梨发酵物及其制备方法和应用与流程

1.本发明属于梨发酵领域，具体涉及一种梨发酵物的制备方法和一种梨发酵物以及所述梨发酵物在饲料领域和饵料领域中的应用。


背景技术：

2.梨含有丰富的糖，利用梨果制备的饲料，广泛应用在家禽家畜、宠物和水产品的饲养中。随着梨产量的提高，残次梨和梨的深加工过程中产生的梨渣的量也逐步增加，在考虑节约资源，有效利用残次梨和梨渣的前提下，农户基本选择将梨剁碎后添加到日粮中直接饲喂，加工厂选择将梨渣直接烘干。
3.随着生物技术的发展，人们开始对梨果或梨渣进行生物处理，比如与其他原料混合后使用微生物或者酶制剂处理，防止霉变和腐败，改善适口性，提高营养成分的转化与吸收。但是目前使用梨果或梨渣生产饲料时，存在蓬松度差，酸度低，粗纤维利用率低，不易与其他饲料混合均匀，以及易腐败或霉变等问题。


技术实现要素：

4.为了克服现有技术存在的梨原料生产饲料时存在的蓬松度差，酸度低，粗纤维利用率低，不易与其他饲料混合均匀，以及易腐败或霉变等问题，提供一种梨发酵物的制备方法和一种梨发酵物以及所述梨发酵物在饲料领域和饵料领域中的应用，该方法制备得到的梨发酵物具有蓬松度好、流动性好、酸溶蛋白高、粗纤维含量低、乳酸含量高、具有梨特殊的芳香气味、不易腐败或霉变且易于保存等优点。
5.为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种梨发酵物的制备方法，该方法包括：将复合菌剂与发酵原料接触并发酵得到梨发酵物；
6.其中，所述复合菌剂包括乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌；
7.所述发酵原料包含梨原料和辅料；
8.所述辅料选自蛋白类原料、淀粉质原料、纤维素原料和无机盐中的至少一种。
9.优选地，所述乳杆菌选自鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)、植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)和嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)的至少一种；和/或所述芽孢杆菌选自枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)和凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)的至少一种；和/或所述酵母菌为产朊假丝酵母(candida utilis)和/或酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)。
10.本发明第二方面提供一种梨发酵物，所述梨发酵物根据如上所述的方法制备得到。
11.本发明第三方面提供如上所述的梨发酵物在饲料领域和饵料领域中的应用。
12.通过本发明所述的方法制备得到的梨发酵物具有蓬松度好、流动性好、酸溶蛋白高、粗纤维含量低、乳酸含量高、具有梨特殊的芳香气味、不易腐败或霉变且易于保存等优点。
13.在本发明中优选的情况下，选择优选的复合菌剂能够进一步提高梨发酵物的品质；通过褐变抑制剂的添加能够显著改善梨发酵物的色泽，并避免或减少微量成分(比如，绿原酸、儿茶素和苹果酸等)的损失，提高梨发酵物的品质。
具体实施方式
14.在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
15.本发明第一方面提供一种梨发酵物的制备方法，该方法包括：将复合菌剂与发酵原料接触并发酵得到梨发酵物；
16.其中，所述复合菌剂包括乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌；
17.所述发酵原料包含梨原料和辅料；
18.所述辅料选自蛋白类原料、淀粉质原料、纤维素原料和无机盐中的至少一种。
19.优选地，所述乳杆菌选自鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)、植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)和嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)的至少一种。
20.优选地，所述鼠李糖乳杆菌为鼠李糖乳杆菌cgmcc no.1.8882。
21.优选地，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌cgmcc no.1.568。
22.优选地，所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌cgmcc no.1.2919。
23.优选地，所述芽孢杆菌选自枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)和凝结芽孢杆菌(bacillus coagulans)的至少一种。
24.优选地，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌cgmcc no.19899。
25.优选地，所述地衣芽孢杆菌为地衣芽孢杆菌cgmcc no.1.7078。
26.优选地，所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌cgmcc no.1.10823。
27.优选地，所述酵母菌为产朊假丝酵母(candida utilis)和/或酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)。
28.优选地，所述产朊假丝酵母为产朊假丝酵母cgmcc no.2.615。
29.优选地，所述酿酒酵母为安琪酵母股份有限公司的超级活性干酵母中的酿酒酵母。
30.在本发明的一种优选的实施方式中，所述复合菌剂包括乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌；所述乳杆菌为鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)cgmcc no.1.8882；所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmcc no.no.19899；所述酵母菌为产朊假丝酵母(candida utilis)cgmcc no.2.615。在所述优选的情况下，复合菌剂的菌株不存在拮抗作用，而是起到互相协同的效果，能够进一步提高梨发酵物的营养价值，更利于动物的吸收利用。
31.在本发明的一种优选的实施方式中，所述复合菌剂包括乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌；所述乳杆菌为鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)cgmcc no.1.8882；所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmcc no.no.19899；所述酵母菌为产朊假丝酵母(candida utilis)cgmcc no.2.615和安琪酵母股份有限公司的超级活性干酵母中的酿
酒酵母。在所述优选的情况下，能够进一步提高梨发酵物中的酯类物质含量，改善梨发酵物的风味。
32.菌株的活菌数可以在较宽的范围内选择，优选地，所述复合菌剂中，乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌的活菌数的比例为1:(0.1-10):(0.1-10)。
33.优选地，所述复合菌剂的用量使得所述发酵原料中的活菌数在106cfu/g以上。
34.应当理解的是，所述复合菌剂中的乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌可以单独存在，或以至少两种的形式混合存在。各菌株可单独添加，也可同时添加。
35.所述复合菌剂的形态可以没有特别的限制，可以是固体菌剂或液体菌剂。
36.一般来说，为了获得活力较高的菌种，可以对菌株进行活化处理得到种子液后接种，使得复合菌剂与发酵原料接触。
37.在本发明的一种优选的实施方式中，芽孢杆菌、乳杆菌和酵母菌分别以芽孢杆菌种子液、乳杆菌种子液和酵母菌种子液的形式进行接种。所述芽孢杆菌种子液、乳杆菌种子液和酵母菌种子液可以分别由芽孢杆菌、乳杆菌和酵母菌经过摇瓶种子培养、一级种子培养两步培养过程完成。培养方法和条件均为本领域常规方式，满足本发明所需的菌种含量即可。
38.作为上述摇瓶种子培养的方法例如可以为：将菌悬液接入经灭菌的摇瓶培养基中，根据菌种性质，在静置(厌氧)/摇瓶机(好氧)条件下培养。
39.作为上述一级种子培养的方法例如可以为：将摇瓶培养液接入一级种子培养基，在扩培罐中，适当条件下培养。
40.用于芽孢杆菌培养的培养基可以是lb培养基，所述lb培养基的组成可以包括：酵母粉0.2-0.8重量％，蛋白胨0.5-1.5重量％，葡萄糖0.2-0.8重量％，氯化钠0.8-1.2重量％。ph优选为7-7.5。
41.优选地，所述芽孢杆菌的培养条件包括：温度为32-37℃，时间为16-20h。
42.用于乳杆菌培养的培养基可以是mrs肉汤培养基，所述mrs肉汤培养基可以通过商购获得。ph优选为6-6.5。
43.优选地，所述乳杆菌的培养条件包括：温度为35-37℃，时间为14-18h。
44.用于酵母菌培养的培养基可以是ypd培养基，所述ypd培养基的组成可以包括：酵母粉0.8-1.2重量％，蛋白胨1.5-2.5重量％，葡萄糖1.5-2.5重量％。ph优选为6-6.5。
45.优选地，所述酵母菌的培养条件包括：温度为30-34℃，时间为12-16h。
46.在本发明中，所述梨原料可以是本领域常见的梨原料，包括但不限于梨果、梨渣或其他梨的加工副产物。
47.应当理解的是，所述梨原料可以是梨或梨渣，其中含有较高含量的水，优选地，所述梨原料中的固含量为10-30重量％。
48.优选地，该方法包括：所述梨原料在发酵前进行粉碎处理，得到梨粉碎物。
49.优选地，所述粉碎处理的方式包括：将梨原料在褐变抑制剂的存在下进行粉碎，得到梨粉碎物。
50.优选地，所述褐变抑制剂选自维生素c、氯化钠和柠檬酸中的至少一种。
51.在优选的实施方式中，所述褐变抑制剂包含维生素c、氯化钠和柠檬酸，在所述优选的方式中，能够进一步改善梨发酵物的外观，抑制褐变。
52.优选地，以氯化钠的用量为基准，氯化钠、维生素c和柠檬酸的用量比为1:2-5:5-10。
53.优选地，相对于1kg的梨原料，所述褐变抑制剂的用量为0.1-1g。
54.所述粉碎可以在本领域常规的粉碎设备中进行。
55.应当理解的是，由于梨原料一般都是含水的，得到的梨粉碎物往往以混合液的形式存在，梨粉碎物中的固含量与梨原料中的固含量基本一致。
56.优选地，所述蛋白类原料选自豆粕、ddgs和氨基酸菌渣中的至少一种。
57.其中，ddgs的淀粉质原料发酵产乙醇的副产物。
58.其中，氨基酸菌渣可以是发酵生产氨基酸后得到的发酵液经固液分离后得到的固体部分，主要成分为菌体。所述氨基酸菌渣比如可以为谷氨酸菌渣或赖氨酸菌渣。
59.优选地，所述淀粉质原料选自玉米粉、大米粉和小麦粉中的至少一种。
60.优选地，所述纤维素原料选自米糠、玉米皮和麸皮中的至少一种。
61.优选地，所述无机盐选自碳酸钙、柠檬酸钙、氢氧化钠和碳酸钠中的至少一种。
62.在没有特殊说明的情况下，上述原料均可通过商购获得。
63.在本发明的优选的实施方式中，所述辅料包含蛋白类原料、淀粉质原料和纤维素原料以及可选的无机盐。
64.优选地，相对于100重量份的发酵原料的总重量，所述梨原料的用量为50-75重量份，所述蛋白类原料的用量为10-20重量份，所述淀粉质原料的用量为5-20重量份，所述纤维素原料的用量为10-30重量份，所述无机盐的用量为0-2重量份。在所述优选的条件下，能够提高梨发酵物的色泽，提高营养价值。
65.在本发明的优选的实施方式中，所述辅料为豆粕、玉米粉和米糠。
66.优选地，相对于100重量份的发酵原料的总重量，所述梨原料的用量为50-75重量份，所述豆粕的的用量为10-20重量份，所述玉米粉的用量为5-20重量份，所述米糠的用量为10-30重量份。
67.在本发明中，将复合菌剂与发酵原料接触并发酵得到梨发酵物，优选地，所述发酵的条件包括：发酵温度为30-40℃，发酵时间为5-10天。
68.应当理解的是，所述接触是指比如将发酵原料与乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌混合的步骤。
69.在本发明的一种优选的实施方式中，所述发酵原料与复合菌剂的接触并发酵的方式包括：将发酵原料与乳杆菌、芽孢杆菌和酵母菌同时接触并第一发酵，得到梨发酵物。在所述优选的情况下，操作简单，能够避免霉变和染杂菌等情况的发生。
70.在上述优选的实施方式中，第一发酵的条件优选包括：起始氧气含量为7-10.5体积％，温度为32-37℃，时间为120-240小时，起始ph值为6.5-7.2。
71.在所述优选的条件下，能够进一步提高好氧菌的生长代谢，并为兼性菌和厌氧菌的生长提供合适的环境和营养成分。
72.在本发明的一种优选的实施方式中，所述发酵原料与复合菌剂的接触并发酵的方式包括：将发酵原料与芽孢杆菌进行第一接触，得到第一接触后的产物，所述第一接触后的产物再与乳杆菌和酵母菌进行第二接触并第二发酵，得到梨发酵物。优选地，所述第一接触的时间低于48h，更优选为36-48h。在所述优选的情况下，避免霉变的发生，且更有利于粗纤
维的降解和利用。
73.应当理解的是，所述第一接触是指比如将发酵原料与芽孢杆菌混合并在芽孢杆菌存在下发酵的操作；所述第二接触比如是将第一接触后的产物与乳杆菌和酵母菌混合，发酵是指混合后的物料发酵的操作。
74.在上述优选的实施方式中，优选地，所述第一接触的条件包括：氧气含量为7-10.5体积％，温度为35-37℃，起始ph值为6.5-7.2。
75.所述第一接触过程中，优选通过通入空气等含氧气体方式保持氧气含量，使得第一接触在好氧条件下进行。
76.在上述优选的实施方式中，优选地，所述第二发酵的条件包括：温度为35-37℃，起始ph值为6.8-7.2。
77.优选地，所述发酵为兼性厌氧或厌氧发酵。优选地，所述第二发酵过程中的氧含量低于0.3体积％。
78.所述兼性厌氧或厌氧发酵可以通过薄膜覆盖密封或类似方式实现。
79.应当理解的是，为了保证发酵的正常进行，还可以向发酵原料和/或复合菌剂中补加水，优选地，所述水的用量使得发酵物料的含水量为50-70重量％。所述发酵物料是指复合菌剂和发酵原料的混合物。
80.在本发明中，所述发酵为固态发酵，所述发酵可以在常规用于固态发酵的设备中进行，比如可以在发酵池中进行。厌氧或兼性厌氧条件可以通过覆盖薄膜实现，本领域技术人员可以根据需要进行选择。
81.应当理解的是，固态发酵时的接触温度和发酵温度是指环境温度。
82.优选地，该方法还包括：对发酵后的物料进行干燥处理，得到梨发酵物。
83.本领域技术人员可以根据实际情况选择合适的干燥方法，包括但不限于烘干、风干、冻干和真空干燥。
84.优选地，所述干燥的条件使得所述梨发酵物的含水量为10-15重量％。
85.优选地，所述干燥的方式为烘干，所述烘干的条件包括：温度为70-100℃，时间为3-20min。
86.本发明第二方面提供一种梨发酵物，所述梨发酵物根据如上所述的方法制备得到。
87.优选地，所述梨发酵物中的含水量为10-15重量％。
88.优选地，所述梨发酵物具有梨的风味，色泽亮黄或淡黄。
89.优选地，所述梨发酵物中，所述乳杆菌的含量为1
×
108cfu/g以上，芽孢杆菌的含量为1
×
109cfu/g以上，酵母菌的含量为1
×
108cfu/g以上。
90.优选地，以乳酸计，所述梨发酵物中，总酸含量为8-10重量％。优选地，l-乳酸含量为7.5-9.5重量％，d-乳酸含量为0.2-0.5重量％。
91.其中，l-乳酸含量和d-乳酸含量通过高效液相色谱仪配制的手性色谱柱进行分离测定。
92.优选地，所述梨发酵物的ph为3-4。
93.优选地，以所述梨发酵物的干基计，粗纤维的含量为6-9重量％，粗蛋白的含量为23-28重量％，粗脂肪的含量为6-8重量％，粗灰分的含量为6-8重量％，酸溶蛋白的含量为
2-4重量％。
94.本发明第三方面提供如上所述的梨发酵物在饲料领域和饵料领域中的应用。
95.以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
96.以下实施例和对比例中，总酸(以乳酸计)通过化学滴定法测定。
97.水分通过《gb/t 6435饲料水分和其它挥发性物质含量的测定方法》测定；
98.以干基计，粗蛋白通过《gb/t 6432饲料中粗蛋白测定方法》测定；
99.以干基计，酸溶蛋白通过《gb/t 22492-2008大豆肽粉》测定；
100.以干基计，粗灰分通过《gb/t 6438-2007饲料中粗灰分的测定》测定；
101.以干基计，粗纤维通过《gb/t 6434饲料中粗纤维测定方法》测定；
102.以干基计，粗脂肪通过《gb/t 6433饲料中粗脂肪的测定》测定。
103.以下实施例和对比例中，菌体含量通过平板计数法测定，具体方法包括：称取5.0g物料到45g无菌水中，放置摇床培养(温度32℃，转速120rpm/min，时间40min-50min)，然后取0.1ml培养液至0.9ml无菌水摇匀，稀释至一定的梯度、涂布至相应菌种的平板培养基，放置恒温箱30℃培养48h。计数方法：一个稀释度的菌落数为30-300个菌落数，则以该稀释度菌落数除以涂布平板所用稀释液体积(0.1ml)，乘以稀释倍数作为该样品的菌体总数。
104.乳杆菌、酵母菌和芽孢杆菌分别使用的平板培养基配制方法如下：
105.mrs肉汤平板培养基：称取mrs肉汤培养基55.2g/l，琼脂10.14g/l，加蒸馏水定容，调节ph值为6.2，120℃，20min灭菌，制成平板培养基，空培养24h后使用。
106.ypd平板培养基：称取酵母粉10g/l，蛋白胨20g/l，葡萄糖20g/l，琼脂14g/l，加蒸馏水定容，调节ph值为6.0，120℃，20min灭菌，制成平板培养基，空培养24h后使用。
107.lb平板培养基：称取酵母粉5g/l，蛋白胨10g/l，葡萄糖5g/l，氯化钠10g/l，琼脂20g/l，加蒸馏水定容，调节ph值为7.20，120℃，20min灭菌，制成平板培养基，空培养24h后使用。
108.下述实施例和对比例中，如无特殊说明，使用的试剂和原料均通过商购获得。
109.以下实施例和对比例中，发酵过程在80cm*80cm*80cm的试验发酵池中进行。菌落数的数值以实测数为准，忽略系统误差。
110.制备例1
111.本制备例用于说明种子液、种子液和种子液的制备方法。
112.芽孢杆菌种子液：
113.芽孢杆菌种子冻存管(-80℃)提前0.5h自然解冻，按照接种量0.1％接种至lb培养基中，30℃、150rpm好氧培养20h，得到芽孢杆菌种子液。
114.乳杆菌种子液：
115.乳杆菌种子冻存管(-80℃)提前0.5h自然解冻，按照接种量0.5％接种至mrs肉汤培养基中，35℃，静置厌氧培养18h，得到乳杆菌种子液。
116.酵母菌种子液：
117.酵母菌种子冻存管(-80℃)提前0.5h自然解冻，按照接种量0.2％接种至ypd培养基中，30℃、120rpm好氧培养15h，得到酵母菌种子液。
118.对得到的种子液进行稀释，控制各个种子液中活菌数为10亿cfu/ml。
119.制备例2
120.本制备例用于说明发酵原料。
121.梨粉碎物的制备方法：将梨和维生素c(按照500g/吨梨的用量添加)采用购自新乡市众科机械有限公司的螺旋压榨破碎一体机进行粉碎处理，得到梨粉碎物(包含梨汁和梨渣)，后放入带有搅拌的储罐进行贮存。
122.豆粕的颗粒度30目-60目，米糠的颗粒度10目-30目；玉米粉的颗粒度30目-60目。
123.梨粉碎物、豆粕、玉米粉和米糠的各组分含量如表1所示。
124.表1
125.原料名称梨粉碎物豆粕玉米粉米糠水分％87.8712.1511.0310.86粗蛋白质(干基)％3.4157.148.8615.15粗灰分(干基)％7.076.122.6010.34粗纤维(干基)％14.773.673.128.05粗脂肪(干基)％0.350.132.5222.12
126.实施例1
127.本实施例用于说明用于梨发酵物发酵的菌株的筛选。
128.将芽孢杆菌组(7株枯草芽孢杆菌、3株凝结芽孢杆菌和6株地衣芽孢杆菌)、乳杆菌组(4株鼠李糖乳杆菌、6株嗜酸乳杆菌和5株植物乳杆菌)和酵母菌组(3株产朊假丝酵母菌和8株酿酒酵母菌)中的每株菌分别组合，进行交叉抑制筛选实验，具体操作如下。
129.首先，对各菌株培养并稀释从而获得活菌数为10亿cfu/ml的种子液，后逐级稀释10-6
倍。
130.然后，向灭菌后冷却但尚未凝固的mrs肉汤固体培养基中加入乳杆菌(确保单菌平板菌落数在100-200)、摇匀，然后倒入已经放置牛津杯的mrs肉汤平板培养基，在上层培养基凝固后取出牛津杯，在牛津杯放置位置中添加一定体积的芽孢杆菌种子液和酵母菌种子液，使得菌株的比例分别满足1:1:1、1:0.5:0.5和1:0.5:0.2。待芽孢杆菌种子液和酵母菌种子液被固体培养基吸收后，将平板倒置放置在密封盒中，35℃培养48h，观察平板和牛津杯周边乳杆菌的生长情况。并以接种乳杆菌替代芽孢杆菌和酵母菌的平板作为空白对照。
131.经培养后发现，乳杆菌的生长分布有以下几种情况：(1)牛津杯位置周边无乳杆菌；(2)牛津杯位置周边有乳杆菌，但分布密度低于其他地方；(3)牛津杯位置周边有乳杆菌，且分布密度与其他地方基本无明显差别。
132.选取第(3)中情况的菌株的组合，筛选出的最佳组合中的乳杆菌为鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)cgmcc no.1.8882，芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)cgmcc no.19899，酵母菌为产朊假丝酵母(candida utilis)cgmcc no.2.615，说明这三株菌不存在拮抗作用，可以共生。
133.实施例2
134.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
135.将实施例1筛选得到复合菌(鼠李糖乳杆菌cgmcc no.1.8882、枯草芽孢杆菌cgmcc no.19899和酵母菌cgmcc no.2.615)中的每株菌按照制备例1所述的方法分别制备活菌数为10亿cfu/ml的种子液。
136.将由60重量份的梨原料、15重量份的豆粕、10重量份的玉米粉和15重量份的米糠
组成的发酵原料与5重量份的混合种子液(鼠李糖乳杆菌：枯草芽孢杆菌：酵母菌＝1:0.5:0.2)混合均匀后，放入发酵池中，表面覆盖薄膜密封进行发酵。在初始氧含量为8％，初始ph为7.2，温度35-37℃条件下，发酵6天后，得到的发酵后物料在烘干机中100℃下烘干3min，得到梨发酵物。
137.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
138.实施例3
139.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
140.将实施例1筛选得到复合菌(鼠李糖乳杆菌cgmcc no.1.8882、枯草芽孢杆菌cgmcc no.19899和酵母菌cgmcc no.2.615)中的每株菌按照制备例1所述的方法分别制备活菌数为10亿cfu/ml的种子液。
141.将由50重量份的梨原料、20量份的豆粕、10量份的玉米粉、20重量份的米糠组成的发酵原料与2重量份的混合种子液(鼠李糖乳杆菌：枯草芽孢杆菌：酵母菌＝1:1:1)以及水混合均匀后，放入发酵池中，表面覆盖薄膜密封进行发酵；其中，水的用量使得发酵物料中的含水量为60％。在初始氧含量为10％，初始ph6.5，温度35-37℃条件下，发酵6天后，得到的发酵后物料在烘干机中70℃下烘干20min，得到梨发酵物。
142.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
143.实施例4
144.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
145.将实施例1筛选得到复合菌(鼠李糖乳杆菌cgmcc no.1.8882、枯草芽孢杆菌cgmcc no.19899和酵母菌cgmcc no.2.615)中的每株菌按照制备例1所述的方法分别制备活菌数为10亿cfu/ml的种子液。
146.将由75重量份的梨原料、10重量份的豆粕、5重量份的玉米粉和10重量份的米糠组成的发酵原料与5重量份的混合种子液(鼠李糖乳杆菌：枯草芽孢杆菌：酵母菌＝1:0.5:0.5)混合均匀后，放入发酵池中，表面覆盖薄膜密封进行发酵。在初始氧含量为7％，初始ph7.2，温度35-37℃条件下，发酵6天后，得到的发酵后物料在烘干机中100℃下烘干3min，得到梨发酵物。
147.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
148.实施例5
149.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
150.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，先将枯草芽孢杆菌种子液与发酵原料混合并在发酵池中发酵40h后，将乳杆菌种子液和酵母菌种子液加入发酵池中，然后用薄膜覆盖物料表面，混合均匀后密封发酵4天。
151.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
152.采用两段发酵的方式能够提高粗纤维的降解效果，降低梨发酵物中的粗纤维含量，但是需要控制第一阶段发酵的时间，避免出现霉变。
153.实施例6
154.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
155.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，乳杆菌种子液、枯草芽孢杆菌种子液和酵母菌种子液中活菌数的比例为1:5:5。
156.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
157.实施例7
158.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
159.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，使用枯草芽孢杆菌cgmcc no.1.9086替换实施例2中的枯草芽孢杆菌。
160.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
161.实施例8
162.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
163.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，使用鼠李糖乳杆菌cgmcc no.1.78替换实施例2中的鼠李糖乳杆菌。
164.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
165.实施例9
166.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
167.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，使用产朊假丝酵母菌cgmcc no.2.1005替换实施例2中的产朊假丝酵母菌。
168.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
169.实施例10
170.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
171.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，使用凝结芽孢杆菌cgmcc no.1.10823替换实施例2中的枯草芽孢杆菌。
172.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
173.实施例11
174.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
175.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，使用嗜酸乳杆菌cgmcc no.1.2919替换实施例2中的鼠李糖乳杆菌。
176.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
177.实施例12
178.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
179.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，使用筛选自安琪酵母股份有限公司的超级活性干酵母产品中的酿酒酵母菌替换实施例2中的产朊假丝酵母菌。
180.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
181.实施例13
182.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
183.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，发酵温度为30-32℃。
184.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
185.实施例14
186.本实施例用于说明本发明所述的梨发酵物及其制备方法。
187.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，所述酵母菌同时含有筛选自安琪酵母股份有限公司的超级活性干酵母产品中的酿酒酵母菌和实施例2中的产朊假丝酵母菌，
两者的活菌数之比为1：2。
188.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
189.对比例1
190.本对比例用于说明参比的梨发酵物及其制备方法。
191.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，使用黑曲霉菌cgmcc no.3.17612替换实施例2中的枯草芽孢杆菌。
192.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
193.对比例2
194.本对比例用于说明参比的梨发酵物及其制备方法。
195.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，使用凝结芽孢杆菌cgmcc no.1.10823替换实施例2中的鼠李糖乳杆菌。
196.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
197.对比例3
198.本对比例用于说明参比的梨发酵物及其制备方法。
199.按照实施例2所述的方法进行操作，不同的是，使用地衣芽孢杆菌cgmcc no.1.7077替换实施例2中的产朊假丝酵母菌。
200.对梨发酵物的性能进行评价，其结果见表2。
[0201][0202]
通过表2的结果可以看出，采用本发明筛选的复合微生物和原辅料配方生产梨发酵物能够使得梨发酵物具有酸溶蛋白高、粗纤维含量低和乳酸含量高等明显更好的优点。
[0203]
通过本发明优选的实施方式制备得到的梨发酵物具有以下优点：
[0204]
(1)特有气味：发酵过程产生的醇类和有机酸发生作用生成酯类物质，加强了梨的芳香气味，利于提高采食量；在实施例14中的酵母菌为同时含有产朊假丝酵母和酿酒酵母时，能够进一步提高酯类物质含量，改良产品风味。
[0205]
(2)特有颜色：梨处理过程添加褐变抑制剂，减弱了酚类物质的氧化；同时发酵过程产生的有机酸以乳酸计在9以上，使物料色泽呈亮黄或淡黄色。
[0206]
(3)特有功效：该梨发酵物中含有酚类物质、果胶、维生素、有机酸、氨基酸、矿物质，营养丰富，易被吸收。其中，果胶含量能达0.5％、膳食纤维能达3.1％；酚类物质绿原酸的含量能达25mg/100g。果胶一般都伴随着膳食纤维而存在，这两种物质能够促进肠胃蠕动，促使肠道内的有害物质排出体外，预防便秘；酚类物质绿原酸具有抗病毒、防止氧化、预防肿瘤，抵抗过敏的作用。
[0207]
(4)有机酸：物料发酵6天产生9％以上的乳酸，物料的ph从6.80降至4以下，抑制杂菌滋生并提供了有机酸，减少日粮中酸化剂的添加。
[0208]
(5)酸溶蛋白：蛋白酶使豆粕中大分子蛋白质发生降解，比如实施例2中的酸溶蛋白由1.49％(干基)增加到3.77(干基)％。
[0209]
(6)粗纤维：纤维素酶使大分子粗纤维进行降解，比如实施例2中的物料粗纤维有8.67％(干基)降至7.27(干基)％，降低了抗营养因子，提高饲料的利用率。
[0210]
(7)微生物：在发酵过程中，枯草芽孢杆菌先进行生长代谢繁殖；后随着氧气的消耗、环境的不适应，枯草芽孢杆菌的营养细胞会变成芽孢体进入休眠状态；该芽孢体在烘干过程，损失率低，能在饲料中较好的留存，进而进入动物肠道发挥作用。
[0211]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。