一种含香芹酚、连翘苷和橙皮素的协同抗菌组合物及其应用的制作方法

本发明涉及一种含香芹酚、连翘苷和橙皮素的协同抗菌组合物及其应用，属于水产养殖用抗菌药物。

背景技术：

1、嗜水气单胞菌（

aeromonas hydrophila）是淡水养殖鱼类、虾类、蟹类的主要病原菌之一，可引起暴发性出血性败血症，死亡率高达95%，给水产养殖业造成严重经济损失。同时该菌为人兽共患病原体，可通过食用受污染水产品威胁公众健康。因此，开发安全、高效的水产养殖用抗菌策略具有重要的经济价值和公共卫生意义。

2、目前水产养殖中嗜水气单胞菌的防治主要依赖抗生素（如硫酸新霉素），但长期滥用已导致严重的耐药性问题。嗜水气单胞菌具有外膜通透性屏障、质粒介导的耐药基因、生物膜保护等多重耐药机制。因此，亟需开发能够降低抗生素用量、延缓耐药性产生的替代或辅助抗菌策略。

3、当前生产中为减少抗生素使用量、规避耐药性风险，已逐步推广多种减抗防控手段，常见方式包括中草药复配抗菌、抗生素减量单用、益生菌生物拮抗、水体微生态调控、物理消杀辅助防控等。

4、中草药因具有天然、低毒、不易产生耐药性等优势，被认为是抗生素的潜在替代品或增效剂。益生菌通过竞争定植位点、分泌抑菌物质抑制病原菌增殖，减少养殖水体细菌基数；微生态调控通过优化水体菌相、藻相平衡，改善养殖环境以降低病害发生率；减量抗生素施用则通过控制用药剂量，缓解抗生素长期滥用引发的耐药性积累问题。

5、但现有减抗手段仍存在诸多显著短板，极大限制了实际应用效果。然而，单味中草药的抗菌作用较弱，难以单独应对高密度养殖模式下的细菌性暴发病害；益生菌、微生态调控技术起效周期长，针对嗜水气单胞菌引发的急性暴发性病害防控效果不佳，仅适用于日常预防，无法应对突发疫情；低剂量单一抗生素施用虽能短期减少用药量，但长期低浓度药物胁迫会加速细菌耐药基因突变与传播，反而诱导菌株产生更强的多重耐药性；同时，各类单一减抗技术普遍存在抗菌靶向性弱、对病原菌生物膜破坏能力不足的问题，无法彻底清除水体及养殖动物体内的嗜水气单胞菌，病害复发率较高，依然存在养殖安全隐患。

6、因此，如何依托中草药天然抗菌优势，通过科学配伍、增效优化实现低剂量协同抗菌，以更少的药物用量、更低的防控成本，高效解决嗜水气单胞菌耐药性滋生、生物膜顽固性感染、病害反复爆发以及水产养殖减抗提质的核心难题，破解现有减抗技术起效慢、效果弱、稳定性差的行业痛点，对构建绿色安全、可持续的水产养殖病害防控体系，延缓水产病原菌耐药性进化、保障水产养殖产业稳产增收具有重要的研究价值与应用意义。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明提供了一种含香芹酚、连翘苷和橙皮素的协同抗菌组合物及其应用。本发明从中草药中筛选得到三种与硫酸新霉素具有协同效应的香芹酚、连翘苷以及橙皮素；进一步将香芹酚、连翘苷以及橙皮素与硫酸新霉素联用，发现该组合物具有显著抑制嗜水气单胞菌的效果，抑菌率最高可达到94.63%，且抑菌效果持久，能显著降低抗生素残留和耐药性传播风险，可用于制备兽用药物或水产饲料添加剂，对防治水产养殖中嗜水气单胞菌引起的出血性败血症具有重要应用价值。

2、本发明的第一个目的是提供一种抗菌组合物，所述抗菌组合物包含香芹酚、连翘苷、橙皮素以及硫酸新霉素；香芹酚、连翘苷、橙皮素以及硫酸新霉素的质量比为1~64：1~128：1~64：0.25。

3、在一种实施方式中，所述香芹酚、连翘苷、橙皮素以及硫酸新霉素的质量比为11.35~39.1：36.35~78.2：8.1~36.35：0.25。

4、在一种实施方式中，所述香芹酚、连翘苷、橙皮素以及硫酸新霉素的质量比为10~20：60~80：6~10：0.25。

5、在一种实施方式中，所述香芹酚、连翘苷、橙皮素以及硫酸新霉素的质量比为13.6：64.6：8.1：0.25。

6、在一种实施方式中，所述抗菌组合物用于抑制嗜水气单胞菌。

7、在一种实施方式中，所述抗菌组合物的剂型为液体剂型或固体剂型。

8、在一种实施方式中，所述液体剂型为溶液剂、混悬剂、乳剂、喷雾剂、洗剂、滴剂中的任意一种。

9、在一种实施方式中，所述固体剂型为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂中的任意一种。

10、本发明的第二个目的是提供一种抑制嗜水气单胞菌的方法，将上述任一项所述的抗菌组合物加入至含有嗜水气单胞菌的体系中。

11、在一种实施方式中，所述体系为水产养殖体系、自然水环境体系。

12、本发明的第三个目的是提供一种产品，所述产品含有上述任一项所述的抗菌组合物。

13、在一种实施方式中，所述产品为兽用药物或水产饲料添加剂。

14、在一种实施方式中，所述兽用药物中还含有药学上可接受的药用辅料。

15、在一种实施方式中，所述药用辅料指药学领域常规的药物载体；所述药用辅料包括如下的一种或多种：粘合剂、稀释剂、填充剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、润滑剂、包衣材料。

16、在一种实施方式中，所述兽用药物的剂型为液体剂型或固体剂型。

17、在一种实施方式中，所述液体剂型为溶液剂、混悬剂、乳剂、喷雾剂、洗剂、滴剂中的任意一种。

18、在一种实施方式中，所述固体剂型为散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂中的任意一种。

19、本发明的第四个目的是提供上述任一项所述抗菌组合物在制备抗嗜水气单胞菌药物、水产养殖用饲料添加剂中的应用。

20、有益效果

21、（1）协同增效显著。本发明通过棋盘法验证，香芹酚、连翘苷和橙皮素三种中草药单体均与硫酸新霉素具有显著的协同抗菌效应，fici值分别为0.375、0.5和0.5（fici ≤0.5为协同），证实了三者与硫酸新霉素联用时抗菌效果显著优于各组分单独使用。

22、（2）显著降低抗生素用量。本发明发现当连翘苷、橙皮素、香芹酚以及硫酸新霉素在64.6：8.1：13.6：0.25的质量比条件下，对嗜水气单胞菌的抑菌率可达到94.63%；硫酸新霉素的有效浓度仅为0.25 mg/l，为硫酸新霉素单用mic（8 mg/l）的1/32，抗生素用量降低96.9%，大幅减少了抗生素残留和耐药性传播风险。

23、（3）杀菌效果持久。时间-生长曲线实验表明，本发明所述组合物可持续抑制嗜水气单胞菌增殖，24 h内无反弹再生长现象。

24、（4）制备方法简便。本发明所述组合物的各组分均为市售可得的中草药单体及抗生素，按比例混合即可使用，适合工业化生产。

1.一种抗菌组合物，其特征在于，所述抗菌组合物包含香芹酚、连翘苷、橙皮素以及硫酸新霉素；香芹酚、连翘苷、橙皮素以及硫酸新霉素的质量比为1~64：1~128：1~64：0.25。

2.根据权利要求1所述的抗菌组合物，其特征在于，所述抗菌组合物用于抑制嗜水气单胞菌。

3.根据权利要求1所述的抗菌组合物，其特征在于，所述抗菌组合物的剂型为液体剂型或固体剂型。

4.一种抑制嗜水气单胞菌的方法，其特征在于，将权利要求1~3任一项所述的抗菌组合物加入至含有嗜水气单胞菌的体系中。

5.一种产品，其特征在于，所述产品含有权利要求1~3任一项所述的抗菌组合物。

6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述产品为兽用药物或水产饲料添加剂。

7.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述兽用药物中还含有药学上可接受的药用辅料。

8.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述药用辅料指药学领域常规的药物载体；所述药用辅料包括如下的一种或多种：粘合剂、稀释剂、填充剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、着色剂、润滑剂、包衣材料。

9.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述兽用药物的剂型为液体剂型或固体剂型。

10.权利要求1~3任一项所述抗菌组合物在制备抗嗜水气单胞菌药物、水产养殖用饲料添加剂中的应用。