一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法

本发明涉及食品检验或安全风险评价，具体而言，涉及一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法。

背景技术：

1、娃娃鱼（大鲵）加工副产物（皮、骨、内脏）富含活性蛋白，经分离纯化所得蛋白可调控机体脂代谢，改善肝细胞脂质堆积，在干预非酒精性脂肪肝方面具备突出生理活性，是极具开发潜力的新食品原料。目前行业逐步开展娃娃鱼副产物活性蛋白提取工艺研究，但该类原料来源特殊，内脏组织易富集铅、镉、砷等重金属，养殖及屠宰加工环节易受沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病微生物污染，热加工、酶解工艺还可能生成杂环胺等加工源性有害化学物质，存在化学与微生物双重安全隐患。

2、现有水产活性蛋白安全性评价多采用传统理化单项检测、平板菌落计数法，只能对单一危害指标单独定量，无法同步完成多类型污染物联合定性与批量定量；常规毒理学试验仅能获取整体毒性数据，难以和原料实际污染含量关联建模，无法精准核算原料安全限量。现阶段缺少针对娃娃鱼源护肝蛋白的专用评价体系，不能实现从原料到成品全链条动态风险量化分级，导致该类功能性蛋白在新食品原料申报、产业化标准制定时缺少标准化安全评价依据，制约产品规模化开发与市场化应用。

3、因此，研发一种基于多组学与毒理耦合建模、以娃娃鱼皮、骨、内脏副产物为原料、用于防治非酒精性脂肪肝的功能性蛋白原料的化学污染物、致病微生物风险定量检测、安全限值判定与全流程动态风险管控的娃娃鱼源护肝功能性蛋白组学风险定量评价方法具有重要的现实意义。

技术实现思路

1、鉴于此，本发明提出了一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法，实现致病微生物、化学危害物同步定性、精准定量，量化原料安全阈值，分级评定产品安全风险，旨在解决当前技术中评价指标单一、无法双风险同步定量、安全限量测算缺乏数据支撑、不能动态溯源管控的弊端。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

3、一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法，所述评价方法包含以下步骤：

4、s1、样品前处理：取娃娃鱼副产物制备的护肝功能性蛋白样品，均质后制备三组平行待测试样，分别用于微生物组学检测、代谢组学联合重金属质谱检测以及理化质量控制与样品留存；

5、s2、多组学联合检测：对微生物组待测试样开展高通量测序，对代谢组待测试样采用液质联用非靶向检测、重金属靶向质谱检测，采集全部原始组学数据并完成数据标准化与归一化处理；

6、s3、标志物关联建模与危害物定量：构建危害物-组学特征标志物关联定量数学模型，基于所述模型同步完成样品中致病微生物、化学危害污染物的定性识别与含量定量测算；

7、s4、毒理试验与暴露数据库搭建：采用实验动物亚慢性毒性试验，设置多梯度功能性蛋白饲喂剂量组，采集受试动物生化、脏器病理试验数据，构建娃娃鱼源护肝功能性蛋白专属暴露评估数据库；

8、s5、产品安全限量定量计算：耦合步骤s3的危害物定量结果与步骤s4的暴露数据库参数，依托膳食暴露评估模型定量核算功能性蛋白原料的安全摄入限量与污染物控制阈值；

9、s6、样品动态风险分级评价：依据实测污染物含量与步骤s5所得限量阈值进行样品风险等级划分，同步建立产品加工全链条动态安全监测指标，输出定量风险评价报告。

10、进一步的，步骤s1中所述护肝功能性蛋白由娃娃鱼皮、骨、内脏加工副产物提取纯化制备，被配置为改善非酒精性脂肪肝的护肝活性。

11、进一步的，步骤s2中所述微生物组采用16s rrna高通量测序，靶向检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、致病性大肠杆菌。

12、进一步的，步骤s2中所述代谢组采用lc-ms/ms非靶向代谢组学筛查加工杂环胺、农药残留，电感耦合等离子体质谱定量铅、镉、汞、砷重金属。

13、进一步的，步骤s3中所述定量数学模型为偏最小二乘回归plsr模型，利用组学特征峰信号与危害物标准浓度完成模型拟合。

14、进一步的，所述步骤s4中所述多梯度功能性蛋白饲喂剂量组为设置5个梯度饲喂剂量组。

15、进一步的，步骤s5中所述安全摄入限量包含两项指标：产品每日人体允许摄入量adi、原料中各类危害物限量阈值。

16、进一步的，步骤s6中所述风险等级分为三级：低风险为污染物实测含量＜限量阈值；中风险为限量阈值＜实测含量≤1.2倍限量阈值；高风险为实测含量＞1.2倍限量阈值。

17、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

18、本发明结合微生物组与代谢组双组学技术，可一次性同步定量微生物污染、化学污染物两类安全风险，突破传统检测分批次、单指标测定的局限，检测效率与数据全面性显著提升。

19、本发明中采用组学定量数据与体内毒理试验数据耦合建模，实现安全限量精准量化，解决传统评价无定量限值、仅靠经验判定的问题，满足新食品原料申报的法规评价要求。

20、本发明中配套形成产品全产业链动态监测指标，可用于娃娃鱼护肝功能性蛋白从副产物原料到终端产品全流程质量管控，直接支撑产业化产品标准编制。

21、本发明所述评价方法针对性适配娃娃鱼源护肝蛋白产品，填补大鲵加工副产物功能性蛋白专用组学风险定量评价的技术空白，适配产业化的落地需求。

1.一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法，其特征在于，所述评价方法包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法，其特征在于，步骤s1中所述护肝功能性蛋白由娃娃鱼皮、骨、内脏加工副产物提取纯化制备，被配置为改善非酒精性脂肪肝的护肝活性。

3.根据权利要求1所述的一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法，其特征在于，步骤s2中所述微生物组采用16s rrna高通量测序，靶向检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、致病性大肠杆菌。

4.权利要求1所述的一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法，其特征在于，步骤s2中所述代谢组采用lc-ms/ms非靶向代谢组学筛查加工杂环胺、农药残留，电感耦合等离子体质谱定量铅、镉、汞、砷重金属。

5.根据权利要求1所述的一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法，其特征在于，步骤s3中所述定量数学模型为偏最小二乘回归plsr模型，利用组学特征峰信号与危害物标准浓度完成模型拟合。

6.根据权利要求1所述的一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法，其特征在于，所述步骤s4中所述多梯度功能性蛋白饲喂剂量组为设置5个梯度饲喂剂量组。

7.根据权利要求1所述的一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法，其特征在于，步骤s5中所述安全摄入限量包含两项指标：产品每日人体允许摄入量adi、原料中各类危害物限量阈值。

8.根据权利要求1所述的一种娃娃鱼源护肝功能性蛋白的组学风险定量评价方法，其特征在于，步骤s6中所述风险等级分为三级：低风险为污染物实测含量＜限量阈值；中风险为限量阈值＜实测含量≤1.2倍限量阈值；高风险为实测含量＞1.2倍限量阈值。