粘性生物样本的保存试剂、试剂盒及其应用的制作方法

本技术涉及体外诊断，特别涉及粘性生物样本的保存试剂、试剂盒及其应用，进一步涉及粘性生物样本的前处理方法、粘性生物样本中的核酸的扩增方法和检测方法。

背景技术：

1、在分子诊断领域，特别是基于核酸扩增技术（如pcr、恒温扩增等）的妇科感染性疾病检测中，阴道分泌物、宫颈分泌物等妇科样本是关键的检测对象。此类样本成分复杂，通常包含大量脱落上皮细胞、白细胞、微生物（如细菌、真菌、原虫）以及含量不等的黏液（宫颈黏液和阴道分泌物）。

2、目前用于采集和保存此类样本的液体介质，虽能在一定程度上维持核酸稳定性并灭活病原体，但在处理高粘稠度样本时暴露出以下严重影响检测准确性与操作效率的缺陷：

3、1、移液精度差且污染风险高：粘稠样本易导致移液器枪头吸液不准、排液不尽，且极易出现“拉丝”现象。此现象不仅造成取样体积误差，更易导致样本沾染管壁、管盖及周边环境，产生交叉污染与气溶胶风险。现有粘性生物样本缺乏有效的液化处理能力，无法有效破解样本的粘稠基质，导致移液操作时出现上述体积误差、拉丝污染和核酸释放率低的缺陷。

4、2、样本不均一，检测重复性差：样本在保存试剂中易形成胶状团块，难以通过涡旋实现均一分散。这导致核酸提取时，每次吸取的等分样本中病原体数量波动大，致使扩增检测结果重复性差，低载量病原体易漏检。

5、3、病原体释放不充分，灵敏度受限：粘稠的黏液网络形成物理屏障，包裹病原体，阻碍裂解成分有效接触和作用，导致核酸释放效率低，最终影响检测灵敏度，尤其不利于低浓度感染的发现。

6、4. 现有生物样本检测方案样本处理主要依赖核酸提取步骤，难以兼顾检测效率与准确性。市面常用的核酸提取检测方法虽能保证结果可靠性，但涉及裂解、结合、洗涤、洗脱等多个操作步骤，流程繁琐、耗时长，无法满足社区医疗、门诊现场等场景对快速检测的迫切需求。

7、综上，现有粘性生物样本处理技术，在样本液化效果、检测灵敏度及流程效率等方面存在显著缺陷，无法满足快速、精准的临床检测需求。因此，亟需开发一种能够有效破解样本粘稠基质、实现样本快速均质化液化，且兼顾操作便捷性与检测灵敏度的粘性生物样本前处理技术，以填补现有技术的空白。

技术实现思路

1、基于此，有必要提供一种粘性生物样本的保存试剂、试剂盒及其应用，以及粘性生物样本的前处理方法、粘性生物样本中的核酸的扩增方法和检测方法。

2、第一方面，一些实施方式中提供了一种粘性生物样本的保存试剂，所述保存试剂包含液化剂、核酸保护剂、表面活性剂和水性溶剂。

3、所述液化剂包含愈创甘油醚和β-巯基乙醇。

4、所述保存试剂中愈创甘油醚的浓度为0.24 mg/ml~2.4 mg/ml，β-巯基乙醇的浓度为0.01%（v/v）~0.1%（v/v）。

5、可选的实施方式中，所述核酸保护剂包含蔗糖、甘油、甘露醇和脯氨酸中的至少一种。

6、可选的实施方式中，所述保存试剂中蔗糖的浓度为1 mg/ml~10 mg/ml。

7、可选的实施方式中，所述保存试剂中甘露醇的浓度为0.5 mg/ml~5 mg/ml。

8、可选的实施方式中，所述保存试剂中脯氨酸的浓度为1 mg/ml~10 mg/ml。

9、可选的实施方式中，所述保存试剂中甘油的浓度为0.05 %（v/v）~0.5 %（v/v）。

10、可选的实施方式中，所述保存试剂包含1 mg/ml~10 mg/ml的蔗糖、0.5 mg/ml~5mg/ml的甘露醇、1 mg/ml~10 mg/ml的脯氨酸和0.05 %（v/v）~0.5 %（v/v）的甘油。

11、可选的实施方式中，所述表面活性剂包括tritonx-100和pvp40中的至少一种。

12、可选的实施方式中，所述保存试剂中tritonx-100的浓度为0.002%（v/v）~0.1%（v/v）。

13、可选的实施方式中，所述保存试剂中pvp40的浓度为0.02 mg/ml~1 mg/ml。

14、可选的实施方式中，所述保存试剂包含0.002%（v/v）~0.1%（v/v）的tritonx-100和0.02 mg/ml~1 mg/ml的pvp40。

15、可选的实施方式中，所述水性溶剂的ph为8.0~8.5。

16、可选的实施方式中，所述水性溶剂为缓冲液。

17、可选的实施方式中，所述缓冲液包括tris-hcl缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液和磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中的至少一种。

18、可选的实施方式中，所述缓冲液为tris-hcl缓冲液，所述保存试剂的缓冲体系为ph为8.0~8.5，浓度为50~100 mm的tris-hcl的缓冲体系。

19、可选的实施方式中，所述保存试剂包含0.24 mg/ml~2.4 mg/ml的愈创甘油醚、0.01%（v/v）~0.1%（v/v）的β-巯基乙醇、1 mg/ml~10 mg/ml的蔗糖、0.5 mg/ml~5 mg/ml的甘露醇、1 mg/ml~10 mg/ml的脯氨酸、0.05 %（v/v）~0.5 %（v/v）的甘油、0.002%（v/v）~0.1%（v/v）的tritonx-100和0.02 mg/ml~1 mg/ml的pvp40，所述水性溶剂为浓度为50~100 mm的tris-hcl缓冲液。

20、第二方面，一些实施方式中提供了一种用于粘性生物样本检测的试剂盒，所述试剂盒包含第一方面所述的粘性生物样本的保存试剂。

21、可选的实施方式中，所述试剂盒还包含核酸检测试剂。

22、可选的实施方式中，所述核酸检测试剂包括核酸扩增试剂。

23、第三方面，一些实施方式中提供了第一方面所述的粘性生物样本的保存试剂、或第二方面所述的用于粘性生物样本检测的试剂盒在制备妇科感染性疾病检测产品中的应用。

24、可选的实施方式中，所述妇科感染性疾病检测产品中的检测样本包括受试者的生殖道分泌物。

25、可选的实施方式中，所述妇科感染性疾病检测产品用于检测所述粘性生物样本中的核酸。

26、可选的实施方式中，所述妇科感染性疾病检测产品用于包括如下步骤的方法：将所述粘性生物样本与所述保存试剂混合，然后将处理所得混合物直接用于检测。

27、第四方面，一些实施方式中提供了一种粘性生物样本的前处理方法，该前处理方法包括将所述粘性生物样本与第一方面所述的粘性生物样本的保存试剂混合。

28、第五方面，一些实施方式中提供了一种粘性生物样本中的核酸的扩增方法，该扩增方法包括按照第四方面所述的粘性生物样本的前处理方法处理所述粘性生物样本，对处理所得混合物进行扩增处理以扩增所得样本中的核酸；

29、可选的实施方式中，将所述粘性生物样本与所述保存试剂混合，将所得混合物直接添加到扩增体系中进行扩增反应。

30、第六方面，一些实施方式中提供了一种非诊断和治疗目的的粘性生物样本中的核酸的检测方法，该检测方法包括按照第四方面所述的粘性生物样本的前处理方法处理所述粘性生物样本，并检测处理所得样本中的核酸；

31、可选的实施方式中，所述检测方法包括采用第五方面所述的粘性生物样本中的核酸的扩增方法扩增目标核酸。

32、本技术实施方式中提供的粘性生物样本的保存试剂包含液化成分，能够降解样本中的黏蛋白与基因组dna网络，降低其粘稠性，实现样本的流体化与均一化，保障移液精准并降低污染，为后续检测奠定可靠基础。该保存试剂能够在液化的同时释放并稳定核酸，在常温下实现核酸的长效稳定保存。本技术的保存试剂从降低粘性生物样本的粘稠性、同时释放并稳定核酸并确保常温稳定性三方面出发，在达到高效液化样本、降低样本粘稠性的同时，保证后续高效核酸扩增。