陈皮的检测分级方法与流程

陈皮的检测分级方法
1.本技术是申请号为202111186037.4、申请日为2021年10月12日、发明名称为“陈皮的检测分级方法”的分案申请。
技术领域
2.本发明属于中药材质量控制技术领域，特别涉及一种陈皮的检测分级方法。


背景技术：

3.2020版《中国药典》将“陈皮”定义为芸香科植物橘citrus reticulata blanco及其栽培变种(茶枝柑citrus reticulate
‘
chachi’等)的干燥成熟果皮，其中来源茶枝柑的果皮为“广陈皮”。
4.随着存储年份的增加，自然陈化的陈皮外观颜色会逐渐变深，价格也随之越高。因此，市场上不乏商家以做旧新皮伪装为外观颜色深的高年份陈皮赚取高额利润，该市场乱象严重影响陈皮行业的健康发展。市场上消费者购买广陈皮时，也一般认为外观颜色深的高年份陈皮就是品质好的陈皮。然而，年份陈皮的外观性状受“产地”、“成熟度”、“存储方式”、“储藏环境”、“干燥方法”、“储藏时间”及人为做旧处理等众多因素的影响。在没有相应客观评价标准的前提下，以“年份”论品质，是不合理的。
5.传统的关于陈皮品质的评价方法，例如：地方标准《db4407/t 70-2021地理标志产品新会陈皮》对青皮、微红皮、大红皮等不同成熟度的陈皮进行了品质分类，分为“一等品”、“二等品”和“三等品”三个等级，该地方标准检验陈皮品质等级的方法主要是目测法、手感法和嗅觉法等传统的经验鉴别方法；而传统感官评价方法大多为主观性强，准确性相对较差，经验传承困难，评判结果的重现性差。
6.因此，如何客观、准确的评价陈皮，是亟待解决的技术问题。


技术实现要素：

7.基于此，本发明的主要目的是提供陈皮的检测分级方法，采用本发明的检测分级方法对陈皮进行检测，所得结果可客观、准确地反映陈皮品质。
8.本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
9.一种陈皮的检测分级方法，所述检测分级方法包括如下步骤：
10.提供包含维采宁-2和5-羟甲基糠醛的对照品溶液，制备待测陈皮的供试品溶液，采用高效液相色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，
11.在检测波长为215nm～225nm下检测获得检测图谱ⅰ，所述检测图谱ⅰ包含色谱峰ⅰa和色谱峰ⅰb，所述色谱峰ⅰa为所述维采宁-2的色谱峰，所述色谱峰ⅰb与所述色谱峰ⅰa的保留时间比值为0.1～0.12，
12.在检测波长为255nm～265nm下检测获得检测图谱ⅱ，所述检测图谱ⅱ包含色谱峰ⅱa、色谱峰ⅱb、色谱峰ⅱc、色谱峰ⅱd和色谱峰ⅱe，所述色谱峰ⅱa为所述维采宁-2的色谱峰，所述色谱峰ⅱb为5-羟甲基糠醛的色谱峰，所述的色谱峰ⅱc、色谱峰ⅱd和色谱峰ⅱe
与所述色谱峰ⅱa的保留时间比值分别为0.32～0.34、0.70～0.72和0.71～0.73，
13.分析所述检测图谱ⅰ中所述色谱峰ⅰa和所述色谱峰ⅰb的峰面积，以及所述检测图谱ⅱ中所述的色谱峰ⅱa、色谱峰ⅱb、色谱峰ⅱc、色谱峰ⅱd和色谱峰ⅱe的峰面积，根据色谱峰面积比值的分析结果确定所述待测陈皮的品质级别。
14.在其中一个实施例中，所述色谱峰ⅰb为与陈皮的陈化度具有负相关变化关系的差异成分的色谱峰，所述色谱峰ⅱc和色谱峰ⅱd各自独立地为与陈皮的陈化度具有正相关变化关系的差异成分的色谱峰，所述色谱峰ⅱe为茶水染色陈皮相对于其他陈皮特有的成分的色谱峰，
15.所述色谱峰ⅰb在所述检测图谱ⅰ中与所述维采宁-2的相对位置基本如图2中的1号峰和3号峰所示，
16.所述色谱峰ⅱc、色谱峰ⅱd和色谱峰ⅱe在所述检测图谱ⅱ中与所述维采宁-2的相对位置基本如图7中的2号峰、3号峰、4号峰和5号峰所示。
17.在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为c18色谱柱，流动相a为甲醇，流动相b为磷酸体积百分比0.08％～0.12％的磷酸水溶液，采用梯度洗脱。
18.在其中一个实施例中，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相a的体积百分比为5％，5min～10min，所述流动相a的体积百分比由5％上升至10％，10min～15min，所述流动相a的体积百分比为10％，15min～25min，所述流动相a的体积百分比由10％上升至20％，25min～35min，所述流动相a的体积百分比由20％上升至25％，35min～50min，所述流动相a的体积百分比由25％上升至40％，50min～55min，所述流动相a的体积百分比为40％，55min～60min，所述流动相a的体积百分比由40％上升至50％，60min～65min，所述流动相a的体积百分比为50％。
19.在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：流速为0.8ml/min～1.2ml/min，或/和，柱温为28℃～32℃，或/和，进样量为8μl～12μl。
20.在其中一个实施例中，所述供试品溶液的制备步骤包括：用提取溶剂对所述待测陈皮进行提取，收集提取液，制备所述供试品溶液。
21.在其中一个实施例中，所述提取溶剂包含甲醇体积百分比为10％～35％的甲醇水溶液。
22.在其中一个实施例中，提取的方式采用超声提取。
23.在其中一个实施例中，所述对照品溶液中的溶剂包含甲醇体积百分比为45％～55％的甲醇水溶液。
24.在其中一个实施例中，根据所述分析结果确定所述待测陈皮的品质级别，包括：
25.r1≥0.7，所述待测陈皮对应高温加速陈化陈皮或者高湿加速陈化陈皮，
26.r2＞0.1，所述待测陈皮对应茶水染色陈皮，
27.r1＜0.7，且r2≤0.1，且r3≥0.9，所述待测陈皮对应烧皮或者存储于透气率＜5mm/s条件下自然陈化的陈皮，
28.r1＜0.7，且r2≤0.1，且r3＜0.9，且r4和r5之一＞0.6，所述待测陈皮对应年份小于七年且存储于5mm/s≤透气率≤80mm/s条件下自然陈化的陈皮或者年份小于五年且存储于透气率＞80mm/s条件下自然陈化的陈皮，
29.r1＜0.7，且r2≤0.1，r3＜0.9，且r4和r5均＞0.6，所述陈皮对应年份大于等于七
年且存储于5mm/s≤透气率≤80mm/s条件下自然陈化的陈皮、年份大于等于五年且存储于透气率＞80mm/s条件下自然陈化的陈皮或者其他做旧方式陈化陈皮，
30.其中，所述的r1、r2、r4和r5分别为所述的色谱峰ⅱb、色谱峰ⅱe、色谱峰ⅱc和色谱峰ⅱd与所述色谱峰ⅱa的峰面积比值，所述r3为所述色谱峰ⅰb与所述色谱峰ⅰa的峰面积比值。
31.一种陈皮的特征图谱的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：
32.提供包含维采宁-2或/和橙皮苷的对照品溶液，制备陈皮的供试品溶液，采用高效液相色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，在255nm～265nm下检测获得对照色谱和检测图谱，将所述检测图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析获得模式图谱，参照所述对照色谱对所述模式图谱进行特征峰指认，获得陈皮的特征图谱。
33.在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为c18色谱柱，流动相a为甲醇，流动相b为磷酸体积百分比0.08％～0.12％的磷酸水溶液，采用梯度洗脱。
34.在其中一个实施例中，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相a的体积百分比为5％，
35.5min～10min，所述流动相a的体积百分比由5％上升至10％，10min～15min，所述流动相a的体积百分比为10％，15min～25min，所述流动相a的体积百分比由10％上升至20％，25min～35min，所述流动相a的体积百分比由20％上升至25％，35min～50min，所述流动相a的体积百分比由25％上升至40％，50min～55min，所述流动相a的体积百分比为40％，55min～60min，所述流动相a的体积百分比由40％上升至50％，60min～65min，所述流动相a的体积百分比为50％。
36.在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：流速为0.8ml/min～1.2ml/min，或/和，柱温为28℃～32℃，或/和，进样量为8μl～12μl。
37.在其中一个实施例中，所述供试品溶液的制备步骤包括：用提取溶剂对所述陈皮进行提取，收集提取液，制备所述供试品溶液。在其中一个实施例中，所述提取溶剂包含甲醇体积百分比为10％～35％的甲醇水溶液。在其中一个实施例中，提取的方式采用超声提取。
38.在其中一个实施例中，所述对照品溶液中的溶剂包含甲醇体积百分比为45％～55％的甲醇水溶液。
39.在其中一个实施例中，所述陈皮包含低陈化度陈皮、中等陈化度陈皮、高陈化度陈皮、高温加速陈皮、茶水染色陈皮、虫蛀陈皮、高湿加速陈皮、其他做旧方式陈皮和烧皮；其中，所述低陈化度陈皮对应存储于透气率＜5mm/s条件下自然陈化的陈皮，所述中等陈化度陈皮对应年份小于七年且存储于5≤透气率≤80mm/s条件下自然陈化的陈皮或者年份小于五年且存储于透气率＞80mm/s条件下自然陈化的陈皮，所述高陈化度陈皮对应年份大于等于七年且存储于5≤透气率≤80mm/s条件下自然陈化的陈皮或者年份大于等于五年且存储于透气率＞80mm/s条件下自然陈化的陈皮。
40.在其中一个实施例中，所述陈皮为低陈化度陈皮，所述特征图谱包含峰4、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图9所示，
41.所述陈皮为中等陈化度陈皮，所述特征图谱包含峰1、峰3、峰4、峰6、峰7、峰9、峰
10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图10所示，
42.所述陈皮为高陈化度陈皮，所述特征图谱包含峰1、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图11所示，
43.所述陈皮为高温加速陈皮，所述特征图谱包含峰2、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图12所示，
44.所述陈皮为茶水染色陈皮，所述特征图谱包含峰4、峰5、峰6、峰7、峰8、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图13所示，
45.所述陈皮为虫蛀陈皮，所述特征图谱包含峰1、峰3、峰4、峰5、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图14所示，
46.所述陈皮为高湿加速陈皮，所述特征图谱包含峰2、峰3、峰4、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图16所示，
47.所述陈皮为其他做旧方式陈皮，所述特征图谱包含峰1、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图15所示，
48.所述陈皮为烧皮，所述特征图谱包含如图17所示的峰2、峰4、峰5、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图17所示；
49.以橙皮苷对应的峰12为参照峰，其余各特征峰的相对保留时间在相应的规定值
±
10％之内，各特征峰的规定值为：峰1为3.9min，峰2为11.4min，峰3为13.8min，峰4为15.5min，峰5为23.9min，峰6为29.8min，峰7为30.6min，峰8为31.9min，峰9为43.2min，峰10为45.5min，峰11为46.7min；或者，以维采宁-2对应的峰9为参照峰，其余各特征峰的相对保留时间在相应的规定值
±
10％之内，各特征峰的规定值为：峰1为3.9min，峰2为11.4min，峰3为13.8min，峰4为15.5min，峰5为23.9min，峰6为29.8min，峰7为30.6min，峰8为31.9min，峰10为45.5min，峰11为46.7min，峰12为56.4min。
50.一种陈皮的检测分级方法，所述检测分级方法包括如下步骤：
51.参照所述的构建方法构建不同品质级别的陈皮的特征图谱，所述陈皮的品质级别包含低陈化度陈皮、中等陈化度陈皮、高陈化度陈皮、高温加速陈皮、茶水染色陈皮、虫蛀陈皮、高湿加速陈皮、其他做旧方式陈皮和烧皮，
52.制备待测陈皮的供试品溶液，采用高效液相色谱法对所述供试品溶液进行检测，在255nm～265nm下获得检测图谱；
53.将所述检测图谱与所述不同品质级别的陈皮的特征图谱进行比对，根据特征峰种类的比对结果确定所述待测陈皮的品质级别。
54.在其中一个实施例中，所述检测分级方法还包括：所述检测图谱所含色谱峰与所述高陈化度陈皮的特征图谱所含特征峰一致，则将所述检测图谱和所述高陈化度陈皮的特征图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统获得相似度系数，并根据所述相似度系数确定所述待测陈皮的品质级别。
55.在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为c18色谱柱，流动相a为甲醇，流动相b为磷酸体积百分比0.08％～0.12％的磷酸水溶液，采用梯度洗脱。
56.在其中一个实施例中，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相a的体积百分比为5％，5min～10min，所述流动相a的体积百分比由5％上升至10％，10min～15min，所
述流动相a的体积百分比为10％，15min～25min，所述流动相a的体积百分比由10％上升至20％，25min～35min，所述流动相a的体积百分比由20％上升至25％，35min～50min，所述流动相a的体积百分比由25％上升至40％，50min～55min，所述流动相a的体积百分比为40％，55min～60min，所述流动相a的体积百分比由40％上升至50％，60min～65min，所述流动相a的体积百分比为50％。
57.在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：流速为0.8ml/min～1.2ml/min。在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：柱温为28℃～32℃。在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：进样量为8μl～12μl。在其中一个实施例中，所述供试品溶液的制备步骤包括：用提取溶剂对所述待测陈皮进行提取，收集提取液，制备所述供试品溶液。
58.在其中一个实施例中，所述提取溶剂包含甲醇体积百分比为10％～35％的甲醇水溶液。
59.在其中一个实施例中，提取的方式采用超声提取。
60.一种陈皮的检测分级方法，所述检测分级方法包括如下步骤：
61.参照所述的构建方法构建高陈化度陈皮的特征图谱；
62.提供包含维采宁-2或/和橙皮苷的对照品溶液，制备待测陈皮的供试品溶液，采用高效液相色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，在255nm～265nm下获得对照图谱和检测图谱，参照所述对照图谱比较所述检测图谱与所述高陈化度陈皮的特征图谱，根据特征峰缺少的比较结果确定所述待测陈皮的品质级别。
63.在其中一个实施例中，所述检测分级方法还包括：所述检测图谱所含色谱峰与所述高陈化度陈皮的特征图谱所含特征峰一致，则将所述检测图谱和所述高陈化度陈皮的特征图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统获得相似度系数，并根据所述相似度系数确定所述待测陈皮的品质级别。
64.在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为c18色谱柱，流动相a为甲醇，流动相b为磷酸体积百分比0.08％～0.12％的磷酸水溶液，采用梯度洗脱。
65.在其中一个实施例中，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相a的体积百分比为5％，5min～10min，所述流动相a的体积百分比由5％上升至10％，10min～15min，所述流动相a的体积百分比为10％，15min～25min，所述流动相a的体积百分比由10％上升至20％，25min～35min，所述流动相a的体积百分比由20％上升至25％，35min～50min，所述流动相a的体积百分比由25％上升至40％，50min～55min，所述流动相a的体积百分比为40％，55min～60min，所述流动相a的体积百分比由40％上升至50％，60min～65min，所述流动相a的体积百分比为50％。
66.在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：流速为0.8ml/min～1.2ml/min。在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：柱温为28℃～32℃。在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的条件包括：进样量为8μl～12μl。
67.在其中一个实施例中，所述供试品溶液的制备步骤包括：用提取溶剂对所述待测陈皮进行提取，收集提取液，制备所述供试品溶液。在其中一个实施例中，所述提取溶剂包含甲醇体积百分比为10％～35％的甲醇水溶液。在其中一个实施例中，提取的方式采用超声提取。
68.一种陈皮的检测分级方法，所述检测分级方法包括如下步骤：提供陈皮样品，参照所述的检测分级方法，根据色谱峰面积比值确定所述陈皮样品的品质级别，参照所述的检测分级方法，根据相似度系数确定所述陈皮样品的品质级别，根据以下质量分级方法确定所述陈皮样品的综合品质等级，
[0069][0070][0071]
根据确定的所述综合品质等级，对所述陈皮样品进行检测分级。
[0072]
与传统技术相比，本发明具备如下有益效果：本发明采用高效液相色谱法，特别是配合合适的高效液相色谱条件，对不同品质级别陈皮间存在的差异成分进行检测，并分析这些差异成分的峰面积，特别是这些差异成分的峰面积与维采宁-2(陈皮中已知且稳定的成分)峰面积的比值，确定待测陈皮的类型，最终实现待测陈皮品质评价，本发明检测分级方法直观且量化，能客观、准确地实现陈皮品质鉴别，为陈皮的质量控制提供稳定、可靠的技术手段。并且，本发明的检测分级方法具有实用性好(快速、简便)和相关性(能够较好反映不同来源陈皮的差异)特点，能推动陈皮行业的高质量发展。同时，本发明突破了以年份论品质的传统理念，为陈皮质量标准的完善提供新思路和新技术支持。
附图说明
[0073]
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0074]
图1为本发明技术路线图；
[0075]
图2为三种不同存储方式的陈皮样品hplc色谱图(220nm)；
[0076]
图3为三种不同存储方式的陈皮样品hplc色谱图(260nm)；
[0077]
图4为hplc全波长扫描3d图；其中，a为样品s11与s17在260nm波长下的色谱图；b为s13的全波长扫描等值图；c为s12的全波长扫描等值图；
[0078]
图5为hplc全波长扫描等值图与对应260nm波长下的色谱图；
[0079]
图6为三种不同浓度提取溶剂的陈皮hplc色谱图(260nm)；
[0080]
图7为不同来源陈皮hplc色谱图(260nm)；
[0081]
图8为陈皮陈化度分级图；
[0082]
图9为低陈化度陈皮hplc特征图谱；
[0083]
图10为中等陈化度陈皮hplc特征图谱；
[0084]
图11为高陈化度陈皮hplc特征图谱；
[0085]
图12为高温加速陈皮hplc特征图谱；
[0086]
图13为茶水染色陈皮hplc特征图谱；
[0087]
图14为虫蛀陈皮hplc特征图谱；
[0088]
图15为其他做旧方式陈皮hplc特征图谱；
[0089]
图16为高湿加速陈皮hplc特征图谱；
[0090]
图17为烧皮hplc特征图谱；
[0091]
图18为不同品质级别陈皮对照特征图谱比较；
[0092]
图19为微观层面的广陈皮品质等级图。
具体实施方式
[0093]
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更详细的描述。但是，应当理解，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式或实施例。相反地，提供这些实施方式或实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
[0094]
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式或实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”的可选范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。
[0095]
术语：本发明中，“第一方面”、“第二方面”、“第三方面”、“第四方面”等仅用于描述目的，不能理解为指示或暗示相对重要性或数量，也不能理解为隐含指明所指示的技术特征的重要性或数量。
[0096]
本发明中，以开放式描述的技术特征中，包括所列举特征组成的封闭式技术方案，也包括包含所列举特征的开放式技术方案。本发明中，涉及到数值区间，如无特别说明，则包括数值区间的两个端点。本发明中涉及的百分比含量，如无特别说明，对于固液混合和固相-固相混合均指质量百分比，对于液相-液相混合指体积百分比。本发明中涉及的百分比浓度，如无特别说明，均指终浓度。所述终浓度，指添加成分在添加该成分后的体系中的占比。本发明中的温度参数，如无特别限定，既允许为恒温处理，也允许在一定温度区间内进行处理。所述的恒温处理允许温度在仪器控制的精度范围内进行波动。需要说明的是，本发明提供的陈皮的检测分级方法和特征图谱的构建方法，其所涉步骤没有时间先后顺序限制。
[0097]
行业标准《db44t 604-2009地理标志产品新会陈皮》将新会陈皮的年份分为三类，即生产年份、历史年份和陈化年份，并对这三种年份进行了阐述。其中
①
生产年份，指采收果实并加工成果皮的年份，说明样品什么年份生产；
②
历史年份，指以检验年份减去生产年份加一年计算出的年份，说明样品有多久；
③
陈化年份，指以年份表示的陈皮陈化度，说明样品达到相应等级的陈化水平。同时，该标准还定义了其他专业术语，如：“陈化”：在自然干爽通风的条件下，产品贮存在透气性良好的包装容器内，随着时间变化，干柑皮其有效内含物的消长变化而导致其色、香、味和成分变化的过程。“陈化度”：用年份表示的新会陈皮不同时期的感官性状。“烧皮”：新鲜柑皮中含有较多糖份，易吸潮，若堆放时间长而不及时翻
堆和晒皮，产生升温，诱发快速糖醇解，造成的碳化和黑皮变坏现象。“虫蛀”：干皮在贮存期间，主要受谷蠹、咖啡豆象等虫的蛀食，先是在“橘白”蛀食成遂道，然后“橘红”穿孔，最后变成蛀粉而失去商品价值。“其他做旧方式”：除高温加速、茶水染色、高湿加速之外的其他做旧方式。本发明所述的“对应”，仅用来限定状态，而非限定获取方式。也可涵盖不同方式获得的相同或相似品质的陈皮。
[0098]
第一方面，本发明提供一种陈皮的检测分级方法，所述检测分级方法包括如下步骤：
[0099]
提供包含维采宁-2和5-羟甲基糠醛的对照品溶液，制备待测陈皮的供试品溶液，采用高效液相色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，
[0100]
在检测波长为215nm～225nm下检测获得检测图谱ⅰ，所述检测图谱ⅰ包含色谱峰ⅰa和色谱峰ⅰb，所述色谱峰ⅰa为所述维采宁-2的色谱峰，所述色谱峰ⅰb与所述色谱峰ⅰa的保留时间比值为0.1～0.12，
[0101]
在检测波长为255nm～265nm下检测获得检测图谱ⅱ，所述检测图谱ⅱ包含色谱峰ⅱa、色谱峰ⅱb、色谱峰ⅱc、色谱峰ⅱd和色谱峰ⅱe，所述色谱峰ⅱa为所述维采宁-2的色谱峰，所述色谱峰ⅱb为5-羟甲基糠醛的色谱峰，所述的色谱峰ⅱc、色谱峰ⅱd和色谱峰ⅱe与所述色谱峰ⅱa的保留时间比值分别为0.32～0.34、0.70～0.72和0.71～0.73，
[0102]
分析所述检测图谱ⅰ中所述色谱峰ⅰa和所述色谱峰ⅰb的峰面积，以及所述检测图谱ⅱ中所述的色谱峰ⅱa、色谱峰ⅱb、色谱峰ⅱc、色谱峰ⅱd和色谱峰ⅱe的峰面积，根据所得分析结果确定所述待测陈皮的品质级别。
[0103]
在其中一个示例中，所述色谱峰ⅰb为与陈皮的陈化度具有负相关变化关系的差异成分的色谱峰，所述色谱峰ⅱc和色谱峰ⅱd各自独立地为与陈皮的陈化度具有正相关变化关系的差异成分的色谱峰，所述色谱峰ⅱe为茶水染色陈皮相对于其他陈皮特有的成分的色谱峰，所述色谱峰ⅰb在所述检测图谱ⅰ中与所述维采宁-2的相对位置基本如图2中的1号峰和3号峰所示，所述色谱峰ⅱc、色谱峰ⅱd和色谱峰ⅱe在所述检测图谱ⅱ中与所述维采宁-2的相对位置基本如图7中的2号峰、3号峰、4号峰和5号峰所示。
[0104]
本发明提供的陈皮的检测分级方法，为便于色谱峰的指认，所采用的对照品溶液还可以进一步包含橙皮苷等。
[0105]
在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为c18色谱柱，流动相a为甲醇，流动相b为磷酸体积百分比0.08％～0.12％的磷酸水溶液，采用梯度洗脱。所述磷酸水溶液中磷酸体积百分比可以选自，包括但不限于，下述任一种浓度或者任两种浓度之间的浓度范围：0.08％、0.09％、0.10％、0.11％、0.12％。
[0106]
在其中一个示例中，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相a的体积百分比为5％，5min～10min，所述流动相a的体积百分比由5％上升至10％，10min～15min，所述流动相a的体积百分比为10％，15min～25min，所述流动相a的体积百分比由10％上升至20％，25min～35min，所述流动相a的体积百分比由20％上升至25％，35min～50min，所述流动相a的体积百分比由25％上升至40％，50min～55min，所述流动相a的体积百分比为40％，55min～60min，所述流动相a的体积百分比由40％上升至50％，60min～65min，所述流动相a的体积百分比为50％。
[0107]
在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：流速为0.8ml/min～
1.2ml/min。所述流速可以选自，包括但不限于，下述任一种流速或者任两种流速之间的流速范围：0.8ml/min、0.85ml/min、0.9ml/min、0.95ml/min、1ml/min、1.05ml/min、1.1ml/min、1.15ml/min、1.2ml/min。在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：柱温为28℃～32℃。所述柱温可以选自，包括但不限于，下述任一种柱温或者任两种柱温之间的柱温范围：28℃、28.5℃、29℃、29.5℃、30℃、30.5℃、31℃、31.5℃、32℃。在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：进样量为8μl～12μl。所述进样量可以选自，包括但不限于，下述任一种进样量或者任两种进样量之间的进样量范围：8μl、8.5μl、9μl、9.5μl、10μl、10.5μl、11μl、11.5μl、12μl。
[0108]
在其中一个示例中，所述供试品溶液的制备步骤包括：用提取溶剂对所述陈皮进行提取，收集提取液，制备所述供试品溶液。在其中一个示例中，所述提取溶剂包含甲醇体积百分比为10％～35％的甲醇水溶液。所述提取溶剂包含甲醇体积百分比可以选自，包括但不限于，下述任一种浓度或者任两种浓度之间的浓度范围：10％、15％、20％、25％、30％、35％。在其中一个示例中，提取的方式采用超声提取。进一步地，超声提取的时长为20min～40min，例如20min、25min、30min、35min、40min。可以理解的是，在提取的过程中，提取溶剂如有损耗，可以继续添加所述提取溶剂填补损耗。本发明对收集所述提取液的方式不做特别限定，例如可以采用离心的方式，在离心后收集上清液，在用微孔滤膜过滤。离心的条件可以是8000rpm～12000rpm下离心8min～12min，例如8000rpm下离心12min、12000rpm下离心8min、10000rpm下离心10min。
[0109]
在其中一个示例中，所述对照品溶液中的溶剂包含甲醇体积百分比为45％～55％的甲醇水溶液。所述甲醇水溶液中甲醇的浓度可以选自，包括但不限于，下述任一种浓度或者任两种浓度之间的浓度范围：45％、45％、50％、55％。
[0110]
在其中一个示例中，根据所述分析结果确定所述待测陈皮的品质级别，包括：r1≥0.7，所述待测陈皮对应高温加速陈化陈皮或者高湿加速陈化陈皮，r2＞0.1，所述待测陈皮对应茶水染色陈皮，r1＜0.7，且r2≤0.1，且r3≥0.9，所述待测陈皮对应烧皮或者存储于透气率＜5mm/s条件下自然陈化的陈皮，r1＜0.7，且r2≤0.1，且r3＜0.9，且r4和r5之一＞0.6，所述待测陈皮对应年份小于七年且存储于5mm/s≤透气率≤80mm/s条件下自然陈化的陈皮或者年份小于五年且存储于透气率＞80mm/s条件下自然陈化的陈皮，r1＜0.7，且r2≤0.1，r3＜0.9，且r4和r5均＞0.6，所述陈皮对应年份大于等于七年且存储于5mm/s≤透气率≤80mm/s条件下自然陈化的陈皮、年份大于等于五年且存储于透气率＞80mm/s条件下自然陈化的陈皮或者其他做旧方式陈化陈皮，其中，所述的r1、r2、r4和r5分别为所述的色谱峰ⅱb、色谱峰ⅱe、色谱峰ⅱc和色谱峰ⅱd与所述色谱峰ⅱa的峰面积比值，所述r3为所述色谱峰ⅰb与所述色谱峰ⅰa的峰面积比值。
[0111]
本发明提供的陈皮的特征图谱的构建方法，可用于常见陈皮品质级别的特征图谱的构建，且相应获得的特征图谱能体现陈皮成分特点，能将多种品质级别陈皮予以区分。
[0112]
第二方面，一种陈皮的特征图谱的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：提供包含维采宁-2或/和橙皮苷的对照品溶液，制备陈皮的供试品溶液，采用高效液相色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，在255nm～265nm下检测获得对照色谱和检测图谱，将所述检测图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析获得模式图谱，参照所述对照色谱对所述模式图谱进行特征峰指认，获得陈皮的特征图谱。
[0113]
在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为c18色谱柱，流动相a为甲醇，流动相b为磷酸体积百分比0.08％～0.12％的磷酸水溶液，采用梯度洗脱。所述磷酸水溶液中磷酸体积百分比可以选自，包括但不限于，下述任一种浓度或者任两种浓度之间的浓度范围：0.08％、0.09％、0.10％、0.11％、0.12％。在其中一个示例中，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相a的体积百分比为5％，5min～10min，所述流动相a的体积百分比由5％上升至10％，10min～15min，所述流动相a的体积百分比为10％，15min～25min，所述流动相a的体积百分比由10％上升至20％，25min～35min，所述流动相a的体积百分比由20％上升至25％，35min～50min，所述流动相a的体积百分比由25％上升至40％，50min～55min，所述流动相a的体积百分比为40％，55min～60min，所述流动相a的体积百分比由40％上升至50％，60min～65min，所述流动相a的体积百分比为50％。在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：流速为0.8ml/min～1.2ml/min。所述流速可以选自，包括但不限于，下述任一种流速或者任两种流速之间的流速范围：0.8ml/min、0.85ml/min、0.9ml/min、0.95ml/min、1ml/min、1.05ml/min、1.1ml/min、1.15ml/min、1.2ml/min。
[0114]
在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：柱温为28℃～32℃。所述柱温可以选自，包括但不限于，下述任一种柱温或者任两种柱温之间的柱温范围：28℃、28.5℃、29℃、29.5℃、30℃、30.5℃、31℃、31.5℃、32℃。在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：进样量为8μl～12μl。所述进样量可以选自，包括但不限于，下述任一种进样量或者任两种进样量之间的进样量范围：8μl、8.5μl、9μl、9.5μl、10μl、10.5μl、11μl、11.5μl、12μl。
[0115]
在其中一个示例中，所述供试品溶液的制备步骤包括：用提取溶剂对所述陈皮进行提取，收集提取液，制备所述供试品溶液。在其中一个示例中，所述提取溶剂包含甲醇体积百分比为10％～35％的甲醇水溶液。所述提取溶剂包含甲醇体积百分比可以选自，包括但不限于，下述任一种浓度或者任两种浓度之间的浓度范围：10％、15％、20％、25％、30％、35％。在其中一个示例中，提取的方式采用超声提取。进一步地，超声提取的时长为20min～40min，例如20min、25min、30min、35min、40min。可以理解的是，在提取的过程中，提取溶剂如有损耗，可以继续添加所述提取溶剂填补损耗。本发明对收集所述提取液的方式不做特别限定，例如可以采用离心的方式，在离心后收集上清液，在用微孔滤膜过滤。离心的条件可以是8000rpm～12000rpm下离心8min～12min，例如8000rpm下离心12min、12000rpm下离心8min、10000rpm下离心10min。
[0116]
在其中一个示例中，所述对照品溶液中的溶剂包含甲醇体积百分比为45％～55％的甲醇水溶液。所述甲醇水溶液中甲醇的浓度可以选自，包括但不限于，下述任一种浓度或者任两种浓度之间的浓度范围：45％、45％、50％、55％。
[0117]
在其中一个示例中，所述陈皮包含低陈化度陈皮、中等陈化度陈皮、高陈化度陈皮、高温加速陈皮、茶水染色陈皮、虫蛀陈皮、高湿加速陈皮、其他做旧方式陈皮和烧皮；其中，所述低陈化度陈皮对应存储于透气率＜5mm/s条件下自然陈化的陈皮，所述中等陈化度陈皮对应年份小于七年且存储于5≤透气率≤80mm/s条件下自然陈化的陈皮或者年份小于五年且存储于透气率＞80mm/s条件下自然陈化的陈皮，所述高陈化度陈皮对应年份大于等于七年且存储于5≤透气率≤80mm/s条件下自然陈化的陈皮或者年份大于等于五年且存储于透气率＞80mm/s条件下自然陈化的陈皮。
[0118]
在其中一个示例中，所述陈皮为低陈化度陈皮，所述特征图谱包含峰4、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图9所示，
[0119]
所述陈皮为中等陈化度陈皮，所述特征图谱包含峰1、峰3、峰4、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图10所示，
[0120]
所述陈皮为高陈化度陈皮，所述特征图谱包含峰1、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图11所示，
[0121]
所述陈皮为高温加速陈皮，所述特征图谱包含峰2、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图12所示，
[0122]
所述陈皮为茶水染色陈皮，所述特征图谱包含峰4、峰5、峰6、峰7、峰8、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图13所示，
[0123]
所述陈皮为虫蛀陈皮，所述特征图谱包含峰1、峰3、峰4、峰5、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图14所示，
[0124]
所述陈皮为高湿加速陈皮，所述特征图谱包含峰2、峰3、峰4、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图16所示，
[0125]
所述陈皮为其他做旧方式陈皮，所述特征图谱包含峰1、峰3、峰4、峰5、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图15所示，
[0126]
所述陈皮为烧皮，所述特征图谱包含如图17所示的峰2、峰4、峰5、峰6、峰7、峰9、峰10、峰11和峰12，峰9为维采宁-2的色谱峰，各特征峰与峰9的相对位置基本如图17所示；
[0127]
以橙皮苷对应的峰12为参照峰，其余各特征峰的相对保留时间在相应的规定值
±
10％之内，各特征峰的规定值为：峰1为3.9min，峰2为11.4min，峰3为13.8min，峰4为15.5min，峰5为23.9min，峰6为29.8min，峰7为30.6min，峰8为31.9min，峰9为43.2min，峰10为45.5min，峰11为46.7min；或者，以维采宁-2对应的峰9为参照峰，其余各特征峰的相对保留时间在相应的规定值
±
10％之内，各特征峰的规定值为：峰1为3.9min，峰2为11.4min，峰3为13.8min，峰4为15.5min，峰5为23.9min，峰6为29.8min，峰7为30.6min，峰8为31.9min，峰10为45.5min，峰11为46.7min，峰12为56.4min。
[0128]
第三方面，本发明提供一种陈皮的检测分级方法，所述检测分级方法包括如下步骤：
[0129]
参照如上所述的构建方法构建不同品质级别的陈皮的特征图谱，所述陈皮的品质级别包含低陈化度陈皮、中等陈化度陈皮、高陈化度陈皮、高温加速陈皮、茶水染色陈皮、虫蛀陈皮、高湿加速陈皮、其他做旧方式陈皮和烧皮，
[0130]
制备待测陈皮的供试品溶液，采用高效液相色谱法对所述供试品溶液进行检测，在255nm～265nm下获得检测图谱；
[0131]
将所述检测图谱与所述不同品质级别的陈皮的特征图谱进行比对，根据特征峰种类的比对结果确定所述待测陈皮的品质级别。
[0132]
本发明提供的上述检测分级方法，将检测图谱和不同品质级别的陈皮的特征图谱做比对，与检测图谱的特征峰保持一致的特征图谱对应的陈皮品质级别即为待测陈皮的品质级别。
[0133]
在其中一个示例中，所述检测分级方法还包括：所述检测图谱所含色谱峰与所述高陈化度陈皮的特征图谱所含特征峰一致，则将所述检测图谱和所述高陈化度陈皮的特征图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统获得相似度系数，并根据所述相似度系数确定所述待测陈皮的品质级别。通过和不同品质级别的陈皮的特征图谱做比对，可以实现多种品质级别的陈皮区分，然而无法区分高陈化度陈皮和其他做旧方式陈皮。为此，本发明可以通过将待测图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，如其与所述高陈化度陈皮的特征图谱的相似度低于0.6，则待测陈皮为其他做旧方式陈皮。
[0134]
在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为c18色谱柱，流动相a为甲醇，流动相b为磷酸体积百分比0.08％～0.12％的磷酸水溶液，采用梯度洗脱。在其中一个示例中，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相a的体积百分比为5％，5min～10min，所述流动相a的体积百分比由5％上升至10％，10min～15min，所述流动相a的体积百分比为10％，15min～25min，所述流动相a的体积百分比由10％上升至20％，25min～35min，所述流动相a的体积百分比由20％上升至25％，35min～50min，所述流动相a的体积百分比由25％上升至40％，50min～55min，所述流动相a的体积百分比为40％，55min～60min，所述流动相a的体积百分比由40％上升至50％，60min～65min，所述流动相a的体积百分比为50％。
[0135]
在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：流速为0.8ml/min～1.2ml/min。所述流速可以选自，包括但不限于，下述任一种流速或者任两种流速之间的流速范围：0.8ml/min、0.85ml/min、0.9ml/min、0.95ml/min、1ml/min、1.05ml/min、1.1ml/min、1.15ml/min、1.2ml/min。在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：柱温为28℃～32℃。所述柱温可以选自，包括但不限于，下述任一种柱温或者任两种柱温之间的柱温范围：28℃、28.5℃、29℃、29.5℃、30℃、30.5℃、31℃、31.5℃、32℃。在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：进样量为8μl～12μl。所述进样量可以选自，包括但不限于，下述任一种进样量或者任两种进样量之间的进样量范围：8μl、8.5μl、9μl、9.5μl、10μl、10.5μl、11μl、11.5μl、12μl。
[0136]
在其中一个示例中，所述供试品溶液的制备步骤包括：用提取溶剂对所述陈皮进行提取，收集提取液，制备所述供试品溶液。在其中一个示例中，所述提取溶剂包含甲醇体积百分比为10％～35％的甲醇水溶液。所述提取溶剂包含甲醇体积百分比可以选自，包括但不限于，下述任一种浓度或者任两种浓度之间的浓度范围：10％、15％、20％、25％、30％、35％。在其中一个示例中，提取的方式采用超声提取。进一步地，超声提取的时长为20min～40min，例如20min、25min、30min、35min、40min。可以理解的是，在提取的过程中，提取溶剂如有损耗，可以继续添加所述提取溶剂填补损耗。本发明对收集所述提取液的方式不做特别限定，例如可以采用离心的方式，在离心后收集上清液，在用微孔滤膜过滤。离心的条件可以是8000rpm～12000rpm下离心8min～12min，例如8000rpm下离心12min、12000rpm下离心8min、10000rpm下离心10min。
[0137]
第四方面，本发明提供一种陈皮的检测分级方法，所述检测分级方法包括如下步骤：
[0138]
参照所述的构建方法构建高陈化度陈皮的特征图谱；
[0139]
提供包含维采宁-2或/和橙皮苷的对照品溶液，制备待测陈皮的供试品溶液，采用
高效液相色谱法对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行检测，在255nm～265nm下获得对照图谱和检测图谱，参照所述对照图谱比较所述检测图谱与所述高陈化度陈皮的特征图谱，根据特征峰缺失的比较结果确定所述待测陈皮的品质级别。本发明可以参照所得检测图谱上各色谱峰相对于所述陈化度陈皮的特征图谱的缺失情况，确定待测陈皮的品质级别。
[0140]
在其中一个示例中，所述检测分级方法还包括：所述检测图谱所含色谱峰与所述高陈化度陈皮的特征图谱所含特征峰一致，则将所述检测图谱和所述高陈化度陈皮的特征图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统获得相似度系数，并根据所述相似度系数确定所述待测陈皮的品质级别。本发明可以通过将待测图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，如其与所述高陈化度陈皮的特征图谱的相似度低于0.6，则待测陈皮为其他做旧方式陈皮。
[0141]
在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件包括：固定相为c18色谱柱，流动相a为甲醇，流动相b为磷酸体积百分比0.08％～0.12％的磷酸水溶液，采用梯度洗脱。所述磷酸水溶液中磷酸体积百分比可以选自，包括但不限于，下述任一种浓度或者任两种浓度之间的浓度范围：0.08％、0.09％、0.10％、0.11％、0.12％。在其中一个示例中，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相a的体积百分比为5％，5min～10min，所述流动相a的体积百分比由5％上升至10％，10min～15min，所述流动相a的体积百分比为10％，15min～25min，所述流动相a的体积百分比由10％上升至20％，25min～35min，所述流动相a的体积百分比由20％上升至25％，35min～50min，所述流动相a的体积百分比由25％上升至40％，50min～55min，所述流动相a的体积百分比为40％，55min～60min，所述流动相a的体积百分比由40％上升至50％，60min～65min，所述流动相a的体积百分比为50％。在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：流速为0.8ml/min～1.2ml/min。所述流速可以选自，包括但不限于，下述任一种流速或者任两种流速之间的流速范围：0.8ml/min、0.85ml/min、0.9ml/min、0.95ml/min、1ml/min、1.05ml/min、1.1ml/min、1.15ml/min、1.2ml/min。在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：柱温为28℃～32℃。所述柱温可以选自，包括但不限于，下述任一种柱温或者任两种柱温之间的柱温范围：28℃、28.5℃、29℃、29.5℃、30℃、30.5℃、31℃、31.5℃、32℃。在其中一个示例中，所述高效液相色谱法的条件还包括：进样量为8μl～12μl。所述进样量可以选自，包括但不限于，下述任一种进样量或者任两种进样量之间的进样量范围：8μl、8.5μl、9μl、9.5μl、10μl、10.5μl、11μl、11.5μl、12μl。
[0142]
在其中一个示例中，所述供试品溶液的制备步骤包括：用提取溶剂对所述陈皮进行提取，收集提取液，制备所述供试品溶液。在其中一个示例中，所述提取溶剂包含甲醇体积百分比为10％～35％的甲醇水溶液。所述提取溶剂包含甲醇体积百分比可以选自，包括但不限于，下述任一种浓度或者任两种浓度之间的浓度范围：10％、15％、20％、25％、30％、35％。在其中一个示例中，提取的方式采用超声提取。进一步地，超声提取的时长为20min～40min，例如20min、25min、30min、35min、40min。可以理解的是，在提取的过程中，提取溶剂如有损耗，可以继续添加所述提取溶剂填补损耗。本发明对收集所述提取液的方式不做特别限定，例如可以采用离心的方式，在离心后收集上清液，在用微孔滤膜过滤。离心的条件可以是8000rpm～12000rpm下离心8min～12min，例如8000rpm下离心12min、12000rpm下离
心8min、10000rpm下离心10min。
[0143]
在其中一个示例中，所述对照品溶液中的溶剂包含甲醇体积百分比为45％～55％的甲醇水溶液。所述甲醇水溶液中甲醇的浓度可以选自，包括但不限于，下述任一种浓度或者任两种浓度之间的浓度范围：45％、45％、50％、55％。
[0144]
第四方面，一种陈皮的检测分级方法，所述检测分级方法包括如下步骤：提供陈皮样品，参照所述的检测分级方法，根据色谱峰面积比值确定所述陈皮样品的品质级别，参照如上所述的检测分级方法，根据相似度系数确定所述陈皮样品的品质级别，根据以下质量分级方法确定所述陈皮样品的综合品质等级，
[0145][0146]
根据确定的所述综合品质等级，对所述陈皮样品进行检测分级。采用该方法可以筛除低级别的陈皮。
[0147]
本发明上述方法中，优选地的高效液相色谱条件包括：固定相为c18色谱柱，流动相a为甲醇，流动相b为磷酸体积百分比0.08％～0.12％的磷酸水溶液，采用梯度洗脱，梯度洗脱的程序包括：0min～5min，所述流动相a的体积百分比为5％，5min～10min，所述流动相a的体积百分比由5％上升至10％，10min～15min，所述流动相a的体积百分比为10％，15min～25min，所述流动相a的体积百分比由10％上升至20％，25min～35min，所述流动相a的体积百分比由20％上升至25％，35min～50min，所述流动相a的体积百分比由25％上升至40％，50min～55min，所述流动相a的体积百分比为40％，55min～60min，所述流动相a的体积百分比由40％上升至50％，60min～65min，所述流动相a的体积百分比为50％，流速为0.8ml/min～1.2ml/min，柱温为28℃～32℃，进样量为8ml～12ml。
[0148]
本发明上述方法中，鉴于陈皮在陈化过程中发生氧化反应的成分，一般极性较大，因此采用低浓度的甲醇作为提取溶剂，可充分提取陈皮中极性较大的成分；同时，还可以节约试剂、利于环保。本发明的下述实施例中所述试验方法，如无特别说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特别说明，均可从商业途径获得。以下实施例以不同年份、不同成熟度、不同存储方式的广陈皮为研究对象，采用hplc技术，结合hplc 3d全波长图谱，先基于不同存储方式的陈皮，找出差异特征峰，并优化色谱条件；再从陈皮的hplc特征峰比值及特征图谱的角度，先分别建立相应的陈皮品质分级方法；最后综合以上二种陈皮品质分级方法，从微观层面构建广陈皮的品质等级。
[0149]
1仪器与试药
[0150]
1.1仪器安捷伦1260高效液相色谱(美国安捷伦公司)，eclipse xdb-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，美国安捷伦公司)、zorbax sb-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，美国安捷伦公司)、eclipse plus-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，美国安捷伦公司)、supfex jx-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，天津喆分医药科技有限公司)、xpr 26/a百万分之一电子天平(瑞士梅特
勒-托利多公司)、sartorius bs420s万分之一电子天平、tgl-15b离心机(上海安亭科学仪器厂)、milli-qreference纯水机(法国millipore)、sb-5200dt超声波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)、尼龙66 0.22μm微孔滤膜、wxj型粉碎机(上海凯旋中药机械制造有限公司)。
[0151]
1.2试剂色谱级甲醇(德国merck)、超纯水、甲醇(广州化学试剂厂)；5-羟甲基糠醛标准品，简称“5-hmf”(纯度99.50％，批号：111626-202013，中国食品药品检定研究院)；维采宁-2标准品，简称“v2”(纯度99.57％，批号：19121201，成都格利普生物科技有限公司)；橙皮苷标准品(纯度95.30％，批号：110721-202019，中国食品药品检定研究院)。
[0152]
1.3试验样品本研究的试验样品主要来源为新会陈皮基地采集、新会产区采购以及向当地的陈皮种植公司或合作社定向购买等，编号为s1～s43，将获得的广陈皮样品采用三种不同的存储方式进行陈化(见表1)，并放置于干燥通风的环境；同时，描述所有陈皮样品的内囊性状、成熟度等信息，详见表2。以上样品经广州中医药大学中药鉴定教研室主任黄海波副教授鉴定为芸香科植物茶枝柑citrus reticulate
‘
chachi’的果皮。
[0153]
表1、陈皮样品三种存储方式
[0154]
序号存储方式透气性透气率(mm/s)编码1麻袋装、网箱装等透气性良好＞80dz2塑料袋装敞口、纸箱装等透气性一般5～80ck3密封袋、玻璃罐密封等透气性较差＜5mf
[0155]
表2、陈皮样品信息表
[0156]
[0157]
dad全波长扫描，见图4；然后，通过比较3d成像后的光谱等值图(见图5)中斑点的有无、大小，找出所有差异较明显的斑点，即差异峰(y、m1、m2、m3)。
[0169]
(2)色谱条件的优化与特征峰的筛选：结合图4、图5可知，差异峰的最佳吸收波长主要集中在200nm(y)、260nm(m1、m2、m3)，考虑到样品在200nm波长下容易产生溶剂峰干扰；因此，本研究将波长220nm、260nm作为检测波长。同时，基于各差异峰的分离度，不断对流动相进行优化，确定了上述最佳的流动相。由于差异峰m1在优化的色谱条件下，其分离度小于1.5，且出峰时间短，干扰太大，故不予以考虑；因此，本研究将差异峰y、m2、m3作为三种不同存储方式陈皮样品在陈化过程中的差异特征成分进行研究。
[0170]
2.1.1.2混合对照品溶液的制备
[0171]
称取5-羟甲基糠醛、维采宁-2、橙皮苷对照品适量，置于容量瓶中，加入50％甲醇水制成混合对照品溶液，储存于4℃冰箱中。
[0172]
2.1.1.3供试品溶液的制备
[0173]
取陈皮样品粉末0.5g(过45目筛)，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，加入25ml 30％甲醇，称重，超声处理30min，放冷后称重，并用30％甲醇补足重量；并离心10min(10000r
·
min-1
)，取上清液，用0.22μm微孔滤膜过滤，即得。
[0174]
本研究比较了10％、30％、50％甲醇这几种不同甲醇浓度的提取溶剂对陈皮样品差异特征成分y、m1、m2、m3峰面积的影响。结果表明：在波长220nm条件下，差异成分y峰面积大小为10％甲醇和30％甲醇＞50％甲醇；在波长260nm条件下(见图6)，差异成分m1峰面积大小依次为10％甲醇＞30％甲醇＞50％甲醇，差异成分m2峰面积大小为10％甲醇和30％甲醇＞50％甲醇，差异成分m3峰面积大小则三种浓度甲醇相当。由此可见，10％甲醇与30％甲醇均适合作为陈皮的提取溶剂。
[0175]
本发明中，例如“50％甲醇”描述的提取溶剂，指含甲醇体积百分比为50％的甲醇水溶液。
[0176]
2.1.1.4结果与分析
[0177]
取三种不同存储方式的陈皮样品，按“2.1.1.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1.1”项下色谱条件进行测定，各差异成分(y、m2、m3)峰面积的测定结果见表3。
[0178]
表3、三种不同存储方式陈皮样品中差异成分峰面积比较
[0179][0180]
由表3可知，三种不同存储方式陈皮样品中3个差异成分峰面积均存在明显差异。
[0181]
在检测波长220nm条件下，各样品差异成分y的峰面积大小依次为s11(7.914)＞s18(1.013)＞s17(1.006)，结合表1可知，以上三种陈皮样品的存储方式透气性良好程度也依次为s17＞s18＞s11；由此可见，差异成分y在陈化过程中其峰面积大小与存储方式透气性良好程度呈现相反的关系，即存储方式透气性越好，差异成分y峰面积就越小，反之，其峰面积就越大。
[0182]
在检测波长260nm条件下，各样品差异成分m2、m3的峰面积大小均为s17＞s18＞s11；结合表1可知，以上三种陈皮样品的存储方式透气性良好程度也依次为s17＞s18＞
s11；由此可见，差异成分m2、m3在陈化过程中其峰面积大小与存储方式透气性良好程度呈现正相关性，即存储方式透气性越好，差异成分m2、m3峰面积就越大，反之，其峰面积就越小。
[0183]
综上所述，以上三种不同存储方式陈皮在陈化过程中，差异成分y的“消”与差异成分m2、m3的“长”变化规律，诠释了行业标准《db44t 604-2009地理标志产品新会陈皮》中“陈化”的概念，即在自然干爽通风的条件下，随着时间变化，陈皮的有效内含物会出现消长变化。陈化度最高的为样品s17，其差异成分y峰面积最小(即消失的最快)，差异成分m2、m3峰面积最大(即增长的最快)；陈化度中等的样品s18次之；陈化度最低的为样品s11，其差异成分y峰面积最大(消失的最慢)，差异成分m2、m3峰面积最小(即增长的最慢)。
[0184]
以上结果表明陈皮陈化高低程度依次为存储方式为dz的陈皮＞存储方式为ck的陈皮＞存储方式为mf的陈皮，提示陈皮的陈化需要接触环境中的氧气和水分，同时说明存储方式是影响陈皮陈化度的一个重要因素，其影响程度大于储藏年份的。
[0185]
由于样品量太少且来源单一，可能会导致样品的代表性存在局限性，因此，需引入不同来源、不同年份的样品对上述差异成分“消”、“长”变化规律，以及陈皮存储容器的透气性对陈化产生的影响程度进行验证。
[0186]
2.1.2差异成分消长变化规律的验证
[0187]
在上述三种不同存储方式陈皮样品(s11、s17、s18)的基础上，引入不同来源、不同年份、不同陈化方式的样品(s1～s43)对上述差异成分“消”、“长”变化规律进行验证；同时，考察陈皮存储容器的透气性对陈化的影响程度。
[0188]
由于上述差异成分y、m2、m3均为未知成分，无法测定其含量大小。因此，本研究以陈皮内含物中性质较稳定、且不受存储环境与时间产生变化的已知成分“维采宁-2”(简称v2)作为参照物，通过计算差异成分的峰面积与同一色谱条件下的参照物(v2)峰面积之间的比值的方法，对上述差异成分数据的客观表达进行均一化处理，以提高检测分级方法的普适性。
[0189]
同时，鉴于引入的样品中存在高温加速陈皮与茶水染色陈皮，因陈皮经高温加速会发生美拉德反应而产生5-羟甲基糠醛(5-hmf)，以及陈皮经茶水染色后，茶里面水溶性较好的成分(编号“cr”)会残留在陈皮的内囊；因此，本研究也将成分5-hmf、cr作为差异成分，与上述3个差异成分一起进行研究。
[0190]
2.1.2.1色谱条件同“2.1.1.1”项下的色谱条件。自然陈化陈皮、高温加速陈皮以及茶水染色陈皮在260nm波长下的色谱图，见图7。
[0191]
2.1.2.2混合对照品溶液的制备同“2.1.1.2”项下的制备方法。
[0192]
2.1.2.3供试品溶液的制备同“2.1.1.3”项下的制备方法。
[0193]
2.1.2.4方法学考察
[0194]
(1)精密度试验：精密吸取对照品溶液10μl，按“2.1.1.1”项下色谱条件连续进样6次，分别积分并记录5-hmf、维采宁-2、橙皮苷的峰面积值，计算相对标准偏差，结果显示5-hmf(rsd＝1.52％)、维采宁-2(rsd＝0.74％)、橙皮苷(rsd＝0.51％)的rsd值均《2％，表明仪器的精密度良好。
[0195]
(2)重复性试验：精密称取同一供试样品(s24)6份，按“2.1.1.3”项下方法制备供试品溶液并按“2.1.1.1”项下色谱条件进行检测，记录峰面积，计算相对标准偏差，结果显
示5-hmf、维采宁-2、橙皮苷的峰面积rsd值分别为3.31％、1.53％、2.10％，表明方法重复性良好。
[0196]
(3)稳定性试验：取供试品溶液，分别在0、4、8、12、24、72h按“2.1.1.1”项下色谱条件进行测定，记录峰面积，计算得5-hmf、维采宁-2、橙皮苷的峰面积rsd值分别为1.11％、0.85％、1.03％，表明供试品溶液在72h内稳定。
[0197]
(4)方法的耐用性考察：分别在3根不同色谱柱上进行耐用性考察，分别选取三根色谱柱，col.1为supfex jx-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，天津喆分医药科技有限公司)；col.2为eclipse plus-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，美国安捷伦公司)；col.3为zorbax sb-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，美国安捷伦公司)。三根不同的色谱柱与原方法(即“2.1.1.1”项下的方法)的测定结果对比发现，在col.1、col.2、col.3上，陈化峰均能有效分离，且各差异峰的峰面积、保留时间与维采宁-2之间的比值与原柱col.4测定结果接近，见表4、表5，因此该方法具有良好的耐用性。
[0198]
表4、不同色谱柱差异峰与参照峰的保留时间比值对比情况
[0199][0200]
表5、不同色谱柱差异峰与参照峰的峰面积比值对比情况
[0201][0202][0203]
注：col.1为supfex jx-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，天津喆分医药科技有限公司)；col.2为eclipse plus-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，美国安捷伦公司)；col.3为
zorbax sb-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，美国安捷伦公司)；col.4为建立方法时选取的eclipse xdb-c18色谱柱(5μm，4.6
×
250mm，美国安捷伦公司)。
[0204]
2.1.2.5结果与分析
[0205]
取陈皮样品(s1～s34)，按“2.1.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.2.1”项下色谱条件进行测定，各差异成分(y、m2、m3、5-hmf、cr)峰面积以及参照物(v2)峰面积的测定结果见表6。
[0206]
220nm下获得色谱图记作“检测图谱
ⅰ”
，其中，维采宁-2的色谱峰记作“色谱峰ⅰa”，差异成分y的色谱峰记作“色谱峰ⅰb”；
[0207]
260nm下获得色谱图记作“检测图谱
ⅱ”
，其中，维采宁-2的色谱峰记作“色谱峰ⅱa”，5-hmf的色谱峰记作“色谱峰ⅱb”，差异成分m2、m3、cr的色谱峰分别记作“色谱峰ⅱc”、“色谱峰ⅱd”、“色谱峰ⅱe”。
[0208]
表6、样品各差异成分峰面积的测定结果
[0209]
[0210][0211]
注：n.a.代表未检出。
[0212]
由表6可知，不同来源广陈皮的各差异成分(y、m2、m3、5-hmf、cr)峰面积之间存在明显的差异。结合表2可知，在检测波长220nm条件下：针对储藏时间而言，自然陈化陈皮中差异成分y的峰面积随着储藏时间的延长，均呈现出逐渐降低的趋势，即差异成分y的色谱峰逐渐“消失”；针对存储方式而言，其中存储方式为mf的自然陈化陈皮成分y的峰面积范围为4.282～20.520，存储方式为ck、dz的自然陈化陈皮成分y的峰面积均≤1.013除存储方式为dz且历史年份小于三年的样品s6(峰面积为13.751)以外。在检测波长260nm条件下：针对储藏时间而言，自然陈化陈皮中差异成分m2、m3的峰面积随着储藏时间的延长，均呈现出逐渐增加的趋势，即差异成分m2、m3的色谱峰逐渐“生长”；针对存储方式而言，其中存储方式为mf的自然陈化陈皮两个差异成分的峰面积均表现为m2＜0.6、m3≤0.817，存储方式为ck、dz的峰面积均表现为m2＞1.0、m3＞1.1，除存储方式为dz且历史年份小于三年的样品s6、以及虫蛀样品s38、s39以外。以上结果表明，存储方式为mf的自然陈化陈皮，无论其储藏时间的长短，其陈化度均处于较低的水平；历史年份小于三年的自然陈化陈皮，无论其存储方式
的透气性，其陈化度也均处于较低的水平，而存储方式为ck、dz且历史年份大于三年的自然陈化陈皮，则陈化度较高。
[0213]
综上所述，在自然条件下陈化的陈皮，其存储方式的透气性越好，陈化度就越高；储藏时间越长，陈化度就越高；陈化度越高(陈化反应越强烈)，差异成分y的峰面积就越小，差异成分m2和m3的峰面积就越大。经不同来源陈皮的验证，差异成分“消”、“长”的变化规律与前文所述情况一致。对于非自然陈化陈皮而言，根据高湿加速、高温加速及其他做旧方式陈皮的差异成分指标的峰面积大小，可知此类陈皮的陈化度均比存储方式为mf及历史年份小于三年的自然陈化陈皮的高。结合表2可知，广陈皮无论是自然陈化，还是加速陈化或进行做旧处理，其内在成分会发生相应的变化。茶水染色陈皮样品(s35、s36、s37)的差异成分y峰面积介于2.201～3.773之间，比同一来源且未经茶水染色的陈皮样品s11的峰面积(7.914)低；且差异成分(m2、m3)峰面积均比同一来源且未经茶水染色的陈皮样品s11的大，由此可以说明样品s11在经茶水染色后，再进行晒干或低温烘干的过程中，陈皮发生了成分消长变化，即陈化反应。以上结果再次证实了陈皮的陈化反应需要环境的氧气和水分。
[0214]
2.1.4品质分级
[0215]
基于表6中各差异成分与参照物维采宁-2的峰面积，计算差异成分(y、m2、m3、5-hmf、cr)与维采宁-2(v2)峰面积之间比值，结果见表7。然后，以上述5个差异成分与维采宁-2之间的比值为评价指标，对广陈皮进行品质等级分类。
[0216]
表7、差异成分峰面积与参照物峰面积之间比值
[0217][0218][0219]
注：“——”代表比值中存在未检出的样品。
[0220]
由表7可知，各类陈皮的差异成分峰面积与参照物(v2)峰面积之间的比值存在较大差异。比较各类陈皮的比值“r1”(5-hmf/v2)大小可知，高温加速陈皮(s30～s34)、高湿加速陈皮(s42)的r1值均≥0.7，而其他品质级别陈皮的r1值均＜0.7；因此，通过比值r1大小可将高温和高湿加速陈皮这两类陈皮与其他品质级别的陈皮区分开来。同法，比较各类陈皮的比值“r2”(cr/v2)大小可知，茶水染色陈皮(s35～s37)的r2值均＞1.0，而其他品质级别陈皮的r2值均≤0.1，远低于茶水染色陈皮的r2值；因此，通过比值r2大小可将茶水染色
陈皮与其他品质级别的陈皮区分开来。
[0221]
以上结果表明，通过比值r1、r2大小，可将高温加速陈皮、高湿加速陈皮、茶水染色陈皮与其他品质级别的陈皮区分开来；在r1＜0.7、r2≤0.1的基础上，针对自然陈化陈皮进行品质分级。
[0222]
通过比较比值“r3”(y/v2)大小，发现陈化度较低的mf自然陈化陈皮r3值均≥0.9，而陈化度较高的ck、dz自然陈化陈皮的r3值均＜0.9；同理，在r3＜0.9的基础上，通过比较比值“r4”(m2/v2)、“r5”(m3/v2)大小，发现年份大于五年的dz自然陈化陈皮与年份大于七年的ck自然陈化陈皮的r4、r5值均＞0.6。
[0223]
基于以上结果，可根据特征峰的峰面积与参照物峰面积之间的比值角，对不同来源陈皮的品质进行分级，以及自然陈化陈皮的陈化度进行分级，分级结果见表8、图8。
[0224]
表8、基于特征峰面积比值进行陈皮品质分级
[0225][0226]
注：“ ”数量越多，说明其品质越好。由于虫蛀陈皮的外观性状较明显，品质较差，故不作品质分级。
[0227]
由表8可知，通过比值r1(5-hmf/v2)大小，可判断出样品是否为高温、高湿加速陈皮；通过比值r2(cr/v2)大小，可判断出样品是否为茶水染色陈皮。结合图8可知，通过存在“消”、“长”变化的色谱峰峰面积比值(r3～r5)，可将陈皮的陈化度分为“低陈化度”、“中等陈化度”、“高陈化度”三个级别。但非自然陈化陈皮“其他做旧方式陈皮(s40、s41)”的色谱峰峰面积比值(r1～r5)也都能满足品质等级“ ”、“高陈化度”级别规定的条件。由此可见，色谱峰峰面积比值可以作为陈皮品质分级的评价方法之一，但还需结合特征图谱相似度等内在指标进行综合评价。
[0228]
2.2基于陈皮hplc特征图谱进行品质分级
[0229]
特征图谱可以较为全面地反映中药多成分的特征，uv光谱可反映化学成分的一定结构特征，故本研究利用hplc特征图谱和uv光谱法分析广陈皮在陈化过程中化学成分的动态变化情况，比较不同来源陈皮图谱中的差异特征峰，通过差异特征峰的有无，对陈皮的品质进行分级；并研究建立陈皮在陈化过程中的陈化特征图谱。
[0230]
2.2.1 hplc特征图谱的建立
[0231]
按照“2.1.2.3”项下方法分别制备自然陈化陈皮、高温加速陈皮、高湿加速陈皮、茶水染色陈皮、烧皮、虫蛀陈皮及其他做旧方式陈皮等各类供试品溶液。其中，自然陈化陈皮样品按陈化度进行分类，结合表8可知：mf自然陈化陈皮为陈化度较低的品质级别；年份
小于七年的ck自然陈化陈皮、年份小于五年的dz自然陈化陈皮为陈化度中等的品质级别；年份大于七年的ck自然陈化陈皮、年份大于五年的dz自然陈化陈皮为陈化度较高的品质级别。按照“2.1.2.1”项下色谱条件进行测定，鉴于在260nm波长条件下色谱信息较丰富，因此，本研究主要记录260nm波长色谱图。采用国家药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012a版”对色谱图进行匹配，确定陈化度低、中、高三类自然陈化陈皮的共有峰个数分别为7、9、10，高温加速陈皮、茶水染色陈皮、虫蛀陈皮及其他做旧方式陈皮共有峰个数分别为10、8、9、10，如图9(低陈化度)、图10(中等陈化度)、图11(高陈化度)、图12(高温加速)、图13(茶水染色)、图14(虫蛀)、图15(其他做旧方式)、图16(高湿加速)、图17(烧皮)所示。
[0232]
关于各类陈皮对照特征图谱的建立，对于低陈化度的陈皮而言(如图9所示)，以s1为参照图谱，以平均数生成对照特征图谱；同法建立中等陈化度陈皮、高陈化度陈皮、高温加速陈皮、茶水染色陈皮、虫蛀陈皮及其他做旧方式陈皮的、特征图谱(见图18)；其中高湿加速陈皮(s42)、烧皮(s43)均为单一样品，其色谱图就代表各自品质级别的特征图谱。同时，计算陈化度低、中等、高陈皮各自品质级别组内的相似度；结果发现，低陈化度陈皮组内相似度大于0.9，中等陈化度、高陈化陈皮组内相似度也均大于0.9。
[0233]
2.2.2品质分级
[0234]
通过对照品保留时间和hplc-dad指认了3个色谱峰：2号峰为5-羟甲基糠醛，9号峰为维采宁-2，12号峰为橙皮苷；并与前文的差异特征峰进行一一对应，即1号峰为“特征峰m1”，3号峰为“特征峰m2”，7号峰为“特征峰m3”，8号峰为“茶水染色峰cr”，如图18所示。同时，对三种陈化度等级陈皮、高温加速陈皮、其他做旧方式陈皮、高湿加速陈皮、茶水染色陈皮、烧皮、虫蛀陈皮特征图谱进行比较，相似度结果见表10。肉眼观察以上不同来源陈皮特征图谱可知，对于自然陈化陈皮而言，与高陈化度的自然陈化陈皮(图18-tp3)比较，中等陈化度陈皮(图18-tp2)出现了5号特征峰的缺失，两者特征图谱之间的共有特征峰基本一致，相似度为0.676；而低陈化度陈皮(图18-tp1)较其出现了1、3、5号特征峰的缺失，相似度为0.518。对于非自然陈化陈皮而言，与高陈化度的自然陈化陈皮(图18-tp3)比较，高温加速陈皮(图18-tp9)出现了2号特征峰的增加，茶水染色陈皮(图18-tp8)出现了8号特征峰的增加；而烧皮(图18-tp4)出现了1、3号特征峰的缺失，虫蛀陈皮(图18-tp7)出现了6、7号特征峰的缺失，高湿加速陈皮(图18-tp6)出现了1、5号特征峰的缺失；而其他做旧方式陈皮(图18-tp5)也存在10个特征峰，其与陈化度高的陈皮相似度为0.631，但小于陈化度中、高陈皮之间的相似度0.676。
[0235]
表9、各品质级别陈皮特征图谱所含特征峰汇总
[0236]
[0237][0238]
表10、不同品质级别陈皮特征图谱相似度
[0239]
相似度tp1tp2tp3tp4tp5tp6tp7tp8tp9tp11
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tp20.9771
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tp30.5180.6761
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
tp40.9240.8960.4561
ꢀꢀꢀꢀꢀ
tp50.9680.9820.6310.9251
ꢀꢀꢀꢀ
tp60.9810.9750.5400.9280.9781
ꢀꢀꢀ
tp70.8620.8210.4110.8920.8750.8341
ꢀꢀ
tp80.6870.6570.2010.6130.6180.6890.5181 tp90.9550.9570.5590.9080.9560.9860.8140.6261
[0240]
注：tp1：陈化度低的陈皮；tp2：陈化度中等的陈皮；tp3：陈化度高的陈皮；tp4：烧皮；tp5：其他做旧方式陈皮；tp6：高湿加速陈皮；tp7：虫蛀陈皮；tp8：茶水染色陈皮；tp9：高温加速陈皮。
[0241]
以上结果表明，不同陈化度陈皮之间的特征图谱不仅存在差异，不同来源非自然陈化陈皮之间的特征图谱也存在明显差异。鉴于此，可根据特征峰的有无、相似度等指标，将陈皮的品质分为“ ”，“ ”，“ ”，“ ”四个等级，见表11；同时，基于自然陈化陈皮的陈化度级别，分别建立陈化度低、中、高的陈皮特征图谱，见图18-tp1、图18-tp2、图18-tp3。
[0242]
表11、基于陈皮特征图谱进行品质分级
[0243][0244]
注：“ ”数量越多，说明其品质越好。由于虫蛀陈皮的外观性状较明显，品质较差，故不作品质分级。
[0245]
由表11可知，通过陈皮特征图谱相似度，可判断出样品是否为高温加速陈皮、茶水
染色陈皮。通过特征图谱中特征峰的有无、相似度基本上可以对陈皮的品质等级进行准确的划分，但非自然陈化陈皮“其他做旧方式陈皮(s40、s41)”的特征峰、相似度也都能满足品质等级“ ”规定的条件；结合表8可知，陈皮样品s40、s41的品质也在等级“ ”范畴；因此，通过内在指标划分“其他做旧方式陈皮”的品质等级是不够的，还需结合外观性状进行综合评价。
[0246]
3从微观层面建立广陈皮的品质等级
[0247]
综上所述，基于陈皮hplc特征峰有无、特征图谱相似度等内在评价指标，在一定程度上均可对陈皮的品质进行分级。结合表8、表11可知，仅凭单一的分级方法所划分的陈皮品质等级不够全面。此外，通过对以上二种品质分级方法进行相关性分析，发现2类分级方法所划分的品质等级基本相同，并相互补充；因此，综合以上二种品质分级方法，所构建出的广陈皮品质等级更全面、可靠。鉴于陈皮的陈化受“存储方式”、“储藏环境”、“干燥方法”、“储藏时间”等众多因素的影响，同时，结合表2、表8可知，储藏年份高的陈皮，则“陈化度”不一定高；而“陈化度”高的陈皮，则储藏年份一定较高。因此“陈化度”较“年份”更适合作为评价陈皮品质的指标。
[0248]
本研究首次融合hplc色谱峰面积比值与特征图谱相似度等微观指标，并结合“陈化度”，将陈皮的品质划分为“劣级”、“低陈化度良好级”、“中陈化度优级”、“高陈化度优级”四个等级，结果见图19。图19中：r1～r5代表色谱峰峰面积之间的比值；其中r1为5-羟甲基糠醛/维采宁-2，r2为茶水染色峰cr/维采宁-2，r3为特征峰y/维采宁-2，r4为特征峰m2/维采宁-2，r5为特征峰m3/维采宁-2。
[0249]
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所述附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。