域接头，(v)第一il-12亚基结构域，(vi)第六结构域接头，和(vii)第二il-12亚基结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e)y40e/k170a，(3)第二fc结构域在第一il-12亚基结构域的n末端处共价连接至第五结构域接头，并且(4)第一il-12亚基结构域在第二il-12亚基结构域的n末端处共价连接至第六结构域接头。

114、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

115、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

116、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

117、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

118、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一抗靶抗原scfv和第二抗靶抗原scfv两者结合选自包括以下的组的靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。在其他实施方案中，第一抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8，并且第二抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

119、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人pd1，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seq id no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人lag3，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seq id no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seqid no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ox40，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq idno: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seq id no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seqid no: 154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq id no: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no:168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人icos，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no:74和75；(ii)分别地，seq id no: 117和118；(iii)分别地，seq id no: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人41bb，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ccr7，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ccr8，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 82和83；(ii)分别地，seq id no: 113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

120、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一抗靶抗原scfv结合第一靶抗原的ecd。

121、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二抗靶抗原scfv结合第二靶抗原的ecd。

122、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一抗靶抗原scfv结合第一靶抗原的ecd，并且第二抗靶抗原scfv结合第二靶抗原的ecd。

123、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一抗靶抗原scfv的vh1结构域在第一fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头。在其他实施方案中，抗靶抗原scfv的vl1结构域在第一fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头。

124、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二抗靶抗原scfv的vh2结构域在第二fc结构域n末端处共价连接至第四结构域接头。在其他实施方案中，第二抗靶抗原scfv的vl2结构域在第二fc结构域n末端处共价连接至第四结构域接头。

125、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

126、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者，并且第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。

127、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二结构域接头、第四结构域接头、第五结构域接头和/或第六结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第二结构域接头、第四结构域接头、第五结构域接头和/或第六结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，至少一个结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且至少一个结构域接头包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

128、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：il-12 fc融合蛋白包含：(a)第一单体，其包含：(i)第一抗靶抗原scfv，其中第一抗靶抗原scfv包含第一vh (vh1)结构域、第一结构域接头和第一vl (vl1)结构域，(ii)第二结构域接头，(iii)第一fc结构域，其中第一抗靶抗原scfv在第一fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头，(iv)第三结构域接头，和(v)第一il-12亚基结构域，其中第一fc结构域在第一il-12亚基结构域的n末端处共价连接至第三结构域接头；和(b)第二单体，其包含：(i)第二抗靶抗原scfv，其中第二抗靶抗原scfv包含第二vh (vh2)结构域、第四结构域接头和第二vl (vl2)结构域，(ii)第五结构域接头，(iii)第二fc结构域，其中第二抗靶抗原scfv在第二fc结构域的n末端处共价连接至第五结构域接头，(iv)第六结构域接头，和(v)第二il-12亚基结构域，其中：(1)第二fc结构域在第二il-12亚基结构域的n末端处共价连接至第六结构域接头，(2)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(3)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d)y40p/k170a和(e) y40e/k170a。

129、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

130、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

131、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

132、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

133、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一抗靶抗原scfv和第二抗靶抗原scfv两者结合选自包括以下的组的靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。在其他实施方案中，第一抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8，并且第二抗靶抗原scfv结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i)人ox40、(ii)人lag3、(iii)人pd1、(iv)人icos、(v)人41bb、(vi)人ccr7和(vii)人ccr8。

134、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人pd1，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 54和55；(ii)分别地，seq id no: 93和94；(iii)分别地，seq id no: 95和96；(iv)分别地，seq id no: 97和98；(v)分别地，seq id no: 99和100；以及(vi)分别地，seq id no: 101和102。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人lag3，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 62和63；(ii)分别地，seq id no: 103和104；(iii)分别地，seq id no: 105和106；(iv)分别地，seq id no: 107和108；(v)分别地，seqid no: 109和110；以及(vi)分别地，seq id no: 111和112。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ox40，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 152和143；(ii)分别地，seq idno: 132和133；(iii)分别地，seq id no: 137和138；(iv)分别地，seq id no: 142和143；(v)分别地，seq id no: 147和148；(vi)分别地，seq id no: 130和131；(vii)分别地，seqid no: 154和143；(viii)分别地，seq id no: 156和143；(ix)分别地，seq id no: 158和148；(x)分别地，seq id no: 160和148；(xi)分别地，seq id no: 162和148；(xii)分别地，seq id no: 164和148；(xiii)分别地，seq id no: 166和148；(xiv)分别地，seq id no:168和148；以及(xv)分别地，seq id no: 170和171，如图13、图75、图81、图85和图112中所示。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人icos，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no:74和75；(ii)分别地，seq id no: 117和118；(iii)分别地，seq id no: 119和120；以及(iv)分别地，seq id no: 121和122。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人41bb，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 70和71；(ii)分别地，seq id no: 123和124；(iii)分别地，seq id no: 125和126；以及(iv)分别地，seq id no: 127和128。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ccr7，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 78和79。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含人ccr8，并且第一抗靶抗原scfv和/或第二抗靶抗原scfv包含选自包括以下的组的vh/vl结构域对：(i)分别地，seq id no: 82和83；(ii)分别地，seq id no: 113和114；以及(iii)分别地，seq id no: 115和116。

135、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一抗靶抗原scfv结合第一靶抗原的ecd。

136、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二抗靶抗原scfv结合第二靶抗原的ecd。

137、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一抗靶抗原scfv结合第一靶抗原的ecd，并且第二抗靶抗原scfv结合第二靶抗原的ecd。

138、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一抗靶抗原scfv的vh1结构域在第一fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头。在其他实施方案中，抗靶抗原scfv的vl1结构域在第一fc结构域的n末端处共价连接至第二结构域接头。

139、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二抗靶抗原scfv的vh2结构域在第二fc结构域n末端处共价连接至第五结构域接头。在其他实施方案中，第二抗靶抗原scfv的vl2结构域在第二fc结构域n末端处共价连接至第五结构域接头。

140、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

141、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者，并且第四结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。

142、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二结构域接头、第三结构域接头、第五结构域接头和/或第六结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第二结构域接头、第三结构域接头、第五结构域接头和/或第六结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，至少一个结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且至少一个结构域接头包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

143、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一il-12亚基结构域，(ii)第一结构域接头，(iii)第二il-12亚基结构域，和(iv)第一fc结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b)y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a；和(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i) vhh结构域，(ii)第二结构域接头，和(iii)第二fc结构域，其中vhh结构域结合靶抗原。

144、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

145、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

146、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

147、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者，并且第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含共价键，并且第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且第二结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，第一结构域接头包含共价键，并且第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

148、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，vhh结构域结合选自包括以下的组的靶抗原：(1) ox40、(2) lag3、(3) pd1、(4) icos、(5) 41bb、(6) ccr7和(7) ccr8。在一些进一步的实施方案中，vhh结构域是人源化的。

149、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含pd1，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(a)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含lag3，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(b)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ox40，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(c)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含41bb，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(d)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含icos，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(e)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr7，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(f)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr8，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(g)节)。

150、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含41bb，并且vhh结构域包含：seq id no: 129。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr8，并且vhh结构域包含：seqid no: 86。

151、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i) vhh结构域，(ii)第一结构域接头，和(iii)第一fc结构域；和(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二fc结构域，(ii)第二结构域接头，(iii)第一il-12亚基结构域，(iv)第三结构域接头，和(v)第二il-12亚基结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e)y40e/k170a。

152、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

153、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

154、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

155、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者，第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头、第二结构域接头和/或第三结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，结构域接头中的至少一者包含seq id no: 31-40中的任一者，并且结构域接头中的至少一者包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

156、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，vhh结构域结合选自包括以下的组的靶抗原：(1) ox40、(2) lag3、(3) pd1、(4) icos、(5) 41bb、(6) ccr7和(7) ccr8。在一些进一步的实施方案中，vhh结构域是人源化的。

157、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含pd1，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(a)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含lag3，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(b)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ox40，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(c)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含41bb，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(d)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含icos，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(e)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr7，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(f)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr8，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(g)节)。

158、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含41bb，并且vhh结构域包含：seq id no: 129。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr8，并且vhh结构域包含：seqid no: 86。

159、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一il-12亚基结构域，(ii)第一结构域接头，和(iii)第一fc结构域；和(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二il-12亚基结构域，(ii)第二结构域接头，(iii)第二fc结构域，(iv)第三结构域接头，和(v) vhh结构域，其中：(1) vhh结构域结合靶抗原，(2)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(3)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a。

160、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

161、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

162、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

163、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者，第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头、第二结构域接头和/或第三结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，结构域接头中的至少一者包含seq id no: 31-40中的任一者，并且结构域接头中的至少一者包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

164、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，vhh结构域结合选自包括以下的组的靶抗原：(1) ox40、(2) lag3、(3) pd1、(4) icos、(5) 41bb、(6) ccr7和(7) ccr8。在一些进一步的实施方案中，vhh结构域是人源化的。

165、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含pd1，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(a)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含lag3，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(b)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ox40，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(c)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含41bb，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(d)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含icos，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(e)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr7，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(f)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr8，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(g)节)。

166、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含41bb，并且vhh结构域包含：seq id no: 129。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr8，并且vhh结构域包含：seqid no: 86。

167、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一il-12亚基结构域，(ii)第一结构域接头，(iii)第二il-12亚基结构域，(iv)第二结构域接头，(v)第一fc结构域，(vi)第三结构域接头，和(vii) vhh结构域，其中：(1) vhh结构域结合靶抗原，(2)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(3)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b)y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a；和(b)第二单体，其包含第二fc结构域。

168、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

169、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

170、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

171、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者，第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头、第二结构域接头和/或第三结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，结构域接头中的至少一者包含seq id no: 31-40中的任一者，并且结构域接头中的至少一者包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

172、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，vhh结构域结合选自包括以下的组的靶抗原：(1) ox40、(2) lag3、(3) pd1、(4) icos、(5) 41bb、(6) ccr7和(7) ccr8。在一些进一步的实施方案中，vhh结构域是人源化的。

173、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含pd1，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(a)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含lag3，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(b)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ox40，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(c)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含41bb，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(d)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含icos，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(e)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr7，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(f)节)。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr8，并且vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(g)节)。

174、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，靶抗原包含41bb，并且vhh结构域包含：seq id no: 129。在其他实施方案中，靶抗原包含ccr8，并且vhh结构域包含：seqid no: 86。

175、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一vhh结构域，(ii)第一结构域接头，(iii)第一fc结构域，(iv)第二结构域接头，(v)第一il-12亚基结构域，(vi)第三结构域接头，和(vii)第二il-12亚基结构域，其中：(1)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，(2)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a，并且(3)第一vhh结构域结合第一靶抗原；和(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二vhh结构域，(ii)第四结构域接头，和(iii)第二fc结构域，其中第二vhh结构域结合第二靶抗原。

176、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

177、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

178、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

179、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者，第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且第四结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头、第二结构域接头、第三结构域接头和/或第四结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，至少一个结构域接头包含seq id no:31-40中的任一者，并且至少一个结构域接头包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

180、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一vhh结构域结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i) ox40、(ii) lag3、(iii) pd1、(iv) icos、(v) 41bb、(vi)ccr7和(vii) ccr8。

181、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二vhh结构域结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i) ox40、(ii) lag3、(iii) pd1、(iv) icos、(v) 41bb、(vi)ccr7和(vii) ccr8。

182、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一vhh结构域和第二vhh结构域两者结合选自包括以下的组的靶抗原：(i) ox40、(ii) lag3、(iii) pd1、(iv) icos、(v)41bb、(vi) ccr7和(vii) ccr8。在其他实施方案中，vhh结构域结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i) ox40、(ii) lag3、(iii) pd1、(iv) icos、(v) 41bb、(vi) ccr7和(vii)ccr8，并且第二vhh结构域结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i) ox40、(ii) lag3、(iii) pd1、(iv) icos、(v) 41bb、(vi) ccr7和(vii) ccr8。

183、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含pd1，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(a)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含lag3，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(b)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含ox40，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(c)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含41bb，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(d)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含icos，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(e)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含ccr7，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(f)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含ccr8，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(g)节)。

184、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一vhh结构域是人源化的。

185、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二vhh结构域是人源化的。

186、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一vhh结构域是人源化的，并且第二vhh结构域是人源化的。

187、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含41bb，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包含：seq id no: 129。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含ccr8，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包含：seq id no: 86。

188、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，其从n末端到c末端包含：(i)第一vhh结构域，(ii)第一结构域接头，(iii)第一fc结构域，(iv)第二结构域接头，和(v)第一il-12亚基结构域，其中第一vhh结构域结合第一靶抗原；和(b)第二单体，其从n末端到c末端包含：(i)第二vhh结构域，(ii)第三结构域接头，(iii)第二fc结构域，(iv)第四结构域接头，和(v)第二il-12亚基结构域，其中：(1)第二vhh结构域结合第二靶抗原，(2)第一il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域，或者第一il-12亚基结构域包含变体il-12 p35亚基结构域并且第二il-12亚基结构域包含il-12 p40亚基结构域，并且(3)变体il-12 p35亚基结构域包含选自包括以下的组的一组氨基酸取代：(a) y40s/k170a、(b) y40s/k170t、(c) y40p/k168a、(d) y40p/k170a和(e) y40e/k170a。

189、在进一步的实施方案中并且根据上文，变体il-12 p35亚基结构域包含seq idno: 17-21中的任一者。

190、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，il-12 p40亚基结构域包含seqid no: 4。在其他实施方案中，il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域。在一些进一步的实施方案中，其中il-12 p40亚基结构域包含变体il-12 p40亚基结构域，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23-25中的任一者。在又一些进一步的实施方案中，变体il-12 p40亚基结构域包含seq id no: 23或seq id no: 25，并且变体il-12 p35亚基结构域还包含c74s取代突变。

191、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一fc结构域包含seq id no:29或30中的任一者，并且第二fc结构域包含seq id no: 30或29中的任一者。在一些进一步的实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，而在其他实施方案中，第一fc结构域还包含一组包括t366s/l368a/y407v/y349c的取代突变，并且第二fc结构域还包含一组包括t366w/s354c的取代突变。

192、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一结构域接头包含seq idno: 31-40中的任一者，第二结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，第三结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者，并且第四结构域接头包含seq id no: 31-40中的任一者。在一些其他实施方案中，第一结构域接头、第二结构域接头、第三结构域接头和/或第四结构域接头包含共价键。在一些其他实施方案中，结构域接头中的至少一者包含seq idno: 31-40中的任一者，并且结构域接头中的至少一者包含共价键。在一些实施方案中，结构域接头中的至少一者包含fc结构域的铰链区。

193、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一vhh结构域结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i) ox40、(ii) lag3、(iii) pd1、(iv) icos、(v) 41bb、(vi)ccr7和(vii) ccr8。

194、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二vhh结构域结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i) ox40、(ii) lag3、(iii) pd1、(iv) icos、(v) 41bb、(vi)ccr7和(vii) ccr8。

195、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一vhh结构域和第二vhh结构域两者结合选自包括以下的组的靶抗原：(i) ox40、(ii) lag3、(iii) pd1、(iv) icos、(v)41bb、(vi) ccr7和(vii) ccr8。在其他实施方案中，第一vhh结构域结合选自包括以下的组的第一靶抗原：(i) ox40、(ii) lag3、(iii) pd1、(iv) icos、(v) 41bb、(vi) ccr7和(vii)ccr8，并且第二vhh结构域结合选自包括以下的组的第二靶抗原：(i) ox40、(ii) lag3、(iii) pd1、(iv) icos、(v) 41bb、(vi) ccr7和(vii) ccr8。

196、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含pd1，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(a)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含lag3，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(b)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含ox40，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(c)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含41bb，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(d)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含icos，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(e)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含ccr7，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(f)节)。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含ccr8，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包括本文所述的vhh结构域(参见例如，第(iii)(a)(2)(g)节)。

197、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一vhh结构域是人源化的。

198、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第二vhh结构域是人源化的。

199、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一vhh结构域是人源化的，并且第二vhh结构域是人源化的。

200、在进一步的实施方案中并且根据上文中的任一者，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含41bb，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包含：seq id no: 129。在其他实施方案中，第一靶抗原和/或第二靶抗原包含ccr8，并且第一vhh结构域和/或第二vhh结构域包含：seq id no: 86。

201、在另一方面，本公开提供了核酸组合物，其包含：编码如本文所述的il-12 fc融合蛋白的一种或多种核酸。

202、在另一方面，本公开提供了表达载体，其包含：编码如本文所述的il-12 fc融合蛋白的一种或多种核酸。

203、在另一方面，本公开提供了宿主细胞，其中宿主细胞被如本文所述的表达载体转化。

204、在另一方面，本公开提供了制备il-12 fc融合蛋白的方法，其包括：(a)培养被表达载体转化的宿主细胞，该表达载体包含编码如本文所述的il-12 fc融合蛋白的一种或多种核酸；以及(b)分离和/或纯化il-12 fc融合蛋白。

205、在另一方面，本公开提供了il-12 fc融合蛋白，其包含：(a)第一单体，(b)第二单体；和(c)第三单体，其中第一单体、第二单体和第三单体包含：(i)分别地，seq id no: 49、153和145；(ii)分别地，seq id no: 48、146和145；(iii)分别地，seq id no: 48、151和150；(iv)分别地，seq id no: 48、153和145；(v)分别地，seq id no: 48、155和145；(vi)分别地，seq id no: 48、157和145；(vii)分别地，seq id no: 48、159和150；(viii)分别地，seq id no: 48、161和150；(ix)分别地，seq id no: 48、163和150；(x)分别地，seq id no:48、165和150；(xi)分别地，seq id no: 48、167和150；(xii)分别地，seq id no: 48、169和150；(xiii)分别地，seq id no: 49、141和140；(xiv)分别地，seq id no: 49、146和145；(xv)分别地，seq id no: 49、151和150；(xvi)分别地，seq id no: 48、141和140；(xvii)分别地，seq id no: 49、155和145；(xviii)分别地，seq id no: 49、157和145；(xix)分别地，seq id no: 49、159和150；(xx)分别地，seq id no: 49、161和150；(xxi)分别地，seq idno: 49、163和150；(xxii)分别地，seq id no: 49、165和150；(xxiii)分别地，seq id no:49、167和150；(xxiv)分别地，seq id no: 49、169和150；(xxv)分别地，seq id no: 50、141和140；(xxvi)分别地，seq id no: 50、146和145；(xxvii)分别地，seq id no: 50、151和150；(xxviii)分别地，seq id no: 50、153和145；(xxix)分别地，seq id no: 50、155和145；(xxx)分别地，seq id no: 50、157和145；(xxxi)分别地，seq id no: 50、159和150；(xxxii)分别地，seq id no: 50、161和150；(xxxiii)分别地，seq id no: 50、163和150；(xxxiv)分别地，seq id no: 50、165和150；(xxxv)分别地，seq id no: 50、167和150；(xxxvi)分别地，seq id no: 50、169和150；(xxxvii)分别地，seq id no: 51、141和140；(xxxviii)分别地，seq id no: 51、146和145；(xxxix)分别地，seq id no: 51、151和150；(xl)分别地，seq id no: 51、153和145；(xli)分别地，seq id no: 51、155和145；(xlii)分别地，seq id no: 51、157和145；(xliii)分别地，seq id no: 51、159和150；(xliv)分别地，seq id no: 51、161和150；(xlv)分别地，seq id no: 51、163和150；(xlvi)分别地，seqid no: 51、165和150；(xlvii)分别地，seq id no: 51、167和150；(xlviii)分别地，seq idno: 51、169和150；(xlix)分别地，seq id no: 52、141和140；(l)分别地，seq id no: 52、146和145；(li)分别地，seq id no: 52、151和150；(lii)分别地，seq id no: 52、153和145；(liii)分别地，seq id no: 52、155和145；(liv)分别地，seq id no: 52、157和145；(lv)分别地，seq id no: 52、159和150；(lvi)分别地，seq id no: 52、161和150；(lvii)分别地，seq id no: 52、163和150；(lviii)分别地，seq id no: 52、165和150；(lix)分别地，seq id no: 52、167和150；(lx)分别地，seq id no: 52、169和150；(lxi)分别地，seq idno: 48、174和173；(lxii)分别地，seq id no: 49、174和173；(lxiii)分别地，seq id no:50、174和173；(lxiv)分别地，seq id no: 51、174和173；或者(lxv)分别地，seq id no:52、174和173。

206、在进一步的实施方案中并且根据上文，第一单体包含seq id no: 49的氨基酸序列，第二单体包含seq id no: 153的氨基酸序列，并且第三单体包含seq id no: 145的氨基酸序列。在一些其他进一步的实施方案中，第一单体包含seq id no: 48的氨基酸序列，第二单体包含seq id no: 174的氨基酸序列，并且第三单体包含seq id no: 173的氨基酸序列。在一些其他进一步的实施方案中，第一单体包含seq id no: 49的氨基酸序列，第二单体包含seq id no: 174的氨基酸序列，并且第三单体包含seq id no: 173的氨基酸序列。在一些其他进一步的实施方案中，第一单体包含seq id no: 50的氨基酸序列，第二单体包含seq id no: 174的氨基酸序列，并且第三单体包含seq id no: 173的氨基酸序列。在一些其他进一步的实施方案中，第一单体包含seq id no: 51的氨基酸序列，第二单体包含seq id no: 174的氨基酸序列，并且第三单体包含seq id no: 173的氨基酸序列。在一些其他进一步的实施方案中，第一单体包含seq id no: 52的氨基酸序列，第二单体包含seq id no: 174的氨基酸序列，并且第三单体包含seq id no: 173的氨基酸序列。

207、在另一方面，本公开提供了治疗人类受试者的癌症的方法，其包括向有需要的人类受试者施用如本文所述的il-12 fc融合蛋白，其中il-12 fc融合蛋白结合至靶细胞。

208、在进一步的实施方案中并且根据上文，靶细胞表达：(1) il-12rβ2，和(2)选自由以下组成的组的细胞表面抗原：(a)人ox40、(b)人lag3、(c)人pd1、(d)人icos、(e)人41bb、(f)人ccr7和(g)人ccr8。

209、在进一步的实施方案中并且根据上文，细胞表面抗原是人pd1，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人lag3，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ox40，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd8+t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人icos，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人41bb，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的nk细胞；(iii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ccr7，并且靶细胞包括：(i)初始cd4+ t细胞；(ii)初始cd8+ t细胞；或(iii)初始调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ccr8，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；或(ii)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。

210、在另一方面，本公开提供了活化人类受试者中的靶细胞的方法，其包括向有需要的人类受试者施用如本文所述的il-12 fc融合蛋白，其中il-12 fc融合蛋白结合至靶细胞。

211、在进一步的实施方案中并且根据上文，靶细胞表达：(1) il-12rβ2，和(2)选自由以下组成的组的细胞表面抗原：(a)人ox40、(b)人lag3、(c)人pd1、(d)人icos、(e)人41bb、(f)人ccr7和(g)人ccr8。

212、在进一步的实施方案中并且根据上文，细胞表面抗原是人pd1，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人lag3，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ox40，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd8+t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人icos，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人41bb，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的nk细胞；(iii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ccr7，并且靶细胞包括：(i)初始cd4+ t细胞；(ii)初始cd8+ t细胞；或(iii)初始调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ccr8，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；或(ii)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。

213、在另一方面，本公开提供了刺激靶细胞中的il-12信号传导的方法，其包括向有需要的人类受试者施用如本文所述的il-12 fc融合蛋白，其中il-12 fc融合蛋白结合至靶细胞。

214、在进一步的实施方案中并且根据上文，靶细胞表达：(1) il-12rβ2，和(2)选自由以下组成的组的细胞表面抗原：(a)人ox40、(b)人lag3、(c)人pd1、(d)人icos、(e)人41bb、(f)人ccr7和(g)人ccr8。

215、在进一步的实施方案中并且根据上文，细胞表面抗原是人pd1，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人lag3，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ox40，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd8+t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人icos，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人41bb，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的nk细胞；(iii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ccr7，并且靶细胞包括：(i)初始cd4+ t细胞；(ii)初始cd8+ t细胞；或(iii)初始调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ccr8，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；或(ii)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。

216、在另一方面，本公开提供了在靶细胞中诱导一种或多种细胞因子的产生和/或分泌的方法，其包括向有需要的人类受试者施用如本文所述的il-12 fc融合蛋白，其中il-12fc融合蛋白结合至靶细胞。

217、在进一步的实施方案中并且根据上文，靶细胞表达：(1) il-12rβ2，和(2)选自由以下组成的组的细胞表面抗原：(a)人ox40、(b)人lag3、(c)人pd1、(d)人icos、(e)人41bb、(f)人ccr7和(g)人ccr8。

218、在进一步的实施方案中并且根据上文，细胞表面抗原是人pd1，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人lag3，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ox40，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd8+t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人icos，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人41bb，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的nk细胞；(iii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ccr7，并且靶细胞包括：(i)初始cd4+ t细胞；(ii)初始cd8+ t细胞；或(iii)初始调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ccr8，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；或(ii)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。

219、在另一方面，本公开提供了重新编程和/或改变靶细胞的分化状态的方法，其包括施用如本文所述的il-12 fc融合蛋白，其中il-12 fc融合蛋白结合至靶细胞。

220、在进一步的实施方案中并且根据上文，靶细胞表达：(1) il-12rβ2，和(2)选自由以下组成的组的细胞表面抗原：(a)人ox40、(b)人lag3、(c)人pd1、(d)人icos、(e)人41bb、(f)人ccr7和(g)人ccr8。

221、在进一步的实施方案中并且根据上文，细胞表面抗原是人pd1，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人lag3，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ox40，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd8+t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人icos，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；(iii)活化的和/或耗竭的nk细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人41bb，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；(ii)活化的和/或耗竭的nk细胞；(iii)活化的和/或耗竭的cd8+ t细胞；或(iv)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ccr7，并且靶细胞包括：(i)初始cd4+ t细胞；(ii)初始cd8+ t细胞；或(iii)初始调节性t细胞。在其他实施方案中，细胞表面抗原是人ccr8，并且靶细胞包括：(i)活化的和/或耗竭的cd4+ t细胞；或(ii)活化的和/或耗竭的调节性t细胞。