一种高通量人肾脏类器官诱导分化方法

技术特征：
1.一种人肾脏类器官诱导分化方法，包括如下步骤：(1)向人诱导多能干细胞中加入含有rock通路抑制剂的培养基a处理18～24h；(2)更换为含有gsk-3抑制剂的培养基b处理1～4天；(3)更换为含有gsk-3抑制剂、fgf-9和heparin的培养基b处理1～3天；(4)消化细胞得到细胞悬液，进行3d培养，得到类器官球体；(5)使用含有gsk-3抑制剂的培养基b处理50～70min，转移至培养器中使用含有fgf-9和heparin的培养基b培养1～6天；(6)更换为无添加的培养基b培养1～10天，得到成熟的肾脏类器官。2.根据权利要求1所述的人肾脏类器官诱导分化方法，其特征在于，所述rock通路抑制剂包括y-27632。3.根据权利要求1所述的人肾脏类器官诱导分化方法，其特征在于，所述gsk-3抑制剂包括ly2090314、chir-98014、bio-acetoxime、azd2858、sar502250、chir99021、chir-99021trihydrochloride中的至少一种。4.根据权利要求1所述的人肾脏类器官诱导分化方法，其特征在于，(1)中细胞的接种量为0.5
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105～1.0
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105细胞/9～10cm2。5.根据权利要求1所述的人肾脏类器官诱导分化方法，其特征在于，(1)中所述人诱导多能干细胞包括人尿源诱导多能干细胞。6.根据权利要求1所述的人肾脏类器官诱导分化方法，其特征在于，(4)中所述3d培养的步骤为：使用v型96孔培养板对细胞进行培养，并辅助机械刺激。7.根据权利要求6所述的人肾脏类器官诱导分化方法，其特征在于，所述机械刺激的强度为50～150rpm，机械刺激的时间优选为20～50h。8.根据权利要求1所述的人肾脏类器官诱导分化方法，其特征在于，(5)中所述培养器提前使用基质胶包被；包被时间优选为25～35min，包被温度优选为35～37℃。9.根据权利要求1所述的人肾脏类器官诱导分化方法，其特征在于，培养基a为多能干细胞培养基；培养基b为贴壁培养基质或细胞分化培养基。10.权利要求1～9任一项所述的人肾脏类器官诱导分化方法在药物筛选、毒理学试验、天然免疫研究或病毒感染方面的应用。

技术总结
本发明公开了一种高通量人肾脏类器官诱导分化方法，包括：向人诱导多能干细胞中加入ROCK通路抑制剂处理18～24h；更换为GSK-3抑制剂处理1～4天；更换为含有GSK-3抑制剂、FGF-9和Heparin的培养基B处理1～3天；进行高通量3D培养，高效得到大量类器官球体；使用GSK-3抑制剂处理后，使用含有FGF-9和Heparin的培养基B培养1～6天；更换为无添加的培养基B培养1～10天，得到成熟的肾脏类器官。该方法操作简单，针对性强，提高了诱导分化的效率和分化稳定性，降低了分化成熟所需时间，增加了肾脏类器官的增殖效率，解决了常规方法中分化效率参差不齐，操作冗杂的问题。操作冗杂的问题。


技术研发人员：周一鸣 杨小强 汪乐
受保护的技术使用者：中山大学孙逸仙纪念医院
技术研发日：2022.08.12
技术公布日：2022/12/12