一种与母乳脂肪高度相似的UPU结构脂组合物及油脂组合物的制作方法

一种与母乳脂肪高度相似的upu结构脂组合物及油脂组合物
技术领域
1.本发明涉及油脂组合物领域，具体涉及一种与母乳脂肪高度相似的upu结构脂组合物及油脂组合物。


背景技术：

2.棕榈酸是母乳脂肪中主要为婴儿提供能量的脂肪酸。与脂肪酸相比，母乳脂肪中的甘油三酯对婴幼儿的生长发育有更直接的影响作用，加强对母乳脂肪甘油三酯的相关研究十分必要。
3.棕榈酸在母乳甘油三酯中的位置分布影响棕榈酸在婴儿胃肠道的消化吸收，大量研究表明当棕榈酸在sn-2位，且sn-1/3位连接不饱和脂肪酸(ufas)时(如1,3-二油酸-2-棕榈酸o-p-o)能减少便秘和婴儿啼哭、提高钙的吸收。
4.母乳中有大量的甘油三酯(约60％)含有棕榈酸，其中的1,3-二不饱和脂肪酸-2-棕榈酸甘油三酯(upu)是其中含量最丰富的甘油三酯类型，由10余种不同的甘油三酯组成(o-p-l，o-p-o，l-p-l，o-p-po，o-p-ln，l-p-po，l-p-ln，eo-p-o，dha-p-o，dha-p-l，di-p-o，da-p-l)。目前对于母乳甘油三酯的模拟主要考虑1,3-二油酸-2-棕榈酸(o-p-o)和1-油酸-2-棕榈酸-3-亚油酸(o-p-l)两种，但母乳中的upu含量更高，且其中长链多不饱和脂肪酸与棕榈酸结合形成的甘油三酯具有更高的消化吸收功能和促进肠道微生物健康的作用。
5.当无法实现母乳喂养时，婴儿配方奶粉是母乳的替代品，市面上的婴儿配方奶粉一般通过植物油、牛乳或者羊乳中的一种或者几种调配而成，这些油基调配的婴幼儿产品脂肪的棕榈酸多分布在sn-1和sn-3位，油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸分布在sn-2上。实践证明长期给婴幼儿喂养这类配方奶粉会造成婴幼儿矿物质流失，此外还容易造成婴儿便秘，腹痛和肠道堵塞等情况，不利于婴儿的成长。虽然国内外奶粉产品开始关注结构甘油三酯的功能且越来越多的产品添加结构脂o-p-o，但是根据中国母乳脂肪的特点，除o-p-o以外，其他的upu型甘油三酯在总甘油三酯中的比重也非常大。
6.大量研究证实，母乳中的长链多不饱和脂肪酸可以直接或间接地影响肠道微生态，改变机体肠道菌群的数量和组成、肠道代谢进程，并影响肠道粘膜屏障生理特性和功能。ω-3型多不饱和脂肪酸包括α-亚麻酸(ala)、二十碳五烯酸(epa)、二十二碳五烯酸(dpa)、二十二碳六烯酸(dha)，ω-6型多不饱和脂肪酸包括亚油酸(l)、花生四烯酸(ara)。ω-3型多不饱和脂肪酸已被证实能够影响小肠上皮细胞生理特性，加强小肠对外源性病原菌和内部炎症的抵御能力，从而提高肠道上皮组织的屏障功能。现有的婴幼儿配方奶粉考虑了1,3-二油酸-2-棕榈酸(opo)这种结构的甘油三酯含量以及多不饱和脂肪酸的添加情况，但是没有涉及帮助婴幼儿肠道菌群定植的甘油三酯结构，因此对婴幼儿肠道微生态的构建作用不大。


技术实现要素：

7.为了解决上述技术问题，本发明对母乳中的upu型甘油三酯进行了大量的研究，意
外发现了其实际上由几种不同饱和度的upu型甘油三酯组成，且各饱和度的upu型甘油三酯的配比对其效果具有较为关键的作用。本发明进一步优化了各饱和度的upu型甘油三酯的配比后，提供了一种upu结构脂组合物及油脂组合物。
8.具体而言，本发明首先提供一种upu结构脂组合物，其包括如下质量百分比的组分：
9.21.23～68.64wt％的2u型upu，22.51～54.89wt％的3u型upu，1.25～33.32wt％的4u型upu，以及0.44～9.91wt％的mu型upu；
10.其中，2u型upu指不饱和度为2的upu型甘油三酯，3u型upu指不饱和度为3的upu型甘油三酯，4u型upu指不饱和度为4的upu型甘油三酯，mu型upu指不饱和度大于4的upu型甘油三酯。
11.在对大量母乳样本进行研究和分析后，发明人发现，按上述方式配置的upu结构脂组合物在组分及功能上与母乳更为接近。
12.作为优选，其中，以upu结构脂组合物的总质量为基准，
13.4u型upu的占比大于等于1.25wt％，mu型upu的占比大于等于0.8wt％；或者，4u型upu和mu型upu的总占比为2～25wt％；
14.2u型upu和3u型upu的总占比大于等于75wt％。
15.本发明意外发现，当upu结构脂组合物配方如上时，组合物在促进脂肪消化吸收和肠道健康等方面的效果尤为突出。
16.为了进一步提升upu结构脂组合物在促进脂肪消化吸收和肠道健康等方面的效果，更优选所述的upu结构脂组合物包括如下质量百分比的组分：40～52wt％的2u型upu，35～47wt％的3u型upu，1.25～20wt％的4u型upu，以及0.8～7wt％的mu型upu。
17.进一步优选的，所述的upu结构脂组合物包括如下质量百分比的组分：
18.40～45wt％的2u型upu，35～40wt％的3u型upu，15～20wt％的4u型upu，以及2～5wt％的mu型upu。
19.同时，本发明进一步对影响组合物效果的其他因素进行了探究与优化，得到如下技术方案。
20.更优选地，所述upu型甘油三酯上所连接的不饱和脂肪酸选自油酸(o，18:0)、亚油酸(l，18:2)、亚麻酸(ln，18:3)、棕榈油酸(po，16:1)、二十碳烯酸(eo，20:1)，二十二碳六烯酸(dha，22:6)，二十二碳二烯酸(di，22:2)，二十二碳一烯酸(da，22:1)中的一种或多种。
21.进一步优选地，所述upu型甘油三酯选自o-p-l、o-p-o、l-p-l、o-p-po、o-p-ln、l-p-po、l-p-ln、eo-p-o、dha-p-o、dha-p-l、di-p-o、da-p-l中的一种或多种。
22.本领域人员能够理解上述甘油三酯具体指代，具体的，以“a-b-c”的形式表示sn-1位上连接有a、sn-2位上连接有b、sn-3位上连接有c的甘油三酯，其中，sn-1和sn-3位视为一致；o指代油酸，p指代棕榈酸，l指代亚油酸，po指代棕榈油酸，ln指代亚麻酸，eo指代二十碳烯酸，dha指代二十二碳六烯酸，di指代二十二碳二烯酸，da指代二十二碳一烯酸。
23.在一个典型的实施例中，油脂组合物中甘油三酯中的不同类型的upu结构包括，2u型upu：o-p-o、o-p-po、eo-p-o，3u型upu：o-p-l、l-p-po、di-p-o、da-p-l，4u型upu：l-p-l、o-p-ln，mu型upu：l-p-ln、dha-p-o、dha-p-l。
24.在针对母乳样本的研究中，本发明还发现在2u型～mu型upu中存在如下的优选体
系，并基于改善组合物功能的目的对如下的体系进行了进一步优化，得到了更为优选的方案。
25.优选地，所述2u型upu包括质量比为(15～60)：(0.2～15)：(0.02～15.6)的o-p-o、o-p-po和eo-p-o；更优选其质量比为(30～52)：(4～39)：(0.08～6.7)。
26.优选地，所述3u型upu包括质量比为(15～55)：(0.2～7)：(0.01～2.5)：(0.01～2.5)的o-p-l、l-p-po、di-p-o和da-p-l；更优选其质量比为(30～46)：(0.5～2.8)：(0.01～0.9)：(0.01～0.2)。
27.优选地，所述4u型upu包括质量比为(0.5～25)：(0.2～13)的l-p-l和o-p-ln；更优选其质量比为(0.5～13)：(0.6～6)。
28.优选地，所述mu型upu包括质量比为(0.3～10)：(0.01～3.5)：(0.01～1)的l-p-ln、dha-p-o和dha-p-l；更优选其质量比为(0.8～4.5)：(0.01～1.8)：(0.01～0.6)。
29.作为本发明的一种优选方案，所述upu结构脂组合物包括如下重量份组分：
30.5～30份o-p-l，5～35份o-p-o，0.09～10份l-p-l，0.06～4份o-p-po，0.1～4份o-p-ln，0.05～2份l-p-po，0.1～3份l-p-ln，0.02～5份eo-p-o，0.01～1.5份dha-p-o，0.01～0.4份dha-p-l，0.01～0.7份di-p-o，0.01～0.6份da-p-l；
31.更优选地，其包括如下重量份组分：
32.18～28份o-p-l，18～31份o-p-o，0.3～8份l-p-l，0.2～2.5份o-p-po，0.4～3.5份o-p-ln，0.3～1.8份l-p-po，0.4～2.5份l-p-ln，0.05～4.5份eo-p-o，0.01～1.5份dha-p-o，0.01～0.4份dha-p-l，0.01～0.6份di-p-o，0.01～0.5份da-p-l。
33.当所述upu结构脂组合物的配方如上时，在肠道健康、促进脂肪和矿物质吸收、促进发育等方面的效果也达到最优。
34.本领域人员依照常识可对上述优选方案进行组合，得到本发明中upu结构脂组合物的较佳实施例。
35.本发明进一步提供一种油脂组合物，其含有所述的upu结构脂组合物。
36.优选地，以所述油脂组合物的总质量为基准，所述upu结构脂组合物的含量为15％～60％，更优选为35％～60％，进一步优选为50％～60％。
37.在进行具体实施时，本领域人员可根据上述技术方案而得到相应的upu结构脂组合物及油脂组合物。具体的，可以按照本发明配方配置相应的原料纯品而得到upu结构脂组合物及油脂组合物，也可以通过对食用油(包括动物油和/或植物油)的酶法酯交换和调配而制备得到upu结构脂组合物及油脂组合物，其所得到的组合物产品均属于本发明的保护范围。
38.作为优选方案，所述油脂组合物的原料为一种或多种可用于婴幼儿配方食品的天然动植物油脂、食用油脂制品、营养强化剂油脂，包括但不限于牛乳脂、羊乳脂、稀奶油、无水奶油、棕榈仁油、棕榈油、玉米油、亚麻籽油、花生油、大豆油、椰子油、菜籽油、葵花籽油、鱼油、藻油中的一种或多种。
39.本发明进一步提供一种食品或药品，其含有所述的upu结构脂组合物或所述的油脂组合物。
40.优选所述食品或药品为婴幼儿食品或婴幼儿药品。
41.更优选地，所述食品为婴儿配方乳粉。
42.本发明进一步提供所述的upu结构脂组合物或所述的油脂组合物在制备食品或药品中的应用。
43.优选地，所述食品或药品为婴幼儿食品或婴幼儿药品；更优选地，所述食品为婴儿配方乳粉。
44.优选地，所述食品或药品具有以下至少一种功能：
45.(1)促进脂肪消化和吸收；(2)减少便秘和排便困难；(3)降低粪便硬度；(4)提高钙的吸收；(5)改善肠道微生态环境；(6)提高肠道粘膜的屏障功能；(7)预防肠道炎性疾病；(8)促进神经系统的发育；(9)促进免疫系统的发育。
46.本发明中所提到的“upu型甘油三酯”指1,3-二不饱和脂肪酸-2-棕榈酸甘油三酯。
47.基于上述技术方案，本发明的有益效果如下：
48.与现有的母乳脂肪替代脂相比，本发明中的upu结构脂组合物和油脂组合物的组成和结构与母乳脂肪高度相似(相似度达到90％以上)。满足婴幼儿对脂质的能量要求，更符合婴幼儿特殊人群生长需求。同时组合物中脂肪酸组成配比合理，sn-2位脂肪酸中p的比例与母乳脂肪比例高度接近。
49.与现有的母乳脂肪替代脂相比，本发明中的upu结构脂组合物还包括含长碳链多不饱和脂肪酸(如dha、ln等)的甘油三酯，有益于婴幼儿神经系统、免疫调节等的发育。
50.与现有的母乳脂肪替代脂相比，本发明中的upu结构脂组合物和油脂组合物不仅可以减少便秘和排便困难、降低粪便硬度，并提高钙等矿物质的吸收；同时组合物中所含的长链多不饱和脂肪酸的甘油三酯的合理配比，通过改善肠道菌群中有益菌群的数量，能够促进婴幼儿肠道内有益微生物的定植，有利于有益微生物的种类和数量的增加，能够降低致病菌在婴儿体内的生长，进而可以大幅改善肠道微生态环境，诱导肠道微生态平衡，提高肠道粘膜的屏障功能，预防肠道炎性疾病的发病率，促进肠道健康和器官生长发育。
附图说明
51.图1为母乳、市售配方奶粉及常见植物油中不同饱和度的upu型甘油三酯比较结果。
52.图2为实验组和对照组在体外模拟消化胃(a)和肠(b)体系中的脂肪酸释放率曲线。
53.图3为小鼠脂肪的吸收差异。
54.图4为小鼠粪便中有机酸的含量，其所涉及的有机酸包括乙酸(a)、丙酸(b)、异丁酸(c)、正丁酸(d)、异戊酸(e)、正戊酸(f)。
55.图5为实验脂质组合物和对照脂质组合物对iec-6细胞中tnf-α(a)、il-1β(b)、和il-6(c)基因mrna表达水平的影响。
56.在图4～5中，数据柱形图标注
*
表示差异显著(p《0.05)，
**
表示差异极显著(p《0.01)。
具体实施方式
57.以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
58.实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，
或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
59.以下实施例虽然均以油脂组合物的方式提供，但本领域人员容易从其中确定相应的有关upu结构脂组合物的具体实施方式，其也属于本发明的保护范围。
60.在实施例所提供的油脂组合物中，除upu组合物外，其他非upu型甘油三酯的成分包括：1)uuu型甘油三酯，主要为ooo、ool、oll、lll等；2)usu型(除upu)甘油三酯，主要为oso、omo、olao、osl、oml、olal等；3)uss型甘油三酯，主要为opp、ops、opm、opla、lpp、lps、lpm等；4)sss型型甘油三酯，主要为ppp、pps、ppm等。此类甘油三酯类型不产生本发明所提供的upu型甘油三酯的功效。
61.实施例1
62.本实施例提供一种油脂组合物，其中，相对于油脂组合物的总质量，各组分的组成如下：
63.[0064][0065]
实施例2
[0066]
本实施例提供一种油脂组合物，其中，相对于油脂组合物的总质量，各组分的组成如下：
[0067]
[0068][0069]
实施例3
[0070]
本实施例提供一种油脂组合物，其中，相对于油脂组合物的总质量，各组分的组成如下：
[0071]
[0072][0073]
实施例4
[0074]
本实施例提供一种油脂组合物，其中，相对于油脂组合物的总质量，各组分的组成如下：
[0075]
[0076][0077]
实施例5
[0078]
本实施例提供一种油脂组合物，其中，相对于油脂组合物的总质量，各组分的组成如下：
[0079]
[0080][0081]
对比例1
[0082]
本对比例提供某市售品牌的opo，经检测，其中，相对于油脂组合物的总质量，各组分的组成如下：
[0083][0084]
对比例2
[0085]
本实施例提供一种油脂组合物，其中，相对于油脂组合物的总质量，各组分的组成如下：
[0086]
[0087][0088]
试验例1
[0089]
分析母乳及其他样品中upu型甘油三酯组成：母乳样本来自全国三大地区9个城市共500例，存放于容器后立即带回实验室冷冻在-80℃冰箱直至进一步分析。对其中的母乳脂肪进行提取，并采用液质联用的方法对其中的甘油三酯组成进行鉴定和分析(检测方法参考文章：x.zhang etal.,food chemistry 2019,275,712-720)，检测共分析甘油三酯95种，其中upu型甘油三酯12种，占所有甘油三酯的15-60％。母乳样本的upu型甘油三酯组成如表1所示，其中，相对含量指相对于甘油三酯总量的含量。
[0090]
同时，对市售的婴儿配方奶粉1～3及常见植物油中的upu组成进行检测，与母乳中的upu组分进行对比，结果见图1。其中，奶粉1主要油脂组成为生牛乳和植物油，奶粉2的主要油脂组成为混合植物油，奶粉3的主要油脂组成为植物油与市售opo结构脂，所检测的植物油包括菜籽油、葵花籽油、大豆油及玉米油，其均通过市售途径购买。
[0091]
表1.母乳样本的upu型甘油三酯组合物组成(％)
[0092][0093]
数据为平均值，方差《5％。
[0094]
结果说明：
[0095]
(1)母乳中upu型按不饱和度分为2u、3u、4u和mu形式的甘油三酯。奶粉中不同饱和度的upu型甘油三酯与母乳比较，不饱和度更高的甘油三酯含量明显低于母乳(如图1所示)。母乳中upu型甘油三酯总量约为15％～60％，不同地区的母乳upu型甘油三酯的含量略有差异，可能受到膳食及母乳个体差异的影响，但是各个地区之间的平均值的差异不大。
[0096]
(2)母乳中upu型甘油三酯有12种，含量从高到低分别是o-p-l，o-p-o，l-p-l，o-p-po，o-p-ln，l-p-po，l-p-ln，eo-p-o，dha-p-o，dha-p-l，di-o-p，da-l-p。
[0097]
(3)婴儿配方奶粉和母乳中的upu组成有显著差别，通过添加opo结构脂可增加其中upu的含量，但是与母乳的upu含量仍有较大的差距，婴儿配方奶粉中不含有mu类型的upu，植物油中几乎不含有upu。
[0098]
试验例2
[0099]
体外模拟婴儿胃肠道的脂类消化试验
[0100]
本试验例模拟婴幼儿小肠消化系统，用ph-stat法考察实验组与对照组的脂肪酸释放率。
[0101]
共设置如下组别：
[0102]
对照组：使用对照脂质组合物，经检测，其中，相对于油脂组合物的总质量，各upu组分的组成如下：
[0103][0104][0105]
实验组：具体包括实验组1～7，其中，实验组1中使用对比例1中某市售品牌的opo，实验组2～6中依次使用实施例1～5中的油脂组合物，实验组7中使用对比例2中的油脂组合物。
[0106]
本试验例模拟婴儿胃肠道的脂类消化参数(体外消化模型参考文献：t.yuan etal.,journal of agricultural and food chemistry 2020,68,4187-4195)，在胃部消化30、60、90、120分钟(g30，g60，g90，g120)和小肠消化30，60，90，120分钟(i30，i60，i90，i120)分别取样，利用配备示差检测器的高效液相色谱进行脂类组成分析。脂类组成包括甘油三酯、甘油二酯、甘油单酯及游离脂肪酸。液相检测得到的质量数据根据母乳、婴儿配方奶粉的脂肪酸组成计算出的平均分子质量转换为摩尔数据。瞬时脂肪分解速率根据下式计算：
[0107][0108]
实验组1，实验组2，实验组3，实验组4，实验组5，实验组6，实验组7和对照组在体外模拟消化胃和肠体系中的脂肪酸释放率曲线结果见图2。
[0109]
结果说明：
[0110]
(1)通过本发明中提供的富含upu的油脂组合物制备方法，能够实现upu甘油三酯的组成和结构与母乳脂肪高度相似。
[0111]
(2)本发明中提供的富含upu的油脂组合物在体外模拟婴儿胃肠道的脂类消化试验中，表现出更高的脂肪水解率，因此可以推测该产品具有促进婴幼儿肠道对脂肪的吸收作用。
[0112]
试验例3
[0113]
本试验例以小鼠为实验对象，对实验组和对照组幼鼠粪便软硬程度、排便频率和钙的吸收率进行分析。具体操作如下：
[0114]
取3-4周龄健康雄性c57bl/6j小鼠无特定病原体(spf)级64只，饲养于22～25℃恒定室温，湿度52～56％，光照12h/12h昼夜循环的spf级屏障环境中。所有小鼠自由采食和饮水，给予基础饲料喂养5天，以适应环境。小鼠适应喂养5天后，编号，随机分为8组，每组8只，包括实验组1，实验组2，实验组3，实验组4，实验组5，实验组6，实验组7和对照组。对照组的饲料是由无脂饲料添加对照组的油脂组合物后加工制备而成，其他7组的实验饲料分别是由无脂饲料添加实验组1～7的油脂组合物后加工制备而成，除了脂肪成分不同，各组饲料的其他成分基本相同。
[0115]
实验期间，所有小鼠自由摄食和饮水，隔日观察并记录小鼠的健康状况、摄食量和饮水情况，每周测一次小鼠体重。正式实验喂养时长为12周。对12周时实验组1，实验组2，实验组3，实验组4，实验组5，实验组6，实验组7和对照组幼鼠粪便软硬程度、排便频率和钙的吸收率进行分析，结果如表2所示。
[0116]
表2.小鼠排便频率和粪便软硬度
[0117][0118]
对小鼠粪便中的进行检测，计算钙吸收率，结果如表3所示。
[0119]
表3.小鼠粪便中钙的含量及钙的吸收率
[0120][0121][0122]
表中，字母上标不同代表其具有显著性差异。
[0123]
结果说明：
[0124]
(1)幼鼠食用7个实验组的结构油脂均比对照组排便频率增加，粪便硬度低，饲料中添加合适比例的upu结构油脂组合物，可明显改善幼鼠的粪便硬度和排便频次，因此具有促进肠道中钙质吸收，减少便秘和排便困难的作用。
[0125]
(2)实验组2中，幼鼠食用含本发明中提供的富含upu结构脂组合物，钙的吸收率增高，且效果显著(p《0.05)。由此证明在饲料中添加合适比例的本发明所涉及的upu结构脂组合物，具有比传统opo结构更好的钙等矿物质元素的吸收效果。
[0126]
试验例4
[0127]
本试验例以小鼠为实验对象，考察了不同实验组和对照组的饲料对幼鼠肠道内脂肪的消化率的影响。其中，实验组和对照组的设置与试验例2相同。
[0128]
计算脂肪消化率的公式为：
[0129]
脂肪消化率(％)＝(样品中总脂肪含量-肠胃中脂肪含量)/样品中脂肪的含量*100％
[0130]
小鼠脂肪的吸收差异见图3。
[0131]
结果说明：
[0132]
实验组的幼鼠在灌喂0.5h后，其肠胃脂肪消化率与对照组接近，为15％左右，在灌喂1h、2h、4h后，实验组的消化率逐渐高于对照组，其中实验组2的消化率最高。实验组的脂肪消化率2h前斜率偏大，2h后趋于平缓。对照组的脂肪消化率最为平缓。实验组2在4h后的最终消化率为90.38％。这一结果表明添加合适比例的本发明所涉及的upu结构油脂组合物可以促进婴幼儿消化吸收，促进婴幼儿的脂肪酸利用率，保证婴幼儿的健康生长。
[0133]
试验例5
[0134]
本试验例以小鼠为实验对象，对饲养12周后实验组1～3和对照组幼鼠的排泄物微生物菌群种类和数量进行分析。其中，实验组1～3和对照组的设置与试验例2中的实验组1～3和对照组的设置相同。具体操作如下：
[0135]
使用dna提取试剂盒从样本中提取dna，使用equalbit dsdna hs assay kit检测dna浓度。以20-30ng dna为模板，使用一系列pcr引物扩增原核生物16srdna上包括v3及v4的2个高度可变区。然后再通过pcr向16s rdna的pcr产物末端加上带有index的接头，以便进行ngs测序，用磁珠进行文库纯化后通过酶标仪检测浓度和琼脂糖凝胶电泳检测片段大小。通过酶标仪检测文库浓度。将文库定量到10nm，按illumina miseq/novaseq(illumina,san diego,ca,usa)仪器使用说明书进行pe250/fe300双端测序，由miseq/novaseq自带的miseq control software(mcs)/novaseq control software(ncs)读取序列信息。
[0136]
双端测序得到的正反向reads首先进行两两拼接，过滤拼接结果中含有n的序列，保留序列长度大于200bp的序列。经过质量过滤，去除嵌合体序列，最终得到的序列用于otu聚类，使用vsearch(1.9.6)进行序列聚类(序列相似性设为97％)，比对的16srrna参考数据库是silva 132。然后利用rdp classifier(ribosomal database program)贝叶斯算法对otu的代表性序列进行物种分类学分析，并在不同物种分类水平下统计每个样本的群落组成。
[0137]
基于otu得到分析结果，采用对样本序列进行随机抽取的方法，分别计算shannon、chao1等α多样性指数反映群落的物种丰度和多样性，通过(un)weighted unifrac分析比较
样本间是否有显著的微生物群落差异。
[0138]
结果见表4。
[0139]
表4.小鼠粪便细菌计数(菌落数转换为lg值，mean
±
sd)
[0140][0141]
表中，字母上标不同代表其具有显著性差异。
[0142]
结果说明：
[0143]
幼鼠食用含本发明中提供的富含upu的油脂组合物，表现出增加肠道有益菌和减少肠道有害菌的趋势，当达到一定合适比例的时候(实验组2)，表现趋势显著(p《0.05)。
[0144]
试验例6：
[0145]
本试验例以小鼠为实验对象，对饲养12周后实验组1～3和对照组幼鼠的排泄物中微生物代谢产物短链脂肪酸的含量进行分析，短链脂肪酸检测指标为乙酸、丙酸、异丁酸、正丁酸、异戊酸、正戊酸六种。其中，实验组和对照组的设置与试验例2相同。使用乙醚萃取法提取小鼠粪便中的短链脂肪酸通过高效液相色谱测定六种短链脂肪酸的含量，结果见图4。
[0146]
结果说明：
[0147]
相较于对照组，实验组明显提高了小鼠粪便中短链脂肪酸的含量。由此证明本发明中提供的upu结构脂组合物能促进肠道有益微生物、防止病原菌的生长，促进肠道动力和肠道上皮细胞增殖，预防结肠直肠炎症，促进肠道健康。
[0148]
试验例7：
[0149]
本试验例以大鼠肠上皮细胞系iec-6细胞为实验模型，采用实时定量pcr的方法分析实验组和对照组细胞中肿瘤坏死因子-α(tnf-α)、白介素-1β(il-1β)和白介素-6(il-6)的基因mrna表达水平的差异。
[0150]
该实施案例共分为6个处理，分别为空白组(加入等体积的dmso)、脂多糖组(加入等体积的dmso；脂多糖，lps，大肠杆菌血清型o55:b5)、实验组1、实验组2、实验组3、对照组。其中，实验组和对照组的设置为试验例2中的实验组1、实验组2、实验组3、对照组的脂质组合物 lps。
[0151]
脂质组合物用二甲亚砜(dmso)溶解为200μg/l的溶液。
[0152]
参照陈祥贵等(陈祥贵,芮光伟,任川洪,等.iec-6细胞的培养鉴定和生长特性研究[j].西华大学学报(自然科学版),2003,22(1):41-44.)的方法对iec-6细胞进行培养。iec-6细胞培养后，以起始细胞密度3
×
105个/孔接种于细胞培养6孔板中，每个处理重复3次，每孔1个重复。接种8h后，实验组和对照组分别加入实验脂质组合物溶液1、2、3和对照脂质组合物溶液，使加入的脂质组合物的最终浓度为100μg/l，空白组和脂多糖组加入等体积
的dmso。预处理细胞48h。向脂多糖组、实验组1、实验组2、实验组3和对照组中加入lps，使lps的最终浓度为1μg/ml。空白组加入等体积的dmso。处理3h后，收集细胞。
[0153]
对收集到的细胞提取总rna并进行反转录。
[0154]
使用pcr仪进行实时定量pcr，mrna相对表达量采用pfaffl的分析方法(pfaffl.a new mathematical model for relative quantification in real-time rt-pcr[j].nucleic acids research,2001,9(29):2002-2007.)进行。
[0155]
实验脂质组合物和对照脂质组合物对iec-6细胞中tnf-α、il-1β、和il-6基因mrna表达水平的影响结果见图5。
[0156]
结果说明：
[0157]
(1)经lps刺激后，tnf-α、il-1β、和il-6基因mrna表达水平均极显著升高，表示细胞处于炎症反应状态。
[0158]
(2)幼鼠食用含本发明中提供的富含upu结构脂组合物后，表现出削弱了细胞内lps诱导下的tnf-α、il-1β、和il-6基因mrna水平上的趋势，当达到一定合适比例的时候(实验组2)，表现趋势显著(p《0.05)。由此证明本发明中涉及的富含upu结构脂组合物在预防和修复肠道炎症的功能上表现良好。
[0159]
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。