鼻黏膜的体外培养方法和培养液与流程

技术特征：
1.一种鼻黏膜的体外培养液，其特征在于，所述体外培养液的成分包括：2.如权利要求1所述的鼻黏膜的体外培养液，其特征在于，所述wnt/β-catenin信号通路激活剂为r-spondin1蛋白、wnt-3a蛋白、fh535中的一种或多种；所述成纤维细胞生长因子为fgf7、fgf10、fgf-4中的一种或两种；所述tgf-β抑制剂为noggin、a83-01、compound c dihydrochloride中的一种或两种；所述rock抑制剂包括y27632、s1049y-27632 2hcl、zinc00881524、gsk269962a、m20594、y-33075中的一种或多种；所述p38 mapk抑制剂包括sb202190、sb431542、birb796中的一种或多种。3.如权利要求2所述的鼻黏膜的体外培养液，其特征在于，所述体外培养液的成分包括：
4.如权利要求3所述的鼻黏膜的体外培养液，其特征在于，所述体外培养液的成分包括：括：5.一种体外培养鼻黏膜的方法，其特征在于，利用如权利要求1～4任一项所述的鼻黏
膜的体外培养液进行体外培养。6.如权利要求5所述的体外培养鼻黏膜的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤(1)：组织收集；将鼻黏膜离体后，浸泡在生理盐水中保存；步骤(2)：清洗；用磷酸盐缓冲液清洗离体的鼻粘膜，除去血块、粘液和骨片；步骤(3)：培养液中培养；将清洗后的鼻黏膜置入体外培养液中，在细胞培养箱中培养。7.如权利要求6所述的体外培养鼻黏膜的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，鼻黏膜浸泡在生理盐水中保存的时间小于6小时8.如权利要求6所述的体外培养鼻黏膜的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，鼻黏膜离体后12小时内尽快置入体外培养液中培养。9.如权利要求6或8所述的体外培养鼻黏膜的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，细胞培养箱中的培养环境为37℃、5％co2。10.一种利用体外培养的鼻黏膜进行体外病毒感染实验的方法，其特征在于，所述体外培养的鼻黏膜利用如权利要求1～4任一项所述的鼻黏膜的体外培养液进行体外培养。

技术总结
本发明提供了一种鼻黏膜的体外培养方法和培养液，所述培养液的成分包括Wnt/β-catenin信号通路激活剂0.1-20ug/ml、成纤维细胞生长因子10-150ng/ml、TGF-β抑制剂0.02-3ug/ml、ROCK抑制剂0.1-100umol/L、P38MAPK抑制剂0.1-1umol/L、无血清添加剂1X、N-乙酰半胱氨酸1-10mmol/L、烟酰胺1-20mmol/L、GlutaMax添加剂1X、抗生素、DMEM/F12培养基1X。本发明可将鼻黏膜进行体外培养，可以保持至少2周的活性，并拥有完整的上皮屏障与免疫系统，可以实现离体外鼻黏膜病毒感染实验。现离体外鼻黏膜病毒感染实验。现离体外鼻黏膜病毒感染实验。


技术研发人员：余少卿 赖菊
受保护的技术使用者：上海市同济医院
技术研发日：2022.11.14
技术公布日：2023/1/13