NCK手性拆分小分子作为BAD/14-3-3ζ双靶点抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用

本技术属于药物制备，尤其涉及一种nck手性拆分小分子作为bad/14-3-3ζ双靶点抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

1、bcl-2（b细胞淋巴瘤2）蛋白家族是调控细胞内线粒体途径凋亡的核心因子，直接决定细胞的存活或死亡命运。在该家族中，bh3-only蛋白作为关键的促凋亡调控因子，在响应多种细胞应激信号时启动凋亡程序。bcl2相关细胞死亡激动剂（bad，又称bcl2l8）是首个被鉴定为与bcl-2/bcl-xl相互作用的促凋亡蛋白，其通过拮抗抗凋亡bcl-2家族成员的功能来促进细胞凋亡。

2、bad的促凋亡活性受到丝氨酸磷酸化和去磷酸化事件的严格调控。三个保守的丝氨酸残基——ser75、ser99和ser118——是共同抑制bad功能的主要磷酸化位点。其中，ser99位点的磷酸化创造了14-3-3支架蛋白的主要对接位点，特别是14-3-3ζ亚型，其以最高亲和力结合磷酸化后的bad，将bad隔离在细胞质中，从而抑制其促死亡功能。ser99突变为丙氨酸（s99a）会完全消除14-3-3结合，表明围绕磷酸化ser99的结构域是主要的14-3-3结合位点。致癌信号通路（如pi3k/akt和ras/mapk通路）的异常激活驱动bad在ser99和ser75位点的组成性磷酸化，使肿瘤细胞对凋亡刺激产生抗性。升高的磷酸化bad（p-bad）在多种人类癌症中被检测到，其丰度常与侵袭性疾病表型、化疗耐药和不良临床预后相关。

3、此前研究中，已经通过大规模虚拟筛选鉴定了靶向bad ser99磷酸化的小分子抑制剂npb，并在此基础上通过药物化学优化获得了衍生物nck。nck保留了与bad的稳健结合亲和力，同时显著改善了水溶性、降低了聚集倾向并增强了口服生物利用度。然而，现有技术仍存在以下关键不足：（1）所有前期研究均采用nck的消旋混合物，未进行手性拆分或立体化学表征；（2）消旋nck获得的生物活性数据代表两种不同分子的复合反应，无法得出关于构效关系的确定性结论；（3）无法排除劣映体产生拮抗活性或脱靶效应的可能性，这些效应可能降低治疗指数；（4）尚不清楚哪种对映异构体是主要的药效贡献者，以及各对映体是否对14-3-3ζ靶点具有选择性结合差异。上述不足严重制约了该类化合物的进一步开发与临床应用转化。因此，本领域亟需对nck对映异构体进行拆分并系统评估其各自的生物活性、靶点选择性及药效学特征，以明确优势对映体并指导后续药物研发。

技术实现思路

1、本技术的目的在于提供一种nck手性拆分小分子作为bad/14-3-3ζ双靶点抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用，旨在解决现有技术中暂无结构明确、活性更高、安全性更好的bad/14-3-3ζ双靶点抑制剂以用于制备抗肿瘤药物的问题。

2、为实现上述申请目的，本技术采用的技术方案如下：

3、第一方面，本技术提供化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚及其药学上可接受的盐在制备bad/14-3-3ζ双靶点抑制剂中的应用。

4、在一些实施例中，bad/14-3-3ζ双靶点抑制剂通过破坏bad蛋白与14-3-3ζ蛋白之间的蛋白-蛋白相互作用来抑制bad/14-3-3ζ双靶点。

5、第二方面，本技术提供化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。

6、在一些实施例中，抗肿瘤药物为bad/14-3-3ζ信号通路异常活化相关肿瘤的治疗药物。

7、在一些实施例中，肿瘤选自三阴性乳腺癌、胰腺导管腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌或宫颈癌。

8、在一些实施例中，抗肿瘤药物通过以下机制发挥抗肿瘤作用：化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚同时直接结合bad蛋白和14-3-3ζ蛋白，破坏bad/14-3-3ζ蛋白-蛋白相互作用，释放bad并促进其去磷酸化，从而激活线粒体凋亡通路。

9、第三方面，本技术提供化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚及其药学上可接受的盐在制备用于降低bad蛋白丝氨酸99位点磷酸化水平的药物中的应用。

10、在一些实施例中，(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚通过抑制bad蛋白ser99位点的磷酸化，解除14-3-3ζ对bad的隔离，恢复bad的促凋亡活性。

11、第四方面，本技术提供一种药物组合物，包含上述的化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

12、第五方面，本技术提供一种化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚的制备方法，包括以下步骤：将消旋nck通过超临界流体色谱在手性柱上进行拆分，获得光学纯的化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚，其中，所述手性柱为chiralpak ad柱；所述超临界流体色谱的流动相为co2与乙醇的混合流动相，其中乙醇中含有0.2%-0.3%nh3的甲醇溶液，co2与乙醇的体积比为（50-55）：（45-50）。

13、本技术第一方面提供的通过提供手性纯的(s)-对映异构体(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚（nck-s）在制备bad/14-3-3ζ双靶点抑制剂中的应用，首次从消旋nck中拆分并鉴定出药效异构体，建立了明确的立体化学与活性之间的构效关系，其抗肿瘤活性显著优于nck-r及消旋混合物；在机制层面，nck-s能够同时直接结合bad和14-3-3ζ两个结构不相关的蛋白靶点，通过破坏bad/14-3-3ζ蛋白-蛋白相互作用释放bad并促进其去磷酸化，从而激活线粒体凋亡通路，nck-s是首个明确结构的手性纯bad/14-3-3ζ双靶点抑制剂，克服了消旋混合物无法确定药效异构体的技术缺陷，同时，其具有的双靶点机制赋予其更持久的抗肿瘤效果；有利于广泛应用。

14、本技术第二方面提供的化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用；化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚通过抑制bad蛋白ser99位点的磷酸化，解除14-3-3ζ对bad的隔离，恢复bad的促凋亡活性，进而激活线粒体凋亡通路，诱导肿瘤细胞凋亡，提供的化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚在三阴性乳腺癌和胰腺导管腺癌的体外和体内模型中均表现出最强的抗增殖和促凋亡效果，具有优异的抗肿瘤作用。

15、本技术第三方面提供的化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚及其药学上可接受的盐在制备用于降低bad蛋白丝氨酸99位点磷酸化水平的药物中的应用。bad的ser99位点磷酸化，为14-3-3ζ支架蛋白提供了主要对接位点，14-3-3ζ以最高亲和力结合磷酸化后的bad，将其隔离在细胞质中；nck-s通过抑制ser99位点的磷酸化，阻断14-3-3ζ对bad的隔离；精准调控了bad的活性，具有高度特异性。

16、本技术第四方面提供的药物组合物，包含nck-s或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。能够确保nck-s在体内能够有效递送至靶部位，发挥其bad/14-3-3ζ双靶点抑制活性，有利于广泛使用。

17、本技术第五方面提供的化合物(s)-2-[(s)-[4-(2,3-二氯苯基)哌嗪-1-基]-(3-吡啶基)甲基]苯酚的制备方法简单方便，有利于广泛应用。