一种装载柴胡皂苷D的间充质干细胞细胞外囊泡及其应用

本发明属于生物医药，具体涉及一种装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡及其应用。

背景技术：

1、代谢相关脂肪性肝病（mafld，也称masld）是全球最常见的肝脏疾病，其核心病理特征是肝脏脂质过度蓄积，常伴有胰岛素抵抗和低度炎症，可进展为严重的纤维化甚至肝细胞癌，带来了沉重的公共卫生负担。目前临床上依然缺乏能够有效逆转疾病进展且安全性高的靶向治疗药物。

2、柴胡皂苷d（ssd）是一种具有明确多靶点抗mafld活性的天然产物。临床前研究证实它具有显著的抗炎、脂质代谢调节和抗肥胖特性，这为将其应用于mafld治疗奠定了坚实的基础。

3、尽管如此，直接使用游离ssd进行干预仍面临严峻的安全性挑战。ssd具有许多皂苷类药物固有的溶血毒性特征，可能破坏红细胞膜完整性诱发溶血。长期高剂量给药有引发神经和心脏毒性的风险。更重要的是，皂苷会直接损伤血管内皮细胞引发血管功能障碍。动物实验表明，直接静脉注射游离ssd会引起小鼠尾静脉注射部位出现明显的血管扭曲和形态异常，表现出强烈的局部血管刺激性。这些毒副作用严重制约了游离ssd的临床应用。

4、因此，开发一种能够降低ssd系统毒性、拓宽治疗窗口的药物递送系统，对于推动ssd在代谢相关脂肪性肝病治疗中的临床转化具有重要的现实意义。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了一种装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡及其应用，可用于制备治疗代谢相关脂肪性肝病的药物。

2、为实现上述目的，本发明的具体技术方案如下：

3、本发明第一方面提供了一种装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡，所述装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡由间充质干细胞细胞外囊泡和柴胡皂苷d组成，间充质干细胞细胞外囊泡内负载柴胡皂苷d；装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡具有经典的杯状双层膜结构，粒径为100nm~1000 nm。

4、进一步地，所述装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡是由以下步骤制备得到的：

5、将间充质干细胞置于含柴胡皂苷d的培养基中孵育，诱导间充质干细胞分泌装载柴胡皂苷d的细胞外囊泡；

6、将孵育后的培养上清液进行差速离心，收集沉淀物，即得。

7、进一步地，所述含柴胡皂苷d的培养基中柴胡皂苷d的浓度为9.5μm~10.5μm。

8、进一步地，所述含柴胡皂苷d的培养基以α-mem培养基为基础培养基，血清为无外泌体血清。

9、进一步地，所述孵育的时间为22h~26h。

10、进一步地，所述差速离心为：700g~900g离心10min，获得离心上清液，再将离心上清液于4℃、16000g~17000g离心30min。

11、进一步地，所述间充质干细胞为传代至第3代-第10代的人脐带间充质干细胞。

12、本发明采用细胞外囊泡对ssd进行包载，不仅实现了ssd的高效装载与稳定递送，更产生了协同增效作用，具体而言：细胞外囊泡与ssd二者联合，一方面显著降低了游离ssd的血管刺激性，另一方面综合了细胞外囊泡自身的治疗活性与ssd的药理效应，从而在减毒的同时协同增强整体疗效。

13、本发明第二方面提供了一种上述所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡在制备治疗代谢相关脂肪性肝病的药物中的应用。

14、本发明第三方面提供了一种治疗代谢相关脂肪性肝病的药物，所述药物以上述所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡为有效活性成分。

15、进一步地，所述药物由装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡和生理盐水组成。

16、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

17、本发明通过将间充质干细胞置于含柴胡皂苷d的培养基中孵育，诱导细胞分泌装载柴胡皂苷d的细胞外囊泡，然后将培养上清液差速离心后，获得了一种装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡（ssd-evs）。此囊泡通过包封高度疏水性的ssd分子，有效屏蔽了游离药物与血管内皮的直接接触，完全消除了游离ssd引发的小鼠尾静脉严重血管扭曲和损伤等副作用，显著提升了给药安全性；同时保留并增强了ssd向病理肝脏的趋向性，并能够被肝脏内活化的巨噬细胞特异性内吞，实现精准靶向递送。在作用机制上，ssd-evs内化入巨噬细胞后，可强效抑制强效抑制关键信号转导及转录激活蛋白3（stat3）的过度磷酸化激活，进而下调il-6、tnf-α等促炎因子的表达，有效打断肝脏炎症循环；同时显著改善肝脏脂肪变性，减少脂滴面积和肝脏重量，降低肝损伤标志物alt/ast水平，重塑肝脏脂质代谢基因谱。此外，在整体代谢层面，ssd-evs还能有效降低血清总胆固醇和甘油三酯水平，控制体重过度增长，并改善糖耐量异常。综上所述，本发明提供的ssd-evs兼具高安全性、精准靶向性和多途径协同治疗优势，可通过抗炎、调脂、保肝的多重机制发挥对代谢相关脂肪性肝病的治疗作用，具有良好的药物开发前景。

1.一种装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡，其特征在于，所述装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡由间充质干细胞细胞外囊泡和柴胡皂苷d组成，间充质干细胞细胞外囊泡内负载柴胡皂苷d。

2.根据权利要求1所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡，其特征在于，所述装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡具有杯状双层膜结构，粒径为100nm~1000nm。

3.根据权利要求1所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡，其特征在于，所述装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡是由以下步骤制备得到的：

4.根据权利要求3所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡，其特征在于，所述含柴胡皂苷d的培养基中柴胡皂苷d的浓度为9.5μm~10.5μm。

5.根据权利要求4所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡，其特征在于，所述含柴胡皂苷d的培养基以α-mem培养基为基础培养基，血清为无外泌体血清。

6.根据权利要求3所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡，其特征在于，所述孵育的时间为22h~26h。

7.根据权利要求3所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡，其特征在于，所述差速离心为：700g~900g离心10min，获得离心上清液，再将离心上清液于4℃、16000g~17000g离心30min。

8.根据权利要求1所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡，其特征在于，所述间充质干细胞为传代至第3代-第10代的人脐带间充质干细胞。

9.一种权利要求1~8任一项所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡在制备治疗代谢相关脂肪性肝病的药物中的应用。

10.一种治疗代谢相关脂肪性肝病的药物，其特征在于，所述药物以权利要求1~8任一项所述的装载柴胡皂苷d的间充质干细胞细胞外囊泡为有效活性成分。