中药颗粒剂及其制备方法和在治疗胃病中的用途与流程

1.本发明涉及中药领域。具体地，本发明涉及中药颗粒剂及其制备方法和在治疗胃病中的用途。


背景技术：

2.荜铃胃痛颗粒是由荜澄茄、延胡索、黄连等11味药材与辅料糊精、甜菊素、羟丙基纤维素适量制成颗粒剂，由于药材成分较多，物料的比重差异大且主要可溶性成份易迁移，极易造成混合不均匀、不稳定、颗粒剂颜色差异较大等问题。同时荜铃胃痛颗粒制剂处方中以甜菊素作为矫味剂，其甜度较低，有苦涩味，口感较差，且方中存在黄连、川楝子等药材，导致颗粒剂口感非常苦，患者难以接受。
3.因此，目前的荜铃胃痛颗粒仍有待研究。


技术实现要素：

4.本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题。为此，本发明提出了一种中药颗粒剂及其制备方法和用途，该中药颗粒剂是在荜铃胃痛颗粒的基础上进行了改进，解决了原药口感不佳、稳定性差、混合不均匀、颜色差异较大等问题。改进后的中药颗粒剂口感可以被大众所接受，颗粒大小和有效成分均匀分布，颗粒圆整，不易碎，稳定可控，溶化性好，无异物，患者依从性强，适于广泛应用。
5.在本发明的一个方面，本发明提出了一种中药颗粒剂。根据本发明的实施例，所述中药颗粒剂包括：主料，所述主料包括：荜澄茄、川楝子、醋制延胡索、酒制大黄、黄连、吴茱萸、醋制香附、香橼、佛手、海螵蛸和煅制瓦楞子；辅料，所述辅料包括：羟丙纤维素或低取代羟丙纤维素；矫味剂和糊精；所述中药颗粒剂中颗粒粒度分布在212μm≤d50≤1700μm。
6.发明人发现，粒径分度对于产品质量影响较大，例如溶化性、是否产生焦渣等异物和稳定性等。进而，发明人经过大量实验发现，粒度分布在所述中药颗粒剂中颗粒粒度分布在212μm≤d50≤1700μm(优选250μm≤d50≤830μm，更优选270μm≤d50≤770μm)范围内，可以保证可在短时间内全部溶化，可实现一步制粒，制粒过程中不会产生黑色焦渣等异物，同时满足装量差异的要求，颗粒收率高。若颗粒粒度过大，容易架桥结块，溶化性差，颗粒表面磨下细粉多，损失有效成份，极易造成颗粒不均匀，有效成分的均匀性差。若颗粒粒度过小，容易出现过多细粉，颗粒收率较低，且由于比表面积较大，会造成灌装装量差异不稳定，从而致使服用剂量不准确。
7.根据本发明的实施例，上述中药颗粒剂还可以具有下列附加技术特征：
8.根据本发明的实施例，所述矫味剂选自阿司帕坦、环拉酸钠、三氯蔗糖和纽甜的至少之一。现有的荜铃胃痛颗粒中采用甜菊素作为甜味剂，其甜度较低，有苦涩味，口感差。进而，发明人尝试采用其他辅料替代甜菊素。经过大量实验筛选优化出阿司帕坦、环拉酸钠、三氯蔗糖、纽甜效果优于甜菊素，可以缓解苦涩口感，其中，三氯蔗糖口感较好，接受度较高，患者依从性较强，并且三氯蔗糖稳定性高，不受光热、ph值影响，适于产业化使用。
9.根据本发明的实施例，所述主料是以清膏或干膏粉的形式提供的，所述清膏的固含物或干膏粉含量为30～70质量％，优选40～67质量％，进一步优选50～55质量％。由此，中药颗粒剂载药量高，具有较好的药效，可以更好地治疗胃病。
10.根据本发明的实施例，基于所述中药颗粒剂的总质量，所述主料的清膏固含物或干膏粉含量为30～70质量％，羟丙纤维素或低取代羟丙纤维素的含量为1.0～1.5质量％，矫味剂的含量为0.07～19.5质量％，余量糊精。
11.发明人经过大量实验得到上述几种组分的最优含量，羟丙纤维素或低取代羟丙基纤维素的加入量对颗粒成型、质量、色斑、装量影响较大，当其含量为1.0～1.5质量％(优选1.1～1.4质量％)时，颗粒成型好，无色斑，大小分布均匀，溶化性好，不易碎。当矫味剂的含量为0.07～19.5质量％(优选0.7～1.5质量％，更优选1.0～1.3质量％)时，产品口感较佳，患者依从性较强。
12.根据本发明的具体实施例，基于所述中药颗粒剂的总质量，所述中药颗粒剂包括：主料的清膏固含物或干膏粉含量为30～70质量％；1.0～1.5质量％的低取代羟丙纤维素；0.07～19.5质量％的矫味剂；以及余量的糊精。发明人发现羟丙纤维素在处方中既有粘合剂的作用，又有崩解剂的效果，其使用延缓了颗粒剂的溶化性。由于本发明的一定范围内的固含物及其相对密度的浸膏能够保证一定的黏度，无需要加入其它粘合剂配合制粒，低取代羟丙纤维素仅具有崩解剂的效果，在制粒过程中降低黏度，因此颗粒剂溶化更快，并且加入低取代羟丙纤维素后使其颗粒剂粒度更加均匀，没有色斑。整体而言，低取代羟丙纤维素的效果更优于羟丙纤维素。
13.根据本发明的实施例，所述清膏于60～70℃的相对密度为1.10～1.30；当所述主料是以干膏粉的形式提供时，先用水溶解成60～70℃的相对密度为1.10～1.30的浆液。发明人发现，清膏或者干膏粉溶于水的浆液的相对密度(60～70℃)与焦渣等异物的形成与否相关，当采用上述相对密度的清膏或者浆液，可以有效地避免焦渣等异物的形成。
14.需要说明的是，本发明所描述的“相对密度”的单位为g/ml。“清膏的固含物”是指浸膏置于干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置于干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。“主料的清膏”是由原料药经过水煎煮或含水醇溶液提取得到的。“主料的干膏粉”是由清膏进一步干燥后得到的粉末。
15.根据本发明的实施例，所述主料包括：荜澄茄335～755重量份、川楝子335～755重量份、醋制延胡索201～453重量份、酒制大黄100～227重量份、黄连100～227重量份、吴茱萸50～114重量份、醋制香附335～755重量份、香橼335～755重量份、佛手201～453重量份、海螵蛸335～755重量份、煅制瓦楞子335～755重量份。根据本发明的优选实施例，荜澄茄419～604重量份、川楝子419～604重量份、醋制延胡索251～362重量份、酒制大黄125～181重量份、黄连125～181重量份、吴茱萸63～91重量份、醋制香附419～604重量份、香橼419～604重量份、佛手251～362重量份、海螵蛸419～604重量份、煅制瓦楞子419～604重量份。由此，具有较好的治疗胃病的疗效。
16.在本发明的另一方面，本发明提出了一种制备前面所述中药颗粒剂的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将含有所述主料的清膏或干膏粉、辅料和任选的水进行混合，然后制粒；将所述制粒所得颗粒进行干燥、过筛和总混，得到所述中药颗粒剂。根据本发明实施例的制备方法中采用一步制粒法制成合格的颗粒剂，载药量较高，颗粒圆整，硬度合
适不易碎，颜色均匀，溶化性好，无异物，口感佳，患者依从性高。
17.根据本发明的实施例，所述制粒是采用喷雾制粒方式进行的，所述喷雾制粒的温度不高于95℃，所述干燥的温度不高于135℃，所述喷雾制粒的雾化压力为100～500kpa，供液速度为100～600r/min。
18.通过喷雾制粒以实现一步制粒，采用上述喷雾制粒条件可以快速制粒，且可避免产生焦渣等黑色或不溶异物，颗粒圆整，粒径分布在212μm≤d50≤1700μm(优选250μm≤d50≤830μm，更优选270μm≤d50≤770μm)范围内，硬度适中不易碎，成品率高。其中，供液速度对于粒径分布影响较大，若供液速度过大，颗粒直径增大，脆性减少；若供液速度过小，颗粒直径减小或不成粒，成品率低。若增加雾化压力，粘浆液的雾滴变小，制的颗粒粒度也变小，细粉多，成品率低，而脆性增大；若变低雾化压力，颗粒粒度增大，但易产生少量大颗粒，降低成品率。
19.根据本发明的实施例，所述过筛的筛网选择上层8～12目，下层60～80目。由此，可以获得满足粒径要求的颗粒。
20.在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述中药颗粒剂在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，所述药物用于治疗胃病。本发明的中药颗粒剂可显著减轻损伤面积，保护胃黏膜，具有较好的抗炎作用，减轻胃黏膜炎症反应。
21.根据本发明的实施例，胃病为十二指肠溃疡、胃溃疡、消化性溃疡、胃炎、胃脘痛等。胃溃疡包括急性胃溃疡、消化性胃溃疡、慢性浅表性胃炎等。
22.根据本发明的实施例，所述药物用于减少胃溃疡损伤面积；所述药物用于减轻胃粘膜损伤程度；所述药物用于使胃粘膜上皮细胞脱落减少、间质出血量减少、减轻水肿和炎细胞浸润；所述药物用于降低血清中il-1β(a)和tnf-α(b)的含量；所述药物用于提高机体sod活性，降低机体mpo活力；所述药物用于上调pge2基因的表达。由此，具有较好的治疗胃病的疗效。
23.有益效果：
24.1、本发明通过对配方中的辅料成分进行优化并辅助制备方法，能够制成合格的中药颗粒剂，载药量较高，颗粒圆整，硬度合适不易碎，颜色均匀，溶化性好，无异物，无色斑，有效改善苦味，且没有怪异的后味，接受度最高，患者依从性更强，适于产业化生产应用。
25.2、本发明的粒度范围控制不仅能够得到较好的颗粒剂收率同时还满足了重量差异的要求。批次间颗粒剂的有效成分含量稳定均一、均匀分布，从而达到溶出及疗效的稳定可控。
26.本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
27.本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
28.图1显示了荜铃胃痛颗粒对乙醇诱导胃溃疡大鼠溃疡面积(a)与黏膜形态(b)的影响(n＝8)；其中，与对照组比较：###p《0.001；与模型组比较：*p《0.05***p《0.001；
29.图2显示了荜铃胃痛颗粒对乙醇诱导胃溃疡大鼠胃黏膜病理评分的影响(n＝
4)；其中，与对照组比较：###p《0.001；与模型组比较：*p《0.05**p《0.01；
30.图3显示了乙醇诱导胃溃疡大鼠胃黏膜组织病理学电镜图；其中，粗箭头：表面上皮细胞脱落；黑色箭头：水肿和炎性细胞浸润；浅色箭头：胃腺体损伤；
31.图4显示了荜铃胃痛颗粒对血清il-1β(a)和tnf-α(b)的影响(n＝8)；
32.图5显示了荜铃胃痛颗粒对胃mpo(a)和血清sod(b)活力的影响(n＝8)；其中，与对照组比较：##p《0.01###p《0.001；与模型组比较：*p《0.05**p《0.01***p《0.001。
33.图6显示了荜铃胃痛颗粒对胃pge2的影响(n＝8)；其中，与对照组比较：##p《0.01；与模型组比较：*p《0.05。
具体实施方式
34.下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
35.实施例1制备中药颗粒剂
36.1、按下列重量配比称取各组分：荜澄茄583.48g、川楝子583.48g、醋制延胡索350.32g、酒制大黄175.16g、黄连175.16g、吴茱萸88.16g、醋制香附583.48g、香橼583.48g、佛手350.32g、海螵蛸583.48g、煅制瓦楞子583.48g。
37.2、将各组分混合，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.15(60～70℃测)的清膏，备用。
38.3、称取清膏(固含量为470g)、627g糊精、13.9g三氯蔗糖、14g低取代羟丙纤维素，采用如下方式制备颗粒：
39.(1)制粒：将低取代羟丙纤维素、三氯蔗糖和糊精投入一步制粒机中，在流化状态下均匀混合，清膏用水稀释得清膏浆液；清膏浆液喷雾制粒，干燥；所述喷雾制粒温度95℃，颗粒干燥温度135℃；所述浆液喷雾的雾化压力为500kpa，供液速度为600r/min。
40.(2)筛选：筛网采用上层10目，下层60或70目对颗粒进行筛选；
41.(3)总混：筛选后的颗粒总混，灌装。
42.实施例2制备中药颗粒剂
43.1、按下列重量配比称取各组分：荜澄茄755g、川楝子755g、醋制延胡索453g、酒制大黄227g、黄连227g、吴茱萸114g、醋制香附755g、香橼755g、佛手453g、海螵蛸755g、煅制瓦楞子755g。
44.2、将各组分混合，加50％乙醇回流提取二次，第一次加8倍量，回流提取2小时，第二次加6倍量，回流提取1小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度为1.10～1.15(60～70℃测)的清膏，备用。
45.3、称取清膏(固含量770g)、546g加糊精、13.9g三氯蔗糖、14g羟丙纤维素，采用如下方式制备颗粒：
46.(1)制粒：将低取代羟丙纤维素、三氯蔗糖和糊精投入一步制粒机中，在流化状态下均匀混合，清膏用水稀释得清膏浆液；清膏浆液喷雾制粒，干燥；所述喷雾制粒温度50℃，颗粒干燥温度85℃；所述浆液喷雾的雾化压力为100kpa，供液速度为100r/min。
47.(2)筛选：筛网采用上层10目，下层60或70目对颗粒进行筛选；
48.(3)总混：筛选后的颗粒总混，灌装。
49.实施例3低取代羟丙纤维素的用量
50.为便于考察，将荜铃胃痛颗粒干膏粉与三氯蔗糖按处方比例预先混合，得到物料a；对物料a、糊精及低取代羟丙纤维素不同配比下的制粒进行考察。
51.表1物料a处方
52.名称理论用量实际用量荜铃胃痛颗粒干膏粉250g(50％)250g三氯蔗糖6g(1.2％)6g制成256g256g
53.注：荜铃胃痛颗粒干膏粉是通过将实施例1的步骤2制备的清膏进行干燥所得到的，后面实施例中的干膏粉与此为同物。
54.将物料a 256g分均分为5份，每份51.2g，再加入不同量的低取代羟丙纤维素，根据计算加入配套的糊精，一步制粒，观察颗粒性状，详见下表。
55.由下表可以看出，低取代羟丙基纤维素的加入量为1.0～1.5质量％，颗粒成型性有所改善，大多数无色斑，大小均一，溶化性好。其中，加入量为1.1～1.4质量％效果最佳。
56.[0057][0058]
实施例4矫味剂的研究
[0059]
现有的荜铃胃痛颗粒制剂处方中采用甜菊素作为矫味剂，其甜度较低，有苦涩味，口感较差，且方中存在黄连、川楝子等药材导致颗粒剂口感非常苦，患者难以接受，为改善荜铃胃痛颗粒口感，提升大众接收度，对处方中的矫味剂品种及用量进行研究以适应市场需求。
[0060]
一、矫味剂的种类筛选
[0061]
以甜菊糖苷、阿司帕坦(阿斯巴甜)、环拉酸钠(甜蜜素)、三氯蔗糖、纽甜和糖精钠作为候选矫味剂，不同矫味剂和蔗糖甜度倍数参见表2，表3为以甜菊素为矫味剂的中药颗粒剂的处方，其他矫味剂的添加量以等量甜菊素添堵折算后的加入量作为起始加入量。
[0062]
表2不同矫味剂和蔗糖甜度倍数
[0063]
[0064][0065]
注：蔗糖甜度按1表示，经查阅相关文献资料得到其它各矫味剂的甜度倍数。
[0066]
表3处方
[0067][0068]
1、试验设计
[0069]
由于矫味剂在处方中占比较低，为便于考察，将原料和除矫味剂外的其他辅料按处方比例预先混合，得到物料b。对物料b与各矫味剂不同配比下的口感进行考察。
[0070]
2、物料b的制备
[0071]
2.1按上述处方制备，各物料用量如下：
[0072]
表4用量
[0073]
名称理论用量实际用量荜铃胃痛颗粒干膏粉50％25.0008g糊精47.89％23.9521g低取代羟丙纤维素1.21％0.6060g制成49.55g49.5589g
[0074]
2.2各矫味剂最佳口感使用量考察
[0075]
取250ml玻璃烧杯，加入物料b 4.9550g，再加入起始量的矫味剂，加入热水200ml，搅拌均匀，口尝，记录口感。如口感不佳，则向烧杯中继续加入适量矫味剂，搅拌均匀，口尝，记录矫味剂用量及对应口感。直至获得相对较好的口感，记录矫味剂用量。将矫味剂用量及对应口感记录于表5-8中。
[0076]
表5阿司帕坦
[0077][0078]
表6环拉酸钠
[0079][0080]
表7三氯蔗糖
[0081][0082]
表8纽甜
[0083][0084]
2.3结论
[0085]
通过上述试验，初步确定各矫味剂的相对最佳口感用量如下表。
[0086]
表9不同矫味剂的加入量
[0087]
矫味剂初步确定的相对最佳口感用量阿司帕坦占比约为3.90％
±
1.00％环拉酸钠占比约为19.50％
±
2.00％
三氯蔗糖占比约为1.25％
±
0.50％纽甜占比约为0.07％
±
0.02％
[0088]
3、各矫味剂的人工评价
[0089]
3.1人工评价样品溶液的制备
[0090]
按处方计算，荜铃胃痛颗粒干膏粉占比约为50％，低取代羟丙纤维素占处方的1.21％，糊精占处方的比例为总量-荜铃胃痛干膏粉-低取代羟丙纤维素-矫味剂，约为47.89％；因矫味剂的种类不同所加入量也不相同，所以需根据矫味剂的加入量调整糊精的加入量。
[0091]
为便于考察，将荜铃胃痛颗粒干膏粉与低取代羟丙纤维素按处方比例预先混合，得到物料c；对物料c、糊精及各矫味剂不同配比下的口感进行考察。
[0092]
按选取的四种矫味剂：阿司帕坦、环拉酸钠、三氯蔗糖、纽甜进行筛选试验。
[0093]
3.1.1物料b处方如下：
[0094]
表10物料c处方
[0095]
名称理论用量实际用量荜铃胃痛颗粒干膏粉50g50.01g低取代羟丙纤维素1.21g1.21g制成51.21g51.22g
[0096]
3.1.2将各矫味剂加入，处方如下：
[0097]
(1)阿司帕坦
[0098]
表11阿司帕坦处方
[0099][0100]
(2)环拉酸钠
[0101]
表12环拉酸钠处方
[0102][0103]
(3)三氯蔗糖
[0104]
表13三氯蔗糖处方
[0105][0106]
(4)纽甜
[0107]
表14纽甜处方
[0108][0109]
(5)甜菊素
[0110]
按表3的处方添加矫味剂(甜菊素)，将物料混合均匀，取相当于成品一袋量(5g/袋)，加入热水200ml，搅拌均匀，分取待受试者试用。
[0111]
3.1.3受试者的选择
[0112]
选取健康受试者10名，来自中药研究院研究人员，按照以下标准筛选：
①
味觉和嗅觉灵敏，受试者年龄控制在20～40岁。
②
最近2d未有饮酒或吸烟。
③
品尝溶液前2h未进食，尤其是没有吃刺激性食物或饮用碳酸饮料等对味蕾有强烈刺激的食品。
[0113]
3.1.4口感调查表的设计
[0114]
根据中药的口感特点，设计口感调查表，主要包含入口苦度、入口酸度、不良气味和苦味残留等4个项目，每个项目的打分标准如下：0分(无，口感愉悦)；1分(轻微，不影响口感)；2分(有，影响口感)；3分(严重，不能接受)及最终评价。
[0115]
评价前受试者应先用温水漱口，顺次品尝各溶液，每种溶液含于口中约10s，吐出药液，马上根据口感调查表对所尝溶液的相关调查项目打分，然后漱口，直至口中无前一种溶液的味道。
[0116]
3.1.5结果
[0117]
实际受试者有10人，根据各人评论整理结果如下，根据众人选择，4种矫味剂的口感均优于甜菊素，其中三氯蔗糖作为矫味剂口感最好，接受度最高。
[0118]
表15感官评价
[0119][0120]
4.矫味剂用量的研究
[0121]
选择评价指标较好的矫味剂三氯蔗糖、物料c、糊精，矫味剂的添加量选取0.7％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.5％共7个比例，考察矫味剂不同用量下的口感。实际受试者为10人，考察结果如下表。根据以下结果显示，矫味剂三氯蔗糖加入量为1.2％时受试者接受度最好。
[0122]
表16矫味剂用量
[0123][0124][0125]
实施例5颗粒粒度的研究
[0126]
按照实施例1的方法制备一步制粒机，其中，通过改变步骤3(2)中筛网的粒径，以获得具有不同粒径的颗粒。
[0127]
结果如下表所示，本发明的颗粒粒径分布在212μm≤d50≤1700μm，其溶化性为5分钟内可溶性颗粒剂应全部溶化，收率高，装量差异合格。
[0128]
表17颗粒粒径
[0129][0130]
注：本发明所述的粒度分布采用激光颗粒分布测量仪测定，例如gsl-101bⅰ型激光颗粒分布测量仪。
[0131]
实施例6荜铃胃痛颗粒治疗胃溃疡的用途
[0132]
1、材料
[0133]
1.1实验动物
[0134]
健康spf级sd大鼠，雄性，体质量180-220g，由南通大学提供，许可证号为scxk(苏)2019-0001。实验动物饲养于恒温环境，光照周期正常，通风良好，足量给予饲料，自由饮用水。实验前适应饲养1周，对动物的所有处理及操作均经中国药科大学动物伦理委员会批准。
[0135]
1.2药品与试剂
[0136]
实施例1的中药颗粒剂(以下称荜铃胃痛颗粒)；西咪替丁片(特一药业集团股份有限公司，批号190203，每片0.2g)；羧甲基纤维素钠(cmc-na，国药集团化学试剂有限公司，批号20191016)；无水乙醇(上海泰坦科技股份有限公司，批号p1575628)；多聚甲醛(pfa，美国sigma-aldrich，批号stbg6223)；总超氧化物歧化酶(sod)测试盒(货号a001-3-1)、髓过氧化物酶(mpo)测试盒(货号a044-1-1)，均购自南京建成生物工程研究所；白介素-1β(il-1β)elisa试剂盒(货号hb965-ra)、肿瘤坏死因子-α(tnf-α)elisa试剂盒(货号hb044-ra)、前列腺素e2(pge2)elisa试剂盒(货号hb445-ra)，均购自南京桥远生物科技有限公司。
[0137]
1.3实验仪器
[0138]
milli-q超纯水仪(美国millipore)；数字病理切片扫描仪(日本hamamatsu，型号nanozoomer 2.0rs)；离心机(德国eppendorf，型号5424r)；酶标仪(瑞士tecan，型号infinite 200pro)；微量电动组织匀浆器(美国kimble)。
[0139]
2、方法
[0140]
2.1大鼠乙醇型急性胃溃疡模型的制备
[0141]
制备大鼠乙醇型急性胃溃疡模型。sd大鼠造模前禁食至少24h，正常饮水。除对照组大鼠ig给予等体积生理盐水外，其余组大鼠ig无水乙醇(1ml/只)，同时禁水，1h后即成。
[0142]
2.2动物分组及给药
[0143]
sd大鼠48只，随机分为对照组、模型组、荜铃胃痛颗粒低剂量组(0.79g/kg)、荜铃胃痛颗粒中剂量组(1.58g/kg，为临床等效剂量)、荜铃胃痛颗粒高剂量组(3.16g/kg)、西咪替丁组(42.00mg/kg，为临床等效剂量)，每组8只。用于动物给药的荜铃胃痛颗粒和西咪替
丁片分别用研钵研碎成粉末，称取适量粉末与一定量0.5％cmc-na溶液一起研磨均匀即可。每日ig给药1次，对照组和模型组给予等体积0.5％cmc-na溶液，预给药8d，末次给药0.5h后造模。
[0144]
2.3动物样本采集及处理方法
[0145]
使用玻璃毛细管对大鼠眼眶后静脉丛取血后，脱颈椎牺牲大鼠，随即剪断贲门和幽门与胃连接处，完整取出全胃并用生理盐水清洗去表面血污，沿胃大弯剪开胃。用预冷生理盐水洗净胃黏膜面并吸干水渍，将胃平铺展开，黏膜面拍照。剪取溃疡及溃疡旁适当区域，放入3ml 4％多聚甲醛中，室温静置24h固定。全血样本4℃、3500r/min离心10min得上层血清。胃组织按照试剂盒要求制备组织匀浆检测相应生化指标。使用image j图像分析软件测量溃疡面积。
[0146]
2.4胃黏膜he染色及病理形态学检查
[0147]
4％多聚甲醛固定保存的胃组织送样至中国药科大学病理与pdx药效评价平台，常规石蜡包埋、切片后进行he染色。he染色后显微观察各组大鼠胃黏膜损伤情况，分别对出血范围(0-4分)、出血深度(0-2分)、黏膜水肿范围(0-4分)、炎性细胞浸润程度(0-3分)、上皮细胞脱落程度(0-3分)、腺体损伤程度(0-3分)进行考察评分。
[0148]
2.5数据分析
[0149]
各组数据均以表示，采用t检验进行两组间比较，p＜0.05表示差异具有统计学意义。使用graphpad prism 8和adobe illustrator cc 2019软件作图。
[0150]
3、结果
[0151]
3.1荜铃胃痛颗粒对模型大鼠胃溃疡面积和黏膜形态的影响
[0152]
如图1a所示，ig乙醇30min后，模型组大鼠胃溃疡面积与对照组相比显著增加(p《0.001)。预给药荜铃胃痛颗粒8d可显著降低溃疡面积(p《0.001)，阳性对照药西咪替丁也可显著降低黏膜损伤。图1b为各组大鼠胃黏膜面展开图，对照组大鼠胃黏膜无明显破损、充血及水肿，皱襞光滑完整、走向规则。与对照组相比，模型组大鼠胃黏膜损伤严重，表面呈暗红色，可见明显充血、水肿，皱襞减少，严重的可见线状、条索状及片状出血。与模型组相比，给药各组大鼠胃黏膜损伤明显减轻，黏膜皱襞较完整，表面为鲜红色，出血性损伤明显较少，偶有点状出血。结果表明，1ml无水乙醇可造成大鼠胃黏膜急性损伤，荜铃胃痛颗粒可显著减轻损伤面积，保护胃黏膜。
[0153]
3.2荜铃胃痛颗粒对大鼠胃黏膜组织病理评分和形态的影响
[0154]
每个实验组随机选取4个大鼠胃黏膜组织做he染色和病理评分。he染色观察胃黏膜病理变化并结合出血范围、出血深度等指标对病理切片评分，结果如图2所示。与对照组相比，模型组大鼠胃黏膜病理评分显著提高(p《0.001)，表明胃黏膜损伤严重。与模型组相比，荜铃胃痛颗粒各给药组大鼠胃黏膜病理评分显著降低(p《0.05、0.01)，胃黏膜损伤程度显著减轻。
[0155]
如图3所示，对照组大鼠胃黏膜结构完整，上皮结构和胃腺体完好，未见出血、水肿及炎细胞浸润。模型组大鼠损伤深达黏膜肌层，上皮细胞脱落严重伴间质多量出血、水肿和炎细胞浸润，腺体损伤严重。荜铃胃痛颗粒给药组大鼠胃黏膜上皮细胞脱落较少，间质少量出血、未见明显水肿和炎细胞浸润，胃腺体结构较完整。
[0156]
3.3荜铃胃痛颗粒对模型大鼠血清炎症因子的影响
[0157]
如图4所示，elisa法检测大鼠血清中il-1β(a)和tnf-α(b)的含量。与对照组相比，模型组大鼠血清中il-1β(p《0.01)和tnf-α(p《0.05)含量均显著升高。与模型组相比，荜铃胃痛颗粒各给药组大鼠血清中il-1β(p《0.05、0.001)和tnf-α(p《0.05)含量均显著降低。结果表明，荜铃胃痛颗粒具有较好的抗炎作用，减轻胃黏膜炎症反应。
[0158]
3.4荜铃胃痛颗粒对模型大鼠胃黏膜氧化应激的影响
[0159]
乙醇在胃内代谢可生成大量氧自由基，同时乙醇能够引起胃黏膜中性粒细胞浸润，促使其释放大量髓过氧化物酶(mpo)。当mpo催化反应生成的过量氧自由基超过局部抗氧化剂的防御反应时，就会导致氧化应激和氧化性组织损伤，氧自由基与胃黏膜损伤和溃疡发生有着密切的联系。
[0160]
如图5a所示，与对照组比较，模型组大鼠胃组织mpo活力显著提高(p《0.001)，荜铃胃痛颗粒可显著降低mpo活力(p《0.01、0.001)，减少胃组织氧自由基的积累。同时，具有抗氧化作用的sod活力在模型组大鼠中显著下降(p《0.01)，荜铃胃痛颗粒可显著提高sod活力(p《0.05)，增强机体氧自由基清除能力，减轻氧化性损伤和溃疡发生。阳性对照药西咪替丁对胃黏膜氧化应激不具备改善作用。
[0161]
3.6荜铃胃痛颗粒对模型大鼠胃pge2的影响
[0162]
pge2在胃黏膜保护中扮演着重要角色，可抑制胃酸胃蛋白酶分泌，促进黏液和碳酸氢盐分泌，增加胃黏膜血流量并有助于胃黏膜修复和维持其完整性，其独特保护作用被称为“适应性细胞保护”，nsaids导致的内源性pge2缺乏是胃溃疡产生的重要原因。如图6所示，与对照组相比，模型组大鼠胃中pge2含量显著降低(p《0.01)。荜铃胃痛颗粒可显著提高胃内pge2水平(p《0.05)，提高胃黏膜保护力。
[0163]
4讨论
[0164]
胃溃疡是常见的消化系统疾病，发病率高，患病周期长，易复发，具有较强的周期性和节律性。胃黏膜防御因素与损伤因素的失衡导致胃溃疡的发生，但其发病机制复杂，尚未完全阐明。以ppis和h2ras为代表的抑酸药作为传统的治疗方法已显示出多种副作用。中药治疗胃溃疡具有良好的疗效，作用机理主要包括抑制胃酸分泌和胃蛋白酶活力、促进胃黏液分泌、提高黏膜血流量和改善微循环、缓解氧化应激和提高胃黏膜保护因子含量等，具有多成分、多靶点、多通路的特点。
[0165]
荜铃胃痛颗粒临床主治胃脘痛，组方中荜澄茄、川楝子、延胡索、黄连等中药的抗炎镇痛活性以及海螵蛸、煅瓦楞子等中药的制酸抑酸活性均有较多研究，对荜铃胃痛颗粒治疗实验性胃溃疡及胃黏膜的保护研究尚未见报道。本研究发现荜铃胃痛颗粒可显著缓解乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤，减轻炎症，提高sod活力与pge2的合成，且作用效果优于阳性对照药西咪替丁。表明荜铃胃痛颗粒可以通过治疗胃溃疡、提高机体抗氧化能力及促进胃黏膜保护因子的产生途径发挥其缓解胃脘痛的作用。胃黏膜保护力的增强与抑制炎症作用缓解了对胃黏膜的刺激，从根本上减轻胃痛的产生。
[0166]
本研究为荜铃胃痛颗粒治疗胃溃疡的临床应用提供了现代药理学依据，对进一步阐明荜铃胃痛颗粒药效作用及作用机制积累科学数据，也为荜铃胃痛颗粒临床合理应用提供支撑。
[0167]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特
点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0168]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。