一种基于基因编辑技术提高家兔产毛性能的方法

本发明属于兔养殖，尤其涉及一种基于基因编辑技术提高家兔产毛性能的方法。

背景技术：

1、家兔可提供优质的肉、皮、毛产品，与人类健康和生活品质息息相关，在现代农业产业技术体系中占有重要地位，兔毛是家兔主要的高附加值产品之一，是一种纯天然、可再生、可降解的绿色环保型纤维，具有透气性、吸湿性，在纺织业中具有重要作用。近年来，随着crispr/cas系统介导的基因组编辑技术的不断优化及挖掘，已被广泛应用于畜禽基因编辑、碱基编辑、转录调控和转录后加工等方面，并在缩短农业动物育种周期、提高生产性能、增强抵抗疾病、减少人畜共患病传播风险和改善动物福利等方面取得了良好的概念验证。

2、成纤维细胞生长因子5（febroblast growth factor, fgf5）基因是目前功能较为明确、决定毛发长度的重要候选基因之一，其通过阻止毛乳头细胞的激活和增殖，促使毛囊生长由兴盛期向休止期转化，抑制了毛囊生长。利用crispr/cas9基因编辑技术可为

fgf5基因修饰长毛兔的培育提供有效的技术手段，缩短了育种进程。相较于大片段敲除，点突变编辑能够在尽可能保留

fgf5基因结构的基础上实现增加产毛，同时避免大片段基因编辑可能带来的基因组不稳定风险，更具育种应用潜力。但

fgf5基因p.a143v尚未有文献报道与毛发生长的关系，现阶段并未挖掘该突变蕴含的潜力，未能将与之相关的关键信息有效转化为切实可行的方法，用以提升家兔毛发生长的遗传特质。

技术实现思路

1、本发明实施例的目的在于提供一种基于基因编辑技术提高家兔产毛性能的方法，旨在解决上述背景技术中提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种基于基因编辑技术提高家兔产毛性能的方法，包括以下步骤：

4、步骤1、eaid-be4max mrna的转录合成：

5、将eaid-be4max表达质粒经酶切过夜形成线性dna，经电泳回收后纯化，进行eaid-be4max mrna的体外转录；eaid-be4max表达质粒的核苷酸序列如seq id no.5所示；

6、步骤2、家兔

fgf5基因 p.a143v位点sgrna设计合成：

7、在家兔

fgf5基因第二外显子上，针对第143位的丙氨酸设计一条通过碱基编辑实现将其突变为缬氨酸的sgrna；

fgf5基因的核苷酸序列如seq id no.1所示；

8、sgrna靶向序列为tttttagcgatgtcaaaaaa，通过sgrna靶向的第8位的c突变成t，实现家兔

fgf5基因p.a143v位点的突变，sgrna具体序列如seq id no.2所示；

9、步骤3、胚胎显微注射技术制备

fgf5基因编辑兔：

10、将合成的sgrna和eaid-be4max mrna混匀后注射受精卵，移植到受体母兔输卵管内，饲养受体母兔直至生产；从生产出的幼兔耳组织提取dna，进行pcr扩增并测序，若在sgrna序列的第8位的c突变成t，则证明获得单碱基突变，即获得

fgf5基因编辑兔。

11、与现有技术相比，本发明的具体有益效果为：

12、本发明利用eaid-be4max基因编辑技术，针对家兔fgf5 p.a143v位点进行单碱基突变，提供了一种基于基因编辑技术提高家兔产毛性能的方法，可以获得提高家兔产毛性能的兔品种；

13、本发明利用基因编辑技术开拓了动物遗传选育的新思路，在促进家兔遗传性状改良、提高家兔生产性能及经济价值上具有应用价值。

1.一种基于基因编辑技术提高家兔产毛性能的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于基因编辑技术提高家兔产毛性能的方法，其特征在于，步骤1中，所述酶切的体系为：noti 2 μl；eaid-be4max表达质粒20 μg；cutsmart buffer 10μl；加ddh2o补充至100 μl；

3.根据权利要求1所述的基于基因编辑技术提高家兔产毛性能的方法，其特征在于，步骤3中，pcr扩增的上游引物的序列如seq id no.3所示，下游引物的序列如seq id no.4所示；