一种5-HT2A/DRD1双靶点激动剂及其在制备抗抑郁药物中的应用

本发明属于医药领域，尤其是涉及一种5-ht2a/drd1双靶点激动剂及其在制备抗抑郁药物中的应用。

背景技术：

1、抑郁症是一类以情绪低落、思维迟缓、兴趣减退为核心症状的情感障碍类疾病，目前西医治疗抑郁症多以对症治疗为主，尚无特效药物，且现有临床抗抑郁药物存在起效缓慢、副作用明显、部分患者疗效不佳等问题，因此，寻找安全有效、副作用小的抗抑郁药物成为当前医药领域的研究热点和迫切需求。

2、柴胡作为我国传统常用中药材，始载于《神农本草经》，具有疏散退热、疏肝解郁、升举阳气等功效，其疏肝解郁的功效使其成为中医药治疗情志抑郁的核心要药，在临床中被广泛应用于抑郁症的治疗，相关方剂如柴胡疏肝散、逍遥散、小柴胡汤等均以柴胡为君药，且大量临床及实验研究证实，柴胡及其相关方剂对抑郁症具有确切的治疗效果，能够有效改善患者的抑郁状态及伴随的睡眠障碍、自主神经功能紊乱等症状。然而，尽管柴胡的抗抑郁功效已得到广泛认可，但其发挥抗抑郁药效的具体物质基础（即核心活性单体成分）及其作用靶点、作用通路尚不完全明确，这成为制约柴胡抗抑郁相关药物现代化开发和应用的关键瓶颈。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种5-ht2a/drd1双靶点激动剂及其在制备抗抑郁药物中的应用。

2、为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

3、第一方面，本发明提供了一种5-ht2a/drd1双靶点激动剂，所述双靶点激动剂包括柴胡皂苷a和柴胡皂苷d。

4、第二方面，本发明还提供了一种5-ht2a/drd1双靶点激动剂在用于制备抗抑郁药物中的应用。

5、第三方面，本发明还提供了一种抗抑郁单体化合物的筛选方法，包括如下步骤：

6、s1.分别分离目标靶点受体过表达的细胞的细胞膜，再分别将细胞膜和改性硅胶制备得到目标靶点受体细胞膜色谱柱；

7、s2.将待测的柴胡单体化合物溶液分别置入目标靶点受体细胞膜色谱柱内，通过hplc-cmc方法对活性成分进行筛选；

8、s3.通过钙流荧光检测系统进行生物活性验证，筛选得到柴胡皂苷a和柴胡皂苷d。

9、优选地，所述步骤s1中的细胞为hek293人胚胎肾细胞。

10、优选地，所述步骤s1中的目标靶点受体过表达的细胞为5-ht2a受体和drd1受体过表达的hek293人胚胎肾细胞。

11、优选地，所述步骤s1中改性硅胶的制备方法包括如下步骤：

12、将氨基硅胶加入四氢呋喃中得到混合物，并将混合物冷却至0℃在冰浴中后，在不高于5℃的温度下，搅拌下加入氰尿酰氯和乙基二异丙胺持续2h时，过滤后，用乙醇冲洗得到氰尿酰氯改性的硅胶，然后，将氰尿酰氯改性的硅胶溶解在n，n-二甲基甲酰胺中，然后加入o6-[4-（氨基甲基）苄基]鸟嘌呤，并在95℃下回流持续8h，回流后，过滤产物并用n，n-二甲基甲酰胺漂洗，得到键合基团改性的改性硅胶。

13、优选地，所述氨基硅胶、氰尿酰氯、乙基二异丙胺的比例为1.4g：0.36g：1.4ml。

14、优选地，所述氰尿酰氯改性的硅胶与o6-[4-（氨基甲基）苄基]鸟嘌呤的质量比为1.4：0.05。

15、优选地，所述步骤s1中目标靶点受体细胞膜色谱柱的制备方法包括如下步骤：

16、s11.通过tris-hcl低渗缓冲液及超声破碎法分别分离目标靶点受体过表达的细胞的细胞膜；

17、s12.利用改性硅胶作为载体，通过细胞膜磷脂自融合使细胞膜均匀包覆于载体表面，制备得到细胞膜固定相悬液；

18、s13.将细胞膜固定相悬液装填到细胞膜色谱柱芯中，在1ml/min的流速下加压至柱前压力稳定，重复补加细胞膜固定相悬液并加压，直至色谱柱填满，填装完成后密封柱体备用。

19、优选地，所述步骤s2的具体步骤为：

20、s21.设置色谱参数：流动相：纯水；柱温：37℃；流速：0.2 ml/min；分析时间：120min；进样量：2μl；

21、s22.对待测的柴胡单体化合物溶液进行全波长扫描，以蒸馏水为空白对照，确定待测的各个柴胡单体化合物的最大吸收波长并筛选分析。

22、相对于现有技术，本发明具有以下优势：

23、（1）本发明实现双靶点精准识别，药效机制明确。本发明通过实验首次证明了柴胡皂苷a和柴胡皂苷d为5-ht2a受体和drd1受体的双靶点激动剂。相较于仅作用于单一递质系统的现有药物，这种多成分的调节方式更符合抑郁症多递质失调的病理特征；

24、（2）本发明筛选结果具有极高的生物活性强度（高结合力、高激动率、低有效浓度）。在hplc-cmc技术筛选中，柴胡皂苷a和d表现出极强的受体结合能力，其中柴胡皂苷a在5-ht2a受体柱上的保留时间达到49.426min，在drd1受体柱上为20.194 min，显著优于其他测试单体。钙流检测结果显示，柴胡皂苷a和d对受体具有极强的激活效应，柴胡皂苷a对drd1的最大激动率为239.5%，而柴胡皂苷d对drd1的激动率高达314.5%。筛选出的成分具有极低的半数有效浓度（ec50），例如柴胡皂苷d对drd1的ec50仅为2.511µm，阿魏酸对5-ht2a的ec50仅为0.536 µm，证明了这些单体在极低剂量下即可发挥显著的生物效应；

25、（3）本发明提供了量化评价标准，提升了研发效率。本发明不仅识别出了活性成分，还通过剂量-效应曲线（量效曲线）建立了精确的药价评价体系。相比传统的表观药效观察，本发明提供的ec50数据为后续开发抗抑郁先导药物及质量控制提供了科学、客观的量化指标；

26、（4）本发明解决了中药活性物质基础不明的问题。本发明通过现代色谱与分子生物学联用技术，明确了柴胡发挥抗抑郁作用的核心单体组分，为柴胡类方剂的现代化研究及新型单体药物的开发提供了坚实的理论依据和物质基础。

1.一种5-ht2a/drd1双靶点激动剂，其特征在于：所述双靶点激动剂包括柴胡皂苷a和柴胡皂苷d。

2.一种5-ht2a/drd1双靶点激动剂在用于制备抗抑郁药物中的应用。

3.一种抗抑郁单体化合物的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于：所述步骤s1中的细胞为hek293人胚胎肾细胞。

5.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于：所述步骤s1中的目标靶点受体过表达的细胞为5-ht2a受体和drd1受体过表达的hek293人胚胎肾细胞。

6.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于：所述步骤s1中改性硅胶的制备方法包括如下步骤：

7.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于：所述氨基硅胶、氰尿酰氯、乙基二异丙胺的比例为1.4g：0.36g：1.4ml。

8.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于：所述氰尿酰氯改性的硅胶与o6-[4-（氨基甲基）苄基]鸟嘌呤的质量比为1.4：0.05。

9.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于：所述步骤s1中目标靶点受体细胞膜色谱柱的制备方法包括如下步骤：

10.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于：所述步骤s2的具体步骤为：