一种靶向载药纳米颗粒及其制备方法与应用

本发明涉及生物医药，具体涉及一种靶向载药纳米颗粒及其制备方法与应用。

背景技术：

1、深静脉血栓（dvt）的传统治疗手段主要依赖重组组织型纤溶酶原激活剂（rtpa），rtpa能够有效激活纤溶酶原转化为纤溶酶降解纤维蛋白。然而，rtpa作为游离药物，其血浆半衰期极短，且缺乏对血栓病灶的特异性靶向能力。临床上，为实现局部的有效溶栓，通常需要对dvt患者进行大剂量rtpa静脉输注，但是，大剂量rtpa静脉输注无法保证血栓完全溶解，还可能引发颅内出血等严重的全身性出血并发症。

2、此外，rtpa的疗效还受困于两大物理与生物学屏障：一是血栓内部致密的交联纤维蛋白网络构成了显著的物理屏障，严重阻碍大分子rtpa向血栓深部渗透，导致其仅作用于血栓表层；二是血栓微环境中炎症因子驱动的纤溶酶原激活物抑制剂-1（pai-1）显著上调，pai-1直接抑制rtpa激活的纤溶酶活性，形成“炎症-纤溶抵抗”恶性循环，进一步削弱rtpa的溶栓效率。

3、目前虽有部分纳米递送系统尝试负载rtpa以延长其循环时间，但多数仍缺乏主动靶向能力，且未能同时解决致密纤维蛋白网络的物理渗透屏障和微环境中的纤溶抑制问题。单纯延长循环时间而不突破屏障，仍难以实现深层、高效的溶栓效果。因此，本领域仍需构建一种不仅能靶向富集rtpa，还能通过物理手段主动破坏纤维蛋白屏障、同时下调局部pai-1以解除纤溶抑制的协同递送系统。

技术实现思路

1、本发明所要解决的问题在于：如何提高rtpa对深静脉血栓的靶向性和溶栓能力。

2、为解决上述技术问题，本发明第一方面提供一种靶向载药纳米颗粒的制备方法，具体包括以下步骤：

3、s1：将二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和靶向肽溶解于有机溶剂中，去除有机溶剂获得脂质薄膜，加入水相缓冲液，水化所述脂质薄膜，获得脂质悬液；

4、s2：向所述脂质悬液中加入全氟戊烷和重组组织型纤溶酶原激活剂，超声乳化，获得乳化液；

5、s3：向所述乳化液中加入载脂蛋白a-i，孵育、过滤、离心，获得靶向载药纳米颗粒。

6、作为优选，所述步骤s1中，所述靶向肽为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-creka肽。

7、作为优选，所述二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和靶向肽的质量比为（2~5）：1:1。

8、作为优选，所述有机溶剂选自三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇中的任意一种或多种。

9、作为优选，所述脂质悬液和所述全氟戊烷的体积比为（80~120）：1。

10、作为优选，所述脂质悬液和所述重组组织型纤溶酶原激活剂的质量比为（150~220）：1。

11、作为优选，所述二棕榈酰磷脂酰胆碱和所述载脂蛋白a-ⅰ的质量比为（8~12）：1。

12、本发明第二方面提供一种靶向载药纳米颗粒，所述靶向载药纳米颗粒采用第一方面所述制备方法制得。

13、本发明第三方面提供一种第二方面所述靶向载药纳米颗粒的应用，所述应用包括将所述靶向载药纳米颗粒用于血栓治疗药物的制备。

14、与现有技术相比，本发明具备的有益效果：

15、1.采用本发明提供的制备方法制得的纳米颗粒，可利用creka肽实现纳米颗粒对血栓的靶向富集，可有效提高血栓处的局部药物浓度，降低rtpa的全身用药剂量，从而降低rtpa的出血风险，同时，该纳米颗粒可利用超声，触发全氟戊烷相变，产生空化微射流，从而物理性地在致密纤维蛋白网络中制造孔隙，暴露血栓中隐蔽的纤维蛋白结合位点，为大分子rtpa向血栓深部渗透打开通道，实现rtpa的瞬时局部高浓度释放，显著提高溶栓效率；

16、2.本发明提供的靶向载药纳米颗粒借助rhdl核心组分apo-a1的内源性抗炎活性，可有效下调血栓局部pai-1表达，解除其对rtpa的纤溶抑制作用，恢复纤溶敏感性；

17、3.本发明提供的载药纳米颗粒具有均一的粒径和较高的包封率、载药量，体外释放呈缓释特征，可有效延长rtpa的半衰期。

1.一种靶向载药纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中，所述靶向肽为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-creka肽。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和靶向肽的质量比为（2~5）：1:1。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂选自三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇中的任意一种或多种。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述脂质悬液和所述全氟戊烷的体积比为（80~120）：1。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述脂质悬液和所述重组组织型纤溶酶原激活剂的质量比为（150~220）：1。

7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述二棕榈酰磷脂酰胆碱和所述载脂蛋白a-ⅰ的质量比为（8~12）：1。

8.一种靶向载药纳米颗粒，其特征在于，所述靶向载药纳米颗粒采用权利要求1~7任一所述制备方法制得。

9.一种权利要求8所述靶向载药纳米颗粒的应用，其特征在于，所述应用包括将所述靶向载药纳米颗粒用于血栓治疗药物的制备。