一种抗人白介素-6的单克隆抗体及其制备方法和用途与流程

本发明涉及生物医药领域，具体的涉及抗白介素-6的单克隆抗体及其制备方法和用途。

背景技术：

1、白介素-6（il-6）是由单基因编码的分泌性蛋白，其前体包含212个氨基酸序列，在翻译后修饰过程中，氨基末端信号肽被裂解，形成由184个氨基酸残基组成的成熟多肽，分子量约为22-27kda。1989年的研究报道发现，急性细菌性感染患者体液中存在分子量约为60-70 kda的免疫反应复合物，提示il-6在感染过程中可能与结合蛋白形成复合物参与免疫应答。

2、在生理和病理条件下，il-6的表达受到严格调控。当机体发生内外伤、外科手术、应激反应、感染、脑死亡、肿瘤发生以及其他急性炎症反应时，il-6会快速合成和释放，其血清/血浆浓度在炎症早期即可显著升高，且升高的幅度与炎症严重程度呈正相关。临床研究表明，手术患者术前及术后血清il-6浓度能够有效预示术后并发症的发生风险。在重症监护（icu）患者中，连续监测血清或血浆中il-6水平可有效评估系统性炎症反应综合征（sirs）的严重程度，并为脓毒症及脓毒症休克的预后判断提供重要参考。此外，il-6已被证实可作为脓毒症的早期预警指标，其升高时间早于c反应蛋白（crp）和降钙素原（pct），具有更高的时效性。在慢性炎症性疾病中，il-6水平同样与疾病活动度密切相关，例如在类风湿关节炎患者中，il-6浓度可反映关节炎症的严重程度。

3、目前，il-6的临床检测方法主要包括酶联免疫吸附测定（elisa）、化学发光免疫分析（clia）及电化学发光免疫分析（eclia）等免疫学检测技术。然而，现有检测用抗il-6单克隆抗体在实际应用中仍存在以下不足：第一，部分抗体的检测灵敏度和线性范围有限，难以满足低浓度il-6（如正常生理水平）和高浓度il-6（如重症感染患者）的同步准确定量需求；第二，部分抗体对il-6与可溶性il-6受体（sil-6r）或il-6结合蛋白形成的复合物识别效率低下，可能导致检测结果与真实活性il-6水平偏离；第三，抗体在复杂临床样本（如溶血、脂血样本）中的抗干扰能力不足，影响检测结果的稳健性；第四，部分市售抗体批次间一致性欠佳，不利于建立标准化的检测体系。

4、因此，开发一种具有高亲和力、高特异性、宽检测范围、良好抗干扰性及优异批次稳定性的新型抗il-6单克隆抗体，对于提高il-6临床诊断的敏感性和准确性、实现对炎症性疾病（尤其是脓毒症）的早期预警和动态监测、指导临床治疗决策和预后评估具有重要的临床价值和广阔的应用前景。

技术实现思路

1、为了改进，本发明设计筛选了抗白介素-6的单克隆抗体，并验证与现有阳性成品试剂盒以及其他高效检测用抗体的对照，充分证实了本发明所述抗体的检测优势。具体包括如下技术方案。

2、一方面，本技术提供一种抗白介素-6的结合分子。

3、在一些实施方案中，所述结合分子为抗白介素-6的抗体或其抗原结合片段。

4、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包括轻链可变区和重链可变区。

5、在一些实施方案中，所述轻链可变区包括如seq id no:14所示氨基酸序列中的lcdr1、lcdr2、lcdr3；在一些实施方案中，所述重链可变区包括如seq id no:13所示氨基酸序列中的hcdr1、hcdr2、hcdr3。在一些具体实施方案中，所述轻链可变区包括如seq id no:14所示氨基酸序列中的lcdr1、lcdr2、lcdr3；且所述重链可变区包括如seq id no:13所示氨基酸序列中的hcdr1、hcdr2、hcdr3。

6、在一些实施方案中，所述轻链可变区包括如seq id no:20所示氨基酸序列中的lcdr1、lcdr2、lcdr3；在一些实施方案中，所述重链可变区包括如seq id no:19所示氨基酸序列中的hcdr1、hcdr2、hcdr3；在一些实施方案中，所述轻链可变区包括如seq id no:20所示氨基酸序列中的lcdr1、lcdr2、lcdr3；且所述重链可变区包括如seq id no:19所示氨基酸序列中的hcdr1、hcdr2、hcdr3；

7、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包括如下任意一组所示的轻链可变区和重链可变区：

8、（1-1）所述轻链可变区包括如seq id no:14所示氨基酸序列中的lcdr1、lcdr2、lcdr3，且所述重链可变区包括如seq id no:13所示氨基酸序列中的hcdr1、hcdr2、hcdr3；

9、（1-2）所述轻链可变区包括如seq id no:20所示氨基酸序列中的lcdr1、lcdr2、lcdr3，且所述重链可变区包括如seq id no:19所示氨基酸序列中的hcdr1、hcdr2、hcdr3。

10、在一些具体实施方案中，所示 cdr是根据kabat、imgt、chothia、abm或contact的编号系统所定义的。

11、在一些具体实施方案中，所示 cdr是根据kabat的编号系统所定义的。

12、在一些实施方案中，所述lcdr1、lcdr2、lcdr3分别包括如seq id no:4、5、6所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3分别包括如seq id no:1、2、3所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述lcdr1、lcdr2、lcdr3分别包括如seq id no:4、5、6所示的氨基酸序列，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3分别包括如seq id no:1、2、3所示的氨基酸序列。

13、在一些具体实施方案中，所述lcdr1、lcdr2、lcdr3的氨基酸序列分别如seq idno:4、5、6所示，且所述hcdr1、hcdr2、hcdr3的氨基酸序列分别如seq id no:1、2、3所示。

14、在一些实施方案中，所述lcdr1、lcdr2、lcdr3分别包括如seq id no:10、11、12所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3分别包括如seq idno:7、8、9所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述lcdr1、lcdr2、lcdr3分别包括如seq id no:10、11、12所示的氨基酸序列，所述hcdr1、hcdr2、hcdr3分别包括如seq id no:7、8、9所示的氨基酸序列。

15、在一些具体实施方案中，所述lcdr1、lcdr2、lcdr3的氨基酸序列分别如seq idno:10、11、12所示，且所述hcdr1、hcdr2、hcdr3的氨基酸序列分别如seq id no:7、8、9所示。

16、在一些具体实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包括如下任意一组：

17、（2-1）氨基酸序列分别如seq id no:4、5、6所示的lcdr1、lcdr2、lcdr3，和氨基酸序列分别如seq id no:1、2、3所示的hcdr1、hcdr2、hcdr3；

18、（2-2）氨基酸序列分别如seq id no:10、11、12所示的lcdr1、lcdr2、lcdr3，和氨基酸序列分别如seq id no:7、8、9所示的hcdr1、hcdr2、hcdr3。

19、在一些实施方案中，所述轻链可变区包括如seq id no:14所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列，所述重链可变区包括如seq id no:13所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列；在一些具体实施方案中，所述轻链可变区包括如seq id no:14所示的氨基酸序列，所述重链可变区包括如seq id no:13所示的氨基酸序列；在一些具体实施方案中，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:14所示，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:13所示。

20、在一些实施方案中，所述轻链可变区包括如seq id no:20所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列，所述重链可变区包括如seq id no:19所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述轻链可变区包括如seq id no:20所示的氨基酸序列，所述重链可变区包括如seq id no:19所示的氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:20所示，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:19所示。

21、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包括如下任意一组所示的轻链可变区和重链可变区：

22、（3-1）氨基酸序列如seq id no:14所示的轻链可变区，和氨基酸序列如seq idno:13所示的重链可变区；

23、（3-2）氨基酸序列如seq id no:20所示的轻链可变区，和氨基酸序列如seq idno:19所示的重链可变区。

24、在一些实施方案中，所述抗体为鼠源抗体、嵌合抗体、重组抗体或人源化抗体；所述抗原结合片段为fab、fab’、f(ab’)2、fd、fv、scfv、dsfv或dab。

25、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段还包括免疫球蛋白fc区。在一些具体实施方案中，所述fc选自igg1、igg2、igg3或igg4。

26、在一些实施方案中，所述轻链包括如seq id no:18所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列，所述重链包括如seq id no:17所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述轻链包括如seq id no:18所示的氨基酸序列，所述重链包括如seq id no:17所示的氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述轻链的氨基酸序列如seq id no:18所示，所述重链的氨基酸序列如seq id no:17所示。

27、在一些实施方案中，所述轻链包括如seq id no:24所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列，所述重链包括如seq id no:23所示或与之具有至少95%同一性的氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述轻链包括如seq id no:24所示的氨基酸序列，所述重链包括如seq id no:23所示的氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述轻链的氨基酸序列如seq id no:24所示，所述重链的氨基酸序列如seq id no:23所示。

28、本发明还提供一种生物材料。

29、在一些实施方案中，所述生物材料包括以下任意一项：

30、（4-1）核酸分子，所述核酸分子编码如上文任一处所述的抗体或其抗原结合片段；

31、（4-2）含有上文任一处所述核酸分子的表达载体/载体组；

32、（4-3）含有上文任一处所述核酸分子或所述表达载体/载体组的宿主细胞。

33、本发明还提供制备如上文任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法。

34、在一些实施方案中，所述方法包括培养如上文任一项所述的宿主细胞。在一些具体实施方案中，所述培养的宿主细胞表达抗体或其抗原结合片段。在一些具体实施方案中，还包括分离所述抗体或其抗原结合片段。在一些具体实施方案中，还包括纯化所述抗体或其抗原结合片段。

35、本发明还提供一种抗白介素-6的组合物。

36、在一些实施方案中，所述组合物包括上文任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

37、本发明还提供一种如上文任一项所述的抗体或其抗原结合片段，或者上文任一项所述的组合物的应用。

38、在一些实施方案中，所述应用包括：用于制备抗白介素-6的产品，或者用于不以疾病诊断和治疗为目的检测白介素-6；所述产品为检测试剂盒、检测试纸条或检测芯片。

39、在一些具体实施方案中，所述检测试剂盒为胶体金检测试剂盒、elisa检测试剂盒、免疫层析试剂盒、免疫比浊检测试剂盒、磁颗粒检测试剂盒、化学发光检测试剂盒、免疫荧光检测试剂盒或放射免疫检测试剂盒；所述检测试纸条为胶体金试纸条或elisa试纸条。

40、在一些具体实施方案中，所述产品包括如组（1-1）所述抗体作为标记抗体，如组（1-2）所述抗体作为包被抗体；在一些具体实施方案中，所述产品包括如组（2-1）所述抗体作为标记抗体，如组（2-2）所述抗体作为包被抗体；在一些具体实施方案中，所述产品包括如组（3-1）所述抗体作为标记抗体，如组（3-2）所述抗体作为包被抗体。

41、在一些具体实施方案中，所述产品包括如组（1-1）所述抗体作为包被抗体，如组（1-2）所述抗体作为标记抗体；在一些具体实施方案中，所述产品包括如组（2-1）所述抗体作为包被抗体，如组（2-2）所述抗体作为标记抗体；在一些具体实施方案中，所述产品包括如组（3-1）所述抗体作为包被抗体，如组（3-2）所述抗体作为标记抗体。

42、在一些实施方案中，上文任一项所述白介素-6为人白介素-6。

43、在一些实施方案中，上文任一项所述抗体为单克隆抗体。