可溶性ST2在激素抵抗型ICIs相关心肌炎的预测中的用途

本发明属于生物检测，涉及可溶性生长刺激表达基因 2 蛋白（sst2）联合心肌肌钙蛋白 t（ctnt）作为生物标志物在 icis 相关心肌炎患者中预测激素抵抗型icis 相关心肌炎（steroid-resistant immune checkpoint inhibitor-associatedmyocarditis，sriciam）风险的用途，还可进一步联合肌酸激酶同工酶（ck-mb）实现联合检测评估。

背景技术：

1、近年来，以免疫检查点抑制剂（immune checkpoint inhibitors，icis）为主的免疫治疗彻底改变了肿瘤的治疗模式，开辟了肿瘤免疫治疗的新时代。但免疫系统的激活可能会诱发免疫相关不良事件（immune-related adverse effects, iraes），icis相关心肌炎是其中发生率不高、但最为严重的irae，死亡率高达46%。

2、糖皮质激素是icis相关心肌炎的一线治疗药物，2022年欧洲心脏病学会指南推荐一旦诊断icis相关心肌炎可能，均需尽早启动大剂量糖皮质激素冲击治疗，以减少主要不良心血管事件（major adverse cardiovascular events，mace），降低死亡率。对于接受足量甲泼尼龙静脉注射治疗3天后，心肌肌钙蛋白t（ctnt）没有明显下降（下降幅度小于50%），或仍存在房室传导阻滞，室性心律失常或左心功能不全的患者，2022年欧洲心脏病学会将这类患者定义为激素抵抗型icis相关心肌炎（sriciam）。

3、激素抵抗型患者在糖皮质激素治疗的基础上增加二线免疫抑制药物，包括吗替麦考酚酯、静脉注射免疫球蛋白、血浆置换、托珠单抗、托法替布等。但激素抵抗型icis相关心肌炎患者不管加用何种二线免疫抑制药物，其死亡率仍高达50%。icis相关心肌炎发病急骤、病程进展迅速，早期评估icis相关心肌炎患者预后情况，并及时采取合理治疗措施，可在一定程度上降低死亡率，因而如何有效识别sriciam并预测其预后，已成为临床亟待解决的研究重点。目前临床仍缺乏兼具检测简便、结果精准、快速高效、创伤小、结果可靠的检测方案，用于激素抵抗型 icis 相关心肌炎的早期预判与预后评估，临床上亟需建立一种精准、便捷的手段实现激素抵抗型 icis 相关心肌炎风险预测。

技术实现思路

1、针对激素抵抗型icis相关心肌炎（sriciam）风险难以预测的临床难题，发明人基于近年收集的临床接受免疫检查点抑制剂治疗的肿瘤患者且确诊 icis 相关心肌炎的肿瘤患者（包括接受过糖皮质激素（例如甲泼尼龙）治疗的患者）血液样本。对于与心肌炎相关的差异表达蛋白开展筛选与分析。研究发现：生长刺激表达基因2蛋白（sst2）在激素抵抗型患者（sriciam）和激素敏感型（non-sriciam）患者中表达水平存在统计学显著差异。sriciam患者血清sst2水平显著高于激素敏感型患者；同时，心肌炎标志物ctnt，ctniplus、ck-mb、myo等在激素抵抗型患者和激素敏感型患者中也存在表达差异。上述结果提示，sst2 可单独作为 sriciam 的生物标志物，将 sst2 与心肌肌钙蛋白 t（ctnt）、肌酸激酶同工酶 mb（ck-mb）联合使用，能够进一步提升预测效能，用于预测 icis 相关心肌炎患者发生激素抵抗亚型的风险；基于上述研究结果，本发明提供如下技术方案：

2、本发明主要提供了一种生物标志物在制备激素抵抗型icis相关心肌炎（sriciam）诊断/风险预测试剂中的生物标志物应用；该生物标志物是可溶性生长刺激表达基因2蛋白即sst2，或者该生物标志物是sst2与心肌肌钙蛋白t即ctnt的组合sst2+ctnt、sst2与肌酸激酶同工酶mb即ck-mb的组合sst2+ck-mb、sst2与ctnt和ck-mb的组合sst2+ctnt+ck-mb。

3、在一种具体实施方式中，通过检测供体患者的生物样本中sst2的表达水平；或者同时检测sst2和ck-mb的表达水平；或者同时检测sst2、ck-mb和ctnt的表达水平来进行sriciam诊断/风险预测，所述生物样本选自下组：全血、血浆、血清、肿瘤组织取样、组织液、唾液、口腔黏膜、鼻咽分泌物、体液、尿液，优选生物样本是全血、血浆或血清，更优选为血清，适配本发明限定的标志物临界值判读体系，检测结果精准度高。

4、可选地，通过基因/mrna检测方式或者蛋白质检测方式确定供体患者的生物样本中sst2的表达水平。

5、优选地，上述生物样本是血清，sriciam诊断/风险预测标准为，当待测供体血清中sst2水平/浓度为36.96 ng/ml以上时，提示该供体患者为sriciam发生高风险人群；或者

6、当待测供体血清中sst2水平/浓度≥ 36.96 ng/ml，同时血清中ctnt水平/浓度≥511.0 pg/ml时，则提示该供体患者存在重度心肌损伤，并且提示该供体患者具有较高的发生激素抵抗型icis相关心肌炎的风险。

7、在本发明的一种具体实施方式中，将上述sriciam分层判读标准构建为可运算的算法模型，可导入搭载计算机或联网的蛋白检测设备等检测系统中，实现自动化风险评估；所述检测系统具体包括分析单元与评估单元，其中分析单元用于检测血清生物样本中sst2、ctnt、ck-mb靶蛋白的表达浓度水平，评估单元可根据分析单元输出的蛋白检测结果，结合前述分层判读算法模型，自动完成激素抵抗型icis相关心肌炎的发生风险评估、严重程度评分及预后判断。

8、可选地，上述试剂是基于下述原理检测生物样本中sst2、ctnt和ck-mb蛋白含量：elisa（酶联免疫吸附测试法）、化学发光免疫分析、流式微球检测、olink邻近延伸技术、多重炎症蛋白检测技术、luminex多重因子检测技术。

9、在本发明的一种应用方式中，上述试剂是试剂盒，即用于诊断激素抵抗型icis相关心肌炎的sst2检测试剂盒；或者是用于诊断激素抵抗型icis相关心肌炎的sst2+ctnt和/或ck-mb检测试剂盒。

10、优选地，所述试剂盒是基于抗体-抗原亲和结合原理的蛋白质检测试剂。

11、上述试剂盒中，用于识别sst2的抗体选自sst2单克隆抗体或sst2多克隆抗体；用于识别ctnt的抗体选自ctnt单克隆抗体或ctnt多克隆抗体；用于识别ck-mb的抗体选自ck-mb单克隆抗体或ck-mb多克隆抗体。

12、在一种具体实施方式中，上述试剂是试剂盒，选自胶乳免疫比浊法试剂盒、磁微粒化学发光法试剂盒、放射免疫测定法试剂盒、或者免疫层析试纸条。

13、可选地，上述试剂盒是双抗体夹心法试剂盒，选自下组方式：

14、a. 酶联免疫吸附测定试剂盒；

15、b. 磁微粒化学发光法试剂盒；

16、c. 免疫层析试纸条。

17、优选地，本发明上述任一种试剂盒中还包括使用说明书。

18、上述使用说明书的承载形式不作严格限定，可印制于试剂盒配套的试剂瓶、试管和类似物、板子上，也可设置为独立纸质文件，张贴或收纳于试剂盒容器的外部或内部，例如是带有操作演示视频app下载窗口比如二维码的纸件，说明书也可以是多媒体的形式，比如cd、u盘、网盘等。

19、本发明首次明确sst2可作为独立生物标志物用于指示、预警激素抵抗型icis相关心肌炎（sriciam），同时可与ctnt、ck-mb心肌炎特异性标志物联合应用，实现sriciam风险预判及重度心肌损伤的精准鉴别诊断。在临床上，通过检测患者体内sst2表达水平联合ctnt，并联合ctnt、ck-mb标志物进行协同分析，能够实现对sriciam的早期精准预测、风险分层及预后评估。本发明检测方法操作简便、检测快速、结果可靠，能够有效识别icis相关心肌炎中激素抵抗高危患者，为临床早期干预、个体化治疗方案制定提供精准的实验室依据，有效改善患者临床预后、降低重症死亡率，具备重要的临床应用价值与推广前景。