一种检测PDE-5抑制剂的胶体金试纸条及其制备方法与应用与流程

一种检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条及其制备方法与应用
技术领域
1.本发明涉及检测试纸条技术领域，特别涉及一种检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条及其制备方法与应用。


背景技术：

2.磷酸二酯酶5型(pde-5)抑制剂是一种被临床用于治疗男性勃起功能障碍(ed)的处方药，pde-5抑制剂通过抑制磷酸二酯酶活性阻断环cgmp被水解为gmp，因阴茎海绵体中cgmp量不断上升导致阴茎海绵体及阴茎动脉平滑肌舒张，最终达到治疗ed的功效。
3.相关技术中，检测pde-5抑制剂的方法主要有仪器分析方法、电化学方法和免疫分析法等。仪器法虽然可以满足国家精准检测的要求，但专业性强、费用高，无法满足现场快速检测的需要；而电化学方法虽然具有准确性和灵敏性高的优点，但成本较高，且测试结果受实验条件影响较大，重现性不佳。免疫分析法由于具有快速、灵敏、准确等优点，且特别适用于现场进行高通量检测，是使用较为广泛的一种方法，因此市面上也出现了一些基于免疫分析法的检测试纸条。然而，实际在应用过程中，对于一些固态或者半固态的待测样品，常规的检测试纸条并不能对其进行及时检测，在检测过程中仍需要经过一些繁琐的样品预处理过程，这对于临时检测带来了极大的不便。此外，目前市场上虽已有部分检测pde-5抑制剂的免疫分析检测试纸，但大多数仅针对单一对象或仅能检出少数几种pde-5抑制剂，存在较大的漏检问题与风险。
4.因此，仍需寻求一种使用方法简便的检测试纸条，且该试纸条具备广谱性和准确性好、灵敏性高的优点。


技术实现要素：

5.本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条及其制备方法与应用，本发明的试纸条能够快速检出多种pde-5抑制剂，且广谱性和准确性好、灵敏性高，并且能够直接对固态或半固态样品进行检测，提高了检测的便捷性。
6.本发明还提出一种上述测pde-5抑制剂的胶体金试纸条的制备方法。
7.本发明还提出一种上述测pde-5抑制剂的胶体金试纸条在检测试剂盒中的应用。
8.本发明的第一方面，提供了一种检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条，包括检测试纸条和壳体；
9.检测试纸条，设有依次相连的样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜设有检测线和质控线；
10.壳体，包含预处理溶液腔和容置腔，所述容置腔内放置所述检测试纸条，所述壳体的壳面设置观察窗口、加样窗口和预处理窗口，所述观察窗口与所述硝酸纤维素膜对应设置，所述加样窗口与所述样品垫对应设置，并与所述预处理溶液腔之间通过连接通道相连通，所述连接通道上设有能够启闭的阀门，所述预处理窗口与所述预处理溶液腔对应设置，
所述预处理窗口处设有密闭组件，所述密闭组件能够启闭所述预处理窗口。
11.根据本发明实施例的胶体金试纸条，至少具有如下有益效果：本发明的胶体金试纸条通过在壳体中设置预处理溶液腔，解决了传统固态或半固态样品检测不便的技术问题，提高了检测效率，且检测条件不受检测环境因素影响，能够实现随时随地检测，具有广泛的应用价值。
12.根据本发明的一些实施例，所述样品垫、所述金标结合垫、所述硝酸纤维素膜及所述吸水垫中相邻的二者搭接设置。
13.根据本发明的一些实施例，所述标结合垫和所述吸水垫分别交叠压在所述硝酸纤维素膜的两端。
14.根据本发明的一些实施例，所述金标结合垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水垫交叠区域的长度为0.8mm～1.5mm。
15.根据本发明的一些实施例，所述检测线位于所述硝酸纤维素膜中靠近金标结合垫的一端，所述质控线位于所述硝酸纤维素膜中靠近吸水垫的一端。
16.根据本发明的一些实施例，所述检测线和所述质控线相隔的距离为5mm～9mm。
17.根据本发明的一些实施例，所述样品垫朝向所述加样窗口的一面上设有样品槽。
18.根据本发明的一些实施例，所述检测试纸条还包括底板，所述依次相连的样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫设置于所述底板上。
19.根据本发明的一些实施例，所述阀门为抽拉式阀门，所述壳体的壳面上设有第二开关槽，所述第二开关槽穿过所述连接通道设置，且覆盖所述连接通道的径向截面，所述阀门为弹性塞，所述弹性塞能够插入所述第二开关槽中，并密封所述连接通道。
20.根据本发明的一些实施例，所述观察窗口为长方形孔或椭圆形孔。
21.根据本发明的一些实施例，所述预处理窗口的边缘处设有相连通的开关腔室和第一开关槽，密闭组件包括相连的密闭板和密闭开关，所述密闭板滑动设置于所述开关腔室中，所述密闭开关滑动设置于所述第一开关槽中，所述密闭开关与所述密闭板的滑动方向相同，所述密闭开关朝向所述第一开关槽伸出所述壳体设置。
22.根据本发明的一些实施例，所述金标结合垫上包被有那非类药物广谱单克隆抗体。
23.根据本发明的一些实施例，所述检测线上包被有那非类药物通用抗原。
24.根据本发明的一些实施例，所述质控线上包被有兔抗鼠或羊抗鼠igg抗体。
25.本发明的第二方面，提供了一种检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条的制备方法，其包括以下步骤：
26.步骤s1、胶体金溶液的制备：利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液；
27.步骤s2、胶体金标记抗体的制备：调节所述胶体金溶液ph至7.8～8.2，加入质量终浓度为5μg/ml～25μg/ml的那非类药物广谱单克隆抗体，然后再加入质量终浓度为0.2％～0.5％的bsa，搅拌后离心去上清，加入胶体金复溶液重悬洗涤，浓缩至原溶液体积的1/12～1/8后备用；
28.步骤s3、金标结合垫的制备：用金标结合垫处理液将玻璃纤维膜浸湿后干燥，再将步骤s2获得的所述胶体金标记抗体喷于所述干燥的玻璃纤维膜上，干燥后备用；
29.步骤s4、样品垫的制备：将玻璃纤维膜浸泡于0.005mol/l～0.015mol/l pbs缓冲
液中，干燥后备用；所述pbs缓冲液还含有质量终浓度为0.1％～1％bsa、2％～3％蔗糖和0.01％～0.03％nan3；
30.步骤s5、硝酸纤维素膜的制备：将浓度为0.5mg/ml～1.5mg/ml的那非类药物通用抗原喷涂在硝酸纤维素膜的检测线上，然后将浓度为0.3mg/ml～0.8mg/ml的羊抗鼠igg抗体喷涂在硝酸纤维素膜的质控线上，干燥备用；
31.步骤s6、试纸条的组装：按样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺序粘附得到所述检测试纸条，然后将所述检测试纸条置于所述壳体的所述容置腔中即得。
32.根据本发明实施例的制备方法，至少具有如下有益效果：本发明提供的胶体金试纸条的制备方法步骤简单、成本较低。采用该方法制得的检测试纸条广谱性好，且可快速、高效、灵敏、准确地对pde-5抑制剂进行残留免疫分析检测，实现对样品的现场快速检测，具有广泛的应用前景。
33.根据本发明的一些实施例，步骤s1中，所述胶体金溶液的制备方法具体包括：将质量分数为0.5％～2％的氯金酸水溶液加热至沸腾，加入质量终浓度为0.8％～1.2％的柠檬酸三钠溶液，保持沸腾4～6min后冷却即得。
34.根据本发明的一些实施例，所述胶体金溶液中胶体金颗粒粒径在18nm～22nm之间。
35.根据本发明的一些实施例，所述氯金酸水溶液和所述柠檬酸三钠溶液过0.2μm～0.3μm滤膜处理。
36.优选的，所述氯金酸水溶液和所述柠檬酸三钠溶液过0.22μm滤膜处理。
37.根据本发明的一些实施例，步骤s2中，所述ph是采用0.05mol/l～0.2mol/l k2co3调节；
38.优选的，所述搅拌采用恒温磁力搅拌，所述搅拌的时间为8min～10min；
39.优选的，所述离心的转速为10000r/min～12000r/min，所述离心的时间为12min～18min。根据本发明的一些实施例，步骤s2中，所述胶体金复溶液为0.005mol/l～0.015mol/l的pbs缓冲液，
40.优选地，所述pbs缓冲液还包含质量终浓度为0.005％～0.015％硼酸、0.15％～0.25％peg20000和0.01％～0.03％nan3。
41.根据本发明的一些实施例，步骤s2中，所述那非类药物广谱单克隆抗体为西地那非单克隆抗体。
42.根据本发明的一些实施例，步骤s3中，所述金标结合垫处理液包含摩尔浓度为18mmol/l～22mmol/l na3po4·
12h2o和质量终浓度为4％～6％bsa、0.2％～0.3％tween-20和8％～12％蔗糖。
43.根据本发明的一些实施例，步骤s3中，所述胶体金标记抗体的喷金量为8μl/cm～10μl/cm；
44.优选的，所述干燥的温度为36～38℃。
45.根据本发明的一些实施例，步骤s5中，所述那非类药物通用抗原和所述羊抗鼠igg抗体的喷涂体积为0.5μl/cm3～1μl/cm3。
46.根据本发明的一些实施例，步骤s5中，所述那非类药物通用抗原为西地那非包被抗原。
47.根据本发明的一些实施例，步骤s6中，所述检测试纸条还包括底板。
48.优选地，当所述检测试纸条包含底板时，步骤s6为：
49.试纸条的组装：按样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫顺序粘附至底板上得到所述检测试纸条，然后将所述检测试纸条置于所述壳体的所述容置腔中即得。
50.本发明的第三方面，提供一种上述的胶体金试纸条在检测试剂盒中的应用。
51.本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。
附图说明
52.下面结合附图和实施例对本发明做进一步的说明，其中：
53.图1为本发明实施例的胶体金试纸条结构示意图。
54.图2为本发明实施例的胶体金试纸条的横截面结构示意图。
55.图3为本发明图2中预处理溶液腔的局部放大图。
56.图4为本发明连接通道径向的横截面局部放大图。
57.图5为本发明另一实施例的胶体金试纸条的横截面结构示意图
58.图6为本发明实施例的检测试纸条的结构示意图。
59.附图标记：
60.壳体100；容置腔110；溶液腔120；观察窗口130；加样窗口140；预处理窗口150；密闭组件160；密闭板161；密闭开关162；开关腔室170；第一开关槽180；阀门190；第二开关槽191；
61.样品垫200；样品槽210；
62.金标结合垫300；
63.硝酸纤维素膜400；检测线410；质控线420；
64.吸水垫500；
65.底板600。
具体实施方式
66.以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
67.本发明的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示意性实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
68.实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
69.(一)检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条
70.参照图1和图2所示，本发明一种实施例的检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条，包括检测试纸条和壳体100；
71.检测试纸条，设有依次相连的样品垫200、金标结合垫300、硝酸纤维素膜400和吸水垫500，所述硝酸纤维素膜400设有检测线410和质控线420；
72.壳体100，包含预处理溶液腔120和容置腔110，所述容置腔110内放置所述检测试纸条，所述壳体100的壳面设置观察窗口130、加样窗口140和预处理窗口150，所述观察窗口130与所述硝酸纤维素膜400对应设置，所述加样窗口140与所述样品垫200对应设置，并与所述预处理溶液腔120之间通过连接通道相连通，所述连接通道上设有能够启闭的阀门190，所述预处理窗口150与所述预处理溶液腔120对应设置，所述预处理窗口150处设有密闭组件160，所述密闭组件160能够启闭所述预处理窗口150。
73.在本发明的一些实施例中，检测试纸条放置于壳体100内部的容置腔110中，具体参见图2所示，在容置腔110中，检测试纸条的样品垫200端靠近壳体100预处理溶液腔120，在预处理溶液腔120中放置有溶解缓冲液，当所测物质为固态或半固态样品时，打开预处理窗口150的密闭组件160，取少量样品放入预处理溶液腔120中，混匀溶解，溶解完成后，将位于容置腔110和预处理溶液腔120之间的阀门190打开，使溶有待测样品的溶解缓冲液流入容置腔110中的检测试纸样品垫200上，在吸水垫500的虹吸作用下，待测样品在检测试纸条中进行迁移，进而实现待测样品的检测。该检测方法简便，可广泛应用于样品的临时快速检测。
74.在本发明的一些实施例中，壳体100对应检测试纸条硝酸纤维素膜400(检测线410和质控线420)的位置设有观察窗口130，观察窗口130为长方形孔或椭圆形孔，其便于直接观察检测结果；壳体100对应检测试纸条样品垫200位置设有加样窗口140；当待测样品为液态时，可以直接在加样窗口140将待测样品滴入样品垫200并进行检测。
75.在本发明的一些实施例中，参见图3所示，图3为图2预处理溶液腔120的局部放大图，预处理窗口150的边缘处设有相连通的开关腔室170和第一开关槽180，密闭组件160包括相连的密闭板161和密闭开关162，密闭板161滑动设置于开关腔室170中，密闭开关162滑动设置于第一开关槽180中，密闭开关162与密闭板161的滑动方向相同，密闭开关162朝向第一开关槽180伸出壳体100设置。当检测固体或半固态待测样品时，将密闭开关162沿第一开关槽180方向向前滑动，滑动的同时，密闭开关162带动密闭板161向相同方向滑动进而打开预处理溶液腔120，其中，打开预处理溶液腔120后，密闭板161进入开关腔室170，最后将固体或半固态待测样品放入预处理溶液腔120进行预处理。
76.在本发明的一些实施例中，具体参见图2所示，样品垫200、金标结合垫300、硝酸纤维素膜400及吸水垫500中相邻的二者搭接设置，搭接设置有利于待测样品在检测试纸条上快速迁移。进一步，为了有效提高待测样品迁移速度，述标结合垫和吸水垫500分别交叠压在硝酸纤维素膜400的两端，金标结合垫300、硝酸纤维素膜400和吸水垫500交叠区域的长度为0.8mm～1.5mm。
77.在本发明的一些实施例中，检测线410位于硝酸纤维素膜400中靠近金标结合垫300的一端，质控线420位于硝酸纤维素膜400中靠近吸水垫500的一端，检测线410和质控线420相隔的距离为5mm～9mm。
78.在本发明的一些实施例中，样品垫200朝向加样窗口140的一面上设有样品槽210，
加样槽的设置有利于防止从预处理溶液腔120中流入的待测样品溅射。
79.在本发明的一些实施例中，如图4所示，所述壳体100的壳面上设有第二开关槽191，所述第二开关槽191穿过所述连接通道设置，且覆盖所述连接通道的径向截面，所述阀门190为弹性塞，所述弹性塞能够插入所述第二开关槽191中，并密封所述连接通道。
80.在本发明的一些实施例中，参见图5所示，检测试纸条还包括底板600，依次相连的样品垫200、金标结合垫300、硝酸纤维素膜400和吸水垫500设置于底板600上。具体可参见图6所示，在本发明的检测试纸条中，样品垫200、金标结合垫300、硝酸纤维素膜400和吸水垫500在底板600上依次搭接设置，其中，金标结合垫300和吸水垫500分别交叠压在硝酸纤维素膜400的两端，以便于待测样品的高效迁移。
81.在本发明的一些实施例中，样品垫200为经表面活性剂缓冲液浸泡处理后干燥的玻璃纤维膜构件，样品垫200经过表面活性剂缓冲液浸泡处理有利于样品的快速迁移，提高检测效率。
82.在本发明的一些实施例中，底板600为聚苯乙烯或者聚乙烯材质，吸水垫500为滤纸材质。
83.在本发明的一些实施例中，检测线410上固定的那非类药物通用抗原是那非类药物通用半抗原与鸡卵清白蛋白的偶联物。
84.(二)检测pde-5抑制剂胶体金试纸条的制备方法
85.本发明的检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条具体制备工艺如下：
86.1、胶体金溶液的制备
87.本发明的检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条利用柠檬酸三钠还原法制备粒径为20nm的胶体金，具体步骤如下：
88.(1)取100ml双蒸水置于500ml烧杯中，加入1ml过0.22μm滤膜氯金酸溶液至氯金酸质量终浓度为2％，然后放入洗净的转子，置于恒温磁力搅拌器上，开始搅拌，将温度调至最高，用锡箔纸封住瓶口；
89.(2)待水煮沸后，快速倒入4.8ml过0.22μm滤膜的柠檬酸三钠溶液至柠檬酸三钠的质量终浓度为1％；保持沸腾5min后，停止加热和搅拌，冷却，用双蒸水重新定容至100ml，混匀，即可得到胶体金粒径为20nm的胶体金溶液；放入4℃冰箱中储存，备用。
90.2、胶体金标记抗体的制备
91.(1)用0.1m k2co3调节上述得到的胶体金溶液的ph至8.0，将那非类药物广谱单克隆抗体加入1ml已调节好ph的胶体金溶液中，加入量为5～25μg，混匀，经磁力搅拌器室温下搅拌10min；
92.(2)加入20μl 10％的bsa溶液，室温下继续电磁搅拌10min，12000r/min离心15min，去上清，加入胶体金复溶液至原溶液体积；再次以12000rpm离心30min后，弃去上清，将沉淀用洗涤保存液重悬至体积为原溶液体积的1/10，即得胶体金标记的抗体，4℃避光保存备用。
93.其中，胶体金复溶液为含质量终浓度为0.01％硼酸、0.2％peg20000和0.02％ nan3的pbs缓冲液，其中pbs的摩尔浓度为0.01mol/l。
94.3、金标结合垫和样品垫的预处理与制备
95.(1)将金标结合垫300(玻璃纤维膜，型号为赛多利斯cn140)浸入金标结合垫处理
液(20mm na3po4·
12h2o，5％bsa，0.25％tween-20，10％蔗糖)浸湿后，37℃烘干待用；
96.(2)以9μl/cm的喷金量将上述得到的胶体金标记抗体喷于金标结合垫300上，37℃过夜烘干，备用；
97.(3)将样品垫200(玻璃纤维膜)浸入样品垫处理液(0.01m pbs，2％bsa，2.5％蔗糖，0.02％nan3)浸湿后，37℃烘干。
98.4、检测线和质控线的制备
99.步骤s1：利用xyz三线划膜喷金仪将1mg/ml的那非类药物通用抗原以0.8μl/cm的体积喷涂在硝酸纤维素膜400的检测线410上；
100.步骤s2：将0.5mg/ml的羊抗鼠igg抗体，以0.8μl/cm的体积喷涂在硝酸纤维素膜400的质控线420上；
101.步骤s3：将步骤s1得到的检测线410和步骤s2得到的质控线420平行设置，间距0.7cm，37℃干燥后，密封保存。
102.5、检测试纸条的组装
103.将上述得到的检测线410、质控线420、样品垫200(1.6cm)、硝酸纤维素膜400(2.5cm)、吸垫(1.8cm)依次衔接在pvc底板600上，样品垫200与硝酸纤维素膜400重叠1mm，吸水垫500与硝酸纤维素膜400重叠2mm，重叠部位样品垫200和吸水垫500均在硝酸纤维素膜400的上方，组装完成后即得。
104.6、检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条的组装
105.将步骤5中制得的检测试纸条放置于壳体100中的容置腔110，其中检测试纸条的样品垫200端靠近预处理溶液腔120，组装完成的即得检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条。
106.(三)检测pde-5抑制剂胶体金试纸条的使用方法
107.1、待测物为液态样品
108.当采用本发明的检测试纸条检测含pde-5抑制剂的液态待测样品时，将待测样品滴加到样品垫200上或者将其加入预处理溶液腔120中先经预处理后再进行检测(有利于提高灵敏性)，待测样品在毛细管作用下沿着试纸条方向(自样品垫200端向吸水垫500端)泳动，泳动到金标结合垫300时，固态化的那非类药物广谱单克隆抗体迅速溶解释放，随待测样品一起沿着试纸条泳动至硝酸纤维素膜400的检测线410，当待测样品中含有pde-5抑制剂时，则其会与相应的胶体金标记的那非类药物广谱单克隆抗体发生反应，形成免疫复合物，抑制了胶体金标记的那非类药物广谱单克隆抗体与相应检测线410包被的抗原(那非类药物通用抗原)的结合，使相应的检测线410截获的金标抗体的量减少，检测线410颜色变浅或消失；当待测样品中的pde-5抑制剂的量超过该试纸条的最低检测限时，则相应的检测线410将不显色或完全消失，金标单抗(那非类药物广谱单克隆抗体)被包被于质控线420上的羊抗鼠igg截获，形成肉眼可见的红色条带，结果为阳性；当待测样品中不含有pde-5抑制剂，或浓度低于该试纸最低检测限时，胶体金标记的单克隆抗体(那非类药物广谱单克隆抗体)与包被于硝酸纤维素膜400检测线410上的对应的抗原发生特异性免疫反应而被截获，在检测线410位置形成肉眼可见的红色条带，即阴性结果。
109.2、待测物为固态或半固态样品
110.当采用本发明的检测试纸条检测含pde-5抑制剂的固态或半固态待测样品时，打开壳体100的密闭组件160，取少量待测样品加入至壳体100的预处理溶液腔120中，待其溶
解后，打开壳体100预处理溶液腔120与容置腔110之间的阀门190，使溶解后的待测样品进入容置腔110中检测试纸条的样品槽210中，待测样品在毛细管作用下沿着试纸条方向(自样品垫200端向吸水垫500端)泳动，泳动到金标结合垫300时，固态化的那非类药物广谱单克隆抗体迅速溶解释放，随待测样品一起沿着试纸条泳动至硝酸纤维素膜400的检测线410。当待测样品中含有pde-5抑制剂时，则其会与相应的胶体金标记的那非类药物广谱单克隆抗体发生反应，形成免疫复合物，抑制了胶体金标记的那非类药物广谱单克隆抗体与相应检测线410包被的抗原(那非类药物通用抗原)的结合，使相应的检测线410截获的金标抗体的量减少，检测线410颜色变浅或消失；当待测样品中的pde-5抑制剂的量超过该试纸条的最低检测限时，则相应的检测线410将不显色或完全消失，金标单抗(那非类药物广谱单克隆抗体)被包被于质控线420上的羊抗鼠igg截获，形成肉眼可见的红色条带，结果为阳性；当待测样品中不含有pde-5抑制剂，或浓度低于该试纸最低检测限时，胶体金标记的单克隆抗体(那非类药物广谱单克隆抗体)与包被于硝酸纤维素膜400检测线410上的对应的抗原发生特异性免疫反应而被截获，在检测线410位置形成肉眼可见的红色条带，即阴性结果。
111.(三)检测pde-5抑制剂胶体金试纸条的应用
112.1、灵敏性和特异性
113.(1)试纸条的灵敏性和特异性检测和判定方法
114.采用上述本发明制得的胶体金试纸条对33种固体pde-5抑制剂标准品(如表1所示)进行检测，其中，预处理溶液腔120中的溶液为10％甲醇溶液，根据固体pde-5抑制剂添加量的不同设置不同的浓度梯度进行灵敏性和特异性检测。
115.其中定性检测结果的判定方法为：
116.阴性(-)：检测线410显色比质控线420显色深或一样深，表示样品中待检测物质浓度低于检测限，或不含待检测物质。
117.阳性( )：检测线410显色比质控线420显色浅，或检测线410无显色，则表示样品中待检测物质浓度高于检测限。
118.无效：质控线420未显色，表明操作过程不正确或检测条已失效。
119.(2)灵敏性和特异性检测结果
120.本发明试纸条对pde-5抑制剂的检测灵敏性、特异性检测结果如表1所示，结果表明，该试纸条对西地那非(sildenafil)、罗地那非(lodenafil)、艾地那非(aildenafil)、乌地那非(udenafil)、米罗那非(mirodenafil)、他达拉非(tadalafil)、红地那非(acetildenafil)、硫代艾地那非(thioaildenafil)、那莫西地那非(norneosildenafil)、豪莫西地那非(homosildenafil)、那红地那非(noracetildenafil)、丙氧苯基西地那非(propoxyphenyl sildenafil)、硫代西地那非(thiosildenafil)、n-去甲基西地那非(n-desmethyl sildenafil)、硫代豪莫西地那非(thiohomosildenafil)、丙氧基苯基硫代艾地那非(prepoxypheyl thioaildenafil)、羟基红地那非(hydroxyacetildenafil)、伐地那非(vardenafil)、伪伐地那非(pseudovardenafil)、那莫伐地那非(norneovardenafil)、阿伐那非和氨基他达拉非共33种pde-5抑制剂的检测结果均呈阳性，最低检测限在0.32～280ng/ml，检测灵敏度高。
121.表1试纸条的检测灵敏性和特异性结果
122.123.124.[0125][0126]
注：
“‑”
代表未检测到药物。
[0127]
检测结果表明：采用本发明制得的检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条灵敏性好，对于西地那非、罗地那非、艾地那非、豪莫西地那非、丙氧苯基西地那非、硫代西地那非、伪伐地那非、伐地那非盐酸盐、n-去甲基西地那非、丙氧苯基西地那非和西地那非n-氧化物的检测线410均低于1ng/ml，对于乌地那非、米罗那非、他达拉非等22种pde-5抑制剂也表现出了不同的检测灵敏度。
[0128]
此外，本发明制得的检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条广谱性好，能够有效测出33种常见的pde-5抑制剂；特异性好，对于非pde-5抑制剂也能有效区分。
[0129]
以上结果说明：本发明的胶体金试纸条可对pde-5抑制剂实现多残留免疫分析检测，检测特异性强，灵敏度高，且不易造成假阳性。
[0130]
2、稳定性检测
[0131]
将本发明制得的胶体金试纸条放入密封袋中，内置干燥剂，置于45℃烘箱内保存，分别与7天、14天、21天、28天、35天、42天取出，检测试纸条的稳定性。
[0132]
结果表明，45℃保存7天、14天、21天、28天、35天，检测结果均无明显变化，45℃保存42天，金标结合垫300上胶体金标记的抗体的复溶效果明显下降，检测线410和质控线420的颜色明显变浅，灵敏度下降。45℃保存42天，相当于常温保存15个月。
[0133]
综上，本发明提供的一种检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条通过在壳体100中设置预处理溶液腔120，解决了传统固态或半固态样品检测不便的技术问题，提高了检测效率，且检测条件不受检测环境因素影响，能够实现随时随地检测，具有广泛的应用价值。
[0134]
此外，本发明提供的胶体金试纸条是基于抗原抗体特异性结合的、用于检测pde-5抑制剂的胶体金试纸条，该试纸条的检测灵敏性高、特异性强、稳定性和广谱性好，保证了pde-5抑制剂检测结果的可靠性。
[0135]
上面对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术
领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。