1.本发明涉及新颖的药物共轭物、药物、药物连接子化合物、其制备方法、含有所述药物共轭物的药物组合物、及其作为抗肿瘤剂的用途。
背景技术：
2.依特那斯汀(ecteinascidin)是从海洋海鞘加勒比海海鞘(ecteinascidia turbinata)中分离的极有效的抗肿瘤剂。这些化合物中的一种，曲贝替定(trabectedin)被用于在蒽环类药物(anthracyclines)和异环磷酰胺(ifosfamide)失效后治疗晚期和转移性软组织肉瘤(sts)的患者，或者不合适接受此类药剂(蒽环类药物(anthracyclines)和异环磷酰胺(ifosfamide))的患者，以及与聚乙二醇化脂质体多柔比星组合治疗铂敏感复发卵巢癌。
3.美国专利(专利号5,149,804)描述了从加勒比海海鞘ecteinascidia turbinata中分离的依特那斯汀722(et-722)及其结构。et-722以非常低的浓度在体内保护小鼠免于p388淋巴瘤、b16黑色素瘤和lewis肺癌。
[0004][0005]
wo03066638描述了et-722的几种合成类似物及其抗肿瘤细胞的细胞毒性活性。具体地，wo03066638描述了化合物1至3及其抗一组癌细胞系的细胞毒性活性。
[0006][0007]
wo 03/014127中描述的另一种化合物，卢比克替定(lurbinectedin)，目前正在临床试验中用于治疗癌症。卢比克替定具有以下化学结构
[0008][0009]
wo2018197663涉及一种新颖的依特那斯汀衍生物，其表现出前景非常好的抗肿瘤活性。在这种专利申请中公开的其中一种化合物目前在用于预防和治疗实体瘤的i期临床试验。
[0010]
近年来，随着可更有效地靶向和杀死癌细胞的药物实体的发展，癌症的治疗取得了显着进展。研究人员已经利用靶细胞(例如癌细胞)选择性表达的细胞表面受体和抗原来开发基于(例如在肿瘤中结合肿瘤特异性或肿瘤相关抗原的)抗体的药物实体。为了实现这一目标，已将化学治疗药物、细菌和植物毒素以及放射性核素等细胞毒性分子与结合肿瘤特异性或肿瘤相关性细胞表面抗原的单克隆抗体化学连接。
[0011]
因此，鉴于复杂的有效负载、连接子和抗体结构，所以adc代表了一个具有挑战性的发展领域，但仍然需要开发进一步的adc。
技术实现要素：
[0012]
需要新颖的活性药物共轭物。本发明解决了这种需求。本发明进一步提供用于制备本发明的药物共轭物的新颖的药物和药物连接子化合物，制备本发明的新颖的药物共轭物的方法，含有所述药物共轭物的药物组合物及其作为抗肿瘤剂的用途，以及用于治疗癌症的包含本发明的药物共轭物的试剂盒。
[0013]
在本发明的第一方面，提供了一种药物共轭物，其包含共价连接至药物共轭物的其余部分的药物部分，该药物共轭物具有式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab，其中：
[0014]
d是具有下式(i)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，
[0015][0016]
其中：
[0017]
d通过羟基或氨基共价连接到(x)b(若存在)，或(aa)w(若存在)，或(t)g(若存在)，或(l)；
[0018]
y是-nh-或-o-；
[0019]
r1是-oh或-cn；
[0020]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0021]
r3是氢或-orb基团；
[0022]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc、-ch2nh2以及-ch2nhprot
nh
；
[0023]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0024]
rb选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0025]
rc选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；且
[0026]
prot
nh
是氨基的保护基团；
[0027]
x和t是可以相同或不同的延伸基团；
[0028]
每个aa独立地为氨基酸单元；
[0029]
l是连接子基团；
[0030]
w为在0至12范围内的整数；
[0031]
b为0或1的整数；
[0032]
g为0或1的整数；
[0033]
ab为包含至少一个抗原结合位点的部分(moiety)；且
[0034]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]与包含至少一个抗原结合位点的部分的比率且在1至20的范围内。
[0035]
在本发明的另一方面，提供了一种药物共轭物，其包含共价连接至药物共轭物的其余部分的药物部分，该药物共轭物具有式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab，其中：
[0036]
d是具有下式(i)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，
[0037][0038]
其中：
[0039]
d通过羟基或氨基共价连接到(x)b(若存在)，或(aa)w(若存在)，或(t)g(若存在)，或(l)；
[0040]
y是-nh-或-o-；
[0041]
r1是-oh或-cn；
[0042]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0043]
r3是氢或-orb基团；
[0044]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc、-ch2nh2以及-ch2nhprot
nh
；
[0045]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0046]
rb选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0047]
rc选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；且
[0048]
prot
nh
是氨基的保护基团；
[0049]
条件是当r4是氢时，y是-o-；
[0050]
x和t是可以相同或不同的延伸基团；
[0051]
每个aa独立地为氨基酸单元；
[0052]
l是连接子基团；
[0053]
w为在0至12范围内的整数；
[0054]
b为0或1的整数；
[0055]
g为0或1的整数；
[0056]
ab为包含至少一个抗原结合位点的部分(moiety)；且
[0057]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]与包含至少一个抗原结合位点的部分的比率且在1至20的范围内。
[0058]
在本发明的另一方面，提供了一种药物共轭物，其包含共价连接至药物共轭物的其余部分的药物部分，该药物共轭物具有式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab，其中：
[0059]
d是具有下式(ih)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，
[0060][0061]
其中：
[0062]
波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(t)g(若存在)、或至(l)的点；
[0063]
y是-nh-或-o-；
[0064]
r1是-oh或-cn；
[0065]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0066]
r3是氢或-orb基团；
[0067]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc、-ch2nh2以及-ch2nhprot
nh
；
[0068]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0069]
rb选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0070]
rc选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；且
[0071]
prot
nh
是氨基的保护基团；
[0072]
x和t是可以相同或不同的延伸基团；
[0073]
每个aa独立地为氨基酸单元；
[0074]
l是连接子基团；
[0075]
w为在0至12范围内的整数；
[0076]
b为0或1的整数；
[0077]
g为0或1的整数；
[0078]
ab为包含至少一个抗原结合位点的部分(moiety)；且
[0079]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]与包含至少一个抗原结合位点的部分的比率且在1至20的范围内。
[0080]
在本发明的另一方面，提供了一种药物共轭物，其包含共价连接至药物共轭物的其余部分的药物部分，该化合物具有式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab，其中：
[0081]
d是具有下式(i)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，
[0082][0083]
其中：
[0084]
d通过羟基或氨基共价连接到(x)b(若存在)，或(aa)w(若存在)，或(t)g(若存在)，或(l)；
[0085]
y选自-nh-和-o-；
[0086]
r1是-oh或-cn；
[0087]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0088]
r3是氢或-orb基团；
[0089]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc、-ch2nh2以及-ch2nhprot
nh
；
[0090]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0091]
rb选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0092]
rc选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0093]
prot
nh
是氨基的保护基团；
[0094]
取代基r
x
选自由以下组成的组：可选择地被至少一个基团ry取代的c
1-c
12
烷基、可选择地被至少一个基团ry取代的c
2-c
12
烯基、可选择地被至少一个基团ry取代的c
2-c
12
炔基、卤素原子、氧基、硫基、氰基、硝基、ory、ocory、ocoory、cory、coory、oconr
yrz
、conr
yrz
、s(o)ry、so2ry、p(o)(ry)orz、nr
yrz
、nrycorz、nryc(＝o)nr
yrz
、nryc(＝nry)nr
yrz
、呈一或多个环的具有6至18个碳原子的芳基(所述芳基可选择地被一或多个可相同或不同的选自由ry、ory、ocory、ocoory、nr
yrz
、nrycorz及nryc(＝nry)nr
yrz
组成的组的取代基取代)、包含被如上所定义的可选择地被取代的芳基取代的具有1至12个碳原子的烷基的芳烷基、包含被如上所定义的可选择地被取代的芳基取代的具有1至12个碳原子的烷氧基的芳烷氧基、以及具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的5至14元饱和或不饱和杂环基，所述杂环基可选择地被一或多个取代基ry取代，且在任何给定基团上存在超过一个可选择的取代基的情况下，可选择的取代基ry可相同或不同；
[0095]
各ry及rz独立地选自由以下组成的组：氢、c
1-c
12
烷基、经至少一个卤素原子取代的c
1-c
12
烷基、包含被呈一或多个环的具有6至18个碳原子的芳基取代的c
1-c
12
烷基的芳烷基、以及包含经具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的5至14
元饱和或不饱和杂环基取代的c
1-c
12
烷基的杂环烷基；
[0096]
x及t为可相同或不同的延伸基团；
[0097]
每个aa独立地为氨基酸单元；
[0098]
l是连接子基团；
[0099]
w为在0至12范围内的整数；
[0100]
b为0或1的整数；
[0101]
g为0或1的整数；
[0102]
其中b g w可选择地不为0；
[0103]
ab为包含至少一个抗原结合位点的部分；且
[0104]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]与包含至少一个抗原结合位点的部分的比率且在1至20的范围内。
[0105]
在本发明的另一方面，提供了一种药物共轭物，其包含共价连接至药物共轭物的其余部分的药物部分，该药物共轭物具有式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab，其中：
[0106]
d是具有下式(ih)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，
[0107][0108]
其中：
[0109]
波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(t)g(若存在)、或至(l)的点；
[0110]
y是-nh-或-o-；
[0111]
r1是-oh或-cn；
[0112]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0113]
r3是氢或-orb基团；
[0114]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc、-ch2nh2以及-ch2nhprot
nh
；
[0115]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0116]
rb选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0117]
rc选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c2-c
12
炔基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0118]
prot
nh
是氨基的保护基团；
[0119]
取代基r
x
选自由以下组成的组：可选择地被至少一个基团ry取代的c
1-c
12
烷基、可选择地被至少一个基团ry取代的c
2-c
12
烯基、可选择地被至少一个基团ry取代的c
2-c
12
炔基、卤素原子、氧基、硫基、氰基、硝基、ory、ocory、ocoory、cory、coory、oconr
yrz
、conr
yrz
、s(o)ry、so2ry、p(o)(ry)orz、nr
yrz
、nrycorz、nryc(＝o)nr
yrz
、nryc(＝nry)nr
yrz
、呈一或多个环的具有6至18个碳原子的芳基(所述芳基可选择地被一或多个可相同或不同的选自由ry、ory、ocory、ocoory、nr
yrz
、nrycorz及nryc(＝nry)nr
yrz
组成的组的取代基取代)、包含被如上所定义的可选择地被取代的芳基取代的具有1至12个碳原子的烷基的芳烷基、包含被如上所定义的可选择地被取代的芳基取代的具有1至12个碳原子的烷氧基的芳烷氧基、以及具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的5至14元饱和或不饱和杂环基，所述杂环基可选择地被一或多个取代基ry取代，且在任何给定基团上存在超过一个可选择的取代基的情况下，可选择的取代基ry可相同或不同；
[0120]
各ry及rz独立地选自由以下组成的组：氢、c
1-c
12
烷基、经至少一个卤素原子取代的c
1-c
12
烷基、包含被呈一或多个环的具有6至18个碳原子的芳基取代的c
1-c
12
烷基的芳烷基、以及包含经具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的5至14元饱和或不饱和杂环基取代的c
1-c
12
烷基的杂环烷基；
[0121]
x及t为可相同或不同的延伸基团；
[0122]
每个aa独立地为氨基酸单元；
[0123]
l是连接子基团；
[0124]
w为在0至12范围内的整数；
[0125]
b为0或1的整数；
[0126]
g为0或1的整数；
[0127]
其中b g w可选择地不为0；
[0128]
ab为包含至少一个抗原结合位点的部分；且
[0129]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]与包含至少一个抗原结合位点的部分的比率且在1至20的范围内。
[0130]
在本发明的另一方面，提供了一种药物共轭物，其包含共价连接至药物共轭物的其余部分的药物部分，该药物共轭物具有式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab，其中：
[0131]
d是具有下式(i)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，
[0132][0133]
其中：
[0134]
d通过羟基或氨基共价连接到(x)b(若存在)，或(aa)w(若存在)，或(t)g(若存在)，或(l)；
[0135]
y选自-nh-和-o-；
[0136]
r1是-oh或-cn；
[0137]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0138]
r3是氢或-orb基团；
[0139]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc、-ch2nh2以及-ch2nhprot
nh
；
[0140]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0141]
rb选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0142]
rc选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；且
[0143]
prot
nh
是氨基的保护基团；
[0144]
x和t是可以相同或不同的延伸基团；
[0145]
每个aa独立地为氨基酸单元；
[0146]
l是连接子基团；
[0147]
w为在0至12范围内的整数；
[0148]
b为1；
[0149]
g为0或1的整数；
[0150]
ab为包含至少一个抗原结合位点的部分(moiety)；且
[0151]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]与包含至少一个抗原结合位点的部分的比率且在1至20的范围内。
[0152]
在本发明的另一方面，提供了一种药物共轭物，其包含共价连接至药物共轭物的其余部分的药物部分，该化合物具有式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab，其中：
[0153]
d是具有下式(i)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，
(t)
g-h的化合物，其中：
[0176]
l1是选自以下式组成的组的连接子：
[0177][0178]
每一个波浪线表示共价连接至(t)g(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(x)b(若存在)、或至d的点；
[0179]
g选自卤素、-o-甲磺酰基、以及-o-甲苯磺酰基；
[0180]
j选自卤素、羟基、-n-丁二酰亚胺氧基(succinimidoxy)、-o-(4-硝基苯基)、-o-五氟苯基、-o-四氟苯基、以及-o-c(o)-or
20
；
[0181]r19
选自-c
1-c
12
亚烷基-、-c
3-c8碳环基、-o-(c
1-c
12
亚烷基)、呈单环或多环的可选择性地被一或多个取代基r
x
取代的-c
6-c
18
亚芳基、-c
1-c
12
亚烷基-c
6-c
18
亚芳基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择性地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
6-c
18
亚芳基-c
1-c
12
亚烷基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择性地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
1-c
12
亚烷基-(c
3-c8碳环基)-、-(c
3-c8碳环基)-c
1-c
12
亚烷基-、-c
5-c
14
杂环基-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择性地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
1-c
12
亚烷基-(c
5-c
14
杂环基)-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择性地被一或多个取代基r
x
取代)、-(c
5-c
14
杂环基)-c
1-c
12
亚烷基-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择性地被一或多个取代基r
x
取代)、-(och2ch2)
r-及-ch
2-(och2ch2)
r-，其中以上各亚烷基取代基无论单独还是连接至另一部分，碳链均可选择性地被一或多个取代基r
x
取代；
[0182]r20
为c
1-c
12
烷基或呈一或多个芳环的具有6至18个碳原子的芳基，所述芳基选择性地被一或多个取代基r
x
取代；
[0183]
r为在1-10范围内的整数；
[0184]
g为0或1的整数；
[0185]
b为0或1的整数；
[0186]
w为在0至12范围内的整数；且
[0187]
d、r
x
、x、t及aa中的每一者如本发明的第一方面中所定义。
[0188]
在本发明的优选的实施例中，b g w不为0。在另一些实施例中，b w不为0。在又一些实施例中，当w不为0时，b为1。在另一实施例中，当w为0时，b为1。
[0189]
在本发明的另一方面中，提供一种式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-l1或式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体；其中d、x、aa、t、l1、b、g及w中的每一者如本文所定义；但进一步其中若化合物为式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，则b w g≠0。
[0190]
在根据本发明的方面的优选的实施例中，n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]与包含至少一个抗原结合位点的部分的比率且在1至20的范围内。在另一些实施例中，n在1-12、1-8、3-8、3-6、3-5的范围内或为1、2、3、4、5或6，优选为3、4或5或4。
[0191]
在本发明的另一方面中，提供一种药物部分d，其用于抗体药物共轭物中。在本发明的另一方面中，提供一种药物部分d，其用作抗体药物共轭物中的有效负载。在本发明的另一方面中，提供如本文所述的药物部分d在制备抗体药物共轭物中的用途。
[0192]
在本发明的另一方面，提供了式(ia)的药物
[0193][0194]
其中：
[0195]
y是-nh-或-o-；
[0196]
r1是-oh或-cn；
[0197]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0198]
r3是氢或-orb基团；
[0199]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc、-ch2nh2以及-ch2nhprot
nh
；
[0200]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0201]
rb选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0202]
rc选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；且
[0203]
prot
nh
是氨基的保护基团；
[0204]
条件是当r4是氢时，y是-o-。
[0205]
在本发明的另一方面，提供了根据本发明的药物共轭物，其用作药物。
[0206]
在本发明的另一方面，提供了一种药物组合物，其包含根据本发明的药物共轭物和药学上可接受的载体。
[0207]
在本发明的另一方面，提供了根据本发明的药物共轭物，其用于治疗癌症。
[0208]
在本发明的另一方面，提供了一种用于预防或治疗癌症的方法，包括将有效量的根据本发明的药物共轭物施用给有此需要的患者。
[0209]
在本发明的另一方面，提供了根据本发明的药物共轭物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
[0210]
在本发明的另一方面，提供了一种试剂盒，其包含治疗有效量的根据本发明的药物共轭物和药学上可接受的载体。
[0211]
在本发明的上述方面，癌症可选自肺癌(包括nsclc)、胃癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、子宫内膜癌、膀胱癌、宫颈癌、食管癌、胆囊癌、子宫癌、涎腺导管癌、卵巢癌、肾癌、白血病、多发性骨髓瘤和淋巴瘤。在一个优选的实施例中，癌症是her2阳性癌症。优选的her2阳性癌症包括her2阳性肺癌(包括her2阳性nsclc)、her2阳性胃癌、her2阳性结直肠癌、her2阳性乳腺癌、her2阳性胰腺癌、her2阳性子宫内膜癌、her2阳性膀胱癌、her2阳性宫颈癌、her2阳性食管癌、her2阳性胆囊癌、her2阳性子宫癌、her2阳性涎腺导管癌和her2阳性卵巢癌。更优选的癌症是her2阳性乳腺癌、her2阳性卵巢癌和her2阳性胃癌。最优选的癌症是her2阳性乳腺癌。
[0212]
在本发明的另一方面，提供了制备根据本发明的药物共轭物的方法，包括将包含至少一个抗原结合位点的部分ab与药物d共轭，ab及d如本文所定义。
具体实施方式
[0213]
以下适用于本发明的所有方面：
[0214]
在本发明化合物中，烷基可支化或未支化，且优选具有1至约12个碳原子。更优选的一类烷基具有1至约6个碳原子。甚至更优选具有1个、2个、3个或4个碳原子的烷基。甲基、乙基、正丙基、异丙基及丁基(包括正丁基、异丁基、仲丁基及叔丁基)为本发明化合物中尤其优选的烷基。
[0215]
在本发明化合物中，烯基可支化或未支化，具有一或多个双键及2个至约12个碳原子。更优选的一类烯基具有2个至约6个碳原子。甚至更优选为具有2、3或4个碳原子的烯基。乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基乙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基及3-丁烯基为本发明化合物中尤其优选的烯基。
[0216]
在本发明化合物中，炔基可支化或未支化，具有一或多个三键及2个至约12个碳原子。更优选的一类炔基具有2至约6个碳原子。甚至更优选具有2、3或4个碳原子的炔基。
[0217]
本发明化合物中的合适芳基包括单环及多环化合物，包括含有独立及/或稠合芳基的多环化合物。典型芳基含有1至3个独立及/或稠合环及6至约18个碳环原子。芳基优选含有6至约10个碳环原子。特别优选的芳基包括取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基、取代或未取代的联苯基、取代或未取代的菲基、及取代或未取代的蒽基。
[0218]
合适杂环基包括含有1至3个独立及/或稠合环及5至约18个环原子的杂芳族基及杂脂环基。优选地，杂芳族基及杂脂环基含有5至约10个环原子，最优选5、6或7个环原子。本发明化合物中的合适杂芳族基含有一个、两个或三个选自n、o或s原子的杂原子，且包括例
如香豆素基(包括8-香豆素基)、喹啉基(包括8-喹啉基)、异喹啉基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、异恶唑基、恶唑基、咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、吲哚嗪基、酞嗪基、喋啶基、嘌呤基、恶二唑基、噻二唑基、呋呫基、哒嗪基、三嗪基、噌啉基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋呫基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基及呋喃并吡啶基。本发明化合物中的合适杂脂环基含有一个、两个或三个选自n、o或s的杂原子，且包括例如吡咯啶基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢硫代哌喃基、哌啶基、啉基、硫代啉基、硫氧杂环己烷基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚基、恶氮蒎基、二氮蒎基、噻氮蒎基、1,2,3,6-四氢吡啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2h-哌喃基、4h-哌喃基、二恶烷基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫杂环戊烷基、二氢哌喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑啶基、咪唑啉基、咪唑啶基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、3h-吲哚基及喹嗪基。
[0219]
上文所提及的基团可在一或多个可利用位置处经一或多个合适基团取代，所述基团诸如or'、＝o、sr'、sor'、so2r'、no2、nhr'、nr'r'、＝n-r'、nhcor'、n(cor')2、nhso2r'、nr'c(＝nr')nr'r'、cn、卤素、cor'、coor'、ocor'、oconhr'、oconr'r'、conhr'、conr'r'、经保护的oh、经保护的氨基、经保护的sh、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基、取代或未取代的芳基、及取代或未取代的杂环基，其中r'基团各独立地选自由以下组成的组：氢、oh、no2、nh2、sh、cn、卤素、coh、co烷基、co2h、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基、取代或未取代的芳基及取代或未取代的杂环基。在此类基团自身被取代的情况下，取代基可选自上面列出的那些。另外，在取代基上存在超过一个r'基团的情况下，各r'可相同或不同。
[0220]
在本发明的化合物中，卤素取代基包括f、cl、br及i。
[0221]
更特定地，在本发明化合物中，r
20
、ra、rb、rc、r
x
、ry及rz的定义中的烷基可为具有1至12个碳原子的直链或支链烷基链基团，且其优选为具有1至6个碳原子的烷基，更优选为甲基、乙基或异丙基，且最优选为甲基。在m及q的定义中，其可为具有1至6个碳原子的直链或支链烷基链基团。甲基、乙基、正丙基、异丙基及丁基(包括正丁基、异丁基、仲丁基及叔丁基)为本发明化合物中尤其优选的烷基。
[0222]
在本发明化合物中，ra、rb、rc及r
x
的定义中的烯基支化或未支化，且可具有一或多个双键及2至12个碳原子。优选地，其具有2至6个碳原子，且更优选地，其为具有2、3或4个碳原子的支化或未支化烯基。乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基乙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基及3-丁烯基为本发明化合物中尤其优选的烯基。
[0223]
在本发明化合物中，ra、rb、rc及r
x
的定义中的炔基支化或未支化，且可具有一或多个三键及2至12个碳原子。优选地，其具有2至6个碳原子，且更优选地，其为具有2、3或4个碳原子的支化或未支化炔基。
[0224]
在本发明化合物中，r
x
、ry及rz的定义中的卤素取代基包括f、cl、br及i，优选为cl。
[0225]
在本发明化合物中，r
x
的定义中的5至14元饱和或不饱和杂环基为具有一或多个环的在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的杂环基。杂环基为可为杂芳族基或杂脂环基的基团，后者可为部分不饱和的，芳族与脂环杂环基均含有1至3个独立或稠合环。优选地，杂芳族基及杂脂环基含有5至10个环原子。本发明化合物中的合适杂芳族基含
有一个、两个或三个选自n、o或s原子的杂原子，且包括例如喹啉基(包括8-喹啉基)、异喹啉基、香豆素基(包括8-香豆素基)、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、异恶唑基、恶唑基、咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、吲哚嗪基、酞嗪基、喋啶基、嘌呤基、恶二唑基、噻二唑基、呋呫基、哒嗪基、三嗪基、噌啉基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋呫基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基及呋喃并吡啶基。本发明化合物中的合适杂脂环基含有一个、两个或三个选自n、o或s原子的杂原子，且包括例如吡咯啶基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢硫代哌喃基、哌啶基、啉基、硫代啉基、硫氧杂环己烷基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚基、恶氮蒎基、二氮蒎基、噻氮蒎基、1,2,3,6-四氢吡啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2h-哌喃基、4h-哌喃基、二恶烷基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫杂环戊烷基、二氢哌喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑啶基、咪唑啉基、咪唑啶基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、3h-吲哚基及喹嗪基。
[0226]
在本发明化合物中，r
x
及r
20
的定义中的芳基为含有独立及/或稠合芳基且具有6至18个环原子且可选择地被取代的单环或多环化合物。典型芳基含有1至3个独立或稠合环。芳基优选含有6至12个碳环原子。尤其优选的芳基包括取代或未取代的苯基、取代或未取代的萘基、取代或未取代的联苯基、取代或未取代的菲基及取代或未取代的蒽基，且最优选为取代或未取代的苯基，其中取代基如上所指出。
[0227]
在本发明化合物中，r
x
、ry及rz的定义中的芳烷基包含经如以上所定义及例示的一或多个芳基取代的如以上所定义及例示的烷基。优选示例包括可选择地被取代的苯甲基、可选择地被取代的苯基乙基、及可选择地被取代的萘基甲基。
[0228]
在本发明化合物中，r
x
的定义中的芳烷氧基包含经一或多个如以上所定义及例示的芳基取代的具有1至12个碳原子的烷氧基。优选地，烷氧基部分具有1至6个碳原子且芳基含有6至约12个碳环原子，且最优选芳烷氧基为可选择地被取代的苯甲氧基、可选择地被取代的苯基乙氧基、及可选择地被取代的萘甲氧基。
[0229]
在本发明化合物中，ry及rz的定义中的杂环烷基包含经一或多个如以上所定义及例示的杂环基取代的如以上所定义及例示的烷基。优选地，杂环烷基包含经在1或2个环原子中具有5至10个环原子且可为芳族、部分饱和或完全饱和的杂环基取代的具有1至6个碳原子的烷基。更优选地，杂环烷基包含经选自由以下组成的组的杂环基取代的甲基或乙基：吡咯啶基、咪唑啶基、哌啶基、哌嗪基、啉基、四氢呋喃基、氧杂环己基、硫杂环己烷基、8-喹啉基、异喹啉基、吡啶基、吡嗪基、吡唑基、嘧啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、三唑基、四唑基、异恶唑基、恶唑基及苯并咪唑。
[0230]
在本发明化合物中，r
19
的定义中的亚烷基为具有1至12个碳原子的直链或支化链亚烷基且m、x、t及r
30
的定义中的亚烷基为具有1至6个碳原子的直链或支化链亚烷基。优选地，r
19
的定义中的亚烷基为具有1至8个碳原子的直链或支化链亚烷基，更优选为具有1至6个碳原子的直链或支化链亚烷基。对于m而言，优选为具有1至3个碳原子的直链或支化链亚烷基。在x的定义中，x的定义中的亚烷基优选为具有2至4个碳原子的直链或支化链亚烷基。对于t而言，优选为具有2至4个碳原子的直链或支化链亚烷基。在r
30
的定义中，优选为具有2至4个碳原子的直链或支化链亚烷基，最优选为具有3个碳原子的直链亚烷基。为避免疑问，
术语“亚烷基”用以指烷二基。
[0231]
在本发明化合物中，r
19
及m的定义中的碳环基为具有3至8个碳原子的环烷基，其在环烷基环上的任意位置处具有将所述环烷基连接至药物共轭物的其余部分的两个共价键。优选地，r
19
及m的定义中的碳环基为具有3至7个碳原子的环烷基，且更优选为具有5至7个碳原子的碳环基。
[0232]
在本发明化合物中，r
19
的定义中的亚芳基为呈一或多个环的具有6至18个碳原子的芳基，其在芳环系统上的任意位置处具有将所述亚芳基连接至药物共轭物的其余部分的两个共价键。优选地，r
19
的定义中的亚芳基为呈一或多个环的具有6至12个碳原子的芳基，其在芳环系统上的任意位置处具有两个共价键，且其最优选为亚苯基。
[0233]
在本发明化合物中，r
19
的定义中的杂环基为含有1至3个独立或稠合环的具有5至14个环原子且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的杂环基，其中在所述杂环基的环系统上的任意位置处存在两个共价键。杂环基为可为杂芳族基或杂脂环基的基团(后者可为部分不饱和的)。优选地，r
19
的定义中的杂环基为含有1至3个独立或稠合环的具有5至12个环原子且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的杂环基，其中在所述杂环基的环系统上的任意位置处存在两个共价键。
[0234]
在取代基上存在超过一个可选择的取代基r
x
、ry或rz的情况下，各取代基r
x
可相同或不同，各取代基ry可相同或不同，且各rz可相同或不同。
[0235]
在一个实施例中，d可以是式(i)的药物部分或其药学上可接受的盐或酯：
[0236][0237]
其中：
[0238]
d通过羟基或氨基共价连接到(x)b(若存在)，或(aa)w(若存在)，或(t)g(若存在)，或(l)；
[0239]
y选自-nh-和-o-；
[0240]
r1是-oh或-cn；
[0241]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0242]
r3是氢或-orb基团；
[0243]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc、-ch2nh2以及-ch2nhprot
nh
；
[0244]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；
[0245]
rb选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c2-c
12
炔基；
[0246]
rc选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基；且
[0247]
prot
nh
是氨基的保护基团。
[0248]
在根据本发明的所有方面的实施例中，取代基团被一或多个取代基r
x
取代，该r
x
独立地选自由以下组成的组：可选择地被至少一个基团ry取代的c
1-c
12
烷基、可选择地被至少一个基团ry取代的c
2-c
12
烯基、可选择地被至少一个基团ry取代的c
2-c
12
炔基、卤素原子、氧基、硫基、氰基、硝基、ory、ocory、ocoory、cory、coory、oconr
yrz
、conr
yrz
、s(o)ry、so2ry、p(o)(ry)orz、nr
yrz
、nrycorz、nryc(＝o)nr
yrz
、nryc(＝nry)nr
yrz
、呈一或多个环的具有6至18个碳原子的芳基(所述芳基可选择地被一或多个可相同或不同的选自由ry、ory、ocory、ocoory、nr
yrz
、nrycorz及nryc(＝nry)nr
yrz
组成的组的取代基取代)、包含被如上所定义的可选择地被取代的芳基取代的具有1至12个碳原子的烷基的芳烷基、包含被如上所定义的可选择地被取代的芳基取代的具有1至12个碳原子的烷氧基的芳烷氧基、以及具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的5至14元饱和或不饱和杂环基，所述杂环基可选择地被一或多个取代基ry取代，且在任何给定基团上存在超过一个可选择的取代基的情况下，可选择的取代基ry可相同或不同；
[0249]
各ry及rz独立地选自由以下组成的组：氢、c
1-c
12
烷基、经至少一个卤素原子取代的c
1-c
12
烷基、包含被呈一或多个环的具有6至18个碳原子的芳基取代的c
1-c
12
烷基的芳烷基、以及包含被具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的5至14元饱和或不饱和杂环基取代的c
1-c
12
烷基的杂环烷基。
[0250]
在另一个实施例中，d可以是式(ih)的药物部分或其药学上可接受的盐或酯：
[0251][0252]
其中波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(t)g(若存在)、或至(l)的点；
[0253]
y选自-nh-和-o-；
[0254]
r1是-oh或-cn；
[0255]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0256]
r3是氢或-orb基团；
[0257]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc、-ch2nh2以及-ch2nhprot
nh
；
[0258]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0259]
rb选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0260]
rc选自取代或未取代的c
1-c
12
烷基、取代或未取代的c
2-c
12
烯基、取代或未取代的c
2-c
12
炔基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0261]
prot
nh
是氨基的保护基团；
[0262]
其中取代基团被一或多个取代基r
x
取代，该r
x
独立地选自由以下组成的组：可选择地被至少一个基团ry取代的c
1-c
12
烷基、可选择地被至少一个基团ry取代的c
2-c
12
烯基、可选择地被至少一个基团ry取代的c
2-c
12
炔基、卤素原子、氧基、硫基、氰基、硝基、ory、ocory、ocoory、cory、coory、oconr
yrz
、conr
yrz
、s(o)ry、so2ry、p(o)(ry)orz、nr
yrz
、nrycorz、nryc(＝o)nr
yrz
、nryc(＝nry)nr
yrz
、呈一或多个环的具有6至18个碳原子的芳基(所述芳基可选择地被一或多个可相同或不同的选自由ry、ory、ocory、ocoory、nr
yrz
、nrycorz及nryc(＝nry)nr
yrz
组成的组的取代基取代)、包含被如上所定义的可选择地被取代的芳基取代的具有1至12个碳原子的烷基的芳烷基、包含被如上所定义的可选择地被取代的芳基取代的具有1至12个碳原子的烷氧基的芳烷氧基、以及具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的5至14元饱和或不饱和杂环基，所述杂环基可选择地被一或多个取代基ry取代，且在任何给定基团上存在超过一个可选择的取代基的情况下，可选择的取代基ry可相同或不同；
[0263]
各ry及rz独立地选自由以下组成的组：氢、c
1-c
12
烷基、经至少一个卤素原子取代的c
1-c
12
烷基、包含被呈一或多个环的具有6至18个碳原子的芳基取代的c
1-c
12
烷基的芳烷基、以及包含被具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的5至14元饱和或不饱和杂环基取代的c
1-c
12
烷基的杂环烷基。
[0264]
通式(i)或(ih)的化合物的优选化合物和通式(ia)的药物，是具有通式a或b的那些或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体：
[0265][0266]
注意，化合物具有通式a或b的情况下，r4可不为氢。
[0267]
优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0268]
y是-nh-；
[0269]
且r1、r2、r3、r4、ra、rb、rc和prot
nh
如上所述。
[0270]
优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0271]
y是-o-；
[0272]
且r1、r2、r3、r4、ra、rb、rc和prot
nh
如上所述。
[0273]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0274]
r1是-oh；
[0275]
且y、r2、r3、r4、ra、rb、rc和prot
nh
如上所述。
[0276]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0277]
r1是-cn；
[0278]
且y、r2、r3、r4、ra、rb、rc和prot
nh
如上所述。
[0279]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0280]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0281]
且y、r1、r3、r4、rb、rc和prot
nh
如上所述。
[0282]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0283]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0284]
且y、r1、r2、r4、ra、rc和prot
nh
如上所述。
[0285]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0286]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0287]
且y、r1、r2、r3、ra、以及rb如上所述。
[0288]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0289]
y是-nh-；
[0290]
r1是-oh；
[0291]
且r2、r3、r4、ra、rb、rc、以及prot
nh
如上所述。
[0292]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0293]
y是-nh-；
[0294]
r2是-c(＝o)ra；其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0295]
且r1、r3、r4、rb、rc、以及prot
nh
如上所述。
[0296]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0297]
y是-nh-；
[0298]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0299]
且r1、r2、r4、ra、rc、以及prot
nh
如上所述。
[0300]
进一步优选的药物部分包括通式(i)或(ih)的部分，其中：
[0301]
y是-nh-；
[0302]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0303]
且r1、r2、r3、ra、以及rb如上所述。
[0304]
进一步优选的通式(ia)的药物，其中：
[0305]
y是-nh-；
[0306]
r4选自-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4是-ch2oh或-ch2nh2。最优选的r4是-ch2oh；
[0307]
且r1、r2、r3、ra、以及rb如上所述。
[0308]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分以及通式(ia)的药物，其中：
[0309]
y是-nh-；
[0310]
r1是-oh；
[0311]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0312]
且r3、r4、rb、rc和prot
nh
如上所述。
[0313]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其
中：
[0314]
y是-nh-；
[0315]
r1是-oh；
[0316]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0317]
且r2、r4、ra、rc和prot
nh
如上所述。
[0318]
进一步优选的药物部分包括通式(i)或(ih)的部分，其中：
[0319]
y是-nh-；
[0320]
r1是-oh；
[0321]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0322]
且r2、r3、ra、以及rb如上所述。
[0323]
进一步优选的通式(ia)的药物，其中：
[0324]
y是-nh-；
[0325]
r1是-oh；
[0326]
r4选自-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4是-ch2oh以及-ch2nh2。最优选的r4是-ch2oh；
[0327]
且r2、r3、ra、以及rb如上所述。
[0328]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0329]
y是-nh-；
[0330]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0331]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0332]
且r1、r4、rc和prot
nh
如上所述。
[0333]
进一步优选的药物部分包括通式(i)或(ih)的部分，其中：
[0334]
y是-nh-；
[0335]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0336]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0337]
且r1、r3、以及rb如上所述。
[0338]
进一步优选的药物包括通式(ia)的药物，其中：
[0339]
y是-nh-；
[0340]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0341]
r4选自-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自-ch2oh以及-ch2nh2。最优选的r4是-ch2oh；
[0342]
且r1、r3、以及rb如上所述。
[0343]
进一步优选的药物部分包括通式(i)或(ih)的部分，其中：
[0344]
y是-nh-；
[0345]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0346]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0347]
且r1、r2、以及ra如上所述。
[0348]
进一步优选的药物包括通式(ia)的药物，其中：
[0349]
y是-nh-；
[0350]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取
代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0351]
r4选自-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自-ch2oh以及-ch2nh2。最优选的r4是-ch2oh；
[0352]
且r1、r2、以及ra如上所述。
[0353]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0354]
y是-nh-；
[0355]
r1是-oh；
[0356]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0357]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0358]
且r4、rc和prot
nh
如上所述。
[0359]
进一步优选的药物部分包括通式(i)或(ih)的部分，其中：
[0360]
y是-nh-；
[0361]
r1是-oh；
[0362]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0363]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0364]
且r3、以及rb如上所述。
[0365]
进一步优选的药物包括通式(ia)的药物，其中：
[0366]
y是-nh-；
[0367]
r1是-oh；
[0368]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、
取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0369]
r4选自-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自-ch2oh以及-ch2nh2。最优选的r4是-ch2oh；
[0370]
且r3、以及rb如上所述。
[0371]
进一步优选的药物部分包括通式(i)或(ih)的部分，其中：
[0372]
y是-nh-；
[0373]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0374]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0375]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0376]
r1如上所述。
[0377]
进一步优选的药物包括通式(ia)的药物，其中：
[0378]
y是-nh-；
[0379]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0380]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0381]
r4选自-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自-ch2oh以及-ch2nh2。最优选的r4是-ch2oh；
[0382]
r1如上所述。
[0383]
进一步优选的药物部分包括通式(i)或(ih)的部分，其中：
[0384]
y是-nh-；
[0385]
r1是-oh；
[0386]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0387]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0388]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢、-ch2oh。最优选的r4是氢。
[0389]
进一步优选的药物包括通式(ia)的药物，其中：
[0390]
y是-nh-；
[0391]
r1是-oh；
[0392]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0393]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0394]
r4选自-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自-ch2oh以及-ch2nh2。最优选的r4是-ch2oh。
[0395]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0396]
y是-o-；
[0397]
r1是-oh；
[0398]
且r2、r3、r4、ra、rb、rc、以及prot
nh
如上所述。
[0399]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其
中：
[0400]
y是-o-；
[0401]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0402]
且r1、r3、r4、rb、rc、以及prot
nh
如上所述。
[0403]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0404]
y是-o-；
[0405]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0406]
且r1、r2、r4、ra、rc、以及prot
nh
如上所述。
[0407]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0408]
y是-o-；
[0409]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0410]
且r1、r2、r3、ra、以及rb如上所述。
[0411]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0412]
y是-o-；
[0413]
r1是-oh；
[0414]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0415]
且r3、r4、rb、rc、以及prot
nh
如上所述。
[0416]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和式(ia)的药物，其中：
[0417]
y是-o-；
[0418]
r1是-oh；
[0419]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔
丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0420]
且r2、r4、ra、rc、以及prot
nh
如上所述。
[0421]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0422]
y是-o-；
[0423]
r1是-oh；
[0424]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0425]
且r2、r3、ra、以及rb如上所述。
[0426]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0427]
y是-o-；
[0428]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0429]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0430]
且r1、r4、rc、以及prot
nh
如上所述。
[0431]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0432]
y是-o-；
[0433]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0434]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0435]
且r1、r3以及rb如上所述。
[0436]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0437]
y是-o-；
[0438]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0439]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0440]
且r1、r2以及ra如上所述。
[0441]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0442]
y是-o-；
[0443]
r1是-oh；
[0444]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0445]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0446]
且r4、rc、以及prot
nh
如上所述。
[0447]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0448]
y是-o-；
[0449]
r1是-oh；
[0450]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0451]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0452]
且r3以及rb如上所述。
[0453]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其
中：
[0454]
y是-o-；
[0455]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0456]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0457]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢；
[0458]
r1如上所述。
[0459]
进一步优选的药物部分和药物包括通式(i)或(ih)的部分和通式(ia)的药物，其中：
[0460]
y是-o-；
[0461]
r1是-oh；
[0462]
r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基；
[0463]
r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基；
[0464]
r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢。
[0465]
以下优选的取代基(在可能的取代基允许的情况下)适用于式(i)或(ih)的药物部分和式(ia)的药物：
[0466]
特别优选的r1是-oh。
[0467]
特别优选的r2是-c(＝o)ra基团，其中ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的ra选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代
或未取代的叔丁基。最优选的r2是乙酰基。
[0468]
特别优选的r3是氢或-orb基团；其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rb选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。更优选的r3是氢和甲氧基，最优选的r3基团是甲氧基。
[0469]
特别优选的r4选自氢、-ch2oh、-ch2oc(＝o)rc以及-ch2nh2；其中rc是取代或未取代的c
1-c6烷基。特别优选的rc选自取代或未取代的甲基、取代或未取代的乙基、取代或未取代的正丙基、取代或未取代的异丙基、取代或未取代的正丁基、取代或未取代的异丁基、取代或未取代的仲丁基、取代或未取代的叔丁基。最优选的rc是甲基。更优选的r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。更优选地，r4可以是氢或-ch2oh。最优选的r4是氢。
[0470]
根据本发明的特别优选的药物部分和药物包括：
[0471]
·
式(i)或(ih)的部分，其中
[0472]
y是-nh-；且
[0473]
r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。
[0474]
·
式(ia)的药物，其中
[0475]
y是-nh-；且
[0476]
r4选自-ch2oh以及-ch2nh2。
[0477]
·
式(i)或(ih)的部分或式(ia)的药物，其中
[0478]
y是-o-；
[0479]
r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2。
[0480]
·
式(i)或(ih)的部分或式(ia)的药物，其中
[0481]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0482]
r3是氢或-orb基团；
[0483]
r4选自-ch2oh、以及-ch2nh2；
[0484]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c6烷基；且
[0485]
rb是取代的或未取代的c
1-c6烷基。
[0486]
根据本发明的更优选的药物部分包括
[0487]
·
式(i)或(ih)的部分，其中
[0488]
y是-nh-；
[0489]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0490]
r3是氢或-orb基团；
[0491]
r4是氢或-ch2oh；
[0492]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c6烷基；且
[0493]
rb是取代的或未取代的c
1-c6烷基。
[0494]
·
式(ia)的药物，其中
[0495]
y是-nh-；
[0496]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0497]
r3是氢或-orb基团；
[0498]
r4是-ch2oh；
[0499]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c6烷基；且
[0500]
rb是取代的或未取代的c
1-c6烷基。
[0501]
·
式(i)或(ih)的部分或式(ia)的药物，其中
[0502]
y是-o-；
[0503]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0504]
r3是氢或-orb基团；
[0505]
r4是氢或-ch2oh；
[0506]
ra选自氢、取代或未取代的c
1-c6烷基；且
[0507]
rb是取代的或未取代的c
1-c6烷基。
[0508]
·
式(i)或(ih)的部分或式(ia)的药物，其中
[0509]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0510]
r3是氢或-orb基团；
[0511]
r4是氢或-ch2oh；
[0512]
ra是取代或未取代的c
1-c6烷基；且
[0513]
rb是取代的或未取代的c
1-c6烷基。
[0514]
特别优选根据本发明的优选药物部分包括：
[0515]
·
式(i)或(ih)的部分，其中
[0516]
y是-nh-；
[0517]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0518]
r3是氢或甲氧基；
[0519]
r4是氢或-ch2oh；且
[0520]
ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。
[0521]
·
式(ia)的药物，其中
[0522]
y是-nh-；
[0523]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0524]
r3是氢或甲氧基；
[0525]
r4是-ch2oh；且
[0526]
ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。
[0527]
·
式(i)或(ih)的部分或式(ia)的药物，其中
[0528]
y是-o-；
[0529]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0530]
r3是氢或甲氧基；
[0531]
r4是氢或-ch2oh；且
[0532]
ra是取代或未取代的c
1-c6烷基。
[0533]
·
式(i)或(ih)的部分或式(ia)的药物，其中
[0534]
r2是-c(＝o)ra基团；
[0535]
r3是氢或甲氧基；
[0536]
r4是氢或-ch2oh；且
[0537]
ra选自甲基、乙基、正丙基、异丙基和丁基(包括正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁
基)。
[0538]
甚至更优选根据本发明的药物部分包括：
[0539]
·
式(i)或(ih)的部分，其中
[0540]
y是-nh-；
[0541]
r2是乙酰基；
[0542]
r3是甲氧基；且
[0543]
r4是氢。
[0544]
·
式(ia)的药物，其中
[0545]
y是-nh-；
[0546]
r2是乙酰基；
[0547]
r3是甲氧基；且
[0548]
r4是-ch2oh。
[0549]
·
式(i)或(ih)的部分或式(ia)的药物，其中
[0550]
y是-o-；
[0551]
r2是乙酰基；
[0552]
r3是甲氧基；且
[0553]
r4是氢。
[0554]
·
式(i)或(ih)的部分或式(ia)的药物，其中r2是乙酰基；
[0555]
r3是甲氧基；且
[0556]
r4是氢。
[0557]
·
式(i)或(ih)的部分或式(ia)的药物，其中
[0558]
r1是-oh；
[0559]
r2是乙酰基；
[0560]
r3是甲氧基；且
[0561]
r4是氢。
[0562]
·
根据本发明的以下式的部分：
[0563][0563]
或者
[0564]
或其药学上可接受的盐或酯；其中d通过羟基或氨基共价连接到(x)b(若存在)，或(aa)w(若存在)，或(t)g(若存在)，或(l)。
[0565]
特别优选以下式的部分：
[0566]
或者
[0567]
或其药学上可接受的盐或酯；其中d通过羟基或氨基共价连接到(x)b(若存在)，或(aa)w(若存在)，或(t)g(若存在)，或(l)。
[0568]
·
以下式的部分：
[0569]
或者
[0570]
在另外的优选实施例中，以上针对不同取代基所述的优选情况被组合。本发明还涉及根据本发明的式(i)或(ih)的药物部分和式(ia)的药物中的优选取代基的这种组合(在可能的取代基允许的情况下)。
[0571]
为避免疑问，以上化合物可为药物部分d且经由羟基或氨基共价连接至(x)b(若存在)或(aa)w(若存在)或至(t)g(若存在)或(l)。因此，当共轭时，共价键替换化合物上的羟基或氨基上的质子。
[0572]
下面给出根据本发明的优选药物共轭物。如以下阐述的(x)b、(aa)w、(t)g及(l)的优选定义可适用于上述所有药物部分d化合物。根据本发明的优选药物共轭物包括：
[0573]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其中l是选自由以下组成的组的连接子基团：
[0574][0575]
其中
[0576]
波浪线表示共价连接至ab(右边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(x)b(若存在)、或至d(左边的波浪线)的点；
[0577]r19
选自-c
1-c
12
亚烷基-、-c
3-c8碳环基、-o-(c
1-c
12
亚烷基)、呈单环或多环的可选择地被一或多个取代基r
x
取代的-c
6-c
18
亚芳基、-c
1-c
12
亚烷基-c
6-c
18
亚芳基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
6-c
18
亚芳基-c
1-c
12
亚烷基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代、-c
1-c
12
亚烷基-(c
3-c8碳环基)-、-(c
3-c8碳环基)-c
1-c
12
亚烷基-、-c
5-c
14
杂环基-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
1-c
12
亚烷基-(c
5-c
14
杂环基)-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-(c
5-c
14
杂环基)-c
1-c
12
亚烷基-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-(och2ch2)
r-及-ch
2-(och2ch2)
r-，其中以上各亚烷基取代基无论单独还是连接至另一部分，碳链均可选择地被一或多个取代基r
x
取代；
[0578]r30
为-c
1-c6亚烷基-基团；
[0579]
m选自由以下组成的组：-c
1-c6亚烷基-、-c
1-c6亚烷基-(c
3-c8碳环基)-、-(ch2ch2o)
s-、-c
1-c6亚烷基-(c
3-c8碳环基)-con(h或c
1-c6烷基)-c
1-c6亚烷基-、可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基、亚苯基-c
1-c6亚烷基-(其中所述亚苯基部分可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、及-c
1-c6亚烷基-con(h或c
1-c6烷基)c
1-c6亚烷基-；
[0580]
q选自由以下组成的组：-n(h或c
1-c6烷基)亚苯基-及-n(h或c
1-c6烷基)-(ch2)s；
[0581]
r为1至10范围内的整数；且
[0582]
s为1至10范围内的整数。
[0583]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其中l选自由以
下组成的组：
[0584]
及
[0585]
其中：
[0586]
波浪线表示共价连接至ab(右边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(x)b(若存在)、或至d(左边的波浪线)的点；
[0587]r19
选自-c
1-c
12
亚烷基-、-o-(c
1-c
12
亚烷基)、呈单环或多环的可选择地被一或多个取代基r
x
取代的-c
6-c
12
亚芳基、-c
1-c
12
亚烷基-c
6-c
12
亚芳基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
6-c
12
亚芳基-c
1-c
12
亚烷基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
5-c
12
杂环基-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
1-c
12
亚烷基-(c
5-c
12
杂环基)-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-(c
5-c
12
杂环基)-c
1-c
12
亚烷基-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-(och2ch2)
r-及-ch
2-(och2ch2)
r-，其中以上各亚烷基取代基无论单独还是连接至另一部分，碳链均可选择地被一或多个取代基r
x
取代；
[0588]r30
为-c
1-c6亚烷基-基团；
[0589]
m选自由以下组成的组：-c
1-c6亚烷基-、-c
1-c6亚烷基-(c
3-c8碳环基)-及可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基；且
[0590]
r为在1-6范围内的整数。
[0591]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其选自式(iv)、(v)及(vi)：
[0592][0593]
其中：
[0594]
x及t为如本文所定义的延伸基团；
[0595]
各aa独立地为如本文所定义的氨基酸单元；
[0596]
w为在0至12范围内的整数；
[0597]
b为0或1的整数；
[0598]
g为0或1的整数；
[0599]
其中b g w可选择地不为0；
[0600]
d为药物部分；
[0601]
ab为包含至少一个抗原结合位点的部分；
[0602]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-](其中l如式(iv)、(v)或(vi)中所定义)与包含至少一个抗原结合位点的部分的比率且在1至20的范围内；
[0603]r19
选自-c
1-c8亚烷基-、-o-(c
1-c8亚烷基)、-c
1-c8亚烷基-c
6-c
12
亚芳基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、及-c
6-c
12
亚芳基-c
1-c8亚烷基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)，其中以上各亚烷基取代基无论单独还是连接至另一部分，碳链均可选择地被一或多个取代基r
x
取代；
[0604]r30
为-c
2-c4亚烷基-基团；且
[0605]
m选自由以下组成的组：-c
1-c3亚烷基-及-c
1-c3亚烷基-(c
5-c7碳环基)-。
[0606]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其选自式(iv)、(v)及(vi)：
[0607][0608]
其中：
[0609]
x及t为可相同或不同的延伸基团；
[0610]
各aa独立地为氨基酸单元；
[0611]
w为在0至12范围内的整数；
[0612]
b为0或1的整数；
[0613]
g为0或1的整数；
[0614]
其中b g w可选择地不为0；
[0615]
d为药物部分；
[0616]
ab为包含至少一个抗原结合位点的部分；
[0617]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-](其中l如式(iv)、(v)或(vi)中所定义)与包含至少一个抗原结合位点的部分的比率且在1至20的范围内；
[0618]r19
选自-c
1-c6亚烷基-、亚苯基-c
1-c6亚烷基-(其中所述亚苯基可选择地被一或多个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代)，其中以上各亚烷基取代基无论单独还是连接至碳链中的另一部
分均可选择地被一或多个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、具有6至12个碳原子的芳基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代，且r
19
优选为-c
1-c6亚烷基基团；
[0619]r30
为-c
2-c4亚烷基-基团；且
[0620]
m为-c
1-c3亚烷基-(c
5-c7碳环基)-。
[0621]
●
优选地，在式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物的定义中，l如以上针对所述基团的优选定义中所定义且(aa)w具有式(ii)：
[0622][0623]
其中波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或至药物部分(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或至连接子(右边的波浪线)的点；且
[0624]r21
在每次出现时选自由以下组成的组：氢、甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、苯甲基、对羟基苯甲基、-ch2oh、-ch(oh)ch3、-ch2ch2sch3、-ch2conh2、-ch2cooh、-ch2ch2conh2、-ch2ch2cooh、-(ch2)3nhc(＝nh)nh2、-(ch2)3nh2、-(ch2)3nhcoch3、-(ch2)3nhcho、-(ch2)4nhc(＝nh)nh2、-(ch2)4nh2、-(ch2)4nhcoch3、-(ch2)4nhcho、-(ch2)3nhconh2、-(ch2)4nhconh2、-ch2ch2ch(oh)ch2nh2、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基-、苯基、环己基、
[0625][0625]
及
[0626]
且w为在0至12范围内的整数。
[0627]
·
根据本发明的第一方面的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其中l如以上在所述基团的优选定义中所定义且(aa)w具有式(ii)，其中：
[0628]r21
在每次出现时选自由以下组成的组：氢、甲基、异丙基、仲丁基、苯甲基、吲哚基甲基、-(ch2)3nhconh2、-(ch2)4nh2、-(ch2)3nhc(＝nh)nh2及-(ch2)4nhc(＝nh)nh2；且
[0629]
w为在0至6范围内的整数。
[0630]
·
根据本发明的第一方面的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其中l如以上在所述基团的优选定义中所定义，其中w为0或2且当w为2时，(aa)w具有式(iii)，其中：
[0631][0632]
波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或至药物部分(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或至连接子(右边的波浪线)的点；
[0633]r22
选自甲基、苯甲基、异丙基、仲丁基及吲哚基甲基；且
[0634]r23
选自甲基、-(ch2)4nh2、-(ch2)3nhconh2及-(ch2)3nhc(＝nh)nh2。
[0635]
·
在本发明的实施例中，b g w不为0。在其他实施例中，b w不为0。在其他实施例中，当w不为0时，b为1。此外，优选在式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物的定义中，l及(aa)w如以上在所述基团的优选定义中所定义且x为选自以下的延伸基团：
[0636]
在d经由氨基共轭的情况下：
[0637]-coo-(c
1-c6亚烷基)nh-；
[0638]-coo-ch
2-(可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-；
[0639]-coo-(c
1-c6亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-；
[0640]-coch2nh-coch
2-nh-；
[0641]-coch2nh-；
[0642]-coo-(c
1-c6亚烷基)s-；
[0643]-coo-(c
1-c6亚烷基)nhco(c
1-c6亚烷基)s-；或
[0644]
在d经由羟基共轭的情况下：
[0645]-conh-(c
1-c6亚烷基)nh-；
[0646]-coo-ch
2-(可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-；
[0647]-conh-(c
1-c6亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-；
[0648]-coch2nh-coch
2-nh-；
[0649]-coch2nh-；
[0650]-conh-(c
1-c6亚烷基)s-；
[0651]-conh-(c
1-c6亚烷基)nhco(c
1-c6亚烷基)s-；且
[0652]
b为0或1，优选为1。
[0653]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其中l及(aa)w如以上在所述基团的优选定义中所定义且x为选自由以下组成的组的延伸基团：
[0654]
其中d经由氨基共轭的情况下：
[0655]-coo-(c
2-c4亚烷基)nh-；
[0656]-coo-ch
2-亚苯基-nh-，其中所述亚苯基可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代；
[0657]-coo-(c
2-c4亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代的亚
苯基)-nh-；
[0658]-coch2nh-coch
2-nh-；
[0659]-coo-(c
2-c4亚烷基)s-；
[0660]-coo-(c
2-c4亚烷基)nhco(c
1-c3亚烷基)s-；或
[0661]
在d经由羟基共轭的情况下：
[0662]-conh-(c
2-c4亚烷基)nh-；
[0663]-coo-ch
2-亚苯基-nh-，其中所述亚苯基可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代；
[0664]-conh-(c
2-c4亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-；
[0665]-coch2nh-coch
2-nh-；
[0666]-conh-(c
2-c4亚烷基)s-；
[0667]-conh-(c
2-c4亚烷基)nhco(c
1-c3亚烷基)s-；且
[0668]
b为0或1，优选为1。
[0669]
●
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其中l及(aa)w如以上在所述基团的优选定义中所定义且x为选自由以下组成的组的延伸基团：
[0670]
其中d经由氨基共轭的情况下：
[0671]-coo-ch
2-亚苯基-nh-[0672]-coo(ch2)3nhcooch
2-亚苯基-nh-；
[0673]-coo(ch2)3nh-；
[0674]-coo(ch2)
3-s-；
[0675]-coo(ch2)3nhco(ch2)2s-；或
[0676]
在d经由羟基共轭的情况下：
[0677]-coo-ch
2-亚苯基-nh-[0678]-conh(ch2)3nhcooch
2-亚苯基-nh-；
[0679]-conh(ch2)3nh-；
[0680]-conh(ch2)
3-s-；
[0681]-conh(ch2)3nhco(ch2)2s-；且
[0682]
b为0或1，优选为1。
[0683]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其中l、(aa)w及(x)b如以上在所述基团的优选定义中所定义且t为选自由以下组成的组的延伸基团：
[0684]-co-(c
1-c6亚烷基)-nh-；
[0685]-co-(c
1-c6亚烷基)-[o-(c
2-c6亚烷基)]
j-nh-；
[0686]-coo-(c
1-c6亚烷基)-[o-(c
2-c6亚烷基)]
j-nh-；
[0687]
其中j为1至25的整数，且
[0688]
g为0或1。
[0689]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其中l、(aa)w及
(x)b如以上在所述基团的优选定义中所定义且t为选自由以下组成的组的延伸基团：
[0690]-co-(c
1-c4亚烷基)nh-[0691]-co-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-；
[0692]-coo-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-；
[0693]
其中j为1至10的整数；且
[0694]
g为0或1。
[0695]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物，其中l、(aa)w及(x)b如以上在所述基团的优选定义中所定义且t为选自由以下组成的组的延伸基团：
[0696]-co-(c
1-c4亚烷基)nh-[0697]-co-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-；
[0698]-coo-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-；
[0699]
其中j为1至5的整数；且
[0700]
g为0或1。
[0701]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的一种优选的药物共轭物是如下药物共轭物：其中l、(aa)w、(x)b、以及(t)g如上所定义，其中d是式(i)或(ih)的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中r1是cn或oh，和更优选r1是cn。
[0702]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一种优选的药物共轭物是如下药物共轭物：其中l、(aa)w、(x)b、以及(t)g如上所定义，其中d是式(i)或(ih)的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中r2是c(＝o)ra，其中ra选自氢和取代或未取代的c
1-c6烷基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
，更优选r2是乙酰基。
[0703]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一种优选的药物共轭物是如下药物共轭物：其中l、(aa)w、(x)b、以及(t)g如上所定义，其中d是式(i)或(ih)的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中r3是氢或-orb基团，其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
，更优选r3是氢或甲氧基。最优选r3是甲氧基。
[0704]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一种优选的药物共轭物是如下药物共轭物：其中l、(aa)w、(x)b、以及(t)g如上所定义，其中d是式(i)或(ih)的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中r4选自氢、-ch2oh和-ch2nh2，更优选r4是氢或-ch2oh。最优选r4是氢。
[0705]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一种优选的药物共轭物是如下药物共轭物：其中l、(aa)w、(x)b、以及(t)g如上所定义，其中d是式(i)或(ih)的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中y是-nh-或-o-。
[0706]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的进一步优选的药物共轭物是如下药物共轭物：其中l、(aa)w、(x)b、以及(t)g如上所定义，其中d是式(i)或(ih)的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中：
[0707]
r1是-cn或-oh；
[0708]
r2是-c(＝o)ra，其中ra选自氢和取代或未取代的c
1-c6烷基，其中可选的取代基是
一或多个取代基r
x
；
[0709]
r3是氢或-orb基团，其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0710]
r4是氢、-ch2oh或-ch2nh2；且
[0711]
y是-nh-或-o。
[0712]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的进一步优选的药物共轭物是如下药物共轭物：其中l、(aa)w、(x)b、以及(t)g如上所定义，其中d是式(i)或(ih)的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中：
[0713]
r1是-cn或-oh；
[0714]
r2是乙酰基；
[0715]
r3是氢或甲氧基，更优选甲氧基；
[0716]
r4是氢或-ch2oh；和
[0717]
y是-nh-或-o-。
[0718]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的进一步优选的药物共轭物是如下药物共轭物：其中l、(aa)w、(x)b、以及(t)g如上所定义，其中d是式(i)或(ih)的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中：
[0719]
r1是-cn；
[0720]
r2是乙酰基：
[0721]
r3是甲氧基；
[0722]
r4是氢，且
[0723]
y是-nh-或-o-。
[0724]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的进一步优选的药物共轭物是如下药物共轭物：其中l、(aa)w、(x)b、以及(t)g如上所定义，其中d选自：
[0725]
以及
[0726]
或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体；其中波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(t)g(若存在)、或至l的共价连接点。
[0727]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一优选药物共轭物为如下药物共轭物，其中l、(aa)w、(x)b、(t)g及d如上所定义，且其中包含至少一个抗原结合位点的部分ab为抗原结合肽。
[0728]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一优选药物共轭物为如下药物共轭物，其中l、(aa)w、(x)b、(t)g及d如上所定义，且包含至少一个抗原结合位点的部分ab为抗体、单域抗体或其抗原结合片段。
[0729]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一优选药物共轭物为如下
药物共轭物，其中l、(aa)w、(x)b、(t)g及d如上所定义且包含至少一个抗原结合位点的部分ab为单克隆、多克隆抗体或双特异性抗体，且其中所述抗体或其抗原结合片段来源于任何物种，优选人类、小鼠或兔。
[0730]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一优选药物共轭物为如下药物共轭物，其中l、(aa)w、(x)b、(t)g及d如上所定义，且包含至少一个抗原结合位点的部分ab为选自由以下组成的组的抗体或其抗原结合片段：人类抗体、人类抗体的抗原结合片段、人类化抗体、人类化抗体的抗原结合片段、嵌合抗体、嵌合抗体的抗原结合片段、糖基化抗体及糖基化抗原结合片段。
[0731]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一优选药物共轭物为如下药物共轭物，其中l、(aa)w、(x)b、(t)g及d如上所定义，且包含至少一个抗原结合位点的部分ab为抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段为选自由以下组成的组的抗原结合片段：fab片段、fab'片段、f(ab')2片段及fv片段。
[0732]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一优选药物共轭物为如下药物共轭物，其中l、(aa)w、(x)b、(t)g及d如上所定义，且包含至少一个抗原结合位点的部分ab为抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段为免疫特异性结合于癌细胞抗原、病毒抗原、产生与自体免疫性疾病相关联的自体免疫抗体的细胞的抗原、微生物抗原的单克隆抗体，且优选为免疫特异性结合于癌细胞抗原的单克隆抗体。
[0733]
·
根据本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的另一优选药物共轭物为如下药物共轭物，其中l、(aa)w、(x)b、(t)g及d如本文所定义，且包含至少一个抗原结合位点的部分ab为选自由以下组成的组的抗体：阿仑单抗(alemtuzumab)、阿奈妥单抗(anetumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、贝伐单抗(bevacizumab)、博纳吐单抗(blinatomumab)、本妥昔单抗(brentuximab)、卡妥索单抗(catumaxomab)、西妥昔单抗(cetuximab)、考妥昔单抗(coltuximab)、达雷木单抗(daratumumab)、地宁妥珠单抗(denintuzumab)、地诺单抗(denosumab)、德帕妥昔珠单抗(depatuxizumab)、地努妥昔单抗(dinutuximab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)、因福土单抗(enfortumab)、格巴妥木单抗(glembatumumab)、吉妥珠单抗(gemtuzumab)、替伊莫单抗(ibritumomab)、英达妥昔单抗(indatuximab)、英度妥单抗(indusatumab)、奥英妥珠单抗(inotuzumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、拉贝珠单抗(labetuzumab)、拉妥珠单抗(ladiratuzumab)、拉妥昔单抗(laprituximab)、利法妥珠单抗(lifastuzumab)、洛沃妥珠单抗(lorvotuzumab)、米拉组单抗(milatuzumab)、米妥昔单抗(mirvetuximab)、那妥昔单抗(naratuximab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、纳武单抗(nivolumab)、奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、奥拉单抗(olaratumab)、帕尼单抗(panitumumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、帕妥珠单抗(pertuzumab)、匹那妥珠单抗(pinatuzumab)、泊洛妥珠单抗(polatuzumab)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、洛伐妥珠单抗(rovalpituzumab)、沙西妥珠单抗(sacituzumab)、司妥昔单抗(siltuximab)、司曲妥单抗(sirtratumab)、索非妥珠单抗(sofituzumab)、伐达妥昔单抗(vadastuximab)、沃瑟妥珠单抗(vorsetuzumab)、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗(trastuzumab))、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，其中优选所述抗体选自阿仑单抗、阿奈妥单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、贝伐
ch
2-(och2ch2)
r-，其中以上各亚烷基取代基无论单独还是连接至另一部分，碳链均可选择地被一或多个取代基r
x
取代；
[0741]r30
为-c
1-c6亚烷基-基团；
[0742]
m选自由以下组成的组：-c
1-c6亚烷基-、-c
1-c6亚烷基-(c
3-c8碳环基)-及可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基；
[0743]
r为在1-6范围内的整数；
[0744]
(aa)w具有式(ii)：
[0745][0746]
其中波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或至药物部分(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或至连接子(右边的波浪线)的点；
[0747]r21
在每次出现时选自由以下组成的组：氢、甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、苯甲基、对羟基苯甲基、-ch2oh、-ch(oh)ch3、-ch2ch2sch3、-ch2conh2、-ch2cooh、-ch2ch2conh2、-ch2ch2cooh、-(ch2)3nhc(＝nh)nh2、-(ch2)3nh2、-(ch2)3nhcoch3、-(ch2)3nhcho、-(ch2)4nhc(＝nh)nh2、-(ch2)4nh2、-(ch2)4nhcoch3、-(ch2)4nhcho、-(ch2)3nhconh2、-(ch2)4nhconh2、-ch2ch2ch(oh)ch2nh2、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基-、苯基、环己基、
[0748][0748]
及
[0749]
w为在0至12范围内的整数；
[0750]
其中x为选自以下的延伸基团：
[0751]
在d经由氨基共轭的情况下：-coo-(c
1-c6亚烷基)nh-、-coo-ch
2-(可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-、-coo-(c
1-c6亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-、-coch2nh-coch
2-nh-、-coch
2-nh-、-coo-(c
1-c6亚烷基)s-、-coo-(c
1-c6亚烷基)nhco(c
1-c6亚烷基)s-；或
[0752]
在d经由羟基共轭的情况下：-conh-(c
1-c6亚烷基)nh-、-coo-ch
2-(可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-、-conh-(c
1-c6亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一或多个取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-、-coch2nh-coch
2-nh-、-coch2nh-、-conh-(c
1-c6亚烷基)
s-及-conh-(c
1-c6亚烷基)nhco(c
1-c6亚烷基)s-；
[0753]
b为0或1，优选为1；
[0754]
其中t为选自以下的延伸基团：-co-(c
1-c6亚烷基)-nh-、-co-(c
1-c6亚烷基)-[o-(c
2-c6亚烷基)]
j-nh-及-coo-(c
1-c6亚烷基)-[o-(c
2-c6亚烷基)]
j-nh-，其中j为1至25的整数；
[0755]
g为0或1；
[0756]
d是式(i)或(ih)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中：
[0757]
r2是c(＝o)ra，其中ra选自氢和取代或未取代的c
1-c6烷基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0758]
r3是氢或-orb基团，其中rb是取代或未取代的c
1-c6烷基，其中可选的取代基是一或多个取代基r
x
；
[0759]
r4选自氢、-ch2oh以及-ch2nh2；
[0760]
包含至少一个抗原结合位点的部分ab为抗体或其抗原结合片段，且其选自由以下组成的组：人类抗体、人类抗体的抗原结合片段、人类化抗体、人类化抗体的抗原结合片段、嵌合抗体、嵌合抗体的抗原结合片段、糖基化抗体及糖基化抗原结合片段；且
[0761]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]与包含至少一个抗原结合位点的部分ab的比率且在1至12范围内。
[0762]
(b)根据本发明的选自式(iv)、(v)及(vi)的药物共轭物：
[0763][0764]
其中：
[0765]r19
选自-c
1-c8亚烷基-、-o-(c
1-c8亚烷基)、-c
1-c8亚烷基-c
6-c
12
亚芳基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、及-c
6-c
12
亚芳基-c
1-c8亚烷基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)，其中以上各亚烷基取代基无论单独还是连接至另一部分，碳链均可选择地被一或多个取代基r
x
取代；
[0766]r30
为-c
2-c4亚烷基-基团；
[0767]
m选自由以下组成的组：-c
1-c3亚烷基-及-c
1-c3亚烷基-(c
5-c7碳环基)-；
[0768]
(aa)w具有式(ii)
[0769][0770]
其中：
[0771]
波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或至药物部分(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或至连接子(右边的波浪线)的点；
[0772]r21
在每次出现时选自由以下组成的组：氢、甲基、异丙基、仲丁基、苯甲基、吲哚基甲基、-(ch2)3nhconh2、-(ch2)4nh2、-(ch2)3nhc(＝nh)nh2及-(ch2)4nhc(＝nh)nh2；
[0773]
w为0至6的整数；
[0774]
x为选自由以下组成的组的延伸基团：
[0775]
在d经由氨基共轭的情况下：-coo-(c
2-c4亚烷基)nh-、-coo-ch
2-亚苯基-nh-(其中所述亚苯基可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代)、-coo-(c
2-c4亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-、-coch2nh-coch
2-nh-、-coo-(c
2-c4亚烷基)s-及-coo-(c
2-c4亚烷基)nhco(c
1-c3亚烷基)s-；或
[0776]
在d经由羟基共轭的情况下：-conh-(c
2-c4亚烷基)nh-、-coo-ch
2-亚苯基-nh-(其中所述亚苯基可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代)、-conh-(c
2-c4亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-、-coch2nh-coch
2-nh-、-conh-(c
2-c4亚烷基)s-及-conh-(c
2-c4亚烷基)nhco(c
1-c3亚烷基)s-；
[0777]
b为0或1，优选为1；
[0778]
其中t为选自以下的延伸基团：-co-(c
1-c4亚烷基)-nh-、-co-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-及-coo-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-，其中j为1至10的整数；
[0779]
g为0或1；
[0780]
d为式(i)或(ih)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中：
[0781]
r2为乙酰基；
[0782]
r3为氢或甲氧基，优选r3为甲氧基；
[0783]
r4为氢或-ch2oh，优选r4为氢；
[0784]
包含至少一个抗原结合位点的部分ab为抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段为免疫特异性结合于癌细胞抗原、病毒抗原、产生与自体免疫性疾病相关联的自体免疫抗体的细胞的抗原、微生物抗原的单克隆抗体，且优选为免疫特异性结合于癌细胞抗原的单克隆抗体；且
[0785]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-](其中l如式(iv)、(v)或(vi)中所定义)与包含
(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-及-coo-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-，其中j为1至5的整数；
[0800]
g为0或1；
[0801]
d为式(i)或(ih)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中：
[0802]
r1为cn；
[0803]
r2为乙酰基：
[0804]
r3为甲氧基；
[0805]
r4为氢；
[0806]
y为-nh-或-o-；
[0807]
包含至少一个抗原结合位点的部分ab为选自由以下组成的组的单克隆抗体：阿仑单抗、阿奈妥单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、贝伐单抗、博纳吐单抗、本妥昔单抗、卡妥索单抗、西妥昔单抗、考妥昔单抗、达雷木单抗、地宁妥珠单抗、地诺单抗、德帕妥昔珠单抗、地努妥昔单抗、德瓦鲁单抗、埃罗妥珠单抗、因福土单抗、格巴妥木单抗、吉妥珠单抗、替伊莫单抗、英达妥昔单抗、英度妥单抗、奥英妥珠单抗、伊匹单抗、拉贝珠单抗、拉妥珠单抗、拉妥昔单抗、利法妥珠单抗、洛沃妥珠单抗、米拉组单抗、米妥昔单抗、那妥昔单抗、耐昔妥珠单抗、尼妥珠单抗、纳武单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥法木单抗、奥拉单抗、帕尼单抗、派姆单抗、帕妥珠单抗、匹那妥珠单抗、泊洛妥珠单抗、雷莫芦单抗、洛伐妥珠单抗、沙西妥珠单抗、司妥昔单抗、司曲妥单抗、索非妥珠单抗、伐达妥昔单抗、沃瑟妥珠单抗、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，其中所述抗体优选选自阿仑单抗、阿奈妥单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、贝伐单抗、博纳吐单抗、本妥昔单抗、卡妥索单抗、西妥昔单抗、达雷木单抗、地宁妥珠单抗、地诺单抗、德帕妥昔珠单抗、地努妥昔单抗、德瓦鲁单抗、埃罗妥珠单抗、因福土单抗、格巴妥木单抗、吉妥珠单抗、替伊莫单抗、英达妥昔单抗、英度妥单抗、奥英妥珠单抗、伊匹单抗、拉贝珠单抗、拉妥珠单抗、拉妥昔单抗、米妥昔单抗、那妥昔单抗、耐昔妥珠单抗、尼妥珠单抗、纳武单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥法木单抗、奥拉单抗、帕尼单抗、派姆单抗、帕妥珠单抗、泊洛妥珠单抗、雷莫芦单抗、洛伐妥珠单抗、萨西土珠单抗、司妥昔单抗、司曲妥单抗、伐达妥昔单抗、沃瑟妥珠单抗、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，且更优选为阿仑单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、贝伐单抗、博纳吐单抗、本妥昔单抗、卡妥索单抗、西妥昔单抗、达雷木单抗、地诺单抗、地努妥昔单抗、德瓦鲁单抗、埃罗妥珠单抗、吉妥珠单抗、替伊莫单抗、奥英妥珠单抗、伊匹单抗、拉贝珠单抗、耐昔妥珠单抗、尼妥珠单抗、纳武单抗、奥滨尤妥珠单抗、奥法木单抗、奥拉单抗、帕尼单抗、派姆单抗、帕妥珠单抗、雷莫芦单抗、洛伐妥珠单抗、司妥昔单抗、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分。其中，尤其优选为本妥昔单抗、吉妥珠单抗、奥英妥珠单抗、洛伐妥珠单抗、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体，或其抗原结合片段或免疫活性部分；或所述抗体选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，尤其曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分；且
[0808]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-](其中l如式(iv)、(v)或(vi)中所定义)与包含
至少一个抗原结合位点的部分ab的比率且在3至5范围内。
[0809]
(d)根据本发明的选自式(iv)、(v)及(vi)的药物共轭物：
[0810][0811]
其中：
[0812]r19
为-c
2-c6亚烷基-；
[0813]r30
为-c
2-c4亚烷基-；
[0814]
m为-c
1-c3亚烷基-(c
5-c7碳环基)-；
[0815]
w为0或2且在w为2的情况下，(aa)w具有式(iii)：
[0816][0817]
其中r
22
为异丙基，r
23
选自甲基及-(ch2)3nhconh2，其中波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或至药物部分(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或至连接子(右边的波浪线)的点；
[0818]
x为选自由以下组成的组的延伸基团：-coo-(c
2-c4亚烷基)nh-、-coo-ch
2-亚苯基-nh-(其中所述亚苯基可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代)、-coo-(c
2-c4亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-、-coch2nh-coch
2-nh-、-coo-(c
2-c4亚烷基)s-及-coo-(c
2-c4亚烷基)nhco(c
1-c3亚烷基)s-；
[0819]
b为0或1，优选为1；其中t为选自以下的延伸基团：-co-(c
1-c4亚烷基)-nh-、-co-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-及-coo-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-，其中j为1至5的整数；
[0820]
g为0或1；
[0821]
d为选自以下的药物部分：
[0822]
以及
[0823]
或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体；其中波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(t)g(若存在)、或至(l)的点；
[0824]
包含至少一个抗原结合位点的部分ab选自本妥昔单抗、吉妥珠单抗、奥英妥珠单抗、洛伐妥珠单抗、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体，或其抗原结合片段或免疫活性部分，且更优选其选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，尤其曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分；且
[0825]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-](其中l如式(iv)、(v)或(vi)中所定义)与包含至少一个抗原结合位点的部分ab的比率且在3至5范围内。
[0826]
(e)根据本发明的选自式(iv)、(v)及(vi)的药物共轭物：
[0827][0828]
其中：
[0829]r19
为-c
2-c6亚烷基-；
[0830]r30
为-c
2-c4亚烷基-；
[0831]
m为-c
1-c3亚烷基-(c
5-c7碳环基)-；
[0832]
w为0或2且在w为2的情况下，(aa)w具有式(iii)：
[0833][0834]
其中r
22
为异丙基，r
23
选自甲基及-(ch2)3nhconh2，且波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或至药物部分(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或至连接子(右边的波浪线)的点；
[0835]
x为选自由以下组成的组的延伸基团：-coo-(c
2-c4亚烷基)nh-、-coo-ch
2-亚苯基-nh-(其中所述亚苯基可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代)、-coo-(c
2-c4亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-、-coch2nh-coch
2-nh-、-coo-(c
2-c4亚烷基)s-及-coo-(c
2-c4亚烷基)nhco(c
1-c3亚烷基)s-；
[0836]
b为0或1，优选为1；
[0837]
其中t为选自以下的延伸基团：-co-(c
1-c4亚烷基)-nh-、-co-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-及-coo-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-，其中j为1至5的整数；
[0838]
g为0或1；
[0839]
d为选自以下的药物部分：
[0840]
以及
[0841]
或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体；其中波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(t)g(若存在)、或至(l)的点；
[0842]
包含至少一个抗原结合位点的部分ab选自本妥昔单抗、吉妥珠单抗、奥英妥珠单抗、洛伐妥珠单抗、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体，或其抗原结合片段或免疫活性部分，且更优选其选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，尤其曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分；且
[0843]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-](其中l如式(iv)、(v)或(vi)中所定义)与包含至少一个抗原结合位点的部分的比率且在3至5范围内。
[0844]
(f)根据本发明的式(iv)的药物共轭物：
[0845][0846]
其中：
[0847]r19
为c
2-c5亚烷基-；
[0848]
w为0或2且在w为2的情况下，(aa)w具有式(iii)：
[0849][0850]
其中r
22
为异丙基，r
23
选自甲基及-(ch2)3nhconh2，且波浪线表示共价连接至(x)b(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或至连接子(右边的波浪线)的点；且
[0851]
x为-cooch
2-亚苯基-nh基团；
[0852]
b为1；
[0853]
t为式-co-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
4-nh-的延伸基团；
[0854]
g为0或1；
[0855]
或具有式(v)
[0856][0857]
其中m为-甲基-亚环己基-；
[0858]
b为1；
[0859]
w为0；
[0860]
x为选自以下的延伸基团：-(ch2)3s-及-(ch2)3nhco(ch2)2s-[0861]
g为0；
[0862]
或具有式(vi)
[0863][0864]
其中r
19
为-c
2-c5亚烷基-；
[0865]r30
为-c3亚烷基-；
[0866]
w为0或2且在w为2的情况下，(aa)w具有式(iii)：
[0867][0868]
其中r
22
为异丙基，r
23
选自甲基及-(ch2)3nhconh2，且波浪线表示共价连接至(x)b(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或至连接子(右边的波浪线)的点；且
[0869]
x为-cooch
2-亚苯基-nh基团；
[0870]
b为1；
[0871]
t为式-co-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
4-nh-的延伸基团；
[0872]
g为0或1；
[0873]
d为选自以下的药物部分：
[0874]
以及
[0875]
或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体；其中波浪线表示共价连接至(x)b的点；
[0876]
包含至少一个抗原结合位点的部分ab为本妥昔单抗、吉妥珠单抗、奥英妥珠单抗、洛伐妥珠单抗、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体，或其抗原结合片段或免疫活性部分，且更优选其选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，尤其曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分；且
[0877]
n为基团[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-](其中l如式(iv)中所定义)与包含至少一个抗原结合位点的部分ab的比率且在3至5范围内且优选为4。
[0878]
g)根据本发明的选自由以下组成的组的抗体药物共轭物：
[0879][0879]
以及
[0880]
其中n为2至6，更优选为3、4或5，且各及独立地选自本妥昔单抗、吉妥珠单抗、奥英妥珠单抗、洛伐妥珠单抗、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体，或其抗原结合片段或免疫活性部分，且更优选其选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，尤其曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分。
[0881]
更优选地，抗体药物共轭物选自由以下组成的组：
[0882][0883]
其中n为2至6，更优选为3、4或5，且选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，更优选为曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分，
[0884][0885]
其中n为2至6，更优选为3、4或5，且选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，更优选为曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分，
[0886][0887]
其中n为2至6，更优选为3、4或5，且选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，更优选为曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分，
[0888][0889]
其中n为2至6，更优选为3、4或5，且选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，更优选为曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分。
[0890]
尤其优选地，根据本发明的抗体药物共轭物应呈分离或纯化形式。
[0891]
根据本发明的式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-l1或式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的优选化合物包括：
[0892]
·
式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-l1或式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，其中d、x、aa、t、l1、b、g及w各如本发明文中所定义；但进一步，若化合物为式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，则b w g≠0。
[0893]
·
根据本发明的式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-l1或式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，其中：
[0894]
l1为下式连接子：
[0895][0896]
其中：
[0897]
波浪线表示共价连接至(t)g(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(x)b(若存在)、或至d的点；
[0898]r19
选自-c
1-c
12
亚烷基-、-o-(c
1-c
12
亚烷基)、呈单环或多环的可选择地被一或多个取代基r
x
取代的-c
6-c
12
亚芳基、-c
1-c
12
亚烷基-c
6-c
12
亚芳基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
6-c
12
亚芳基-c
1-c
12
亚烷基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
5-c
12
杂环基-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-c
1-c
12
亚烷基-(c
5-c
12
杂环基)-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-(c
5-c
12
杂环基)-c
1-c
12
亚烷基-(其中所述杂环基可为具有一或多个环且在所述一或多个环中包含至少一个氧、氮或硫
原子的饱和或不饱和基团，所述基团可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、-(och2ch2)
r-及-ch
2-(och2ch2)
r-，其中以上各亚烷基取代基无论单独还是连接至另一部分，碳链均可选择地被一或多个取代基r
x
取代；
[0899]
r为在1-6范围内的整数；且
[0900]
d、r
x
、x、aa、t、b、g及w各如本发明中所定义；但其中若化合物为式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，则b w g≠0。
[0901]
·
根据本发明的式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-l1或式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，其中：
[0902]
l1为下式连接子：
[0903][0904]
其中：
[0905]
波浪线表示共价连接至(t)g(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(x)b(若存在)、或至d的点；
[0906]r19
选自-c
1-c8亚烷基-、-o-(c
1-c8亚烷基)、-c
1-c8亚烷基-c
6-c
12
亚芳基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)、及-c
6-c
12
亚芳基-c
1-c8亚烷基-(其中所述亚芳基呈单环或多环，其可选择地被一或多个取代基r
x
取代)，其中以上各亚烷基取代基无论单独还是连接至另一部分，碳链均可选择地被一或多个取代基r
x
取代；
[0907]
(aa)w具有式(ii)：
[0908][0909]
其中波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或至d(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或l1或至氢原子(右边的波浪线)的点；
[0910]
其中r
21
在每次出现时选自由以下组成的组：氢、甲基、异丙基、仲丁基、苯甲基、吲哚基甲基、-(ch2)3nhconh2、-(ch2)4nh2、-(ch2)3nhc(＝nh)nh2及-(ch2)4nhc-(＝nh)nh2且w为0至6的整数；
[0911]
x为选自由以下组成的组的延伸基团：
[0912]
在d经由氨基共轭的情况下：-coo-(c
2-c4亚烷基)nh-、-coo-ch
2-亚苯基-nh(其中所述亚苯基可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代)、-coo-(c
2-c4亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-、-coch2nh-coch
2-nh-、-coo-(c
2-c4亚烷基)s-及-coo-(c
2-c4亚烷基)-nhco(c
1-c3亚烷基)s-或
[0913]
在d经由羟基共轭的情况下：-conh-(c
2-c4亚烷基)nh-、-coo-ch
2-亚苯基-nh-(其
中所述亚苯基可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代)、-conh-(c
2-c4亚烷基)nh-coo-ch
2-(可选择地被一至四个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代的亚苯基)-nh-、-coch2nh-coch
2-nh-、-conh-(c
2-c4亚烷基)s-及-conh-(c
2-c4亚烷基)nhco(c
1-c3亚烷基)s-；
[0914]
t为选自以下的延伸基团：-co-(c
1-c4亚烷基)-nh-、-co-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-及-coo-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-，其中j为1至10的整数；
[0915]
b为0或1；
[0916]
g为0或1；
[0917]
其中若化合物为式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，则b w g≠0；且
[0918]
d为式(i)的药物部分；且经由羟基或氨基共价连接；或
[0919]
为式(ih)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体，其中：
[0920][0921]
其中(ih)的波浪线表示共价连接至(x)b(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(t)g(若存在)、或至l1的点；
[0922]
r1为-oh或-cn；
[0923]
r2为-c(＝o)ra基团，其中ra选自氢及取代或未取代的c
1-c6烷基，其中可选择的取代基为一或多个取代基r
x
；
[0924]
r3为氢或-orb基团，其中rb为取代或未取代的c
1-c6烷基，其中可选择的取代基为一或多个取代基r
x
。
[0925]
r4选自氢、-ch2oh和-ch2nh2；且
[0926]
y是-nh-或-o-。
[0927]
·
根据本发明的式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-l1或式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，其中：
[0928]
l1为下式基团：
[0929]
[0930]
其中：
[0931]
波浪线表示共价连接至(t)g(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(x)b(若存在)、或至d的点；
[0932]r19
选自-c
1-c6亚烷基-、亚苯基-c
1-c6亚烷基-(其中所述亚苯基可选择地被一或多个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代)，其中以上各亚烷基取代基无论单独还是连接至碳链中的另一部分均可选择地被一或多个选自由具有1至6个碳原子的烷基、具有1至6个碳原子的烷氧基、具有6至12个碳原子的芳基、卤素原子、硝基及氰基组成的组的取代基r
x
取代，且r
19
优选为c
1-c6亚烷基；
[0933]
w为0或2且在w为2的情况下，(aa)w具有式(iii)：
[0934][0935]
其中波浪线表示共价连接至x(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或l1或至氢原子(右边的波浪线)的点；
[0936]r22
选自甲基、苯甲基、异丙基、仲丁基及吲哚基甲基；
[0937]r23
选自甲基、-(ch2)4nh2、-(ch2)3nhconh2及-(ch2)3nhc(＝nh)nh2；
[0938]
x为选自以下的延伸基团：
[0939]
在d经由氨基共轭的情况下：-coo-ch
2-亚苯基-nh-、-coo(ch2)3nhcoo-ch
2-亚苯基-nh、-coo-(ch2)3)nh-、-coo(ch2)
3-s-及-coo-(ch2)3nhco-(ch2)2s-或
[0940]
在d经由羟基共轭的情况下：-coo-ch
2-亚苯基-nh-、-conh(ch2)3nhcooch
2-亚苯基-nh-、-conh(ch2)3nh-、-conh(ch2)
3-s-及-conh(ch2)3nhco(ch2)2s-。
[0941]
其中t为选自以下的延伸基团：-co-(c
1-c4亚烷基)-nh-、-co-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-及-coo-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-，其中j为1至5的整数；
[0942]
b为0或1；
[0943]
g为0或1；
[0944]
其中若化合物为式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，则b w g≠0；且
[0945]
d为式(i)的药物部分；且经由羟基或氨基共价连接；或
[0946]
为式(ih)的药物部分，或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体：
[0947][0948]
其中(ih)的波浪线表示共价连接点；
[0949]
r1为-cn或-oh；
[0950]
r2为乙酰基；
[0951]
r3为氢或甲氧基，优选甲氧基；
[0952]
r4为氢或-ch2oh，优选为氢；
[0953]
y为-nh-或-o-。
[0954]
·
根据本发明的式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-l1或式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，其中：
[0955]
l1为下式连接子：
[0956][0957]
其中：
[0958]
波浪线表示共价连接至(t)g(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(x)b(若存在)、或至d的点；
[0959]r19
为-c
2-c6亚烷基-；
[0960]
w为0或2且在w为2的情况下，(aa)w具有式(iii)：
[0961][0962]r22
为异丙基，r
23
选自甲基及-(ch2)3nhconh2，其中波浪线表示共价连接至x(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或l1或至氢原子(右边的波浪线)的点；
[0963]
x为选自以下的延伸基团：-coo-ch
2-亚苯基-nh-、-coo(ch2)3nhcoo-ch
2-亚苯基-nh、-coo-(ch2)3)nh-、-coo(ch2)
3-s-及-coo-(ch2)3nhco-(ch2)2s-；
[0964]
其中t为选自以下的延伸基团：-co-(c
1-c4亚烷基)-nh-、-co-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-及-coo-(c
1-c4亚烷基)-[o-(c
2-c4亚烷基)]
j-nh-，其中j为1至5的整数；
[0965]
b为0或1；
[0966]
g为0或1；
[0967]
其中若化合物为式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，则b w g≠0；且
[0968]
d为选自以下的药物部分：
[0969]
及
[0970]
或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体；其中波浪线表示共价连接点。
[0971]
·
根据本发明的式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-l1或式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，其中：
[0972]
l1为下式基团：
[0973][0974]
其中：
[0975]
波浪线表示共价连接至(t)g(若存在)、或(aa)w(若存在)、或至(x)b(若存在)、或至d的点；
[0976]r19
为-c
2-c5亚烷基-；
[0977]
w为0或2且在w为2的情况下，(aa)w具有式(iii)：
[0978][0979]
其中r
22
为异丙基，r
23
选自甲基及-(ch2)3nhconh2，其中波浪线表示共价连接至x(左边的波浪线)及至(t)g(若存在)、或l1或至氢原子(右边的波浪线)的点；
[0980]
x为-coo-ch
2-亚苯基-nh-基团；
[0981]
t为-co-(ch2)
2-[o-(ch2)2]
4-nh-基团；
[0982]
b为0或1；
[0983]
g为0或1；
[0984]
其中若化合物为式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物，则b w g≠0；且
[0985]
d为选自以下的药物部分：
[0986]
及
[0987]
或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体；其中波浪线表示共价连接点。
[0988]
·
选自以下的式d-x-(aa)
w-(t)
g-l1的化合物：
[0989]
及
[0990]
本发明的药物共轭物中的术语“药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、互变异构体或立体异构体”是指在施用给患者时能够，无论直接还是间接地，提供如本文所述的化合物的任何药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、水合物或立体异构体形式或任何其他化合物。然而，应了解，非药学上可接受的盐也在本发明的范畴内，因为所述盐适用于制备药学上可接受的盐。盐、前药及衍生物的制备可通过本技术领域中已知的方法进行。
[0991]
举例而言，本文所提供的化合物的药学上可接受的盐由含有碱性或酸性部分的母体化合物通过常规的化学方法合成。一般而言，此类盐例如通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的适当碱或酸在水中或有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备。一般而言，优选非水性介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。酸加成盐的示例包括无机酸加成盐(诸如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐)及有机酸加成盐
(诸如乙酸盐、三氟乙酸盐、顺丁烯二酸盐、反丁烯二酸盐、柠檬酸盐、乙二酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、杏仁酸盐、甲烷磺酸盐及对甲苯磺酸盐)。碱加成盐的示例包括无机盐(诸如钠盐、钾盐、钙盐及铵盐)及有机碱盐(诸如乙二胺、乙醇胺、n，n-二亚烷基乙醇胺、三乙醇胺及碱性氨基酸盐)。
[0992]
本发明的药物共轭物可呈结晶形式，呈游离化合物或呈溶剂合物(例如水合物)，且意欲两种形式都在本发明的范畴内。溶剂化方法一般为本技术领域中已知的。
[0993]
作为本发明的药物共轭物的前药的任何化合物在本发明的范畴及精神内。术语“前药”以其最广泛的含义使用且涵盖在活体内转化为本发明化合物的那些衍生物。本领域技术人员容易想到此类衍生物，且此类衍生物包括例如其中游离羟基转化成酯衍生物的化合物。许多合适前药为本领域技术人员所熟知且可见于例如burger“medicinal chemistry and drug discovery第6版(donald j.abraham编辑，2001，wiley)及“design and applications of prodrugs”(h.bundgaard编辑，1985，harwood academic publishers)，其内容以引用的方式并入本文中。
[0994]
与本发明化合物相关的药学上可接受的酯不特别受限，且可由本领域技术人员选择。在所述酯的情况下，优选此类酯可通过诸如在活体内水解的生物过程而裂解。构成酯的基团(当基团表示为r时，酯表示为-coor)可为，例如：c
1-c4烷氧基c
1-c4烷基，诸如甲氧基乙基、1-乙氧基乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-(异丙氧基)乙基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、1，1-二甲基-1-甲氧基甲基、乙氧基甲基、丙氧基甲基、异丙氧基甲基、丁氧基甲基或叔丁氧基甲基；c
1-c4烷氧基化c
1-c4烷氧基c
1-c4烷基，诸如2-甲氧基乙氧基甲基；c
6-c
10
芳基氧基c
1-c4烷基，诸如苯氧基甲基；卤化c
1-c4烷氧基c
1-c4烷基，诸如2，2，2-三氯乙氧基甲基或双(2-氯乙氧基)甲基；c
1-c4烷氧基羰基c
1-c4烷基，诸如甲氧基羰基甲基；氰基c
1-c4烷基，诸如氰基甲基或2-氰基乙基；c
1-c4烷基硫甲基，诸如甲基硫甲基或乙基硫甲基；c
6-c
10
芳基硫甲基，诸如苯基硫甲基或萘基硫甲基；c
1-c4烷基磺酰基c
1-c4低碳烷基，其可选择地被一或多个卤素原子取代，诸如2-甲烷磺酰基乙基或2-三氟甲烷磺酰基乙基；c
6-c
10
芳基磺酰基c
1-c4烷基，诸如2-苯磺酰基乙基或2-甲苯磺酰基乙基；c
1-c7脂族酰氧基c
1-c4烷基，诸如甲酰氧基甲基、乙酰氧基甲基、丙酰氧基甲基、丁酰氧基甲基、特戊酰氧基甲基、戊酰氧基甲基、异戊酰氧基甲基、己酰氧基甲基、1-甲酰氧基乙基、1-乙酰氧基乙基、1-丙酰氧基乙基、1-丁酰氧基乙基、1-特戊酰氧基乙基、1-戊酰氧基乙基、1-异戊酰氧基乙基、1-己酰氧基乙基、2-甲酰氧基乙基、2-乙酰氧基乙基、2-丙酰氧基乙基、2-丁酰氧基乙基、2-特戊酰氧基乙基、2-戊酰氧基乙基、2-异戊酰氧基乙基、2-己酰氧基乙基、1-甲酰氧基丙基、1-乙酰氧基丙基、1-丙酰氧基丙基、1-丁酰氧基丙基、1-特戊酰氧基丙基、1-戊酰氧基丙基、1-异戊酰氧基丙基、1-己酰氧基丙基、1-乙酰氧基丁基、1-丙酰氧基丁基、1-丁酰氧基丁基、1-特戊酰氧基丁基、1-乙酰氧基戊基、1-丙酰氧基戊基、1-丁酰氧基戊基、1-特戊酰氧基戊基或1-特戊酰氧基己基；c
5-c6环烷基羰氧基c
1-c4烷基，诸如环戊基羰氧基甲基、环己基羰氧基甲基、1-环戊基羰氧基乙基、1-环己基羰氧基乙基、1-环戊基羰氧基丙基、1-环己基羰氧基丙基、1-环戊基羰氧基丁基或1-环己基羰氧基丁基；c
6-c
10
芳基羰氧基c
1-c4烷基，诸如苯甲酰氧基甲基；c
1-c6烷氧基羰氧基c
1-c4烷基，诸如甲氧基羰氧基甲基、1-(甲氧基羰氧基)乙基、1-(甲氧基羰氧基)丙基、1-(甲氧基羰氧基)丁基、1-(甲氧基羰氧基)戊基、1-(甲氧基羰氧基)己基、乙氧基羰氧基甲基、1-(乙氧基羰氧基)乙基、1-(乙氧基羰氧基)丙基、1-(乙氧基羰氧
基)丁基、1-(乙氧基羰氧基)戊基、1-(乙氧基羰氧基)己基、丙氧基羰氧基甲基、1-(丙氧基羰氧基)乙基、1-(丙氧基羰氧基)丙基、1-(丙氧基羰氧基)丁基、异丙氧基羰氧基甲基、1-(异丙氧基羰氧基)乙基、1-(异丙氧基羰氧基)丁基、丁氧基羰氧基甲基、1-(丁氧基羰氧基)乙基、1-(丁氧基羰氧基)丙基、1-(丁氧基羰氧基)丁基、异丁氧基羰氧基甲基、1-(异丁氧基羰氧基)乙基、1-(异丁氧基羰氧基)丙基、1-(异丁氧基羰氧基)丁基、叔丁氧基羰氧基甲基、1-(叔丁氧基羰氧基)乙基、戊氧基羰氧基甲基、1-(戊氧基羰氧基)乙基、1-(戊氧基羰氧基)丙基、己氧基羰氧基甲基、1-(己氧基羰氧基)乙基或1-(己氧基羰氧基)丙基；c
5-c6环烷基氧基羰氧基c
1-c4烷基，诸如环戊基氧基羰氧基甲基、1-(环戊基氧基羰氧基)乙基、1-(环戊基氧基羰氧基)丙基、1-(环戊基氧基羰氧基)丁基、环己基氧基羰氧基甲基、1-(环己基氧基羰氧基)乙基、1-(环己基氧基羰氧基)丙基或1-(环己基氧基羰氧基)丁基；[5-(c
1-c4烷基)-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基]甲基，诸如(5-甲基-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基、(5-乙基-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基、(5-丙基-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基、(5-异丙基-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基或(5-丁基-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基；[5-(苯基，其可选择地被c
1-c4烷基、c
1-c4烷氧基或卤素原子取代)-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基]甲基，诸如(5-苯基-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基、[5-(4-甲基苯基)-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基]甲基、[5-(4-甲氧基苯基)-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基]甲基、[5-(4-氟苯基)-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基]甲基或[5-(4-氯苯基)-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基]甲基；或酞基，其可选择地被c
1-c4烷基或一个或多个c
1-c4烷氧基取代，诸如酞基、二甲基酞基或二甲氧基酞基；且优选为特戊酰氧基甲基、酞基或(5-甲基-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基，且更优选为(5-甲基-2-氧代-1，3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基。
[0995]
本文所提及的任何化合物意欲代表此类特定化合物以及某些变体或形式。具体地，本文所提及的化合物可具有不对称中心且因此以不同对映异构形式存在。本文所提及的化合物的所有光学异构体及立体异构体及其混合物视为在本发明的范畴内。因此，本文所提及的任何给定化合物意欲表示外消旋体、一或多种对映异构形式、一或多种非对映异构形式、一或多种阻旋异构形式及其混合物中的任一者。特定而言，式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)]
n-ab的药物共轭物及式dx-(aa)
w-(t)
g-l1或dx-(aa)
w-(t)
g-h的化合物可包括对映异构体(取决于其不对称性)或非对映异构体。关于双键的立体异构也是可能的，因此在一些情况下，分子可以(e)-异构体或(z)-异构体的形式存在。若分子含有几个双键，则每个双键将具有其自身立体异构，可与分子其他双键的立体异构相同或不同。单一异构体及异构体的混合物在本发明的范畴内。
[0996]
此外，本文所提及的化合物可以几何异构体(也即，顺式及反式异构体)、互变异构体或阻旋异构体形式存在。具体而言，术语互变异构体是指平衡存在且容易自一种异构形式转化成另一种异构形式的化合物的两种或更多种结构异构体中的一者。常见互变异构体对为胺-亚胺、酰胺-酰亚胺、酮-烯醇、内酰胺-内酰亚胺等。另外，当介质中存在水合物、溶剂合物及多晶形物及其混合物时，本文所提及的任何化合物意欲代表此类形式。另外，本文所提及的化合物可以经同位素标记的形式存在。本文所提及的化合物的所有几何异构体、互变异构体、阻旋异构体、水合物、溶剂合物、多晶形物及同位素标记形式及其混合物视为在本发明的范畴内。
[0997]
本文所公开的化合物的保护形式视为在本发明的范畴内。合适保护基是本领域技术人员所熟知的。关于有机化学中的保护基的综述由wuts，pgm及greene tw在protecting groups in organic synthesis，第4版wiley-interscience及kocienski pj在protecting groups，第3版georg thieme verlag中提供。这些参考文献提供关于oh、氨基及sh基团的保护基的章节。所有这些参考文献以全文引用的方式并入。
[0998]
在本发明的范畴内，oh保护基定义为经由形成合适的经保护的oh基团来保护oh所产生的o-键部分。此类经保护的oh基团的示例包括醚、硅烷基醚、酯、磺酸酯、次磺酸酯及亚磺酸酯、碳酸酯及氨基甲酸酯。在醚的情况下，oh保护基可选自甲基、甲氧基甲基、甲基硫甲基、(苯基二甲基硅烷基)甲氧基甲基、苯甲基氧基甲基、对甲氧基苯甲基氧基甲基、[(3，4-二甲氧基苯甲基)氧基]甲基、对硝基苯甲基氧基甲基、邻硝基苯甲基氧基甲基、[(r)-1-(2-硝基苯基)乙氧基]甲基、(4-甲氧基苯氧基)甲基、愈创木酚甲基、[(对苯基苯基)氧基]甲基、叔丁氧基甲基、4-戊烯氧基甲基、硅氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基、2-氰基乙氧基甲基、双(2-氯乙氧基)甲基、2，2，2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基硅烷基)乙氧基甲基、薄荷氧基甲基、o-双(2-乙酰氧基-乙氧基)甲基、四氢哌喃基、氟四氢哌喃基、3-溴四氢哌喃基、四氢硫哌喃基、1-甲氧基环己基、4-甲氧基四氢哌喃基、4-甲氧基-四氢硫哌喃基、4-甲氧基四氢硫哌喃基s，s-二氧化物、1-[(2-氯-4-甲基)-苯基]-4-甲氧基哌啶-4-基、1-(2-氟苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基、1-(4-氯苯基)-4-甲氧基哌啶-4-基、1，4-二恶烷-2-基、四氢呋喃基、四氢硫呋喃基、2，3，3a，4，5，6，7，7a-八氢-7，8，8-三甲基-4，7-甲桥苯并呋喃-2-基、1-乙氧基乙基、1-(2-氯乙氧基)乙基、2-羟基乙基、2-溴乙基、1-[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]乙基、1-甲基-1-甲氧基乙基、1-甲基-1-苯甲基氧基乙基、1-甲基-1-苯甲基氧基-2-氟乙基、1-甲基-1-苯氧基乙基、2，2，2-三氯乙基、1，1-双大茴香基-2，2，2-三氯乙基、1，1，1，3，3，3-六氟-2-苯基异丙基、1-(2-氰基乙氧基)乙基、2-三甲基硅烷基乙基、2-(苯甲基硫基)乙基、2-(苯基硒基)乙基、叔丁基、环己基、1-甲基-1'-环丙基甲基、烯丙基、异戊二烯基、肉桂基、2-苯烯丙基、炔丙基、对氯苯基、对甲氧基苯基、对硝基苯基、2，4-二硝基苯基、2，3，5，6-四氟-4-(三氟甲基)苯基、苯甲基、对甲氧基苯甲基、3，4-二甲氧基苯甲基、2，6-二甲氧基苯甲基、邻硝基苯甲基、对硝基苯甲基、戊二烯基硝基苯甲基、戊二烯基硝基胡椒基、卤基苯甲基、2，6-二氯苯甲基、2，4-二氯苯甲基、2，6-二氟苯甲基、对氰基苯甲基、氟苯甲基、4-氟烷氧基苯甲基、三甲基硅烷基二甲苯基、对苯基苯甲基、2-苯基-2-丙基、对酰基氨基苯甲基、对叠氮基苯甲基、4-叠氮基-3-氯苯甲基、2-三氟甲基苯甲基、4-三氟甲基苯甲基、对(甲基亚磺酰基)苯甲基、对硅杂环丁烷基苯甲基、4-乙酰氧基苯甲基、4-(2-三甲基硅烷基)乙氧基甲氧基苯甲基、2-萘基甲基、2-吡啶甲基、4-吡啶甲基、3-甲基-2-吡啶甲基n-氧化物、2-喹啉基甲基、6-甲氧基-2-(4-甲基苯基)-4-喹啉甲基、1-芘基甲基、二苯基甲基、4-甲氧基二苯基甲基、4-苯基二苯基甲基、p，p'-二硝基二苯甲基、5-二苯并环庚基、三苯基甲基、三(4-叔丁基苯基)甲基、α-萘基二苯基甲基、对甲氧基苯基二苯基甲基、二(对甲氧基苯基)苯基-甲基、三(对甲氧基苯基)甲基、4-(4'-溴苯甲酰甲基氧基)苯基二苯基甲基、4，4'，4
”‑
三(4，5-二氯邻苯二酰亚胺基苯基)甲基、4，4'，4
”‑
三(乙酰丙酰基氧基苯基)甲基、4，4'，4
”‑
三(苯甲酰氧基苯基)甲基、4，4'-二甲氧基-3
”‑
[n-(咪唑基甲基)]三苯甲基、4，4'-二甲氧基-3
”‑
[n-(咪唑基乙基)氨甲酰基]三苯甲基、双(4-甲氧基苯基)-1'-芘基甲基、4-(17-四苯并[a，c，g，i]芴基甲基)-4，4
”‑
二甲氧基三苯甲基、9-蒽基、9-(9-苯基)二苯并哌喃基、9-苯基噻
氰基乙酯、氨基甲酸2-丹磺酰基乙酯、氨基甲酸2-(4-硝基苯基)乙酯、氨基甲酸4-甲硫基苯酯、氨基甲酸2，4-二甲硫基苯基酯、氨基甲酸间硝基苯酯、氨基甲酸3，5-二甲氧基苯甲酯、氨基甲酸1-甲基-1-(3，5-二甲氧基苯基)乙酯、氨基甲酸α-甲基硝基胡椒基酯、氨基甲酸邻硝基苯甲酯、氨基甲酸3，4-二甲氧基-6-硝基苯甲酯、氨基甲酸苯基(邻硝基苯基)甲酯、氨基甲酸2-硝基苯基乙酯、氨基甲酸6-硝基藜芦基酯、氨基甲酸4-甲氧基苯甲酰甲酯、氨基甲酸3'，5'-二甲氧基安息香酯、氨基甲酸9-二苯并哌喃基甲酯、氨基甲酸n-甲基-n-(邻硝基苯基)酯、氨基甲酸叔戊酯、氨基甲酸1-甲基环丁酯、氨基甲酸1-甲基环己酯、氨基甲酸1-甲基-1-环丙基甲酯、氨基甲酸环丁酯、氨基甲酸环戊酯、氨基甲酸环己酯、氨基甲酸异丁酯、氨基甲酸异降冰片酯、氨基甲酸环丙基甲酯、氨基甲酸对癸氧基苯甲酯、氨基甲酸二异丙基甲酯、氨基甲酸2，2-二甲氧基-羰基乙烯酯、氨基甲酸邻(n，n-二甲基甲酰氨基)苯甲酯、氨基甲酸1，1-二甲基-3-(n，n-二甲基-甲酰氨基)丙酯、氨基甲酸丁炔酯、氨基甲酸1，1-二甲基丙炔酯、氨基甲酸2-碘乙酯、氨基甲酸1-甲基-1-(4'-吡啶基)乙酯、氨基甲酸1-甲基-1-(对苯偶氮基苯基)乙酯、氨基甲酸p-(p'-甲氧基苯偶氮基)苯甲酯、氨基甲酸对(苯偶氮基)苯甲酯、氨基甲酸2，4，6-三甲基苯甲酯、氨基甲酸异烟碱酯、4-(三甲基-铵)苯甲基氨基甲酸酯、氨基甲酸对氰基苯甲酯、氨基甲酸二(2-吡啶基)甲酯、氨基甲酸2-呋喃基甲酯、氨基甲酸苯酯、氨基甲酸2，4，6-三叔丁基苯酯、氨基甲酸1-甲基-1-苯基乙酯及氨基甲酸s-苯甲硫酯。在脲的情况下，氨基保护基可选自吩噻嗪基-(10)-羰基、n'-对甲苯磺酰基氨基羰基、n'-苯基氨基硫基羰基、4-羟基苯基氨基羰基、3-羟基色氨基羰基及n'-苯基氨基硫基羰基。在酰胺的情况下，氨基保护基连同其连接的氨基一起形成可选自以下的酰胺：甲酰胺、乙酰胺、氯乙酰胺、三氯乙酰胺、三氟乙酰胺、苯基乙酰胺、3-苯基丙酰胺、戊-4-烯酰胺、吡啶甲酰胺、3-吡啶基甲酰胺、n-苯甲酰基苯基丙胺酰基酰胺、苯甲酰胺、对苯基苯甲酰胺、邻硝基苯基乙酰胺、2，2-二甲基-2-(邻硝基苯基)乙酰胺、邻硝基苯氧基乙酰胺、3-(邻硝基苯基)丙酰胺、2-甲基-2-(邻硝基苯氧基)丙酰胺、3-甲基-3-硝基丁酰胺、邻硝基肉桂酰胺、邻硝基苯甲酰胺、3-(4-叔丁基-2，6-二硝基苯基)-2，2-二甲基丙酰胺、邻(苯甲酰氧基甲基)苯甲酰胺、2-(乙酰氧基甲基)苯甲酰胺、2-[(叔丁基二苯基硅氧基)甲基]苯甲酰胺、3-(3'，6'-二氧代-2'，4'，5'-三甲基环己-1'，4'-二烯)-3，3-二甲基丙酰胺、邻羟基-反式-肉桂酰胺、2-甲基-2-(邻苯偶氮基苯氧基)丙酰胺、4-氯丁酰胺、乙酰-乙酰胺、3-(对羟基苯基)丙酰胺、(n'-二硫基苯甲基氧基羰基氨基)乙酰胺及n-乙酰基甲硫胺酸酰胺。在杂环系统的情况下，氨基保护基连同其连接的氨基一起形成可选自以下的杂环系统：4，5-二苯基-3-恶唑啉-2-酮、n-邻苯二甲酰亚胺、n-二氯邻苯二甲酰亚胺、n-四氯邻苯二甲酰亚胺、n-4-硝基邻苯二甲酰亚胺、n-硫基二乙二醇酰基、n-二硫杂丁二酰亚胺、n-2，3-二苯基顺丁烯二酰亚胺、n-2，3-二甲基顺丁烯二酰亚胺、n-2，5-二甲基吡咯、n-2，5-双(三异丙基硅氧基)吡咯、n-1，1，4，4-四甲基二硅烷基氮杂环戊烷加合物、n-1，1，3，3-四甲基-1，3-二硅异吲哚啉、n-二苯基硅烷基二亚乙基、n-5-取代的1，3-二甲基-1，3，5-三氮杂环己-2-酮、n-5-取代的1，3-苯甲基-1，3，5-三氮杂环己-2-酮、1-取代的3，5-二硝基-4-吡啶酮及1，3，5-二恶。在n-烷基、n-烯基、n-炔基或n-芳基胺的情况下，氨基保护基可选自n-甲基、n-叔丁基、n-烯丙基、n-异戊二烯基、n-肉桂基、n-苯基烯丙基、n-炔丙基、n-甲氧基甲基、n-[2-(三甲基硅烷基)乙氧基]甲基、n-3-乙酰氧基丙基、n-氰基甲基、n-2-氮杂降冰片烯、n-苯甲基、n-4-甲氧基苯甲基、n-2，4-二甲氧基苯甲基、n-2-羟基苯甲基、n-二茂铁基甲基、n-2，4-二硝基苯基、邻
甲氧基苯基、对甲氧基苯基、n-9-苯基芴基、n-芴基、n-2-吡啶甲基胺n'-氧化物、n-7-甲氧基香豆素-4-基甲基、n-二苯基甲基、n-双(4-甲氧基苯基)甲基、n-5-二苯并环庚基、n-三苯基甲基、n-(4-甲基苯基)二苯基甲基及n-(4-甲氧基苯基)二苯基甲基。在亚胺的情况下，氨基保护基可选自n-1，1-二甲基硫亚甲基、n-苯亚甲基、n-对甲氧基苯亚甲基、n-二苯基亚甲基、n-[2-吡啶基)均三甲苯基]亚甲基、n-(n'，n'-二甲基氨基亚甲基)、n-(n'，n'-二苯甲基氨基亚甲基)、n-(n'-叔丁基氨基亚甲基)、n，n'-亚异丙基、n-对硝基苯亚甲基、n-亚水杨基、n-5-氯亚水杨基、n-(5-氯-2-羟基苯基)苯基亚甲基、n-亚环己基及n-亚叔丁基。在烯胺的情况下，氨基保护基可选自n-(5，5-二甲基-3-氧代-1-环己烯基)、n-2，7-二氯-9-芴基亚甲基、n-1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基、n-(1，3-二甲基-2，4，6-(1h，3h，5h)-三氧代亚嘧啶-5-基)-甲基、n-4，4，4-三氟-3-氧代-1-丁烯基及n-(1-异丙基-4-硝基-2-氧代-3-吡咯啉-3-基)。在n-金属衍生物的情况下，氨基保护基可选自n-硼烷、n-二苯基硼酸酯、n-二乙基硼酸酯、n-9-硼双环壬烷、n-二氟硼酸酯及3，5-双(三氟甲基)苯基硼酸；以及包括n-苯基(五羰基铬)碳烯基、n-苯基(五羰基钨)碳烯基、n-甲基(五羰基铬)碳烯基、n-甲基(五羰基钨)碳烯基、n-铜螯合物、n-锌螯合物及18-冠-6-衍生物。在n-n衍生物的情况下，氨基保护基连同其连接的氨基一起形成可选自以下的n-n衍生物：n-硝基氨基、n-亚硝基氨基、胺n-氧化物、叠氮化物、三氮烯衍生物及n-三甲基硅烷基甲基-n-苯甲基肼。在n-p衍生物的情况下，氨基保护基连同其连接的氨基一起形成可选自以下的n-p衍生物：二苯基膦酰胺、二甲基硫基膦酰胺、二苯基硫基膦酰胺、氨基磷酸二烷酯、氨基磷酸二苯甲酯、氨基磷酸二苯酯及亚氨基三苯基磷烷。在n-si衍生物的情况下，nh2保护基可选自叔丁基二苯基硅烷基及三苯基硅烷基。在n-s衍生物的情况下，经保护的氨基可选自n-次磺酰基或n-磺酰基衍生物。n-次磺酰基衍生物可选自苯次磺酰胺、2-硝基苯次磺酰胺、2，4-二硝基苯次磺酰胺、五氯苯次磺酰胺、2-硝基-4-甲氧基苯次磺酰胺、三苯基甲基苯次磺酰胺、1-(2，2，2-三氟-1，1-二苯基)乙基苯次磺酰胺及n-3-硝基-2-吡啶苯次磺酰胺。n-磺酰基衍生物可选自甲烷磺酰胺、三氟甲烷磺酰胺、叔丁基磺酰胺、苯甲基磺酰胺、2-(三甲基硅烷基)乙烷磺酰胺、对甲苯磺酰胺、苯磺酰胺、邻大茴香基磺酰胺、2-硝基苯磺酰胺、4-硝基苯磺酰胺、2，4-二硝基苯磺酰胺、2-萘磺酰胺、4-(4'，8'-二甲氧基萘基甲基)苯磺酰胺、2-(4-甲基苯基)-6-甲氧基-4-甲基磺酰胺、9-蒽磺酰胺、吡啶-2-磺酰胺、苯并噻唑-2-磺酰胺、苯甲酰甲基磺酰胺、2，3，6-三甲基-4-甲氧基苯磺酰胺、2，4，6-三甲氧基苯磺酰胺、2，6-二甲基-4-甲氧基-苯磺酰胺、五甲基苯磺酰胺、2，3，5，6-四甲基-4-甲氧基苯磺酰胺、4-甲氧基苯磺酰胺、2，4，6-三甲基苯磺酰胺、2，6-二甲氧基-4-甲基苯磺酰胺、3-甲氧基-4-叔丁基苯磺酰胺及2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰胺。
[1000]
在本发明的范畴内，sh保护基定义为经由形成合适的经保护的sh基团来保护sh基团所产生的s-键部分。此类经保护的sh基团的示例包括硫醚、二硫化物、硅烷基硫醚、硫酯、硫代碳酸酯及硫代氨基甲酸酯。在硫醚的情况下，sh保护基可选自s-烷基、s-苯甲基、s-对甲氧基苯甲基、s-邻羟基苯甲基、s-对羟基苯甲基、s-邻乙酰氧基苯甲基、s-对乙酰氧基苯甲基、s-对硝基苯甲基、s-邻硝基苯甲基、s-2，4，6-三甲基苯甲基、s-2，4，6-三甲氧基苯甲基、s-4-吡啶甲基、s-2-吡啶甲基-n-氧化物、s-2-喹啉基甲基、s-9-蒽基甲基、s-9-芴基甲基、s-二苯并哌喃基、s-二茂铁基甲基、s-二苯基甲基、s-双(4-甲氧基苯基)甲基、s-5-二苯并环庚基、s-三苯基甲基、4-甲氧基三苯甲基、s-二苯基-4-吡啶基甲基、s-苯基、s-2，4-二
therapy:conferring specificity to cytotoxic drugs.acc.chem.res.41，98-107]。在过去25年间已批准超过30种g型免疫球蛋白(igg)及相关药剂，主要用于癌症及炎性疾病。
[1005]
一种替代策略为期望小的抗赘生性分子化学共轭至mab，用作载剂(增加半衰期)与靶向剂(选择性)。由于单克隆抗体(mab)对肿瘤相关抗原具有高度选择性、良好药物动力学及相对较低的内在毒性，已针对使用单克隆抗体(mab)靶向递送药物进行了大量工作。mab-药物共轭物(adc)通过将抗癌药物(通常经由条件性稳定的连接子系统)共价连接至mab来形成。一旦结合于细胞表面抗原，用于大部分adc的mab主动输送至溶酶体或其他细胞内隔室，其中酶、低ph值或还原剂促进药物释放。然而，当前处于研发中的adc很有限。
[1006]
抗原必须具有高度肿瘤细胞选择性以限制毒性及脱靶作用。在临床前模型及临床试验中研究众多肿瘤相关抗原，仅举几例，包括在b细胞(例如cd20、cd22、cd40、cd79)、t细胞(cd25、cd30)、癌细胞(her2、egfr、epcam、ephb2、psma)、内皮(内皮因子)或基质细胞(纤维母细胞活化蛋白)中过度表达的抗原[teicher ba.antibody-drug conjugate targets.curr cancer drug targets 9(8):982-1004，2009]。adc目标的一种重要特性为其内化能力；此可为抗原本身的内在特征，或其可通过抗体结合至其抗原诱发。实际上，adc内化对于减少与药物有效负载的细胞外递送相关联的毒性而言是至关重要的。
[1007]
有关共轭小分子，并与多种推定的抗原靶点对比，当前在临床试验中积极研究用作adc中的有效负载的有限数目的细胞毒性药物家族：刺孢霉素(calicheamycin)(pfizer)、倍癌霉素(duocarmycin)(synthon)、吡咯并苯并二氮呯(spirogen)、伊立替康(irinotecan)(immunomedics)、类美登素(maytansinoid)(dm1及dm4；immunogen genentech/roche、sanofi-aventis、biogen idec、centocor/johnson&johnson、millennium/takeda)及奥瑞他汀(auristatin)(mmae及mmaf；seattle genetics genentech/roche，medimmune/astrazeneca，bayer-schering，celldex，progenics，genmab)。刺孢霉素、倍癌霉素及吡咯并苯并二氮呯为dna小沟结合子，伊立替康为拓朴异构酶i抑制剂，而类美登素及奥瑞他汀为微管蛋白解聚剂。
[1008]
有趣的是，三种这些获得细胞毒性的adc的代表已进入后期临床试验。曲妥珠单抗-美坦新(t-dm1)，曲妥珠单抗通过稳定连接子连接于类美登素半合成药物(fda于2013年2月22日批准用于晚期her2阳性乳腺癌)；奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin，cmc-544)，一种用酸不稳定连接子(乙酰基苯氧基-丁酸)与刺孢霉素共轭的人类化抗cd22mab(g5/44，igg4)(b细胞非霍奇金氏淋巴瘤)；本妥昔单抗维多汀，一种经由顺丁烯二酰亚胺己酰基-缬氨酰基-瓜氨酸基-对氨基苯甲基氨基甲酸酯连接子连接于单甲基奥瑞他汀e(mmae)的人类化抗cd30 mab(fda于2011年8月19日批准用于间变性大细胞淋巴瘤及霍奇金氏淋巴瘤)。
[1009]
连接子表示adc结构的关键组分。已研究若干类别第二代连接子，包括酸不稳定的腙连接子(溶酶体)(例如吉妥珠单抗及奥英妥珠单抗)；基于二硫化物的连接子(还原性细胞内环境)；不可裂解的硫醚连接子(溶酶体中分解代谢降解)(例如曲妥珠单抗-美坦新)；肽连接子(例如瓜氨酸-缬氨酸)(溶酶体蛋白酶，如组织蛋白酶b)(例如本妥昔单抗维多汀)：参见例如wo-a-2004/010957、wo-a-2006/060533及wo-a-2007/024536。也描述通过尺寸排阻层析(sec)纯化抗体-药物共轭物[参见例如liu等人，proc.natl.acad.sci.usa，93:8618-8623(1996)及chari等人，cancer research，52:127-131(1992)]。
[1010]
曲妥珠单抗(赫赛汀(herceptin))为干扰her2/neu受体的单克隆抗体。其主要用途为治疗某些乳腺癌。her受体为包埋于细胞膜中且将分子信号自细胞(称为egf的分子)外部传达至细胞内部且打开及关闭基因的蛋白质。her蛋白质刺激细胞增殖。在一些癌症、尤其某些类型乳腺癌中，her2过度表达，且引起癌细胞不受控制地复制。
[1011]
在20％至30％的早期乳腺癌中her2基因扩增，此使得其在细胞膜中过度表达表皮生长因子(egf)受体。在一些类型癌症中，在生长因子未到达及结合于受体的情况下，her2可发送信号，使得其对细胞构成产生影响；然而，曲妥珠单抗在此情况下无效。
[1012]
当her2路径正常起作用时，其促进细胞生长及分裂；然而，当其过度表达时，细胞生长加速超出其正常限度。在一些类型癌症中，所述路径用以促进快速细胞生长及增殖，因此形成肿瘤。在癌细胞中，her2蛋白可比正常细胞中多表达高达100倍(每细胞两百万对比20，000)。此过度表达引起强烈且恒定的增殖信号传导，因此形成肿瘤。her2的过度表达也引起检查点失活，允许增殖增加更大。
[1013]
在本发明的化合物中，ab为包含至少一个抗原结合位点的部分。在一替代实施例中，ab可为能够结合于靶细胞，优选动物细胞且更优选人类细胞的任何适合的药剂。此类药剂的示例包括淋巴因子、激素、生长因子及养分输送分子(例如运铁蛋白)。在另一示例中，ab可为适体，且可包括核酸或肽适体。
[1014]
在ab为包含至少一个抗原结合位点的部分的情况下，该部分优选为抗原结合肽或多肽。在一优选的实施例中，该部分为抗体或其抗原结合片段。
[1015]
在本发明的药物共轭物中术语“抗体”是指任何免疫球蛋白，优选全长免疫球蛋白。优选地，所述术语涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(诸如双特异性抗体)及其抗体片段，只要它们展现所需生物活性即可。抗体可来源于任何物种，但优选来源于啮齿动物，例如大鼠或小鼠、人类或兔来源。可替代地，抗体、优选单克隆抗体可为人类化抗体、嵌合抗体或其抗体片段。术语“嵌合抗体”也可包括“灵长类源化”抗体，其包含来源于非人类灵长类动物(例如旧大陆猴、猿等)的可变域抗原结合序列及人类恒定区序列。免疫球蛋白分子可为任何类型(例如igg、ige、igm、igd及iga)、类别(例如iggl、igg2、igg3、igg4、igal及iga2)或子类别的免疫球蛋白分子。
[1016]
术语“单克隆抗体”是指通过b谱系细胞(常常是杂交瘤)的单克隆产生的实质上均质的抗体分子群体(也即，除可少量存在的可能天然存在的突变以外，构成所述群体的各个抗体是相同的)。重要地，各单克隆具有相同抗原特异性，也即其针对抗原上的单一决定子。
[1017]
单克隆抗体可通过本技术领域中已知的方法产生。然而，举例而言，单克隆抗体可通过杂交瘤方法(kohler等人(1975)nature 256:495)、人类b细胞杂交瘤技术(kozbor等人，1983，immunology today 4:72)或ebv-杂交瘤技术(cole等人，1985，monoclonal antibodies and cancer therapy，alan r.liss，公司，第77-96页)制造。可替代地，可使用重组dna方法(参见us 4816567)产生单克隆抗体，或使用以下中所述的技术自噬菌体抗体库分离：clackson等人(1991)nature，352:624-628；marks等人(1991)j.moi.biol.，222:581-597。
[1018]
多克隆抗体为针对不同决定子(抗原决定基)的抗体。此非均质的抗体群体可使用本技术领域中熟知的多种方法自免疫动物的血清获得。
[1019]
术语“双特异性抗体”是指由两种不同单克隆抗体构成的人工抗体。其可经设计以
结合于单一抗原上的任一至两个相邻抗原决定基，借此增加亲合力与特异性，或结合两种不同抗原用于多种应用，但特定地，用于募集细胞毒性t细胞及自然杀伤(nk)细胞，或再靶向毒素、放射核种或细胞毒性药物以进行癌症治疗(holliger及hudson，nature biotechnology，2005，23(9)，1126-1136)。双特异性抗体可在一个臂中具有具第一结合特异性的混杂免疫球蛋白重链、及在另一臂中具有混杂免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)。此不对称结构有助于所需双特异性化合物自非所需的免疫球蛋白链组合分离，因为双特异性分子仅二分之一存在免疫球蛋白轻链，这提供了一种便捷的分离方式(wo 94/04690；suresh等人，methods in enzymology，1986，121:210；rodrigues等人，1993，j.of immunology151:6954-6961；carter等人，1992，bio/technology 10:163-167；carter等人，1995，j.of hematotherapy 4:463-470；merchant等人，1998，nature biotechnology 16:677-681)。
[1020]
制备混杂或双特异性抗体的方法是本技术领域中已知的。在一种方法中，双特异性抗体可通过两种不同fab或scfv模块的化学交联或基因融合使两种融合瘤融合成单一“四源杂交瘤”来产生(holliger及hudson，nature biotechnology，2005，23(9)，1126-1136)。
[1021]
术语“嵌合”抗体是指其中不同部分来源于不同动物物种的抗体。举例而言，嵌合抗体可自小鼠获得可变区且自人类获得恒定区。相比之下，“人类化抗体”主要来自人类，即使其含有非人类部分。具体而言，人类化抗体为人类免疫球蛋白(接受者抗体)，其中来自接受者的高变区的残基经来自具有所需特异性、亲和力及能力的诸如小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类动物的非人类物种的高变区的残基(供者抗体)置换。在一些情况下，人类免疫球蛋白的构架区(fr)残基经相应非人类残基置换。此外，人类化抗体可包含在接受者抗体或供体抗体中未发现的残基。进行这些修饰以进一步优化抗体性能。一般而言，人类化抗体将包含至少一个，典型地两个，可变域的大致全部，其中高变环的全部或大致全部与非人类免疫球蛋白的高变环对应，且fr的全部或大致全部为人类免疫球蛋白序列的fr。人类化抗体可选择地也包含免疫球蛋白恒定区(fc)(典型地，人类免疫球蛋白恒定区)的至少一部分。
[1022]
诸如嵌合及人类化单克隆抗体的重组抗体可通过本技术领域中已知的重组dna技术产生。完全人类抗体可使用不能表达内源性免疫球蛋白重链及轻链基因但可表达人类重链及轻链基因的转殖基因小鼠产生。转殖基因小鼠以正常方式用所选抗原进行免疫接种。针对抗原的单克隆抗体可使用常规的融合瘤技术获得。转殖基因小鼠具有的人类免疫球蛋白转殖基因在b细胞分化期间重排，且随后进行类别转换及体细胞突变。因此，使用此类技术，可产生治疗上适用的igg、iga、igm及ige抗体。关于用于产生人类抗体的此技术的综述，参见lonberg及huszar(1995，int.rev.immunol.13:65-93)。关于用于产生人类抗体及人类单克隆抗体的此技术及用于产生此类抗体的方案的详细论述，参见例如美国专利us5625126、us5633425、us5569825、us5661016、us5545806；各文献以全文引用的方式并入本文中。其他人类抗体可购自例如abgenix公司(freemont，ca)及genpharm(san jose，ca)。
[1023]
本发明的药物共轭物中术语“抗原结合片段”是指全长抗体的一部分，其中抗体的此类抗原结合片段保留对应全长抗体的抗原结合功能。抗原结合片段可包含抗体可变区的一部分，所述部分包含选自cdr1、cdr2及cdr3的至少一个、两个、优选三个cdr。抗原结合片段也可包含免疫球蛋白轻链及重链的一部分。抗体片段的示例包括fab、fab'、f(ab')2、scfv、
di-scfv、sdab及bite(双特异性t细胞接合分子)、fv片段(包括纳米抗体、双功能抗体、双功能抗体-fc融合物、三功能抗体及四功能抗体)；微型抗体；线性抗体；通过fab表达库产生的片段、抗独特型(抗id)抗体、cdr(互补决定区)及以上各者中任一者的免疫特异性结合于靶抗原(诸如癌细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原)的抗原决定基结合片段；单链或单域抗体分子，包括仅重链抗体，例如骆驼科vhh域及鲨鱼v-nar；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。相比之下，称为“抗体”的全长抗体为包含vl及vh结构域以及完整轻链及重链恒定域的抗体。
[1024]
抗体也可具有一或多个效应子功能，效应子功能是指可归因于抗体的fc区(天然序列fc区或根据本技术领域中的方法进行工程化以改变受体结合的氨基酸序列变异fc区)的生物活性。抗体效应子功能的示例包括ciq结合；补体依赖性细胞毒性；fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)；吞噬作用；细胞表面受体(诸如b细胞受体；bcr)的下调等。
[1025]
抗体也可为功能活性片段(在本文中也称为免疫活性部分)、免疫特异性结合于靶抗原(诸如癌细胞抗原、病毒抗原或微生物抗原)的抗体衍生物或类似物、或结合于肿瘤细胞的其他抗体。在此方面，功能活性意指所述片段、衍生物或类似物能够引发抗独特型抗体，所述抗独特型抗体识别的抗原与所述片段、衍生物或类似物源自的抗体所识别的抗原相同。特定地，在一例示性实施例中，免疫球蛋白分子的独特型的抗原性可通过缺失构架及cdr序列来增强，构架及cdr序列是特异性识别抗原的cdr序列的c端。为确定哪些cdr序列结合抗原，含有所述cdr序列的合成肽可与抗原一起通过本技术领域中已知的任何结合分析方法(例如bia核心分析)用于结合分析中，参见例如kabat等人，1991，sequences of proteins of immunological interest，第五版，national institute of health，bethesda，md；kabat e等人，1980，j.of immunology 125(3):961-969)。
[1026]
术语“抗体”也可包括抗体或其功能活性片段的融合蛋白，例如其中抗体在n端或c端经由共价键(例如肽键)与非所述抗体的另一蛋白质的氨基酸序列(或其部分，诸如所述蛋白质的至少10个、20个或50个氨基酸部分)融合。抗体或其片段可在恒定域的n端共价连接至其他蛋白质。
[1027]
此外，本发明的抗体或抗原结合片段可包括诸如通过共价连接任何类型的分子进行修饰的抗体或其抗原结合片段的类似物及衍生物，只要此类共价连接允许所述抗体保留其抗原结合免疫特异性即可。修饰的示例包括糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护基/阻隔基衍生化、蛋白水解裂解、连接至细胞抗体单元或其他蛋白质等。众多化学修饰中的任一者可通过已知的技术进行，所述技术包括(但不限于)特定化学裂解、乙酰化、甲酰化、在衣霉素(tunicamycin)存在下代谢合成等。另外，类似物或衍生物可含有一或多个非天然氨基酸。
[1028]
本发明的抗体或抗原结合片段也可在抗体的fc结构域中具有修饰(例如取代、缺失或添加)。具体而言，修饰可在fc-铰链区中且引起对fcrn受体的结合增加(wo 97/34631)。
[1029]
在一个实施例中，本发明药物共轭物中的抗体可以是任何抗体或其抗原结合片段，优选可用于治疗疾病，优选癌症，更优选以下癌症的单克隆抗体：肺癌(包括nsclc)、胃癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、子宫内膜癌、膀胱癌、宫颈癌、食管癌、胆囊癌、子宫癌、涎腺
导管癌、卵巢癌、肾癌、白血病、多发性骨髓瘤和淋巴瘤，其中癌症优选为her2阳性癌症，其中her2阳性癌症包括her2阳性肺癌(包括her2阳性nsclc)、her2阳性胃癌、her2阳性结直肠癌、her2阳性乳腺癌、her2阳性胰腺癌、her2阳性子宫内膜癌、her2阳性膀胱癌、her2阳性宫颈癌、her2阳性食管癌、her2阳性胆囊癌、her2阳性子宫癌、her2阳性涎腺导管癌和her2阳性卵巢癌，更优选her2阳性乳腺癌、her2阳性卵巢癌和her2阳性胃癌，最优选her2阳性乳腺癌。
[1030]
可适用于治疗癌症的抗体包括(但不限于)针对以下抗原的抗体：ca125(卵巢)、ca15-3(癌瘤)、ca19-9(癌瘤)、l6(癌瘤)、lewis y(癌瘤)、lewis x(癌瘤)、α胎蛋白(癌瘤)、ca 242(结肠直肠)、胎盘碱性磷酸酶(癌瘤)、前列腺特异性抗原(前列腺)、前列腺酸性磷酸酶(前列腺)、表皮生长因子(癌瘤)(例如egf受体2蛋白(乳腺癌))、mage-i(癌瘤)、mage-2(癌瘤)、mage-3(癌瘤)、mage-4(癌瘤)、抗运铁蛋白受体(癌瘤)、p97(黑素瘤)、mucl-klh(乳腺癌)、cea(结肠直肠)、gploo(黑素瘤)、martl(黑素瘤)、psa(前列腺)、il-2受体(t细胞白血病及淋巴瘤)、cd20(非霍奇金氏淋巴瘤)、cd52(白血病)、cd33(白血病)、cd22(淋巴瘤)、人类绒毛膜促性腺素(癌瘤)、cd38(多发性骨髓瘤)、cd40(淋巴瘤)、黏蛋白(癌瘤)、p21(癌瘤)、mpg(黑素瘤)及neu致癌基因产物(癌瘤)。一些适用的特定抗体包括(但不限于)br96 mab(trail，p.a.等人，science(1993)261，212-215)、br64(ttrail，pa等人，cancer research(1997)57，100-105)；针对cd40抗原的mab，诸如s2c6 mab(francisco，j.a.等人，cancer res.(2000)60:3225-3231)；针对cd70抗原的mab，诸如1f6 mab；及针对cd30抗原的mab，诸如aclo(bowen，m.a.等人，(1993)j.immunol.，151:5896-5906；wahl等人，2002cancer res.62(13):3736-3742)。可使用结合于肿瘤相关抗原的许多其他内化抗体且已予以评述(franke，a.e.等人，cancer biother radiopharm.(2000)15:459-476；murray，j.l.，(2000)semin oncol，27:64-70；breitling，f.及dubel，s.，recombinant antibodies，john wiley，and sons，new york，1998)。
[1031]
其他肿瘤相关抗原包括(但不限于)：bmpr1b、e16、steap1、steap2、0772p、mpf、napi3b、sema5b、psca hlg、etbr、msg783、trpm4、cripto、cd21、cd79b、fcrh2、her2、nca、mdp、il20rα、brevican、ephb2r、aslg659、psca、geda、baff-r、cd79a、cxcr5、hla-dob、p2x5、cd72、ly64、fcrh1、irta2及tenb2。
[1032]
在另一实施例中，抗体或抗原结合片段结合于诸如肿瘤细胞的细胞上存在的抗原决定基。优选地，在细胞为肿瘤细胞的情况下，肿瘤细胞抗原决定基不存在于非肿瘤细胞上，或以较低浓度或以不同于肿瘤细胞中的空间组态存在。
[1033]
在一个实施例中，抗体或抗原结合片段结合于在以下抗原中的一者的情况下存在的抗原决定基：ca125、ca15-3、ca19-9 l6、lewis y、lewis x、α胎蛋白、ca 242、胎盘碱性磷酸酶、前列腺特异性抗原、前列腺酸性磷酸酶、表皮生长因子(例如egf受体2蛋白)、mage-i、mage-2、mage-3、mage-4、抗运铁蛋白受体、p97、mucl-klh、cea、gploo、martl、psa、il-2受体、cd20、cd52、cd33、cd22、人类绒毛膜促性腺素、cd38、cd40、黏蛋白、p21、mpg、neu致癌基因产物、bmpr1b、e16、steap1、steap2、0772p、mpf、napi3b、sema5b、psca hlg、etbr、msg783、trpm4、cripto、cd21、cd79b、fcrh2、her2、nca、mdp、il20rα、短蛋白聚糖(brevican)、ephb2r、aslg659、psca、geda、baff-r、cd79a、cxcr5、hla-dob、p2x5、cd72、ly64、fcrh1、irta2、tenb2。
[1034]
在一个实施例中，在抗原为erbb2(也称为erbb2、cd340或her2；此类术语可互换使用)的情况下，抗体或抗原结合片段可结合于以下抗原决定基中的一或多者：arhc l(seq id no:1)、qngs(seq id no:2)及ppfcvarc psg(seq id no:3)。这些抗原决定基分别与人类her2多肽序列的位置557-561、570-573及593-603对应(寄存号：nm_004448，版本：nm_004448.3)。
[1035]
结合所关注的分子靶标或抗原，例如erbb2抗原的抗体为能够以足够亲和力结合所述抗原，使得抗体可用于靶向表达所述抗原的细胞的抗体。在抗体为结合erbb2的抗体的情况下，通常与其他erbb受体相反，其优先结合erbb2，且可为不与诸如egfr、erbb 3或erbb4的其他蛋白质显著交叉反应的抗体。在此类实施例中，如通过荧光激活细胞分选(facs)分析或放射免疫沉淀(ria)所测定，抗体与这些非erbb2蛋白的结合程度(例如与内源性受体的细胞表面结合)将小于10％。有时，抗erbb2抗体不与大鼠neu蛋白显著交叉反应，例如如schecter等人，nature 312:513-516(1984)及drebin等人，nature 312:545-548(1984)中所述。
[1036]
在另一实施例中，本发明的药物共轭物的抗体或靶标可选自以下表中的抗体或靶标。此类抗体对靶抗原具有免疫特异性，且可商购获得，或通过本技术领域中已知的任何方法(诸如重组表达技术)产生。
[1037]
表1：治疗性单克隆抗体
[1038]
[1039]
[1040]
[1041]
[1042]
[1043]
[1044]
[1045]
[1046]
[1047]
[1048]
[1049]
[1050]
[1051]
[1052]
[1053]
[1054][1055]
除以上之外，本发明的药物抗体共轭物的抗体可为vitaxin，其为用于治疗肉瘤的人类化抗体；smart idio，其为用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤的人类化抗hla-dr抗体；oncolym，其为用于治疗非霍奇金氏淋巴瘤的放射性标记鼠类抗hla-drlo抗体；以及allomune，其为用于治疗霍奇金氏病或非霍奇金氏淋巴瘤的人类化抗cd2 mab。
[1056]
本发明的药物共轭物的抗体也可为已知用于治疗任何疾病，优选癌症的任何抗体片段。同样，此类抗体片段对靶抗原具有免疫特异性，且可商购获得，或通过本技术领域中已知的任何方法(诸如重组表达技术)产生。可利用的此类抗体的示例包括来自下表的任一者。
[1057]
表2：治疗性单克隆抗体片段
[1058]
[1059]
[1060]
[1061]
[1062][1063]
fab抗原结合片段(一臂)
[1064]
f(ab')2抗原结合片段，包括铰链区(两个臂)
[1065]
fab'抗原结合片段，包括铰链区(一个臂)
[1066]
scfv单链可变片段
[1067]
di-scfv二聚单链可变片段
[1068]
(holliger及hudson，nature biotechnology，2005，23(9)，1126-1136)。
[1069]
在一优选的具体实施例中，本发明的药物共轭物中的抗体靶向细胞表面抗原。
[1070]
在优选的实施例中，本发明的药物共轭物中的抗体可结合于由erbb基因编码的受体。抗体可特异性结合于选自egfr、her2、her3及her4的erbb受体。优选地，药物共轭物中的抗体可特异性结合于her2受体的细胞外域，且抑制过度表达所述her2受体的肿瘤细胞的生长。药物共轭物的抗体可为单克隆抗体，例如鼠类单克隆抗体、嵌合抗体或人类化抗体。优选地，人类化抗体可为humab4d5-1、humab4d5-2、humab4d5-3、humab4d5-4、humab4d5-5、humab4d5-6、humab4d5-7或humab4d5-8(曲妥珠单抗)，尤其优选曲妥珠单抗。抗体也可为抗体片段，例如fab片段。
[1071]
其他优选抗体包括：
[1072]
(i)抗cd4抗体。药物共轭物的抗体可为单克隆抗体，例如鼠类单克隆抗体、嵌合抗体或人类化抗体；
[1073]
(ii)抗cd5抗体。药物共轭物的抗体可为单克隆抗体，例如鼠类单克隆抗体、嵌合抗体或人类化抗体；
[1074]
(iii)抗cd13抗体。药物共轭物的抗体可为单克隆抗体，例如鼠类单克隆抗体、嵌合抗体或人类化抗体；
[1075]
(iv)抗cd20抗体。药物共轭物的抗体可为单克隆抗体，例如鼠类单克隆抗体、嵌合抗体或人类化抗体。优选地，人类化抗体为利妥昔单抗或其抗体片段，例如fab片段；以及
[1076]
(v)抗cd30抗体。药物共轭物的抗体可为单克隆抗体，例如鼠类单克隆抗体、嵌合抗体或人类化抗体。优选地，人类化抗体为本妥昔单抗维多汀或其抗体片段。
[1077]
在本发明的一个实施例中，药物抗体共轭物可显示以下各者中的一或多者：(i)细胞毒性增加(或细胞存活减少)、(ii)细胞生长抑制活性(细胞生长抑制)增加、(iii)与靶抗原或抗原决定基结合的亲和力增加、(iv)共轭物内化增加、(v)患者副作用减轻及/或(vi)毒性特征改善。此类增加可相对于本技术领域中结合相同或不同抗原决定基或抗原的已知药物抗体共轭物。
[1078]
用于制备药物抗体共轭物的方法
[1079]
本发明的药物抗体共轭物可根据本技术领域中熟知的技术制备。使用不同方法将包含至少一个抗原结合位点的部分，诸如抗体，共轭至大量不同药物的方法已在先前有描述，并例示于例如wo-a-2004/010957、wo-a-2006/060533及wo-a-2007/024536中，其内容以引入的方式并入本文中。这些包括使用连接子基团，所述连接子基团以使药物、毒素或放射性核素接着可连接至所述部分(诸如抗体)的方式将药物、毒素或放射性核素衍生化。典型地，通过三个途径之一连接至所述部分(诸如抗体)：经由抗体中的二硫基部分还原之后半胱氨酸中的游离巯基；经由抗体中的离氨酸中的游离氨基；以及经由抗体中的丝氨酸及/或苏氨酸中的游离羟基。连接方法视所述部分(诸如抗体)上连接的位点而变化。也描述了通过尺寸排阻层析(sec)纯化抗体-药物共轭物[参见例如liu等人，proc.natl.acad.set(usa)，93:8618-8623(1996)及chari等人，cancer research，52:127-131(1992)]。
[1080]
如前面所指出，提供一种制备根据本发明的药物共轭物的方法，其包含使包含至少一个抗原结合位点的部分ab与式(i)或(ih)的药物d共轭，ab及d如本文所定义。
[1081]
制备本发明的药物共轭物的方法的一示例包括制备本发明的如下式(g)或(g')的药物抗体共轭物：
[1082][1083]
所述方法包括以下步骤：
[1084]
(i)使式(ih)-h的药物(d-h)：
[1085][1086]
其中(ih)-h的定义中的取代基如上文关于式(ih)所定义，与式(d')或(e)的化合
物反应：
[1087][1088]
分别得到式(f)或(f')的化合物：
[1089][1090]
(ii)使待共轭的抗体中的一或多个二硫键部分还原，得到经还原的具有游离巯基的抗体ab-sh：
[1091]
且
[1092]
(iii)使经部分还原的具有游离巯基的抗体ab-sh与步骤(i)中产生的式(f)或(f')的化合物反应，分别得到式(g)或(g')的所需药物抗体共轭物：
[1093][1094]
在此方法的另一个优选的实施例中，所述抗体选自本妥昔单抗、吉妥珠单抗、奥英妥珠单抗、洛伐妥珠单抗、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体，或其抗原结合片段或免疫活性部分，或其选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，且其最优选为曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分。此外，此单克隆抗体的部分还原使用三[2-羧基乙基]膦盐酸盐(tcep)进行。
[1095]
用于制备本发明的药物共轭物的方法的另一实施例包括制备如下式(w)或(w')的药物抗体共轭物：
[1096][1097][1098]
所述方法包含以下步骤：
[1099]
(i)使所述抗体与2-亚氨基硫烷盐酸盐(traut
′
s试剂)反应，得到巯基活化的抗体：
[1100][1101]
(ii)使所述巯基活化的抗体与所述式(f)或(f')的化合物反应，分别得到式(w)或(w')的所需药物抗体共轭物。
[1102][1103]
在此方法的另一个优选的实施例中，所述抗体选自本妥昔单抗、吉妥珠单抗、奥英妥珠单抗、洛伐妥珠单抗、抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)、抗cd4抗体、抗cd5抗体、抗cd13抗体及抗cd30抗体，或其抗原结合片段或免疫活性部分，或其选自抗her2抗体(例如曲妥珠单抗)及抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，且其最优选为曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分。
[1104]
用于制备本发明的药物抗体共轭物的方法的另一示例包括制备如下式(o)或(p)的药物抗体共轭物：
[1105][1106]
所述方法包含以下步骤：
[1107]
(i)：
[1108]
(a)使式(ih)-h的药物(d-h)：
[1109][1110]
其中(ih)-h的定义中的取代基如上所定义，与其中x1及x2为离去基的式x
2-c(o)-x1的化合物反应，得到式(b)化合物：
[1111][1112]
且所述-(c＝o)x1部分的连接点为式d-h的化合物的游离-nh2基团，或
[1113]
(b)使如上所定义的式(ih)-h的药物(d-h)与4-硝基-苯基氯甲酸酯反应，得到式(j)化合物：
[1114][1115]
且(4-硝基苯基)-o-co-基团的连接点与以上(a)中的x1(co)部分的连接点相同；
[1116]
(ii)：
[1117]
(c)使步骤(i)中产生的所述式(b)的化合物与式ho-(ch2)
1-6
nhprot
nh
的羟基化合物反应且自偶合的化合物移除prot
nh
基团，得到式(c)化合物：
[1118][1119]
且接着使式(c)的化合物与式me-s-s-(ch2)
1-3-co2h的化合物反应，得到式(k)化合物：
[1120]
或者
[1121]
(d)使步骤(i)中产生的化合物(j)与式ho-(ch2)
1-3
sprot
sh
的化合物反应且自偶合的化合物移除prot
sh
基团，得到式(l)化合物：
[1122][1123]
(iii)使步骤(ii)中产生的(k)或(l)与二硫苏糖醇在二硫键还原条件下反应，分别得到式(m)及(n)化合物：
[1124][1125]
(iv)使待共轭的抗体与丁二酰亚胺基-4-(n-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯反应，以在一或多个离氨酸基处用丁二酰亚胺基-4-(n-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-羰基将所述抗体衍生化：
[1126][1127]
(v)使步骤(iv)中产生的衍生抗体与步骤(iii)中产生的(m)或(n)反应，得到式(o)或(p)的所需药物抗体共轭物：
[1128][1129]
式x
2-c(o)-x1的化合物优选为1，1'-羰基二咪唑。类似地，与式(b)的化合物反应的羟基化合物优选为ho-(ch2)
2-4-nhprot
nh
，且更优选为ho-(ch2)
3-nhprot
nh
。
[1130]
在本发明的一个优选的实施例中，与式(c)的化合物反应得到式(k)的化合物的化合物为3-(甲基二硫烷基)丙酸。
[1131]
在另一优选的实施例中，与式(j)的化合物反应得到式(l)的化合物的化合物ho-(ch2)
1-3
sprot
sh
为ho-(ch2)3sprot
sh
。
[1132]
在与药物连接部分的连接是在包含至少一个抗原结合位点的部分(诸如单克隆抗体)中的二硫键基团的部分还原之后经由半胱氨酸中的游离巯基的情况下，所述部分还原
典型地通过以下进行：首先稀释至合适浓度且缓冲溶液，接着借助于添加诸如三[2-羧基乙基]膦盐酸盐(tcep)或二硫苏糖醇(dtt)的合适还原剂将二硫键部分还原。通过挑选待还原的部分(诸如单克隆抗体)与还原剂的适当比率、还原的反应条件及时间，可获得所需的游离巯基与部分的比率，例如每个单克隆抗体四个游离巯基。
[1133]
接着使如上所述制备的经部分还原的部分(诸如经部分还原的具有游离巯基的单克隆抗体)与本发明的式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-l1的药物-连接子化合物(其中此类化合物中的基团l1为顺丁烯二酰亚胺基，其自由地与巯基反应)反应。所得药物抗体共轭物通过本技术领域中已知的任何适合方式，例如通过尺寸排阻层析(sec)来纯化[参见例如liu等人，proc.natl.acad.sci.usa，93:8618-8623(1996)及chari等人，cancer research，52:127-131(1992)]。
[1134]
在本发明的一个优选的实施例中，经部分还原的单克隆抗体为抗her2抗体(诸如曲妥珠单抗)或抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分，优选为曲妥珠单抗或其抗原结合片段或免疫活性部分；或优选为抗cd13抗体或其抗原结合片段或免疫活性部分。
[1135]
在本发明的一替代实施例中，包含至少一个抗原结合位点的部分(诸如单克隆抗体)中的离氨酸可首先与丁二酰亚胺基-4-(n-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯反应。抗体上的游离氨基可与n-羟基丁二酰亚胺酯反应，得到顺丁烯二酰亚胺活化的抗体：
[1136][1137]
接着顺丁烯二酰亚胺活化的抗体可与具有活性巯基部分的式d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-h的化合物反应。
[1138]
在本发明的一替代实施例中，包含至少一个抗原结合位点的部分(诸如单克隆抗体)中的离氨酸可首先与2-亚氨基硫烷盐酸盐(traut
′
s试剂)反应。抗体上的游离氨基可与亚胺硫代内酯反应，得到巯基活化的抗体。
[1139][1140]
图1显示通过在抗体中的二硫键基团的部分还原之后经由半胱氨酸中的游离巯基进行共轭，用于制备本发明的式[d-(x)
b-(aa)w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物抗体共轭物的方法的一特定示例。
[1141]
图2显示通过在抗体与特氏试剂反应之后利用离氨酸中的游离氨基进行共轭，用于制备本发明的式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物抗体共轭物的方法的另一特定示
例。
[1142]
包含本发明的药物抗体共轭物的组合物及其用途
[1143]
也提供一种药物组合物，其包含根据本发明的药物共轭物及药学上可接受的载剂。本发明的具有通式[d-(x)
b-(aa)
w-(t)
g-(l)-]
n-ab的药物共轭物的施用形式的示例包括但不限于经口、局部、非经肠、舌下、经直肠、经阴道、经眼及鼻内。非经肠施用包括皮下注射、静脉内、肌肉内、胸骨内注射或输注技术。优选地，组合物非经肠施用。本发明的药物组合物可经调配以便允许在向动物、优选人类施用组合物后本发明的药物共轭物为生物可用的。组合物可采取一或多个剂量单元的形式，其中例如锭剂可为单一剂量单位，且本发明的呈气雾剂形式的药物抗体共轭物的容器可容纳多个剂量单元。
[1144]
药学上可接受的载剂或媒剂可为微粒，以使得组合物例如呈锭剂或散剂形式。一或多种载剂可为液体，其中组合物为例如口服糖浆或可注射液体。另外，一或多种载剂可为气体，以便提供可用于例如吸入施用的气雾剂组合物。术语“载剂”是指稀释剂、佐剂或赋形剂，本发明的药物抗体共轭物与其一起施用。此类药物载剂可为液体，诸如水及油(包括石油、动物、植物或合成来源的油(诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油及其类似物))。多种载剂可为盐水、阿拉伯胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶态二氧化硅、尿素及其类似物。另外，可使用助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂及着色剂。在一个实施例中，当施用给动物时，本发明的药物抗体共轭物或组合物及药学上可接受的载剂是无菌的。当本发明的药物抗体共轭物静脉内施用时，水为优选的载剂。也可使用生理食盐水溶液及右旋糖水溶液及甘油溶液作为液体载剂，尤其用于可注射溶液。适合的药物载剂也包括赋形剂，诸如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻谷、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇及其类似物。必要时，本发明的组合物也可含有少量润湿剂或乳化剂，或ph缓冲剂。
[1145]
当意欲经口施用时，药物组合物优选为固体或液体形式，其中半固体、半液体、悬浮液及凝胶形式包括在本文视为固体或液体的形式内。
[1146]
作为用于口服施用的固体组合物，组合物可调配为散剂、颗粒剂、压缩锭剂、丸剂、胶囊、口嚼锭、粉片或类似形式。此类固体组合物典型地含有一或多种惰性稀释剂。另外，可存在以下中的一或多者：黏合剂，诸如羧基甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素或明胶；赋形剂，诸如淀粉、乳糖或糊精；崩解剂，诸如海藻酸、海藻酸钠、玉米淀粉及其类似物；润滑剂，诸如硬脂酸镁；滑动剂，诸如胶态二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精；调味剂，诸如胡椒薄荷、水杨酸甲酯或柑橘调味剂；及着色剂。
[1147]
当组合物呈胶囊(例如明胶胶囊)形式时，除以上类型的材料之外，其也可含有液体载剂，诸如聚乙二醇、环糊精或脂肪油。
[1148]
组合物可呈液体形式，例如酏剂、糖浆、溶液、乳液或悬浮液。液体可用于经口施用或用于通过注射输送。当意欲用于经口施用时，组合物可包含甜味剂、防腐剂、染料/着色剂及味道增强剂中的一或多者。在通过注射施用的组合物中，也可包括表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、缓冲剂、稳定剂及等张剂中的一或多者。
[1149]
优选施用途径为非经肠施用，包括(但不限于)皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、鼻内、脑内、室内、鞘内、阴道内或经皮。优选施用模式由执业医生来判断，且部分可视医学病状的部位(诸如癌症部位)而定。在一个更优选的实施例中，本发明的药
物抗体共轭物经静脉内施用。
[1150]
本发明的液体组合物无论为溶液、悬浮液还是其他类似形式，其也可包括以下各者中的一或多者：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐水溶液(优选生理盐水)、林格氏溶液(ringer'ssolution)、等张氯化钠、不挥发性油(诸如合成甘油单酯或甘油二酯、聚乙二醇、甘油)或其他溶剂；抗细菌剂，诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；以及用于调整张力的试剂，诸如氯化钠或右旋糖。非经肠组合物可封闭于由玻璃、塑胶或其他材料制成的安瓿、抛弃式注射器或多剂量小瓶中。生理盐水为优选的佐剂。
[1151]
本发明的药物共轭物有效治疗特定病症或病状的量将视病症或病状的性质而定，且可通过标准临床技术确定。另外，可选择地采用试管内或活体内分析来帮助鉴别最优选剂量范围。待用于组合物中的精确剂量也将视施用途径及疾病或病症的严重性而定，且应根据执业医师的判断及各患者的情况来决定。
[1152]
组合物包含有效量的本发明的药物共轭物，以便获得合适剂量。化合物的正确剂量将根据特定调配物、应用模式及其治疗的特定部位、宿主及疾病，例如癌症及何种类型肿瘤(若为癌症)变化。应顾及其他因素，如年龄、体重、性别、饮食、施用时间、分泌速率、宿主状况、药物组合、反应敏感性及疾病严重程度。施用可在最大耐受剂量内连续或周期性进行。
[1153]
本发明的药物共轭物或组合物可通过任何适宜途径施用，例如通过输注或快速注射，通过经上皮或黏膜皮肤内衬吸收。
[1154]
在特定实施例中，可能需要局部施用本发明的一或多种药物共轭物或组合物至需要治疗的区域。在一个实施例中，施用可通过直接注射在癌症、肿瘤或肿瘤组织或肿瘤形成前组织的部位(或形成部位)。在另一实施例中，施用可通过直接注射在自体免疫疾病的显现部位(或形成部位)。
[1155]
也可采用经肺施用，例如通过使用吸入器或喷雾器，且用气雾剂调配，或经由在氟碳化合物或合成的肺表面活性剂中的灌注液。在某些实施例中，本发明的药物抗体共轭物或组合物可用传统黏合剂及载剂(诸如甘油三酯)调配为栓剂。
[1156]
本发明组合物可采取以下形式：溶液、悬浮液、乳液、锭剂、丸剂、丸粒、胶囊、含液体的胶囊、散剂、持续释放调配物、栓剂、乳液、气雾剂、喷雾剂、悬浮液或适用于使用的任何其他形式。合适药物载剂的其他示例描述于e.w.martin的“remington's pharmaceutical sciences”中。
[1157]
药物组合物可通过医药领域中熟知的方法制备。举例而言，意欲通过注射施用的组合物可通过本发明的药物共轭物与水组合形成溶液来制备。可添加表面活性剂以促进均匀溶液或悬浮液形成。
[1158]
已发现本发明的药物共轭物及组合物尤其有效地治疗癌症。
[1159]
因此，如前所述，本发明提供一种治疗患有癌症的有需要的患者、尤其人类的方法，其包含向所述患病个体施用治疗有效量的本发明的药物共轭物或组合物。本发明提供了根据本发明的药物缀合物，其用于治疗癌症，更优选选自以下的癌症：肺癌(包括nsclc)、胃癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、子宫内膜癌、膀胱癌、宫颈癌、食管癌、胆囊癌、子宫癌、涎腺导管癌、卵巢癌、肾癌、白血病、多发性骨髓瘤和淋巴瘤。最优选的癌症是乳腺癌。优选的癌症为her2阳性癌症，其中her2阳性癌症包括her2阳性肺癌(包括her2阳性nsclc)、her2阳
性胃癌、her2阳性结直肠癌、her2阳性乳腺癌、her2阳性胰腺癌、her2阳性子宫内膜癌、her2阳性膀胱癌、her2阳性宫颈癌、her2阳性食管癌、her2阳性胆囊癌、her2阳性子宫癌、her2阳性涎腺导管癌和her2阳性卵巢癌，更优选her2阳性乳腺癌、her2阳性卵巢癌和her2阳性胃癌，最优选her2阳性乳腺癌。
[1160]
本发明的药物共轭物及组合物可用于抑制肿瘤细胞或癌细胞的繁殖，或用于治疗动物的癌症。本发明的药物共轭物及组合物因此可用于多种环境中用于治疗动物癌症。本发明的包含药物-连接子-包含至少一个抗原结合位点的部分的共轭物可用于递送药物或药物单元至肿瘤细胞或癌细胞。不受理论束缚，在一个实施例中，本发明的药物共轭物的包含至少一个抗原结合位点的部分与癌细胞或肿瘤细胞相关抗原结合或缔合，且本发明的药物共轭物可经由受体介导的内吞作用吸收在肿瘤细胞或癌细胞内。抗原可连接至肿瘤细胞或癌细胞或可为与肿瘤细胞或癌细胞缔合的细胞外基质蛋白质。一旦在细胞内，连接子单元内的一或多个特定序列由一或多种肿瘤细胞或癌细胞相关的蛋白酶或水解酶水解裂解，从而释放药物或药物-连接子化合物。随后，所释放的药物或药物-连接子化合物在细胞中自由迁移且诱发细胞毒性活性。在一替代实施例中，药物或药物单元在肿瘤细胞或癌细胞外自本发明的药物共轭物裂解，且药物或药物-连接子化合物随后会渗透细胞。
[1161]
在一个实施例中，包含至少一个抗原结合位点的部分结合于肿瘤细胞或癌细胞。在另一实施例中，包含至少一个抗原结合位点的部分结合于在肿瘤细胞或癌细胞的表面上的肿瘤细胞或癌细胞抗原。在另一实施例中，包含至少一个抗原结合位点的部分结合于作为与肿瘤细胞或癌细胞相关联的细胞外基质蛋白的肿瘤细胞或癌细胞抗原。
[1162]
包含至少一个抗原结合位点的部分对特定肿瘤细胞或癌细胞的特异性对于确定最有效治疗的那些肿瘤或癌症而言是重要的。举例而言，本发明的具有曲妥珠单抗单元的药物共轭物可用于治疗抗原阳性癌，包括白血病、肺癌、结肠癌、淋巴瘤(例如霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤)、实体肿瘤(诸如肉瘤及癌瘤)、多发性骨髓瘤、肾癌及黑素瘤。优选地，癌症可为肺癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰脏癌、肾癌、白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤或卵巢癌。举例而言，本发明的具有利妥昔单抗单元的药物共轭物可用于治疗表达cd-20的肿瘤，诸如血液癌症，包括白血病及淋巴瘤。举例而言，本发明的具有抗cd4抗体单元的药物共轭物可用于治疗表达cd-4的肿瘤，诸如血液癌症，包括淋巴瘤。举例而言，本发明的具有抗cd5抗体单元的药物共轭物可用于治疗表达cd-5的肿瘤，诸如血液癌症，包括白血病及淋巴瘤。举例而言，本发明的具有抗cd13抗体单元的药物共轭物可用于治疗表达cd-13的肿瘤，诸如血液癌症，包括白血病及淋巴瘤。
[1163]
可用本发明的药物共轭物治疗的癌症的其他特定类型包括(但不限于)：血源性癌症，包括白血病的所有形式；淋巴瘤，诸如霍奇金氏病、非霍奇金氏淋巴瘤及多发性骨髓瘤。
[1164]
特定而言，本发明的药物共轭物及组合物展示治疗乳腺癌的极优活性。
[1165]
本发明的药物共轭物及组合物提供共轭物特定的肿瘤或癌症靶向，因此降低这些共轭物的总体毒性。连接子单元使药物抗体共轭物在血液中稳定，而可通过细胞内的肿瘤特异性蛋白酶及水解酶裂解，释出药物。
[1166]
可向也已经历手术作为癌症的治疗的动物施用本发明的药物共轭物及组合物。在本发明的一个实施例中，额外的治疗方法为放射线疗法。
[1167]
在本发明的一特定实施例中，本发明的药物共轭物或组合物可与放射线疗法一起
施用。放射线疗法可与本发明的药物共轭物或组合物治疗同时、在其之前或之后施用。在一实施例中，本发明的药物共轭物或组合物与放射线疗法同时施用。在另一特定实施例中，在施用本发明的药物共轭物或组合物之前或之后，优选施用本发明的药物抗体共轭物或组合物之前或之后至少一小时、五小时、12小时、一天、一周、一个月、更优选几个月(例如长达三个月)施用。
[1168]
关于放射线，任何放射线疗法方案可视待治疗的癌症类型而使用。举例而言，但不作为限制，可施用x射线辐射；特定而言，高能兆伏数(超过1mev能量的放射线)可用于深部肿瘤，且电子束及正电压射线辐射可用于皮肤癌。也可施用发射γ射线的放射性同位素，诸如镭、钴及其他元件的放射性同位素。
[1169]
在本发明中，提供一种试剂盒，其包含根据本发明的治疗有效量的药物共轭物及药学上可接受的载剂。在一实施例中，提供一种试剂盒，其包含根据本发明的组合物及可选择的治疗癌症且更优选选自肺癌(包括nsclc)、胃癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、子宫内膜癌、膀胱癌、宫颈癌、食管癌、胆囊癌、子宫癌、涎腺导管癌、卵巢癌、肾癌、白血病、多发性骨髓瘤和淋巴瘤的癌症的使用说明书。
[1170]
在一个实施例中，根据此方面的试剂盒用于治疗癌症且更优选选自肺癌(包括nsclc)、胃癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、子宫内膜癌、膀胱癌、宫颈癌、食管癌、胆囊癌、子宫癌、涎腺导管癌、卵巢癌、肾癌、白血病、多发性骨髓瘤和淋巴瘤的癌症。最优选试剂盒用于治疗乳腺癌。
附图说明
[1171]
在附图中通过示例的方式示意性地示出了本发明，其中：
[1172]
图1是根据本发明的一种方法的示意图，其中通过游离巯基与抗体共轭；
[1173]
图2是根据本发明的一种方法的示意图，其中通过游离氨基与抗体共轭。
[1174]
示例
[1175]
通过以下非限制性示例进一步说明本发明。在示例中，使用以下缩写：
[1176]
cdi，1，1'-羰基二咪唑
[1177]
dipea，n，n-二异丙基乙胺
[1178]
hex，己烷
[1179]
etoac，乙酸乙酯
[1180]
dcm，二氯甲烷
[1181]
nmp，n-甲基-2-吡咯啶酮
[1182]
dmf，二甲基甲酰胺
[1183]
edc，n-(3-二甲氨基丙基)-n'-乙基碳化二亚胺盐酸盐
[1184]
edta，乙二胺四乙酸
[1185]
meoh，甲醇
[1186]
dtt，二硫苏糖醇
[1187]
py，吡啶
[1188]
thf，四氢呋喃
[1189]
tcep，三[2-羧基乙基]膦盐酸盐
[1190]
mc，6-顺丁烯二酰亚胺基己酰基
[1191]
fmoc，9-芴基甲氧基羰基
[1192]
cit，瓜氨酸
[1193]
val，缬氨酸
[1194]
dmso，二甲亚砜
[1195]
trt，三苯甲基
[1196]
hobt，1-羟基苯并三唑
[1197]
dipcdi，n，n'-二异丙基碳化二亚胺
[1198]
tfa，三氟乙酸
[1199]
paboh，4-氨基苯甲醇
[1200]
bis-pnp，碳酸双(4-硝基苯基)酯
[1201]
nac，n-乙酰半胱氨酸
[1202]
sec，尺寸排阻层析
[1203]
hplc，高效液相层析
[1204]
adc，抗体药物共轭物
[1205]
atcc，美国菌种保存中心
[1206]
dmem，达尔伯克改良伊格尔培养基(dulbecco's modified eagle's medium)
[1207]
rpmi，洛斯维帕克纪念研究所(roswell park memorial institute)培养基
[1208]
its，胰岛素-运铁蛋白-亚硒酸钠培养基补充剂
[1209]
fcs，胎牛血清
[1210]
srb，磺酰罗丹明b(sulforhodamine b)
[1211]
pbs，磷酸盐缓冲盐水
[1212]
dr，剂量反应
[1213]
uv，紫外光
[1214]
smcc，丁二酰亚胺基-4-(n-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯
[1215]
lar，连接子与抗体的比率
[1216]
示例1合成药物
[1217]
按照wo2003066638中描述的方法(分别为示例69和65，第112-116页)获得化合物1和2。
[1218]
按照wo2003066638中描述的方法(示例12，第61-62页)获得化合物4。
[1219]
通过wo2018197663中描述的方法(示例8，第97-98页)获得化合物8-s和8-r。
[1220]
通过wo2018197663中描述的方法(示例19，第117页)获得化合物16-s。
[1221]
示例1-1
[1222]
a)
[1223][1224]
向4(35mg，0.054mmol)于乙酸(0.7ml，0.08m)中的溶液中加入l-色氨酸(36mg，0.189mmol，sigma-aldrich)。将反应混合物在50℃下搅拌3小时，然后蒸发乙酸。加入饱和nahco3水溶液，用ch2cl2萃取混合物。将合并的有机层用na2so4干燥。快速柱层析(己烷：etoac，1：1)得到纯化合物5-s(28mg，63％)。
[1225]
rf＝0.25(己烷：etoac，1：1)。
[1226]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.72(s,1h),7.35(d,j＝7.9hz,1h),7.26(d,j＝7.9hz,1h),7.12(t,j＝7.9hz,1h),7.02(t,j＝8.0hz,1h),6.62(s,1h),6.25(s,1h),6.03(s,1h),5.91-5.80(m,1h),5.75(s,1h),5.17-5.04(m,3h),4.60(s,1h),4.41(s,1h),4.36(d,j＝11.5hz,1h),4.29(dd,j＝11.7,2.1hz,1h),4.22(d,j＝2.7hz,1h),3.81(s,3h),3.59-3.44(m,3h),3.35(dd,j＝11.1,9.0hz,1h),2.97-2.64(m,5h),2.61(dd,j＝15.3,4.6hz,1h),2.43-2.29(m,1h),2.37(s,3h),2.28(s,3h),2.05(s,3h).
[1227]
esi-ms m/z：c
44h45
n5o9s的计算值：819.3。实验值：820.3(m 1)
。
[1228]
b)
[1229][1230]
向5-s(26mg，0.032mmol)于ch2cl2中的溶液中加入pdcl2(pph3)2(13mg,0.02mmol)、乙酸(0.069ml,1.2mmol)、以及hsnbu3(0.17ml，0.64mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌2小时。将粗产物真空浓缩。快速柱层析(己烷：etoac，1：9至9：1)得到纯化合物6-s(17mg,68％)。
[1231]
rf＝0.15(己烷：etoac，1：1)。
[1232]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.74(s,1h),7.38(d,j＝7.9hz,1h),7.26(d,j＝7.9hz,1h),7.12(t,j＝8.0hz,1h),7.02(t,j＝7.9hz,1h),6.63(s,1h),6.26(s 1h),6.03(s,1h),5.82(s,1h),5.15(d,j＝11.6hz,1h),4.59(s,1h),4.50(d,j＝5.1hz,1h),4.41(s,1h),4.29(dd,j＝11.7,2.1hz,1h),4.22(d,j＝2.7hz,1h),3.90-3.81(m,1h),3.80(s,3h),3.67-3.49(m,1h),3.49(d,j＝5.2hz,1h),3.36(dd,j＝11.0,9.1hz,1h),3.11-2.85(m,3h),2.60(dd,j＝15.3,4.5hz,1h),2.42(d,j＝15.3hz,1h),2.38-2.22(m,2h),2.35(s,
3h),2.25(s,3h),2.06(s,3h).
[1233]
esi-ms m/z：c
41h41
n5o9s的计算值：779.3。实验值：780.2(m 1)
。
[1234]
c)
[1235][1236]
向6-s(14mg,0.018mmol)于ch3cn:h2o(1.39:1,1.3ml,0.015m)的溶液中加入agno3(61mg,0.36mmol)。在23℃下17小时后，用1：1的盐水和nahco3的饱和水溶液的混合物淬灭反应，搅拌15分钟，用ch2cl2稀释，搅拌5分钟，并用ch2cl2萃取。将合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。通过快速柱层析(ch2cl2:ch3oh，99：1至85：15)纯化所得残余物，得到纯7-s(3mg，22％)。
[1237]
rf＝0.15(ch2cl2:ch3oh,9:1).
[1238]1h nmr(500mhz,cd3od):δ7.70(s,1h),7.35(d,j＝7.9hz,1h),7.26(d,j＝7.9hz,1h),7.11(t,j＝8.2hz,1h),7.02(t,j＝8.2hz,1h),6.63(s,1h),6.23(s,1h),6.01(s,1h),5.76(s,1h),5.26(d,j＝11.5hz,1h),4.92(s,1h),4.54(s,1h),4.48(s,2h),4.37(d,j＝5.3hz,1h),4.21(d,j＝10.2hz,1h),3.80(s,3h),3.67-3.50(m,4h),3.36(t,j＝10.2hz,1h),3.04-2.82(m,3h),2.61(dd,j＝15.2,5.8hz,1h),2.42-2.28(m,2h),2.36(s,3h),2.27(s,3h),2.02(s,3h).
[1239]
esi-ms m/z：c
40h42
n4o
10
s的计算值：770.3。实验值：753.2(m-h2o 1)
。
[1240]
示例1-2
[1241]
a)
[1242][1243]
向4(400mg，0.62mmol)于乙酸(8ml，0.08m)的溶液中加入8-s(468mg，2.13mmol)。将反应混合物在52℃下搅拌17小时，然后蒸发乙酸。加入饱和nahco3水溶液，用ch2cl2萃取混合物。将合并的有机层用na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。快速柱层析(己烷：etoac，1：1)得
到纯化合物9-s(325mg，62％)。
[1244]
rf＝0.30(己烷：etoac，1：1)。
[1245]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.65(s,1h),7.16(d,j＝8.6hz,1h),6.78(s,1h),6.77(m,1h),6.62(s,2h),6.23(d,j＝1.3hz,2h),6.02(d,j＝1.3hz,2h),5.85(dddd,j＝17.1,10.2,6.8,5.8hz,1h),5.75(s,1h),5.15-5.00(m,3h),4.59(s,1h),4.43-4.22(m,4h),3.80(s,3h),3.78(s,3h),3.53(d,j＝12.9hz,2h),3.46(d,j＝5.0hz,1h),3.38(s,1h),2.93(s,1h),2.86(d,j＝4.4hz,1h),2.85-2.70(m,2h),2.58(dd,j＝15.2,4.6hz,1h),2.42-2.30(m,2h),2.37(s,3h),2.26(s,3h),2.04(s,3h).
[1246]
esi-ms m/z：c
45h47
n5o
10
s的计算值：849.9。实验值：850.3(m 1)
。
[1247]
b)
[1248][1249]
向9-s(325mg，0.38mmol)于ch2cl2中的溶液中加入pdcl2(pph3)2(160mg，0.23mmol)、乙酸(0.82ml，14.2mmol)和hsnbu3(1.7ml，6.27mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌1.5小时。将粗产物真空浓缩。快速柱层析(己烷：etoac，1：9至9：1)得到纯化合物10-s(180mg，59％)。
[1250]
rf＝0.15(己烷：etoac，1：1)。
[1251]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.19(s,1h),6.79(m,2h),6.65(s,1h),6.26(s,1h),6.03(d,j＝1.4hz,2h),5.77(d,j＝11.5hz,1h),5.10(s,1h),4.59(s,1h),4.48(d,j＝4.9hz,1h),4.39-4.29(m,3h),3.79(s,3h),3.79(s,3h),3.64-3.33(m,4h),3.03-2.90(m,4h),2.59(d,j＝14.6hz,2h),2.44-2.32(m,2h),2.37(s,3h),2.26(s,3h),2.04(s,3h).
[1252]
esi-ms m/z：c
42h43
n5o
10
s的计算值：809.3。实验值：810.3(m 1)
。
[1253]
c)
[1254]
[1255]
向10-s(180mg，0.22mmol)于ch3cn:h2o(1.39：1,16ml，0.015μm)的溶液中加入agno3(756mg，4.40mmol)。在23℃下18小时后，用1：1的盐水和nahco3的饱和水溶液的混合物淬灭反应，搅拌15分钟，用ch2cl2稀释，搅拌5分钟，并用ch2cl2萃取。将合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。通过快速柱层析(ch2cl2:ch3oh，99：1至85：15)纯化所得残余物，得到纯11-s(100mg，56％)。
[1256]
rf＝0.35(ch2cl2:ch3oh，9：1)。
[1257]1h nmr(500mhz,cd3od):δ7.15(dd,j＝8.8,0.6hz,1h),6.82(dd,j＝2.5,0.6hz,1h),6.68(dd,j＝8.9,2.5hz,1h),6.56(s,1h),6.27(d,j＝1.3hz,1h),6.08(d,j＝1.3hz,1h),5.31(d,j＝11.5hz,1h),4.62-4.55(m,1h),4.44(ddtd,j＝4.9,1.5,1.0,0.5hz,2h)4.38-4.27(m,1h),4.25-4.18(m,1h),3.75(s,3h),3.74(s,3h),3.64(d,j＝4.8hz,1h),3.61-3.42(m,3h),3.13-2.95(m,3h),2.80(dd,j＝10.4,5.4hz,2h),2.68(dd,j＝15.1,4.2hz,2h),2.55(d,j＝15.4hz,1h),2.51-2.36(m,3h),2.34(s,3h),2.29(s,3h),2.00(s,3h).
[1258]
13
c nmr(126mhz,cd3od):δ172.6,169.2,155.1,148.0,147.2,144.7,142.4,142.1,133.1,132.6,132.2,131.1,128.2,125.5,122.2,122.0,116.3,112.9,112.8,111.4,109.0,103.5,100.9,91.0,66.6,65.0,61.8,60.3,59.2,57.1,56.1,51.7,47.2,45.5,43.8,39.0,28.2,25.4,20.6,16.3,9.5.
[1259]
esi-ms m/z：c
41h44
n4o
11
s的计算值：800.3。实验值：783.4(m-h2o 1)
。
[1260]
( )-hr-esi-tof-ms m/z 800.2796[m h]
(c
41h44
n4o
11
s的计算值：800.2727)。
[1261]
示例1-3
[1262]
a)
[1263][1264]
向4(400mg，0.62mmol)于乙酸(8ml，0.08m)中的溶液中加入8-r(468mg，2.13mmol)。将反应混合物在52℃下搅拌17小时，然后蒸发乙酸。加入饱和nahco3水溶液，用ch2cl2萃取混合物。将合并的有机层用na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。快速柱层析(己烷：etoac，1：1)得到纯化合物9-r(390mg，77％)。
[1265]
rf＝0.30(己烷：etoac，1：1)。
[1266]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.64(s,1h),7.14(d,j＝8.8hz,1h),6.81(d,j＝2.6hz,1h),6.74(dd,j＝8.8,2.4hz,1h),6.59(s,1h),6.18(d,j＝1.4hz,1h),5.97(d,j＝1.4hz,1h),5.91-5.80(m,1h),5.79(s,1h),5.15-4.92(m,3h),4.62(s,1h),4.42-4.23(m,2h),4.23-4.03(m,3h),3.79(s,3h),3.78(s,3h),3.68-3.48(m,2h),3.43(d,j＝5.1hz,2h),3.01-2.68(m,3h),2.57-2.41(m,3h),2.39(s,3h),2.25(s,3h),2.22-2.20(m,1h),2.07(s,
3h).
[1267]
esi-ms m/z：c
45h47
n5o
10
s的计算值：849.9。实验值：850.4(m 1)
。
[1268]
b)
[1269][1270]
向9-r(390mg,0.46mmol)于ch2cl2中的溶液中加入pdcl2(pph3)2(193mg,0.28mmol)、乙酸(1.0ml,17.2mmol)、以及hsnbu3(2.04ml,7.60mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌1.5小时。将粗产物真空浓缩。快速柱层析(己烷：etoac，1：9至9：1)得到纯化合物10-r(210mg，57％)。
[1271]
rf＝0.15(己烷：etoac，1：1)。
[1272]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.16(d,j＝8.8hz,1h),6.82(d,j＝2.4hz,1h),6.76(dd,j＝8.8,2.5hz,1h),6.62(s,1h),6.22(d,j＝1.5hz,1h),6.00(d,j＝1.5hz,1h),5.03(d,j＝11.5hz,1h),4.62(s,1h),4.51(d,j＝5.0hz,1h),4.36(s,1h),4.23-4.11(m,3h),3.85(dd,j＝8.1,4.1hz,1h),3.80(s,3h),3.78(s,3h),3.72-3.57(m,1h),3.45(d,j＝5.2hz,2h),3.12(d,j＝17.6hz,1h),2.99(dd,j＝17.9,9.6hz,1h),2.54(s,2h),2.46(d,j＝14.7hz,2h),2.38(s,3h),2.33-2.19(m,1h),2.26(s,3h),2.08(s,3h).
[1273]
esi-ms m/z：c
42h43
n5o
10
s的计算值：809.3。实验值：810.5(m 1)
。
[1274]
c)
[1275][1276]
向10-r(210mg，0.26mmol)于ch3cn:h2o(1.39：1，18ml，0.015μm)的溶液中加入agno3(883mg，5.20mmol)。在23℃下18小时后，用1：1的盐水和nahco3的饱和水溶液的混合物淬灭反应，搅拌15分钟，用ch2cl2稀释，搅拌5分钟，并用ch2cl2萃取。将合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。通过快速柱层析(ch2cl2:ch3oh，99：1至85:15)纯化所得残余物，得到纯11-r(140mg，66％)。
[1277]
rf＝0.30(ch2cl2:ch3oh，9：1)。
[1278]1h nmr(500mhz,cd3od):δ7.13(dd,j＝8.8,0.6hz,1h),6.82(d,j＝8.8hz,1h),6.67(dd,j＝8.8,2.5hz,1h),6.61(s,1h),6.25(d,j＝1.3hz,1h),6.07(d,j＝1.4hz,1h),5.21(d,j＝11.3hz,1h),4.80-4.72(m,2h),4.58(s,1h),4.45(d,j＝5.4hz,1h),4.21(d,j＝2.7hz,1h),4.16-4.06(m,1h),3.75(s,3h),3.72(s,3h),3.64(d,j＝7.7hz,2h),3.55-3.48(m,3h),3.16(d,j＝17.6hz,1h),3.03(dd,j＝17.7,9.8hz,1h),2.76-2.63(m,2h),2.32(s,3h),2.29(s,3h),2.25-2.11(m,2h),2.04(s,3h).
[1279]
13
c nmr(126mhz,cd3od):δ171.6,153.6,146.6,145.9,143.4,141.3,140.9,132.1,131.1,130.8,129.7,126.4,121.2,120.7,114.8,112.1,111.5,110.0,108.8,107.6,107.6,102.1,99.5,89.6,65.4,63.1,60.1,59.0,57.8,55.9,54.7,52.7,45.9,26.6,25.1,24.2,19.4,19.1,14.8,13.0,8.2.
[1280]
esi-ms m/z：c
41h44
n4o
11
s的计算值：800.3。实验值：783.3(m-h2o 1)
。
[1281]
( )-hr-esi-tof-ms m/z 800.2781[m h]
(c
41h44
n4o
11
s的计算值：800.2727)。
[1282]
示例1-4
[1283]
a)
[1284][1285]
向4(350mg，0.54mmol)于乙酸(7ml，0.08m)的溶液中加入2-苯并呋喃-3-基-乙胺盐酸盐(12)(1.52g，7.70mmol，sigma aldrich)。将反应混合物在52℃下搅拌72小时，然后蒸发乙酸。加入饱和nahco3水溶液，用ch2cl2萃取混合物。将合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。快速柱层析(己烷：etoac，1：1)产生纯13(180mg，42％)。
[1286]
rf＝0.5(己烷：etoac，1：1)。
[1287]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.39-7.29(m,2h),7.23-7.07(m,2h),6.64(s,1h),6.19(d,j＝1.3hz,1h),6.04(d,j＝1.3hz,1h),5.97-5.80(m,1h),5.78(s,1h),5.19-4.97(m,3h),4.54(s,1h),4.36(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),4.31(s,1h),4.20(dd,j＝11.4,1.9hz,2h),3.80(s,3h),3.59-3.49(m,1h),3.47(dd,j＝7.0,2.9hz,1h),3.25(ddd,j＝11.4,8.1,5.0hz,1h),3.04(d,j＝18.0hz,1h),2.98-2.72(m,5h),2.59-2.49(m,2h),2.37(s,3h),2.27(s,3h),2.23-2.12(m,1h),2.07(s,3h).
[1288]
esi-ms m/z：c
43h42
n4o9s的计算值：790.9。实验值：791.5(m 1)
。
[1289]
b)
[1290][1291]
向13(320mg，0.40mmol)于ch2cl2中的溶液中加入pdcl2(pph3)2(170mg，0.24mmol)、乙酸(0.86ml，15mmol)、以及snbu3h(1.78ml，6.60mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌1.5小时。将粗产物真空浓缩。快速柱层析(己烷：etoac，1：9至9：1)得到纯14(130mg，43％)。
[1292]
rf＝0.15(己烷：etoac，1：1)。
[1293]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.40-7.31(m,2h),7.19-7.10(m,2h),6.65(s,1h),6.19(d,j＝1.5hz,1h),6.04(d,j＝1.5hz,1h),5.05(d,j＝11.5hz,1h),4.43(s,1h),4.51-4.47(m,1h),4.30(s,1h),4.21(d,j＝2.3hz,2h),3.86-3.76(m,2h),3.79(d,j＝1.9hz,2h),3.46(d,j＝4.7hz,1h),3.29-3.22(m,1h),3.19(d,j＝17.9hz,1h),2.99(dd,j＝17.9,9.4hz,1h),2.83(s,1h),2.53(dt,j＝7.9,4.8hz,2h),2.35(s,3h),2.33-2.23(m,1h),2.27(s,3h),2.20-2.14(m,1h),2.07(m,3h).
[1294]
esi-ms m/z：c
40h38
n4o9s的计算值：750.8。实验值：751.9(m 1)
。
[1295]
c)
[1296][1297]
向14(130mg，0.17mmol)于ch3cn:h2o(1.39:1,12ml,0.015m)的溶液中加入agno3(578mg，3.40mmol)。在23℃下3小时后，加入1：1的盐水和nahco3的饱和水溶液的混合物，搅拌15分钟，用ch2cl2稀释，搅拌5分钟，用ch2cl2萃取。将合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。通过快速柱层析(ch2cl2:ch3oh，99：1至85:15)纯化所得残余物，得到纯15(80mg，64％)。
[1298]
rf＝0.25(ch2cl2:ch3oh,9:1).
[1299]1h nmr(500mhz,cd3od):δ7.45-7.34(m,2h),7.26-7.09(m,2h),6.60(s,1h),6.06(d,j＝1.1hz,1h),6.24(d,j＝1.1hz,1h),5.24(d,j＝11.5hz,1h),4.74(s,1h),4.52(s,1h),4.47(d,j＝4.9hz,1h),4.19-4.09(m,2h),3.74(s,3h),3.64(d,j＝9.2hz,1h),3.57(d,j＝4.9hz,1h),3.43-3.37(m,1h),3.20-3.09(m,1h),3.04(dd,j＝17.8,9.5hz,1h),2.96-2.90(m,1h),2.83(d,j＝15.4hz,1h),2.59-2.56(m,2h),2.34(s,3h),2.30(s,3h),
2.10-2.02(m,1h),2.05(s,3h).
[1300]
13
c nmr (126mhz,cd3od):δ171.9,170.7,156.0,150.5,148.7,147.0,144.8,142.4,142.1,132.6,131.2,128.6,125.5,124.7,123.8,122.3,121.2,120.2,116.8,114.9,114.0,112.3,103.5,91.4,90.7,63.7,62.3,60.4,58.7,57.1,47.2,43.5,40.8,39.3,28.2,21.5,20.6,16.2,9.6.
[1301]
esi-ms m/z：c
39h39
n3o
10
s的计算值：741.8。实验值：724.9(m-h2o 1)
。
[1302]
( )-hr-esi-tof-ms m/z:741.2416[m h]
(c
39h39
n3o
10
s的计算值：741.2356).
[1303]
示例1-5
[1304]
a)
[1305][1306]
向4(150mg，0.24mmol)于ch3cn(15ml,0.016m)的溶液中加入16-s(230mg,1.20mmol)和氰尿酰氯(tct)(45mg，30％)。将反应混合物在85℃下搅拌24小时，然后加入饱和nahco3水溶液，用ch2cl2萃取混合物。将合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。快速柱层析(己烷：etoac，9：1至1：9)得到纯化合物17-s(145mg，73％的产率)。
[1307]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.35(dt,j＝8.2,0.9hz,1h),7.31(ddd,j＝7.6,1.5,0.7hz,1h),7.20(ddd,j＝8.4,7.2,1.5hz,1h),7.13(td,j＝7.4,1.1hz,1h),6.62(s,1h),6.20(d,j＝1.5hz,1h),6.05(d,j＝1.4hz,1h),5.85(m,1h),5.74(s,1h),5.16-5.08(m,3h),4.58(s,1h),4.40-4.32(m,2h),4.28(dd,j＝11.5,2.2hz,1h),4.19(d,j＝2.9hz,1h),3.80(s,3h),3.58-3.53(m,1h),3.50(dd,j＝11.3,4.1hz,2h),3.42-3.30(m,1h),2.96(s,1h),2.90-2.73(m,4h),2.58(dd,j＝15.7,4.9hz,1h),2.52(d,j＝15.0hz,1h),2.37(s,3h),2.36-2.26(m,2h),2.28(s,3h),2.04(s,3h).
[1308]
esi-ms m/z:821.3(m h)
.
[1309]
b)
[1310]
[1311]
向17-s(140mg，0.17mmol)于ch2cl2中的溶液中加入pdcl2(pph3)2(19mg，0.027mmol)、乙酸(0.097ml，1.70mmol)、以及snbu3h(1.65ml，6.12mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌3小时。将粗产物真空浓缩。快速柱层析(己烷：etoac，1：9至9：1)得到纯化合物18-s(94mg，71％收率)。
[1312]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.35(dt,j＝8.2,0.9hz,1h),7.31(dt,j＝7.6,1.0hz,1h),7.20(ddd,j＝8.3,7.2,1.5hz,1h),7.13(td,j＝7.4,1.1hz,1h),6.62(s,1h),6.20(d,j＝1.4hz,1h),6.05(d,j＝1.4hz,1h),5.09(dd,j＝11.5,1.1hz,1h),4.58(s,1h),4.52(d,j＝5.0hz,1h),4.39-4.35(m,1h),4.27(dd,j＝11.5,2.1hz,1h),4.20(d,j＝2.6hz,1h),3.85(d,j＝18.3hz,1h),3.79(s,3h),3.54-3.44(m,2h),3.34(dd,j＝11.2,9.2hz,1h),3.04-2.97(m,2h),2.92(tt,j＝8.6,4.3hz,1h),2.60-2.47(m,2h),2.35(s,3h),2.34-2.28(m,2h),2.28(s,3h),2.05(s,3h).
[1313]
esi-ms m/z:781.3(m h)
.
[1314]
c)
[1315][1316]
向18-s(90mg，0.11mmol)于ch3cn:h2o(1.39:1,8ml,0.015m)的溶液中加入agno3(580mg,3.45mmol)。在23℃下18小时后，加入1：1的盐水和nahco3的饱和水溶液的混合物，搅拌15分钟，用ch2cl2稀释，搅拌5分钟，并用ch2cl2萃取。将合并的有机层用无水na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。通过快速柱层析(ch2cl2:ch3oh，99：1至85：15)纯化所得残余物，得到纯19-s(60mg，68％收率)。
[1317]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.35(d,j＝8.1hz,1h),7.32-7.28(m,1h),7.19(td,j＝8.3,7.8,1.4hz,1h),7.16-7.09(m,1h),6.58(s,1h),6.18(d,j＝1.5hz,1h),6.04(d,j＝4.6hz,1h),5.18(d,j＝11.3hz,1h),4.91(s,1h),4.63(s,1h),4.60-4.46(m,2h),4.18(d,j＝10.8hz,2h),3.83-3.71(m,2h),3.78(s,1h),3.69(s,1h),3.56-3.44(m,2h),3.32(t,j＝10.3hz,1h),3.08-2.86(m,2h),2.54(dd,j＝15.6,5.0hz,2h),2.37-2.23(m,2h),2.32(s,3h),2.27(s,3h),2.04(s,3h).
[1318]
esi-ms m/z:754.3(m-h2o h)
.
[1319]
示例2合成连接子
[1320]
制备lin 1：mc-val-cit-pabc-pnp
[1321]
反应机理
[1322][1323]
(a)制备lin 1-1：mc-val-cit-oh
[1324]
lin 1-1
[1325][1326]
将cl-trtcl-树脂(20g，1.49mmol/g)(iris biotech，参考：br-1065，2-氯三苯甲基氯树脂(200-400目，1％ dvb，1.0-1.6mmol/g)，cas 42074-68-0)置于滤板中。将100ml dcm添加至树脂且搅拌混合物1小时。通过在真空下过滤来除去溶剂。添加fmoc-cit-oh(11.83g，29.78mmol)及dipea(17.15ml，98.45mmol)于dcm(80ml)中的溶液且搅拌混合物10分钟。此后，添加dipea(34.82mmol，199.98mmol)且搅拌混合物1小时。在搅拌15分钟之后通过添加meoh(30ml)终止反应。因此产生的fmoc-cit-o-trtcl-树脂经受以下洗涤/处理：dcm(5
×
50ml
×
0.5min)、dmf(5
×
50ml
×
0.5min)、哌啶：dmf(1：4，1
×
1min，2
×
10min)、dmf(5
×
50ml
×
0.5min)、dcm(5
×
50ml
×
0.5min)。最终哌啶洗涤得到nh
2-cit-o-trtcl-树脂。计算负载量：1.15mmol/g。
[1327]
将以上产生的nh
2-cit-o-trtcl-树脂用dmf(5
×
50ml
×
0.5min)洗涤，且将fmoc-val-oh(31.22g，91.98mmol)、hobt(11.23g，91.98mmol)于dmf(100ml)中的溶液添加至nh
2-cit-o-trtcl-树脂，搅拌且添加dipcdi(14.24ml，91.98mmol)且搅拌混合物1.5小时。通过用dmf(5
×
50ml
×
0.5min)洗涤来终止反应。因此产生的fmoc-val-cit-o-trtcl-树脂用哌啶：dmf(1:4，1
×
1min、2
×
10min)处理且用dmf(5
×
50ml
×
0.5min)洗涤。最终哌啶洗涤得到nh
2-val-cit-o-trtcl-树脂。
[1328]
将6-顺丁烯二酰亚胺基己酸(mc-oh)(9.7g，45.92mmol)、hobt(6.21g，45.92mmol)于dmf(100ml)中的溶液添加至以上产生的nh
2-val-cit-o-trtcl-树脂，搅拌且添加dipcdi(7.12ml，45.92mmol)且搅拌混合物1.5小时。通过用dmf(5
×
50ml
×
0.5min)及dcm(5
×
50ml
×
0.5min)洗涤来终止反应。
[1329]
通过用tfa:dcm(1:99，5
×
100ml)处理，使肽自树脂裂解。将树脂用dcm(7
×
50ml
×
0.5min)洗涤。合并的滤液在减压下蒸发至干，且将所获得的固体用et2o湿磨且过滤，以获得呈白色固体的lin 1-1(7.60g，71％)。
[1330]1h nmr(500mhz,dmso-d6):δ12.47(s,1h),8.13(d,j＝7.3hz,1h),7.74(d,j＝
9.0hz,1h),6.99(s,2h),5.93(s,1h),5.35(s,2h),4.20(dd,j＝9.0,6.8hz,1h),4.15-4.07(m,1h),3.36(t,j＝7.0hz,2h),3.00-2.88(m,2h),2.21-2.12(m,1h),2.11-2.03(m,1h),1.98-1.86(m,1h),1.74-1.62(m,1h),1.61-1.50(m,1h),1.50-1.31(m,6h),1.21-1.11(m,2h),0.84(d,j＝6.8hz,3h),0.80(d,j＝6.8hz,3h)。
[1331]
esi-ms m/z:c
21h33
n5o7的计算值:467.2。实验值:468.3(m h)
。
[1332]
(b)制备lin 1-2：mc-val-cit-paboh
[1333]
lin 1-2
[1334][1335]
向lin 1-1(1.6g，3.42mmol)及4-氨基苯甲醇(paboh)(0.84g，6.84mmol)于dcm(60ml)中的溶液中添加hobt(0.92g，6.84mmol)于dmf(5ml)中的溶液。添加dipcdi(1.05ml，6.84mmol)，将反应混合物在23℃下搅拌2小时，添加et2o(150ml)，且所得固体在过滤板中在真空下过滤，得到lin 1-2(1.31g，67％)。
[1336]1h nmr(500mhz,dmso-d6):δ9.88(s,1h),8.03(d,j＝7.6hz,1h),7.77(dd,j＝12.2,8.5hz,1h),7.53(d,j＝8.2hz,2h),7.21(d,j＝8.2hz,2h),6.99(s,3h),6.01-5.92(m,1h),5.39(s,2h),5.07(s,1h),4.41(s,2h),4.39-4.31(m,1h),4.23-4.12(m,1h),3.36(t,j＝7.0hz,2h),3.06-2.97(m,1h),2.96-2.90(m,1h),2.22-2.03(m,2h),2.01-1.88(m,1h),1.76-1.62(m,1h),1.63-1.28(m,6h),1.25-1.11(m,2h),0.84(d,j＝6.9hz,3h),0.81(d,j＝6.8hz,3h)。
[1337]
esi-ms m/z:c
28h40
n6o7的计算值:572.3。实验值:573.3(m h)
。
[1338]
(c)制备lin 1：mc-val-cit-pab-pnp
[1339]
lin 1
[1340][1341]
向lin 1-2(500mg，0.87mmol)及碳酸双(4-硝基苯基)酯(bis-pnp)(2.64g，8.72mmol)于dcm:dmf(8:2，25ml)中的溶液中添加dipea(0.45ml，2.61mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌20小时且倾倒至硅胶柱上(dcm:ch3oh，50:1至10:1)，得到纯目标lin1(364mg，57％)。
[1342]
rf＝0.40(ch2cl2:ch3oh，9:1)。
[1343]1h nmr(400mhz,cdcl3/cd3od):δ9.45(s,1h),8.23(d,j＝8.3hz,2h),7.59(d,j＝
8.5hz,2h),7.35(d,j＝8.3hz,2h),7.34(d,j＝8.5hz,2h),6.65(s,2h),5.20(s,2h),4.56(dt,j＝10.5,5.4hz,1h),4.15(d,j＝7.2hz,1h),3.46(dd,j＝8.0,6.4hz,2h),3.16-2.89(m,2h),2.21(dd,j＝8.3,6.6hz,2h),2.06-1.97(m,1h),1.90-1.83(m,1h),1.73-1.46(m,7h),1.34-1.20(m,2h),0.91(d,j＝6.7hz,3h),0.90(d,j＝6.7hz,3h)。
[1344]
13
c nmr(125mhz,cdcl3/cd3od)δ174.4,172.4,171.1,170.6,160.5,155.5,152.5,145.3,138.7,134.1,129.9,129.5,125.2,121.8,120.0,70.6,59.0,53.2,37.5,35.8,30.6,29.6,29.3,28.1,26.2,26.2,25.1,19.1,18.1。
[1345]
esi-ms m/z:c
35h43
n7o
11
的计算值:737.3。实验值:738.3(m h)
。
[1346]
制备lin-2：mc2-peg4-val-cit-pabc-pnp
[1347]
反应机理
[1348][1349]
a)制备lin 2-1：mc2-peg4-val-cit-oh
[1350]
lin 2-1
[1351][1352]
将cl-trtcl-树脂(5g，1.49mmol/g)置于滤板中。向树脂添加ch2cl2(25ml)且在23℃下搅拌混合物1小时。通过在真空下过滤来除去溶剂。添加fmoc-cit-oh(2.95g，7.44mmol)及dipea(4.29ml，24.61mmol)于ch2cl2(20ml)中的溶液且在23℃下搅拌混合物10分钟。另外添加dipea(8.70ml，49.99mmol)且在23℃下搅拌混合物1小时。通过添加meoh(10ml)停止反应，且在23℃下搅拌15分钟。fmoc-cit-o-trtcl-树脂经受以下洗涤/处理：ch2cl2(5
×
15ml
×
0.5min)、dmf(5
×
15ml
×
0.5min)、哌啶：dmf(1:4，15ml，1
×
1min、2
×
10min)、dmf(5
×
15ml
×
0.5min)、ch2cl2(5
×
15ml
×
0.5min)。计算负载量：1.17mmol/g。
[1353]
将nh
2-cit-o-trtcl-树脂用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤且将fmoc-val-oh(7.80g，22.99mmol)及hobt(2.80g，24.5mmol)于dmf(25ml)中的溶液添加至nh
2-cit-o-trtcl-树脂，接着在23℃下添加dipcdi(3.56ml，24.5mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌1.5小时。通过用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤来停止反应。fmoc-val-cit-o-trtcl-树脂用哌啶：dmf(1:4，15ml，1
×
1min、2
×
10min)处理且用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤。
[1354]
将15-(9-芴基甲氧基羰基)氨基-4，7，10，13-四氧杂-十五烷酸(fmoc-nh-peg4-oh)(4.27g，8.75mmol)及hobt(1.18g，8.72mmol)于dmf(30ml)中的溶液添加至nh
2-val-cit-o-trtcl-树脂，接着在23℃下添加dipcdi(1.35ml，8.72mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌24小时。通过用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤来停止反应。fmoc-nh-peg4-val-cit-o-trtcl-树脂用哌啶：dmf(1:4，15ml，1
×
1min、2
×
10min)处理且用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤。
[1355]
将3-(顺丁烯二酰亚胺基)丙酸(mc2-oh)(3.95g，23.35mmol)及hobt(3.16g，23.37mmol)于dmf(30ml)中的溶液添加至nh
2-peg4-val-cit-o-trtcl-树脂，接着在23℃下添加dipcdi(3.62ml，23.37mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌2小时。通过用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)及ch2cl2(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤停止反应。
[1356]
通过用tfa：ch2cl2(1:99，5
×
50ml)处理，使肽自树脂裂解。将树脂用ch2cl2(7
×
50ml
×
0.5min)洗涤。合并的滤液在减压下蒸发至干，将所获得的固体用et2o湿磨且过滤，以获得呈白色固体的lin 2-1(4.59g，87％产率)。
[1357]1h nmr(300mhz,cdcl3):δ7.67-7.57(m,1h),7.44(d,j＝8.3hz,1h),7.11(t,j＝5.4hz,1h),6.73(s,2h),4.49(d,j＝7.2hz,1h),4.35(t,j＝7.7hz,1h),3.82(t,j＝7.0hz,2h),3.74(t,j＝6.2hz,2h),3.68-3.56(m,13h),3.56-3.45(m,2h),3.39(q,j＝5.4hz,2h),3.17(s,2h),2.55(q,j＝7.0,6.0hz,4h),2.16-1.99(m,1h),1.91(s,1h),1.75(s,1h),1.43(s,2h),0.94(d,＝9.7hz,3h),0.93(d,＝9.7hz,3h)。
[1358]
esi-ms m/z:673.3(m h)
。
[1359]
(b)制备lin 2-2：mc2-peg4-val-cit-paboh
[1360]
lin 2-2
[1361][1362]
在23℃下向lin 2-1(1.5g，2.22mmol)及4-氨基苯甲醇(paboh)(0.55g，4.45mmol)于ch2cl2(60ml)中的溶液中添加hobt(0.60g，4.45mmol)于dmf(5ml)中的溶液，接着添加dipcdi(0.69ml，4.45mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌5小时，添加et2o(150ml)，且真空过滤所得固体，得到粗lin 2-2(2.37g，》100％产率)，其未经进一步纯化即用于下一步。
[1363]1h nmr(500mhz,dmso-d6):δ7.57(d,j＝8.6hz,2h),7.30(d,j＝8.6hz,2h),6.81(s,2h),4.58(s,1h),4.56(s,2h),4.50(dd,j＝9.1,5.1hz,1h),4.21(d,j＝7.0hz,1h),3.80-3.68(m,4h),3.65-3.59(m,12h),3.55-3.47(m,1h),3.20(dd,j＝13.6,6.9hz,1h),3.12(dt,j＝13.5,6.7hz,1h),2.55(td,j＝6.1,2.1hz,2h),2.46(t,j＝6.9hz,2h),2.15-2.07(m,1h),1.95-1.88(m,1h),1.79-1.70(m,1h),1.67-1.50(m,2h),0.99(d,j＝7.0hz,3h),0.98(d,j＝7.0hz,3h)。
[1364]
esi-ms m/z:778.4(m h)
。
[1365]
(c)制备lin 2：mc2-peg4-val-cit-pabc-pnp
[1366][1367]
在23℃下向lin 2-2(1.73g，2.22mmol)及碳酸双(4-硝基苯基)酯(bis-pnp)(3.38g，11.12mmol)于dcm:dmf(8:2，75ml)中的溶液中添加dipea(1.16ml，6.07mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌19小时且倾倒至硅胶柱(ch2cl2:ch3oh，50:1至10:1)上，得到纯lin 2(945mg，45％产率)。
[1368]1h nmr(500mhz,cd3od):δ8.22(d,j＝9.2hz,2h),7.61(d,j＝8.6hz,2h),7.34(d,j＝9.2hz,2h),7.33(d,j＝8.6hz,2h),6.67(s,2h),4.57-4.47(m,1h),4.23-4.12(m,1h),3.78-3.76(m,12h),3.63-3.50(m,16h),3.49-3.41(m,2h),3.34-3.25(m,2h),3.18-3.03(m,2h),2.51(t,j＝5.9hz,2h),2.45(t,j＝7.2hz,2h),2.13-1.99(m,1h),1.92-1.84(m,1h),1.73-1.62(m,1h),1.55-1.45(m,2h),0.92(d,j＝6.8hz,3h),0.90(d,j＝6.8hz,3h)。
[1369]
13
c nmr(75mhz,cdcl3/cd3od):δ174.4,172.9,172.4,172.4,171.6,170.9,170.8,170.7,163.7,155.8,155.7,152.5,145.4,138.8,134.1,131.3,130.4,129.2,128.7,125.7,124.9,121.8,119.8(
×
2),115.1,70.2(
×
2),70.1(
×
2),70.0,69.9,69.8,69.0,66.9,59.2,53.5,39.0,36.0,34.4,34.1,30.4,29.0,18.5,17.5。
[1370]
esi-ms m/z:943.4(m h)
。
[1371]
rf＝0.20(ch2cl2:ch3oh，9:1)。
[1372]
制备lin 3：mc2-peg4-val-ala-pabc-pnp
[1373]
反应机理
[1374][1375]
(a)制备lin 3-1：mc2-peg4-val-ala-oh
[1376]
lin 3-1
[1377][1378]
将cl-trtcl-树脂(5g，1.49mmol/g)置于滤板中。向树脂添加ch2cl2(25ml)且在23
℃下搅拌混合物1小时。通过在真空下过滤来除去溶剂。添加fmoc-ala-oh(2.31g，7.41mmol)及dipea(4.28ml，24.61mmol)于ch2cl2(20ml)中的溶液且在23℃下搅拌混合物10分钟。另外添加dipea(8.60ml，49.37mmol)且在23℃下搅拌反应混合物1小时。通过添加meoh(10ml)停止反应，且在23℃下搅拌15分钟。fmoc-ala-o-trtcl-树脂经受以下洗涤/处理：ch2cl2(5
×
15ml
×
0.5min)、dmf(5
×
15ml
×
0.5min)、哌啶：dmf(1:4，15ml，1
×
1min、2
×
10min)、dmf(5
×
15ml
×
0.5min)、ch2cl2(5
×
15ml
×
0.5min)。计算负载量：1.34mmol/g。
[1379]
将nh
2-ala-o-trtcl-树脂用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤且将fmoc-val-oh(9.09g，26.79mmol)及hobt(3.62g，26.79mmol)于dmf(25ml中的溶液添加至nh
2-ala-o-trtcl-树脂，接着在23℃下添加dipcdi(4.14ml，26.79mmol)。将混合物在23℃下搅拌1.5小时。通过用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤来停止反应。fmoc-val-ala-o-trtcl-树脂用哌啶：dmf(1:4，15ml，1
×
1min、2
×
10min)处理且用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤。
[1380]
将15-(9-芴基甲氧基羰基)氨基-4，7，10，13-四氧杂-十五烷酸(fmoc-nh-peg4-oh)(4.90g，8.75mmol)及hobt(1.35g，9.98mmol)于dmf(30ml)中的溶液添加至nh
2-val-ala-o-trtcl-树脂，接着在23℃下添加dipcdi(1.55ml，10.0mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌22小时。通过用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤来停止反应。fmoc-nh-peg4-val-ala-o-trtcl-树脂用哌啶：dmf(1:4，15ml，1
×
1min、2
×
10min)处理且用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤。
[1381]
将3-(顺丁烯二酰亚胺基)丙酸(mc2-oh)(4.53g，26.78mmol)及hobt(3.62g，26.77mmol)于dmf(30ml)中的溶液添加至nh
2-peg4-val-ala-o-trtcl-树脂，接着在23℃下添加dipcdi(4.15ml，26.80mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌2小时。通过用dmf(5
×
15ml
×
0.5min)及ch2cl2(5
×
15ml
×
0.5min)洗涤停止反应。
[1382]
通过用tfa：ch2cl2(1:99，5
×
50ml)处理，使肽自树脂裂解。将树脂用ch2cl2(7
×
50ml
×
0.5min)洗涤。合并的滤液在减压下蒸发至干，将所获得的固体用et2o湿磨且过滤，以获得呈白色固体的l3-1(4.73g，87％产率)。
[1383]1h nmr(500mhz,cdcl3):δ7.67(bs,1h),7.31(d,j＝8.9hz,1h),7.17(d,j＝7.0hz,1h),6.85(t,j＝5.6hz,1h),6.72(s,2h),4.51(q,j＝7.1hz,1h),4.38(dd,j＝8.9,6.9hz,1h),3.84(t,j＝7.1hz,2h),3.75(t,j＝5.9hz,2h),3.69-3.59(m,12h),3.55(t,j＝5.1hz,2h),3.41(qd,j＝5.0,1.7hz,2h),2.62-2.49(m,4h),2.19-2.01(m,1h),1.44(d,j＝7.2hz,3h),0.95(d,j＝11.9hz,1h),0.94(d,j＝11.9hz,1h)。
[1384]
(b)制备lin 3-2：mc2-peg4-val-ala-paboh
[1385]
lin 3-2
[1386][1387]
在23℃下向lin 3-1(1.84g，3.13mmol)及4-氨基苯甲醇(paboh)(0.77g，6.27mmol)于ch2cl2(70ml)中的溶液中添加hobt(0.84g，6.27mmol)于dmf(5ml)中的溶液，接着添加dipcdi(0.97ml，6.27mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌5小时，添加et2o(150ml)，且真空过滤所得固体，得到粗lin 3-2(1.74g，81％产率)，其未经进一步纯化即用于下一
步。
[1388]1h nmr(500mhz,dmso-d6):δ7.58(d,j＝8.5hz,2h),7.30(d,j＝8.5hz,2h),6.81(s,2h),4.56(s,2h),4.52-4.41(m,1h),4.21(d,j＝6.7hz,1h).3.91(p,j＝6.5hz,1h),3.81-3.67(m,4h),3.65-3.54(m,12h),3.49(t,j＝5.5hz,2h),2.56(dd,j＝6.6,5.5hz,2h),2.46(t,j＝6.9hz,2h),2.12(h,j＝6.8hz,1h),1.45(d,j＝7.2hz,3h),1.00(d,j＝12.1hz,3h),0.98(d,j＝12.1hz,3h)。
[1389]
(c)制备lin 3：mc2-peg4-val-ala-pabc-pnp
[1390]
lin 3
[1391][1392]
在23℃下向lin 3-2(1.74g，2.51mmol)及碳酸双(4-硝基苯基)酯(bis-pnp)(3.82g，12.57mmol)于ch2cl2：dmf(8:1，70ml)中的溶液中添加dipea(1.31ml，7.54mmol)。将反应混合物在23℃下搅拌20小时且倾倒至硅胶柱上(ch2cl2:ch3oh，50:1至10:1)，得到纯lin 3(1.26g，59％产率)。
[1393]1h nmr(500mhz,cdcl3):δ8.82(s,1h),8.27(d,j＝9.2hz,2h),7.73(d,j＝8.6hz,2h),7.38(d,j＝9.1hz,4h),7.15(dd,j＝21.8,7.2hz,2h),6.69(s,2h),6.62(t,j＝5.7hz,1h),5.24(s,2h),4.67(p,j＝7.2hz,1h),4.24(dd,j＝6.8,5.7hz,1h),3.91-3.76(m,2h),3.71(ddd,j＝10.1,6.1,4.3hz,1h),3.66-3.54(m,14h),3.53(t,j＝5.1hz,1h),3.46-3.33(m,2h),2.76-2.57(m,1h),2.57-2.42(m,2h),2.33-2.19(m,1h),1.46(d,j＝7.1hz,3h),1.01(d,j＝12.1hz,3h),1.00(d,j＝12.1hz,3h)。
[1394]
13
c nmr(75mhz,cd3od):δ173.0,172.1,171.6(
×
2),170.7,163.8,155.7,152.5,145.4,140.3,138.9,134.1,130.4,129.1,125.6,124.8,121.9,119.7,115.1,70.2,70.1(x3),70.0,69.9,69.8,69.0,66.9,59.1,53.4,49.7,39.0,36.0,34.3,34.1,30.4,18.3,17.3,16.6。
[1395]
esi-ms m/z:857.3(m h)
。
[1396]
rf＝0.45(ch2cl2:ch3oh，9:1)。
[1397]
示例3：合成式d-x-(aa)
w-(t)
g-l1的化合物
[1398]
制备化合物dl-1
[1399][1400]
在23℃下向1(15mg,0.019mmol)和l1(14mg,0.019mmol)于1-甲基-2-吡咯烷酮(nmp)(1ml，0.019m)的溶液中加入dipea(3μl，0.019mmol)。在72小时后，加入etoac并将反应混合物用水洗涤，将有机层用无水na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。通过hplc制备液纯化所得残余物，得到纯dl1(7.5mg，29％收率)。
[1401]1h nmr(500mhz,cd3od):δ7.58(d,j＝8.6hz,1h),7.50(d,j＝8.6hz,1h),7.32(d,j＝8.6hz,1h),7.21(d,j＝8.6hz,1h),7.11(dd,j＝8.7,1.8hz,1h),6.82(t,j＝2.0hz,1h),6.77(s,2h),6.67(ddd,j＝8.9,2.5,1.3hz,1h),6.58(s,1h),6.23(dd,j＝3.0,1.3hz,1h),6.07(t,j＝1.4hz,1h),5.64(ddd,j＝12.4,4.9,1.8hz,1h),5.21(dd,j＝22.0,11.1hz,1h),5.19-5.11(m,1h),5.14-5.04(m,1h),5.04-4.96(m,1h),4.75(s,1h),4.70(s,1h),4.58(s,1h),4.50(ddd,j＝8.7,5.1,3.3hz,1h),4.30(d,j＝3.1hz,1h),4.22-4.11(m,3h),3.75(s,3h),3.74(s,3h),3.58-3.53(m,1h),3.50-3.44(m,2h),3.35(s,3h),3.24-3.17(m,2h),3.11(ddd,j＝13.7,10.6,6.6hz,1h),3.02(dd,j＝17.5,9.8hz,1h),2.90-2.84(m,2h),2.76(dd,j＝15.3,2.4hz,1h),2.59(dd,j＝7.0,4.9hz,2h),2.36-2.24(m,6h),2.14-2.07(m,1h),2.10-1.97(m,4h),2.04(s,3h),1.93-1.86(m,1h),1.79-1.71(m,1h),1.66-1.60(m,2h),1.59-1.53(m,4h),1.35-1.25(m,4h),0.97(m,6h).
[1402]
esi-ms m/z:1352.2(m-h2o h)
[1403]
制备化合物dl-2
[1404][1405]
在23℃下向2(21mg，0.027mmol)于二甲基甲酰胺(dmf)(2ml，0.013m)的溶液中加入l1(22mg，0.029mmol)、1-羟基苯苯并三唑(hobt，3.9mg，0.029mmol)和dipea(26μl，0.15mmol)。在72小时后，加入etoac并将反应混合物用水洗涤，将有机层用无水na2so4干燥，过滤，并真空浓缩。通过hplc制备纯化得到的残余物，得到纯dl2(3.5mg，9％收率)。
[1406]1h nmr(400mhz,cdcl3):δ7.74(d,j＝7.8hz,1h),7.47(dd,j＝21.6,8.1hz,2h),7.23(d,j＝7.8hz,1h),7.12(d,j＝8.2hz,1h),7.07(d,j＝8.2hz,1h),6.77(s,2h),6.64(s,2h),6.54(s,1h),6.16(s,1h),5.97(s,1h),5.63(d,j＝17.2hz,1h),5.11(d,j＝12.5hz,1h),5.01(s,1h),4.90(d,j＝12.2hz,1h),4.66(s,1h),4.50(s,1h),4.29-4.19(m,2h),4.13-4.08(m,1h),3.74(s,3h),3.70(s,3h),3.68(s,3h),3.43(t,j＝7.1hz,2h),3.34(t,j＝1.9hz,1h),3.33(s,2h),3.08(s,2h),2.98-2.72(m,5h),2.50(d,j＝16.0hz,1h),2.33(s,3h),2.26(s,3h),2.22-2.14(m,3h),1.99(s,3h),1.81(s,1h),1.63-1.50(t,j＝7.4hz,4h),1.48-1.39(m,4h),1.28-1.19(m,3h),0.90-0.86(m,6h).
[1407]
esi-ms m/z:1379.5(m h)
.
[1408]
示例4：制备抗体-药物共轭物(adc)
[1409]
在此实施例中，描述本发明的抗体-药物共轭物的合成。应注意，这些合成为示例性的，且所述方法可应用于本文所述的所有化合物及抗体。
[1410]
实施例4a制备抗cd13单克隆抗体
[1411]
按照本技术领域中常用的熟知方法获得抗cd13单克隆抗体。简言之，balb/c小鼠经自脐带分离的人类内皮细胞免疫接种。为此，在第-45天及第-30天将1.5e7个细胞经腹膜内注射至小鼠，且在第-3天经静脉内注射至小鼠。在第0天，从这些动物移除脾脏，且根据标准技术将脾脏细胞与sp2小鼠骨髓瘤细胞以4:1的比率融合，以产生杂交瘤且分配在96孔组织培养板(costar公司，cambridge，ma)上。在2周之后，收获杂交瘤培养上清液，且通过流动
式细胞测量术测试其针对免疫接种步骤中使用的细胞系的反应性。通过将用作抗原的对应细胞进行免疫荧光染色来分析阳性上清液。选择展示特定染色、免疫沉淀模式及细胞分布的融合瘤且通过限制稀释法克隆及亚克隆。
[1412]
一旦选择克隆，就将细胞在补充有10％(v/v)胎牛血清、2mm谷氨酰胺、100u/ml青霉素及100μg/ml链霉素的rpmi-1640培养基中在37℃下培养3-4天，直至培养基变成淡黄色。彼时，移除三分之二培养基体积，在1，000xg下离心10分钟，以使细胞集结，且再次在3，000xg下离心上清液10分钟以进一步清洗，或经由22μm孔径膜过滤。澄清上清液用55％饱和的硫酸铵沉淀，且所得集结粒再悬浮于100mm tris-hcl ph 7.8(每100ml原始澄清上清液1ml)中，且在4℃下针对5l具有150mm nacl的100mm tris-hcl ph 7.8透析16-24小时，更换透析溶液至少三次。将透析材料最终负载至蛋白a-琼脂糖凝胶柱上且对应单克隆抗体用100mm柠檬酸钠ph 3.0或可替代地用1m甘胺酸ph 3.0洗脱。含有抗体的那些洗脱份经2m tris-hcl ph 9.0中和且最终用pbs透析，且储存于-80℃下，直至其使用。
[1413]
用曲妥珠单抗和dl1制备抗体-药物共轭物adc1
[1414]
(a)制备曲妥珠单抗
[1415]
将曲妥珠单抗(曲妥珠单抗自roche购得，呈白色冻干粉末，用于制备供输注用的浓溶液)溶解于5ml磷酸盐缓冲液(50mm，ph 8.0)中，且通过使用sephadex g25 pd-10色谱柱脱盐至磷酸盐缓冲液(50mm，ph 8.0)中来纯化。通过量测280nm处的吸光度，确定曲妥珠单抗浓度(17.0mg/ml)。
[1416]
(b)部分还原曲妥珠单抗以得到部分还原的曲妥珠单抗
[1417]
用磷酸盐缓冲液(50mm，ph 8)将曲妥珠单抗溶液(0.5ml,8.5mg,56.6nmol)稀释至10mg/ml的浓度。通过添加5.0mm三[2-羧基乙基]膦盐酸盐(tcep)溶液(34μl,170nmol,3eq.)将抗体中的二硫键部分还原。将还原反应在20℃下搅拌90分钟。紧接在还原之后进行埃尔曼分析(ellman assay)，得到5.0的游离巯基与抗体比率(ftar)。
[1418]
(c)制备adc1
[1419]
向经部分还原的曲妥珠单抗(0.2ml,2mg,13.3nmol)的溶液添加dma(39.4μl)，接着添加刚制备的dl 1溶液(dma中10mm，10.6μl,106nmol,8eq.)。将共轭反应在20℃下搅拌30分钟，且通过添加n-乙酰半胱氨酸(nac)(10mm,10.6μl,106nmol)淬灭过量药物，接着搅拌溶液20分钟。淬灭的共轭反应通过使用sephadex g25 nap-5色谱柱脱盐至pbs缓冲液中来纯化。如通过uv所测定，最终目标产物adc 1浓缩至3.9mg/ml的最终浓度，且获得370μl(1.44mg,9.6nmol,72％)的adc溶液。运行hic hplc以确定共轭反应百分比(94％)。
[1420]
用曲妥珠单抗和化合物dl2制备抗体-药物共轭物adc2
[1421]
(a)制备曲妥珠单抗
[1422]
将曲妥珠单抗(从roche购得，白色冻干粉末，用于制备供输注用的浓溶液)溶解在5ml磷酸盐缓冲液(50mm，ph 8.0)中，并通过使用sephadex g25 pd-10色谱柱脱盐至磷酸盐缓冲液(50mm，ph 8.0)中来纯化。通过测量280nm下的吸光度来测定曲妥珠单抗的浓度(17.1mg/ml)。
[1423]
(b)部分还原曲妥珠单抗以得到部分还原的曲妥珠单抗
[1424]
用磷酸盐缓冲液(50mm，ph8)将曲妥珠单抗溶液(0.5ml，8.55mg，57nmol)稀释至10mg/ml的浓度。通过加入5.0mm三[2-羧基乙基]膦盐酸盐(tcep)溶液(34.2μl,171μmol，
3eq.)将抗体中的二硫键部分还原。将还原反应在20℃下搅拌90分钟。紧接在还原之后进行埃尔曼分析(ellman assay)，得到6.7的游离巯基与抗体比率(ftar)。
[1425]
(c)制备adc2
[1426]
向经部分还原的曲妥珠单抗(171μl,1.71mg，11.4nmol)的溶液添加dma(33.6μl)，然后加入刚制备的dl2溶液(dma，9.1μl，91nmol，8eq.)。将共轭反应在20℃下搅拌30分钟。通过加入n-乙酰半胱氨酸(nac)(10mm，9.1μl，91nmol)淬灭过量的药物，然后搅拌溶液20分钟。淬灭的共轭反应通过使用sephadex g25 nap-5色谱柱脱盐至pbs缓冲液中来纯化。如通过uv所测定，将最终目标产物adc2浓缩至5.14mg/ml的最终浓度，且获得300μl(1.5mg，10nmol，87％)adc溶液。运行hic hplc以确定共轭反应的百分比(75％)。
[1427]
用曲妥珠单抗和化合物dl1制备抗体-药物共轭物adc3
[1428]
(a)制备曲妥珠单抗
[1429]
将曲妥珠单抗(曲妥珠单抗自roche购得，呈白色冻干粉末，用于制备供输注用的浓溶液)溶解于5ml磷酸盐缓冲液(50mm，ph 8.0)中，并通过使用sephadex g25 pd-10色谱柱脱盐至磷酸盐缓冲液(50mm，ph 8.0)中来纯化。通过测量280nm处的吸光度来确定曲妥珠单抗的浓度(16.5mg/ml)。
[1430]
(b)曲妥珠单抗与2-亚氨基硫烷盐酸盐(traut
′
s试剂)的反应，得到巯基活化的曲妥珠单抗
[1431]
用磷酸盐缓冲液(50mm磷酸盐，2mm edta，ph 8)将曲妥珠单抗溶液(0.5ml，8.25mg，55nmol)稀释至10mg/ml的浓度。添加14mm的traut
′
s试剂的溶液(47.1μl，660nmol，12eq.)，并将反应在20℃下搅拌2小时。将混合物使用两个sephadex g25 nap-5色谱柱缓冲交换到pbs缓冲液中，并浓缩至0.85ml(9.7mg/ml)的体积。在此之后，进行埃尔曼分析(ellman assay)，得到5.5的游离巯基与抗体比率(ftar)。
[1432]
(c)制备adc3
[1433]
向巯基活化的曲妥珠单抗(200μl,1.94mg，12.9nmol)的溶液中加入dma(38μl)，然后加入新制备的dl1溶液(dma中10mm，12μl，120nmol，9.3eq.)。将共轭反应在25℃下搅拌2小时，并通过使用sephadex g25 nap-5色谱柱脱盐至pbs缓冲液中来纯化。如通过uv所测定，将最终目标产物adc3浓缩至1.48mg/ml的最终浓度，且获得340μl(0.5mg，3.3nmol，25％)的adc溶液。
[1434]
用曲妥珠单抗和dl2制备抗体-药物共轭物adc4
[1435]
(a)曲妥珠单抗的制备
[1436]
将曲妥珠单抗(曲妥珠单抗自roche购得，呈白色冻干粉末，用于制备供输注用的浓溶液)溶解于5ml磷酸盐缓冲液(50mm，ph 8.0)中，并通过使用sephadex g25 pd-10色谱柱脱盐至磷酸盐缓冲液(50mm，ph 8.0)中来纯化。通过测量280nm处的吸光度来确定曲妥珠单抗的浓度(17.1mg/ml)。
[1437]
(b)曲妥珠单抗与2-亚氨基硫烷盐酸盐(traut
′
s试剂)的反应，得到巯基活化的曲妥珠单抗
[1438]
用磷酸盐缓冲液(50mm磷酸，2mm edta，ph 8)将曲妥珠单抗溶液(0.85ml，14.5mg，96.6nmol)稀释至10mg/ml的浓度。添加14mm的traut
′
s试剂的溶液(69μl，966nmol，10eq.)，并将反应在20℃下搅拌2小时。将混合物使用两个sephadex g25 nap-5色谱柱缓冲交换到
pbs缓冲液中，并浓缩至1.45ml(10mg/ml)的体积。在此之后，进行埃尔曼分析(ellman assay)，得到3.7的游离巯基与抗体比率(ftar)。
[1439]
(c)制备adc4
[1440]
向巯基活化的曲妥珠单抗(290μl，2.9mg，19.3nmol)的溶液中加入dma(57.1μl)，然后加入新制备的dl2溶液(dma中10mm，15.4μl，154nmol，8eq.)。将共轭反应在25℃下搅拌2小时，并通过使用sephadex g25 nap-5色谱柱脱盐至pbs缓冲液中来纯化。如通过uv所测定，将最终目标产物adc4浓缩至3.82mg/ml的最终浓度，且获得315μl(1.2mg，8.0nmol，41％)的adc溶液。
[1441]
示例5用于检测本发明的药物的抗肿瘤活性的体外生物分析
[1442]
该分析的目的是评估所测试的样品的体外细胞抑制(延迟或抑制肿瘤细胞生长的能力)或细胞毒性(杀死肿瘤细胞的能力)活性。
[1443]
细胞系
[1444]
名称n
°
atcc物种组织特征a549ccl-185人类肺肺癌(nsclc)ht29htb-38人类结肠结直肠癌mda-mb-231htb-26人类乳房乳腺癌psn1.crm-crl-3211人类胰腺胰腺癌
[1445]
使用srb比色分析评估细胞毒性活性
[1446]
使用磺酰罗丹明b(srb)反应的比色分析已适用以提供细胞生长及存活力的定量量测(根据skehan等人.j.natl.cancer inst.1990，82，1107-1112所述的技术)。
[1447]
这种形式的分析使用sbs标准的96孔细胞培养物微量培养板(faircloth等人，methods in cell science，1988,11(4)，201-205；mosmann等人，journal of immunological methods，1983,65(1-2)，55-63。此研究中使用的所有细胞系是从美国菌种保存中心(atcc)获得的，且来源于不同类型人类癌症。
[1448]
将细胞保持在补充有10％胎儿牛血清(fbs)、2mm l-谷氨酰胺、100u/ml青霉素、100u/ml链霉素的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(dmem)中，处于37℃，5％co2和98％湿度。对于实验而言，使用胰蛋白酶消化自亚汇合培养物收获细胞，且再悬浮于新鲜培养基中，接着计数(counting)及接种(plating)。
[1449]
将细胞呈150μl的等分试样，以每孔5
×
103个细胞接种在96孔微量滴定板中，并在无药培养基中附着在板表面上持续18小时(过夜)。之后，将每个细胞系的一个对照(未处理的)板固定(如下所述)并用于时间零参考值。然后使用10次连续稀释液(浓度为10至0.00262μg/ml)和一式三份培养物(最终浓度为在dmso中1％)用测试化合物(在完全培养基加4％dmso中的4x储备溶液的50μl等分试样)处理培养板。处理72小时后，通过使用srb方法测量抗肿瘤作用：简言之，通过pbs洗涤细胞两次，在室温下在1％戊二醛溶液中固定15分钟，在pbs中漂洗两次，并在室温下在0.4％ srb溶液中染色30分钟。然后用1％乙酸溶液漂洗几次细胞，并在室温下风干。然后在10mm trizma基液中提取srb，并在自动化分光光度盘式读取器中在490nm处测量吸光度。通过应用nci算法评估了对细胞生长和存活的影响(boyd mr和paull kd.drug dev.res.1995,34,91-104)。
[1450]
使用一式三份培养物的平均值
±
sd，使用非线性回归分析自动产生剂量反应曲
线。通过自动插值计算(nci算法)计算三个参考参数：gi
50
＝与对照培养物相比的产生50％细胞生长抑制的化合物浓度；tgi＝与对照培养物相比的总细胞生长抑制(细胞抑制效果)，lc
50
＝产生50％净细胞杀死细胞毒性作用的化合物浓度)。
[1451]
本发明的化合物1、2、3和et722以及其它有效负载的体外细胞抑制(延迟或抑制肿瘤细胞生长的能力)或细胞毒性(杀死肿瘤细胞的能力)已在wo2003066638(分别为化合物64、60、59和63，第149-151页)中公开。
[1452]
表3-6示出本发明药物的生物活性与最接近的现有技术化合物的生物活性的数据。
[1453]
表3 生物活性(摩尔)
[1454][1455][1456]
表4 生物活性(摩尔)
[1457][1458]
表5 生物活性(摩尔)
[1459][1460]
表6 生物活性(摩尔)
[1461][1462]
例6：证明本发明的抗体-药物共轭物的细胞毒性
[1463]
用于检测抗肿瘤活性的生物分析
[1464]
此分析的目的是评估所测试的样品的体外细胞抑制(延迟或抑制肿瘤细胞生长的能力)或细胞毒性(杀死肿瘤细胞的能力)活性。
[1465]
细胞系和细胞培养
[1466]
从美国菌种保存中心(atcc)获得以下人细胞系：sk-br-3(atcc hb-30)，hcc-1954(atcc crl-2338)(乳腺癌，her2 )；mda-mb-231(atcc htb-26)和mcf-7(atcc htb-22)(乳腺癌，her2-)，细胞在37℃，5％co2和95％湿度下保持在达尔伯克改良伊格尔培养基(dmem)(sk-br-3，mda-mb-231和mcf-7细胞)，或rpmi-1640(hcc-1954)，所有培养基均补充有10％胎牛血清(fcs)，2mm l-谷氨酰胺和100units/ml青霉素和链霉素。
[1467]
细胞毒性分析
[1468]
对于sk-br-3、hcc-1954、mda-mb-231及mcf-7细胞，使用磺酰罗丹明b(srb)的比色分析适用于定量量测细胞生长及细胞毒性，如v.vichai及k.kirtikara，sulforhodamine b colorimetric assay for cytotoxicity screening.nature protocols，2006，1，1112-1116中所述。简言之，将细胞接种在96孔微量滴定板中且使其在无药物培养基中静置24小时，接着用单独媒剂或测试物质处理72小时。为进行定量，将细胞用磷酸盐缓冲盐水(pbs)洗涤两次，在1％戊二醛溶液中固定15分钟，用pbs冲洗两次，在具有1％(v/v)乙酸溶液的0.4％(w/v)srb中染色30分钟，用1％乙酸溶液冲洗数次且风干。接着在10mm trizma基液中萃取srb，且在微定量盘式分光光度计中在490nm下量测吸光度。
[1469]
细胞存活表示为对照的未处理细胞存活的百分比。所有评估一式三份进行且所得数据通过非线性回归，与四参数对数曲线拟合，由此计算ic
50
值(与对照细胞存活相比引起50％细胞死亡的化合物浓度)。
[1470]
生物活性示例1-共轭物adc 1和相关试剂针对her2阳性和阴性乳腺癌细胞的细胞毒性
[1471]
评估adc 1以及母体细胞毒性化合物1及曲妥珠单抗针对过度表达或不表达her2受体的四种不同人类乳癌细胞系，包括sk-br-3、hcc-1954(her2阳性细胞)以及mda-mb-231及mcf-7(her2阴性细胞)的体外细胞毒性。进行与测试物质一起培育72小时的标准剂量-反应(dr)曲线。
[1472]
曲妥珠单抗的细胞毒性
[1473]
通过进行在50至0.01μg/ml(3.33e-07-8.74e-11)范围内的一式三份的10点2.5倍稀释dr曲线，评估曲妥珠单抗针对不同肿瘤细胞系的体外细胞毒性。曲妥珠单抗完全非活性，在任一测试细胞系中均未达到ic
50
，与其her2状态无关，如表7中所示，其中呈现与三个独立实验中获得的ic
50
值的几何平均值对应的结果。
[1474]
表7 曲妥珠单抗的体外细胞毒性概述
[1475][1476][1477]
1的细胞毒性
[1478]
通过进行100至0.03ng/ml(1.26e-07-3.3e-11m范围内的一式三份的10点2.5倍稀释dr曲线，评估有效负载1对不同的肿瘤细胞系的细胞毒性。
[1479]
如表8所示，其中呈现了与在三个独立实验中获得的ic
50
值的几何平均值相对应的结果，这种化合物的细胞毒性在所有肿瘤细胞系中都类似，而无论其her2表达如何，其中ic
50
值在低纳摩尔范围内8.82e-10to 1.95e-09m)。整个细胞板上的几何平均ic
50
值为1.32e-09m。
[1480]
表8 1的体外细胞毒性概述
[1481][1482]
adc1的细胞毒性
[1483]
通过进行100μg/ml至26ng/ml(6.67e-07-1.75e-10m)范围内的一式三份的10点2.5倍稀释dr曲线评估adc1针对不同肿瘤细胞系的细胞毒性。在三个独立实验中进行评估，表9总结了对应于在三个独立实验中获得的ic
50
值的几何平均值的结果。如表9所示，adc1显示细胞毒性，其类似于母体药物1仅在her2阳性细胞中所示的细胞毒性。然而，在her2阴性细胞中，这种毒性显着降低：根据将her2阴性细胞中的平均ic
50
值除以her2阳性细胞中的平均ic
50
值所获得的选择性比，降低接近8倍。这种选择性导致我们得出结论：共轭物adc1通过抗体与肿瘤细胞上的膜相关her2受体的相互作用而作用，然后进行细胞毒性药物的细胞内递送。
[1484]
表9 adc1的体外活性概述
[1485][1486][1487]
生物活性示例2-共轭物adc 2和相关试剂针对her2阳性和阴性乳腺癌细胞的细胞毒性
[1488]
评估adc 2以及母体细胞毒性化合物2针对过度表达或不表达her2受体的四种不同人类乳癌细胞系，包括xk-br-3、hcc-1954(her2阳性细胞)以及mda-mb-231和mcf-7(her2阴性细胞)的体外细胞毒性。进行与测试物质一起培育72小时的标准剂量-反应(dr)曲线。还将结果与上述单克隆抗体曲妥珠单抗进行比较。
[1489]
2的细胞毒性
[1490]
通过进行100至0.03ng/ml(1.26e-07-3.3e-11m范围内的一式三份的10点2.5倍稀释dr曲线，评估中间化合物2针对不同肿瘤细胞系的细胞毒性。如表10所示，其中呈现了与在三个独立实验中获得的ic
50
值的几何平均值相对应的结果，这种化合物的细胞毒性在所有肿瘤细胞系中都是相似的，而无论其her2表达如何，其中ic
50
值在低纳摩尔范围内，从8.85e-10至2-31e-09m)。整个细胞板上的几何平均ic
50
值为1.53e-09m。
[1491]
表10 2的体外细胞毒性概述
[1492][1493]
adc2的细胞毒性
[1494]
通过进行100μg/ml至26ng/ml(6.67e-07-1.75e-10m)范围内的一式三份的10点2.5倍稀释dr曲线评估adc2针对不同肿瘤细胞系的细胞毒性。在三个独立实验中进行评估，表11总结了对应于在三个独立实验中获得的ic
50
值的几何平均值的结果。如表11所示，adc2显示细胞毒性，其类似于母体药物2仅在her2阳性细胞中所示的细胞毒性。然而，在her2阴性细胞中，这种毒性根据将her2阴性细胞中的平均ic
50
值除以her2阳性细胞中的平均ic
50
值所获得的选择性比显着降低。这种选择性导致我们得出结论：共轭物adc2通过抗体与肿瘤细胞上的膜相关her2受体的相互作用而作用，然后进行细胞毒性药物的细胞内递送。
[1495]
表11 adc2的体外细胞毒性概述
[1496][1497]
生物活性实施例3-共轭物adc 3和相关试剂对her2阳性和阴性乳腺癌细胞的细胞毒性。
[1498]
评估adc 3针对过度表达或不表达her2受体的四种不同人类乳癌细胞系，包括sk-br-3、hcc-1954(her2阳性细胞)以及mda-mb-231及mcf-7(her2阴性细胞)的体外细胞毒性。进行与测试物质一起培育72小时的标准剂量-反应(dr)曲线。
[1499]
adc3的细胞毒性
[1500]
通过进行100μg/ml至26ng/ml(6.67e-07-1.75e-10m)范围内的一式三份的10点2.5倍稀释dr曲线评估adc3针对不同肿瘤细胞系的细胞毒性。在三个独立实验中进行评估，表12总结了对应于在三个独立实验中获得的ic
50
值的几何平均值的结果。如表12所示，adc3显示细胞毒性，其类似于母体药物1仅在her2阳性细胞中所示的细胞毒性。然而，在her2阴性细胞中，这种毒性显着降低：根据将her2阴性细胞中的平均ic
50
值除以her2阳性细胞中的平均ic
50
值所获得的选择性比，降低接近56倍。这种选择性导致我们得出结论：该共轭物通过抗体与肿瘤细胞上的膜相关her2受体的相互作用而作用，然后进行细胞毒性药物的细胞内递送。
[1501]
表12 adc3的体外活性
[1502][1503]
生物活性示例4：证明本发明的抗体-药物共轭物的体内疗效
[1504]
评估adc 4针对过度表达或不表达her2受体的四种不同人类乳癌细胞系，包括sk-br-3、hcc-1954(her2阳性细胞)以及mda-mb-231及mcf-7(her2阴性细胞)的体外细胞毒性。进行与测试物质一起培育72小时的标准剂量-反应(dr)曲线。
[1505]
adc4的细胞毒性
[1506]
通过进行100μg/ml至26ng/ml(6.67e-07-1.75e-10m)范围内的一式三份的10点
2.5倍稀释dr曲线评估adc4针对不同肿瘤细胞系的细胞毒性。在三个不同实验中进行评估，表13总结了对应于在三个不同实验中获得的ic
50
值的几何平均值的结果。如表13所示，adc4显示细胞毒性，其类似于母体药物2仅在her2阳性细胞中所示的细胞毒性。然而，在her2阴性细胞中，这种毒性显着降低：根据将her2阴性细胞中的平均ic
50
值除以her2阳性细胞中的平均ic
50
值所获得的选择性比，降低接近14倍。这种选择性导致我们得出结论：该共轭物adc4通过抗体与肿瘤细胞上的膜相关her2受体的相互作用而作用，然后进行细胞毒性药物的细胞内递送。
[1507]
表13 adc4的体外活性
[1508][1509]
再多了解一些
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