一种僵蚕水溶性活性成分的提取方法、其提取物及嫩肤面膜与流程

本发明涉及化妆品，特别是涉及一种僵蚕水溶性活性成分的提取方法、其提取物及嫩肤面膜。

背景技术：

1、僵蚕为家蚕幼虫感染白僵菌后僵化的干燥体，是一种传统中药材。现代研究表明，僵蚕富含蛋白质、多肽、多糖及多种水解酶类活性成分，具有促进皮肤细胞新生、调节皮脂、改善皮肤微循环、清除自由基等护肤功效。

2、目前，僵蚕水溶性活性成分的提取方法主要有水煎煮法和水提醇沉法。水煎煮法是将僵蚕加水煮沸提取，该方法操作简单，但存在明显不足：高温长时间煮沸易导致蛋白质、多肽等热敏性活性成分变性失活；提取效率较低，活性成分提取不充分；所得提取物中以大分子蛋白质为主，小分子多肽含量很少，而大分子蛋白质难以透过人体皮肤角质层，生物利用度较差。水提醇沉法是在水提液基础上加入乙醇进行沉淀，可去除部分杂质，但该方法通常采用单一浓度的乙醇，难以对不同分子量的活性成分进行选择性富集，提取物中小分子多肽的含量仍然有限。

3、在化妆品应用方面，现有僵蚕类护肤品多采用僵蚕原粉直接添加，或使用未经过精细化处理的粗提物。僵蚕原粉水溶性差，分散不均匀，有效成分释放不充分；粗提物中杂质含量较高，影响产品的透明度和稳定性，且可能增加皮肤刺激风险。此外，僵蚕原料来源较为复杂，不同批次间的活性成分含量差异较大，导致产品质量不稳定，难以满足化妆品工业化生产的要求。

4、因此，开发一种能够高效提取僵蚕水溶性活性成分、富集可透皮吸收的小分子多肽的提取方法，并研制相应的嫩肤面膜产品，具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种僵蚕水溶性活性成分的提取方法、其提取物及嫩肤面膜。

2、为实现上述目的，本发明提供了一种僵蚕水溶性活性成分的提取方法，包括以下步骤：

3、s1.将僵蚕、水和复合蛋白酶混合，进行酶解，酶解结束后，依次进行灭酶和热提，固液分离后得到水提液；

4、s2.向水提液中加入乙醇，调节乙醇浓度至第一体积浓度，静置，除去沉淀，继续加入乙醇，调节乙醇浓度至第二体积浓度，静置，收集沉淀，得到僵蚕粗提物；

5、s3.将僵蚕粗提物和水混合，依次通过超滤膜和纳滤膜进行膜分离，收集纳滤截留液，干燥后得到中间品；

6、s4.将中间品进行离子交换层析纯化，脱盐、干燥后得到僵蚕提取物。

7、在一个可选的实施方式中，s1中，僵蚕在使用前进行预处理。所述预处理包括：将僵蚕依次经进行清洗、灭菌、干燥、粉碎和过筛。其中，所述灭菌的温度为115-125℃，时间为3-7s；所述干燥的温度为-40至-50℃，真空度为5-15pa，干燥至含水率≤8%；所述过筛的筛孔粒径为50-150目。

8、在一个可选的实施方式中，s1中，所述混合包括：将僵蚕和水混合，然后用浓度为0.05-0.15mol/l的氢氧化钠溶液调节ph至所需范围，再加入复合蛋白酶进行酶解。

9、在一个可选的实施方式中，s1中，所述僵蚕和水的质量比为1：（10-20）；所述复合蛋白酶的加入量占僵蚕质量的0.5-2.5%；所述复合蛋白酶包括中性蛋白酶和木瓜蛋白酶，二者质量比为（1-2）：1。

10、在一个可选的实施方式中，s1中，所述酶解的ph为6.5-8.0，温度为35-55℃，时间为2-6h；所述灭酶的温度为80-100℃，时间为10-20min；所述热提的温度为80-100℃，时间为1-3h。

11、在一个可选的实施方式中，s1中，所述固液分离的方式为离心分离，所述离心的转速为3500-4500r/min，时间为15-25min。

12、在一个可选的实施方式中，s2中，向水提液中加入乙醇，调节乙醇浓度至第一体积浓度，2-6℃下静置3-5h，然后在3500-4500r/min下离心10-20min，除去沉淀；向上清液中继续加入乙醇，调节乙醇浓度至第二体积浓度，2-6℃静置7-9h，然后在3500-4500r/min下离心15-25min，收集沉淀；将沉淀在温度为-40至-50℃、真空度为5-15pa的条件下干燥22-26h，得到僵蚕粗提物。

13、在一个可选的实施方式中，s2中，所述第一体积浓度为30-50%；所述第二体积浓度为70-85%。

14、在一个可选的实施方式中，s3中，所述僵蚕粗提物和水的质量比为（10-15）：（150-250）；所述超滤膜的截留分子量为80-120kda；所述纳滤膜的截留分子量为1-3kda。

15、在一个可选的实施方式中，s3中，所述干燥的温度为-40至-50℃，真空度为5-15pa，时间为18-22h。

16、在一个可选的实施方式中，s4中，所述离子交换层析纯化包括：将中间品和缓冲液混合，得到中间品溶液；将中间品溶液上样至离子交换层析柱，进行梯度洗脱，收集洗脱峰。

17、在一个可选的实施方式中，所述缓冲液选自tris-hcl缓冲液，所述tris-hcl缓冲液的浓度为45-55mmol/l，ph为7.5-8.5；所述中间品溶液中中间品的浓度为15-25mg/ml。

18、在一个可选的实施方式中，所述上样的流速为1-3ml/min，所述离子交换层析柱的填料选自deae-sepharose fast flow；采用包含0-0.55mol/l氯化钠的tris-hcl缓冲液进行梯度洗脱。

19、在一个可选的实施方式中，梯度洗脱包括：先采用tris-hcl缓冲液洗去未结合的杂质，然后依次用含0.15mol/l、0.35mol/l和0.55mol/l氯化钠的tris-hcl缓冲液进行梯度洗脱，收集洗脱峰。

20、在一个可选的实施方式中，s4中，所述脱盐采用截留分子量为0.8-1.2kda的透析袋进行透析脱盐，透析的时间为22-26h，每3-5h换水一次。

21、在一个可选的实施方式中，s4中，所述干燥的温度为-40至-50℃，真空度为5-15pa，时间为22-26h。

22、本发明还提供了一种僵蚕提取物，根据所述的提取方法提取得到。

23、本发明还提供了一种嫩肤面膜，包括以下质量份数的组分：

24、僵蚕提取物0.5-5份、甘油3-8份、丙二醇2-5份、透明质酸钠0.05-0.3份、黄原胶0.1-0.5份、聚乙烯醇3-10份、羟苯甲酯0.1-0.3份、苯氧乙醇0.3-0.8份、去离子水补足至100份。

25、本发明还提供了嫩肤面膜的制备方法，包括以下步骤：

26、（1）将去离子水加热至70-80℃，加入黄原胶、聚乙烯醇，250-350r/min下搅拌25-35min至完全溶解，得到a相；将甘油、丙二醇、透明质酸钠加入去离子水中，搅拌溶解，加热至60-70℃，加入羟苯甲酯和苯氧乙醇，搅拌溶解，得到b相；

27、（2）将a相和b相混合，450-550r/min下搅拌10-20min，降温至35-40℃，加入僵蚕提取物，继续搅拌5-15min；

28、（3）用质量份数为8-12%的柠檬酸溶液或质量份数为8-12%的氢氧化钠溶液调节ph至5.5-6.5，补足去离子水至100份，搅拌均匀，脱泡，灌装，得到嫩肤面膜。

29、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

30、（1）本发明采用“低温酶解辅助水提+分段醇沉+超滤-纳滤级联膜分离+离子交换层析”的组合工艺提取僵蚕水溶性活性成分。低温酶解条件温和，可有效保护热敏性活性成分，同时将大分子蛋白质水解为小分子多肽；分段醇沉（先低浓度后高浓度）能够选择性地去除大分子杂质，富集目标多肽组分；超滤与纳滤级联膜分离实现了按分子量精准分级，操作温和、不引入有机溶剂；离子交换层析进一步去除色素和内毒素等杂质。上述各步骤协同作用，使得最终提取物中蛋白质与多肽总含量高，且小分子多肽占比显著提升，具有良好的透皮吸收性能。

31、（2）本发明所使用的僵蚕来源于规范化规模化人工接种白僵菌养殖，符合“三无一全”质量认证，批次间质量稳定，从源头保证了提取物的安全性和质量一致性，适合化妆品工业化生产。

32、（3）本发明全程不使用有毒有机溶剂，溶剂仅为水和乙醇，无有害溶剂残留风险，符合化妆品原料的安全要求，且各单元技术成熟，易于工业化放大生产。

33、（4）本发明以所述僵蚕提取物为活性成分，复配保湿剂、成膜剂、增稠剂等辅料制备的嫩肤面膜，各组分协同增效。僵蚕提取物提供核心嫩肤功效，透明质酸钠和甘油提供深层保湿，聚乙烯醇和黄原胶形成透气性保护膜，促进活性成分吸收。该面膜具有良好的保湿持久性和改善皮肤弹性的嫩肤功效。

34、（5）本发明嫩肤面膜对皮肤无刺激性和致敏性，安全性良好，适合各类肤质使用。