一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法

技术特征：
1.一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集不同区域不同养殖模式下的克氏原鳌虾样品，用清水洗净，剥离虾尾肉粉碎成肉糜，真空冷冻干燥后研磨成粉，过100目筛，-18℃冷冻保存；(2)取制好的粉末样品置于离心管中加入溶剂2500r/min涡旋5-10min后4000r/min离心10-15min去除上清液，重复操作2-3次，真空干燥箱内40℃恒温干燥12h；(3)对上述样品分别进行c、n、h、o同位素测定得到稳定同位素丰度比，计算得到同位素比率δ
13
c
‰
、δ
15
n
‰
、δ2h
‰
、δ
18
o
‰
；(4)采用不同养殖模式对应的稳定同位素比率数据建立模型，得到养殖模式判别模型；(5)将未知样品的稳定同位素比率数据带入步骤(4)的模型中进行判别溯源。2.根据权利要求1所述的一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，其特征在于，步骤(1)中每个养殖模式下的样品采集≥20份，且采集区域≥5处，每份样品重量≥2kg，每份样品数量15～20只。3.根据权利要求1所述的一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，其特征在于，步骤(2)中所述溶剂为体积比甲醇：氯仿＝2：1的混合液，样品与溶剂的质量体积比为0.1g/ml。4.根据权利要求1所述的一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，其特征在于，步骤(3)中的具体操作如下：(3.1)取0.2mg待测样品到锡箔杯中，称取等量的标准物质，将各样品经过元素分析仪转化为co2气体和n2，然后利用conflo iii型稀释仪稀释后，再利用同位素比率质谱仪检测每个待检测样品，得到各样品的稳定碳同位素丰度比和稳定氮同位素丰度比；(3.2)取0.25mg待测样品装入银杯中，称取等量的标准物质，将各样品经过元素分析仪1380℃下燃烧裂解转化为co和h2，生成气体在65℃条件下通过色谱柱分离后经confloⅳ型稀释仪稀释后，再利用同位素比率质谱仪检测每个待检测样品，得到各样品的稳定氢同位素丰度比和稳定氧同位素丰度比。5.根据权利要求4所述的一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，其特征在于，步骤(3.1)中所述的标准物质为usgs40、usgs41a和usgs42；步骤(3.2)中所述的标准物质为usgs42。6.根据权利要求6所述的一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，其特征在于，步骤(3.1)中元素分析仪进样器氦气吹扫流量为220ml/min，氧化炉温度为960℃，还原炉温度为650℃，载气氦气流量为90ml/min；confloiii条件为：he稀释压力为0.6bar，co2参考气压力为0.6bar，n2参考气压力为1.0bar；同位素比率质谱仪参数：ei离子源，离子源电压：3.06kv，真空度：1.2
×
10-6
mbar，电流：1.5ma；测试仪器δ
13
c、δ
15
n、δ2h及δ
18
o的连续测定精度<0.06
‰
(n＝10)、δ2h的连续测定精度<0.4
‰
(n＝10)；分析过程中各样品进行平行测试取平均值，每10个样品穿插一个标准样品。7.根据权利要求1所述的一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，其特征在于，步骤(3)中，稳定同位素比率计算公式为：δ
‰
＝(r
样品
/r
标准
－1)
×
1000，式中，r代表标准物质和样品中轻重同位素与轻同位素的丰度比，即分别为
13
c/
12
c，
15
n/
14
n，2h/1h，
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o/
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o。8.根据权利要求1所述的一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，其特征在于，不同养殖模式下的克氏原鳌虾样品为稻虾、塘虾、河虾。9.根据权利要求8所述的一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，其特征在于，步骤(4)中利用相关性分析、主成分分析和线性判别分析不同养殖模式下克氏原鳌虾的稳定同位素测定养殖模式判别准确率；其中，稻虾、塘虾、河虾的稳定同位素比数据间的相关性分析系数分别为：δ
13
c、δ
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n相关性系数为0.1；δ
13
c、δ2h相关性系数为0.29；δ
13
c、δ
18
o相关性系数为0.11；δ2h、δ
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o相关性系数为0.05；稻虾、塘虾、河虾，对应的主成分分析的前第一主成分的方差贡献率为37.8％，第二主成分方差贡献率为26.4％，前两项主成分得分的方差贡献率和为64.2％。10.根据权利要求9所述的一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，其特征在于，以稳定同位素比率数据的前两项主成分得分作为输入，建立的对应的线性判别模型分别为：y稻虾＝b
稻虾
×
a；y塘虾＝b
稻虾
×
a；y河虾＝b
稻虾
×
a；其中a表示稳定同位素比率数据；b表示不同养殖下的转换系数。

技术总结
本发明公开了一种基于稳定同位素的克氏原鳌虾养殖模式溯源方法，首先采集不同区域不同养殖模式的克氏原鳌虾样品处理成粉后冷冻保存，然后脱脂分别进行C、N、H、O同位素测定，采用不同养殖模式对应的同位素测定数据建立模型，得到养殖模式判别模型，然后将未知样品的C、N、H、O稳定同位素数据带入模型中进行养殖模式判别，从而实现对未知来源的克氏原鳌虾进行养殖方式的溯源。本发明利用稳定同位素技术采集不同产区的不同养殖模式小龙虾样品数据，结合化学计量学方法挖掘得到的数据信息，进一步建立小龙虾的养殖方式鉴别模型，具有较高的准确率，能够准确分辨样品来源，该项技术可应用于快速辨别不同养殖模式的小龙虾中。于快速辨别不同养殖模式的小龙虾中。于快速辨别不同养殖模式的小龙虾中。


技术研发人员：夏珍珍 郑丹 彭西甜 胡西洲 彭立军 张仙
受保护的技术使用者：湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
技术研发日：2022.09.21
技术公布日：2022/12/9