一种利用木质纤维素类原料生产虾青素的方法

1.本发明属于生物发酵技术领域，涉及一种利用木质纤维素类原料生产虾青素的方法，尤其涉及一种利用木质纤维素类原料经红法夫酵母和大肠杆菌基因工程菌共发酵生产虾青素的方法。


背景技术：

2.木质纤维素类农林废弃物是一种重要的可再生资源，可通过化学法、生物法等将其转化为乙醇、丁醇、丁二酸等大宗化学品。但由于转化成本较高，至今难以实现产业化应用。选择一种高附加值的产品，可以提高木质纤维素类生物质资源转化利用的经济性。
3.虾青素是一种酮式类胡萝卜素，红色固体粉末，不溶于水，可溶于有机溶剂。它广泛存在于生物界中，特别是水生动物如虾、蟹、鱼和鸟类的羽毛中，起显色的作用。虾青素具有极强的抗氧化能力，可以清除二氧化氮、硫化物、二硫化物等，也可降低脂质过氧化作用，有效的抑制自由基引起的脂质过氧化作用。此外，有抑制肿瘤发生，增强免疫力，清除体内自由基等多方面的生理作用，对紫外线引起的皮肤癌有很好的治疗效果，对糖尿病引起的眼病也有防治作用，在保健品、医药、化妆品、食品添加剂以及水产养殖等方面具有广阔的应用前景。
4.由于木质纤维素本身的结构特点，微生物难以直接对木质纤维素进行转化，需要对其进行预处理。目前预处理技术包括多种方法，如稀酸法、水热法、汽爆法、研磨法、石灰法等等。汽爆法是一种研究较为深入且有效的方法。汽爆过程中，半纤维素会被部分降解，这有利于后续的酶催化或微生物利用。
5.红法夫酵母是合成虾青素的重要微生物，已经广泛用于饲料等领域。作为四萜类的虾青素，其在红法夫酵母体内需要较长的合成路径，造成虾青素的产量和产率一直很低。研究者通过物理、化学诱变、驯化以及生物工程改造的方法，在一定程度上提高了微生物合成虾青素的性能。研究发现，添加虾青素合成前体，如番茄红素等，是一种提高虾青素产量的有效方法。但如果直接添加这些前体物质，会显著增加虾青素的生产成本。


技术实现要素：

6.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种利用木质纤维素类原料生产虾青素的方法，尤其提供一种利用木质纤维素类原料经红法夫酵母和大肠杆菌基因工程菌共发酵生产虾青素的方法。
7.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
8.第一方面，本发明提供一种利用木质纤维素类原料生产虾青素的方法，所述方法包括：将木质纤维素类原料依次进行汽爆处理、酶解处理和发酵处理，生产虾青素；所述发酵处理中使用的发酵菌包括红法夫酵母和产丙酮酸的大肠杆菌基因工程菌。
9.本发明所涉及的生产虾青素的方法将木质纤维素类原料经过汽爆处理后，半纤维素会部分降解，这有利于后续的酶催化或微生物利用，然后对处理后产物进行酶解，形成五
碳糖和六碳糖混合的高浓度可发酵糖溶液，最后以可发酵糖为碳源进行发酵处理，为了提高红法夫酵母合成虾青素的能力，本发明创造性地采用红法夫酵母和产丙酮酸的大肠杆菌基因工程菌共发酵的方式，以大肠杆菌合成的丙酮酸作为促进剂，强化红法夫酵母合成虾青素，虾青素产量显著提高，为利用可再生资源合成虾青素提供了一种有效方法。
10.优选地，所述红法夫酵母在发酵体系中的接种量为3-10％，例如3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％等，该数值范围的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。优选5-7％。
11.优选地，所述大肠杆菌基因工程菌在发酵体系中的接种量为0.5-5％，例如0.5％、1％、2％、3％、4％、5％等，该数值范围的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。优选1-2％。
12.为了使大肠杆菌产生的丙酮酸能够充分强化红法夫酵母发酵生产虾青素，同时避免大肠杆菌与红法夫酵母争夺碳源，本发明优选两种菌的接种量满足上述数值范围。
13.优选地，所述大肠杆菌基因工程菌的接种时间为红法夫酵母接种后的24-72h，例如24h、36h、48h、60h、72h等，该数值范围的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
14.优选地，所述发酵处理的体系ph为5.5-7.0，例如5.5、6.0、6.5、7.0等。
15.优选地，所述发酵处理的温度为14-35℃，例如14℃、16℃、18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃、32℃、34℃等；发酵处理的时间为30-120h，例如30h、45h、60h、75h、90h、105h、120h等。
16.上述各项数值范围的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
17.为了使大肠杆菌产生的丙酮酸能够充分强化红法夫酵母发酵生产虾青素，同时避免大肠杆菌与红法夫酵母争夺碳源，本发明优选采用更适合红法夫酵母生长的低温、偏酸环境培养，同时推后大肠杆菌接种时间，选择在红法夫酵母进入对数期后接种大肠杆菌。
18.上述各发酵处理的参数相互配合，能使得发酵效果更好，有利于获得更高产量的虾青素。
19.所述发酵的体系中还需要加入无机盐和微量元素。
20.所述无机盐例如可以是kh2po4、kcl、mgso4·
7h2o等；所述微量元素例如可以是fecl3·
6h2o、cocl2·
6h2o、cucl2·
2h2o、zncl2、na2moo4·
2h2o、h3bo3、mncl2·
4h2o等。
21.优选地，所述发酵的体系中初始可发酵糖浓度为10-60g/l以上，例如10g/l、15g/l、20g/l、25g/l、30g/l、35g/l、40g/l、45g/l、50g/l、55g/l、60g/l等，该数值范围的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。优选25-35g/l。发酵过程中，根据发酵罐中残糖量补充糖液，当残糖量低于2.0g/l时，补加糖液，使发酵罐中糖浓度维持在5g/l以上。并通过添加氨水调控发酵液的ph值。
22.优选地，所述汽爆处理的体系中添加有铵盐。
23.为了进一步提高半纤维素的降解效率，现有技术进行汽爆过程中一般添加一定量的硫酸，但是添加硫酸往往会产生更多的发酵抑制物，如乙酸和糠醛等等，这对后续的发酵有很大的影响。因此本发明创造性地以铵盐为添加剂，利用其弱酸性，降低木质纤维素汽爆体系的ph，提高汽爆过程中半纤维素的降解效率，提升木质纤维素的生物降解性，同时减少发酵抑制物生成；此外，保留在体系中的铵盐可为后续发酵环节提供氮源，降低发酵环节的成本。
24.优选地，所述铵盐包括硫酸铵、氯化铵或磷酸铵中的任意一种或至少两种的组合。
25.优选地，所述铵盐与木质纤维素类原料的质量比为(0.1-10):100，例如0.1:100、1:100、2:100、4:100、6:100、8:100、10:100等，优选(2-4):100。
26.所述铵盐与木质纤维素类原料的质量比满足上述数值范围时，其起到的提高汽爆过程中半纤维素的降解效率，提升木质纤维素的生物降解性，同时减少发酵抑制物生成效果更加显著。
27.优选地，所述汽爆处理的体系中固含量为60-90％，例如60％、70％、75％、80％、90％等，进一步优选70-75％。
28.优选地，所述汽爆处理的压力为0.8-2.0mpa，例如0.8mpa、1.0mpa、1.2mpa、1.4mpa、1.5mpa、1.6mpa、2.0mpa等，持续时间为1-10min，例如1min、2min、3min、4min、5min、6min、8min、10min等。
29.上述各项数值范围的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
30.上述各汽爆处理的参数相互配合，能使得汽爆效果更好，有利于获得更高产量的虾青素。
31.优选地，所述酶解处理使用复合酶，所述复合酶包括纤维素酶和半纤维素酶。
32.优选地，所述纤维素酶包括β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶或果胶酶中的任意一种或至少两种的组合。
33.优选地，所述半纤维素酶包括木聚糖酶和/或漆酶。
34.优选地，所述复合酶包括β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶和漆酶。
35.本发明所涉及的方法中使用的复合酶若同时包含β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶和漆酶时，其酶解效果更好，酶解得到的可发酵糖溶液的浓度更高。
36.优选地，所述复合酶中滤纸酶活、β-葡萄糖苷酶活、果胶酶活、木聚糖酶活与漆酶活的比例为(3-5):(1-2):(0.5-1):(1-2):(0.5-1)。
37.本发明所涉及的方法中使用的复合酶各酶成分若按照上述特定的配比进行混合时，其酶解效果更好，酶解得到的可发酵糖溶液的浓度更高。
38.上述(3-5)中的具体点值可以为3、3.5、4、4.5、5等。
39.上述(1-2)中的具体点值可以为1、1.2、1.5、1.8、2等。
40.上述(0.5-1)中的具体点值可以为0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1等。
41.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
42.优选地，所述酶解处理的体系中固含量为15-30％，例如15％、16％、18％、20％、22％、23％、24％、26％、28％、30％等。
43.优选地，所述酶解处理的温度为40-60℃，例如40℃、42℃、45℃、47℃、50℃、52℃、55℃、58℃、60℃等，酶解处理的时间为20-40h，例如20h、25h、30h、35h、40h等。
44.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
45.上述各酶解处理的参数相互配合，能使得酶解效果更好，有利于获得更高产量的虾青素。
46.在本发明中，所述木质纤维素类原料包括秸秆、稻壳、玉米芯、锯末、木屑、树枝或
甘蔗渣中的任意一种或至少两种的组合。
47.优选地，所述木质纤维素类原料为农作物废弃物。
48.本发明所涉及的方法可以提高木质纤维素类生物质资源转化利用的经济性。
49.优选地，所述木质纤维素类原料在进行汽爆处理前还进行粉碎处理。
50.优选地，所述粉碎处理后的颗粒粒度为1-50mm，例如1mm、5mm、10mm、20mm、30mm、40mm、50mm等，该数值范围的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。进一步优选10-20mm。
51.作为本发明的优选技术方案，所述利用木质纤维素类原料生产虾青素的方法包括：
52.(1)将木质纤维素类原料粉碎后进行汽爆处理，所述汽爆处理的体系中添加有铵盐，所述铵盐与木质纤维素类原料的质量比为(0.1-10):100；
53.(2)然后使用复合酶进行酶解处理，所述复合酶包括β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶和漆酶；
54.(3)然后使用红法夫酵母和产丙酮酸的大肠杆菌基因工程菌进行共发酵处理，所述红法夫酵母在发酵体系中的接种量为3-10％，所述大肠杆菌基因工程菌在发酵体系中的接种量为0.5-5％，所述大肠杆菌基因工程菌的接种时间为红法夫酵母接种后的24-72h，所述发酵处理的体系ph为5.5-7.0，发酵处理的温度为14-35℃，时间为30-120h。
55.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
56.一方面，为了提高红法夫酵母合成虾青素的能力，本发明采用红法夫酵母和产丙酮酸的大肠杆菌基因工程菌共培养的方式。为了达到提供丙酮酸的目的，同时又不会与红法夫酵母争夺碳源，采用更适合红法夫酵母生长的低温、偏酸环境培养，同时推后大肠杆菌接种时间，选择在红法夫酵母进入对数期后接种大肠杆菌，采用合适的菌种接种量。
57.另一方面，本发明以铵盐为添加剂，利用其弱酸性，降低木质纤维素汽爆体系的ph，提高汽爆过程中半纤维素的降解效率，提升木质纤维素的生物降解性，同时减少发酵抑制物生成，此外，保留在体系中的铵盐可为后续发酵环节提供氮源，降低发酵环节的成本。
具体实施方式
58.为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
59.下述实施例涉及的大肠杆菌为产丙酮酸的大肠杆菌基因工程菌，其为保藏号为cgmcc no.12463的大肠埃希氏菌(escherichia coli)yp02菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2016年5月18日，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
60.下述实施例涉及的红法夫酵母购自于中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏号为cicc 33064，保藏时间为2015年1月29日，地址为：北京市朝阳区酒仙桥中路24号院6号楼。
61.下述实施例涉及的种子培养基的配方为：碳源：葡萄糖1％；氯化铵：2g/l；大量元素(mmol/l)：(nh4)2hpo
4 19.92，nh4h2po
4 7.56，kcl 2.00，nh4cl 7.50，mgso4·
7h2o 1.50；微量元素(μmol/l)：fecl3·
6h2o 8.88，cocl2·
6h2o 1.26，cucl2·
2h2o 0.88，zncl
2 2.20，
na2moo4·
2h2o 1.24，h3bo
3 1.21，mncl2·
4h2o2.50。
62.下述实施例涉及的发酵培养基的配方为：碳源：水解糖母液；大量元素(mmol/l)：kh2po
4 7.56，kcl 2.00，mgso4·
7h2o 1.50；微量元素(μmol/l)：fecl3·
6h2o 8.88，cocl2·
6h2o 1.26，cucl2·
2h2o 0.88，zncl
2 2.20，na2moo4·
2h2o1.24，h3bo
3 1.21，mncl2·
4h2o 2.50。
63.下述实施例涉及的β-葡萄糖苷酶购自sigma公司，型号为g0395；内切葡聚糖酶购自sigma公司，型号为e2164；外切葡聚糖酶购自阿拉丁公司，型号为d298997；果胶酶购自阿拉丁公司，型号为p128776；木聚糖酶购自sigma公司，型号为x3876；漆酶购自阿拉丁公司，型号为l304691。
64.下述实施例得到的发酵液中的虾青素采用以下方法分析：将发酵液中的细胞通过离心回收，并用蒸馏水洗涤两次。用3m hcl处理酵母细胞壁并煮沸。离心酵母溶液并用丙酮提取虾青素。虾青素的含量通过配备uv
–
vis检测器的hplc测定。检测柱为c18柱(4.6mm
×
250mm)，乙腈：超纯水(95:5)为流动相，流速为1ml/min。
65.实施例1
66.本实施例提供一种利用玉米秸秆生成虾青素的方法，如下：
67.(1)将玉米秸秆粉碎至粒度为20mm；将玉米秸秆颗粒加水调配至含水量30％，按硫酸铵与玉米秸秆质量1:100的比例加入铵盐，并搅拌均匀；装入汽爆机进行蒸汽爆破处理，处理条件设定为压力1.8mpa，维持时间2.4min，收集汽爆后的玉米秸秆；
68.(2)将预处理后的玉米秸秆通过复合酶酶解，复合酶为β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶和漆酶的混合物，所述复合酶中滤纸酶活、β-葡萄糖苷酶活、果胶酶活、木聚糖酶活与漆酶活的比例为4:2:1:2:1；首先添加滤纸酶活为20fpu/g的复合酶，酶解温度为50℃，酶解36h，结束后，经过沉降、过滤，得到水解糖母液，测定溶液中葡萄糖、木糖等单糖的浓度；经测定，溶液中葡萄糖浓度达到95g/l，木糖浓度达到35g/l，此糖浓度完全达到发酵虾青素的要求；
69.(3)以大肠杆菌和红法夫酵母共培养生产虾青素；
70.(3.1)种子培养：在250ml三角瓶中种子培养基100ml，115℃灭菌30min。冷却后分别将大肠杆菌和红法夫酵母按照1％(v/v)的接种量接种于种子培养基，在ph＝6.0、26℃和200rpm的条件下培养30h得到种子液；
71.(3.2)发酵培养：5l发酵罐发酵培养基体积为3l，121℃灭菌20min，添加已高温灭菌的步骤(2)获得的水解糖母液，使发酵罐中单糖浓度为5％。将红法夫酵母种子液按照5％(v/v)的接种量接种于发酵培养基，在ph＝6.0、20℃和200rpm的条件下培养24h，再添加大肠杆菌种子液(接种量1％)，培养72h后得到虾青素发酵液；培养期间，利用氨水调节发酵体系ph，使其维持在6.0左右。
72.采用高效液相色谱仪对发酵液中的成分进行定量分析，经检测，虾青素产量为0.2mg/g菌体。
73.实施例2
74.本实施例提供一种利用杨木木屑生成虾青素的方法，如下：
75.(1)将杨木木屑粉碎至粒度为40mm；将杨木木屑颗粒加水调配至含水量40％，按氯化铵与杨木木屑质量3:100的比例加入铵盐，并搅拌均匀；装入汽爆机进行蒸汽爆破处理，
处理条件设定为压力2.0mpa，维持时间3.0min，收集汽爆后的杨木木屑；
76.(2)将预处理后的杨木木屑通过复合酶酶解，复合酶为β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶和漆酶的混合物，所述复合酶中滤纸酶活、β-葡萄糖苷酶活、果胶酶活、木聚糖酶活与漆酶活的比例为5:2:1:2:1；首先添加滤纸酶活为20fpu/g的复合酶，酶解温度为50℃，酶解48h，结束后，经过沉降、过滤，得到水解糖母液，测定溶液中葡萄糖、木糖等单糖的浓度；经测定，溶液中葡萄糖浓度达到88g/l，木糖浓度达到32g/l，此糖浓度完全达到发酵虾青素的要求；
77.(3)以大肠杆菌和红法夫酵母共培养生产虾青素；
78.(3.1)种子培养：在250ml三角瓶中种子培养基100ml，115℃灭菌30min。冷却后分别将大肠杆菌和红法夫酵母按照2％(v/v)的接种量接种于种子培养基，在ph＝6.5、24℃和200rpm的条件下培养36h得到种子液；
79.(3.2)发酵培养：5l发酵罐发酵培养基体积为3l，121℃灭菌20min，添加已高温灭菌的步骤(2)获得的水解糖母液，使发酵罐中单糖浓度为5％。将红法夫酵母种子液按照8％(v/v)的接种量接种于发酵培养基，在ph＝6.5、22℃和200rpm的条件下培养24h，再添加大肠杆菌种子液(接种量0.5％)，培养84h后得到虾青素发酵液。培养期间，利用氨水调节发酵体系ph，使其维持在6.5左右；
80.采用高效液相色谱仪对发酵液中的成分进行定量分析，经检测，虾青素产量为0.25mg/g菌体。
81.实施例3
82.本实施例提供一种利用甘蔗渣生成虾青素的方法，如下：
83.(1)将甘蔗渣粉碎至粒度为5mm；将甘蔗渣颗粒加水调配至含水量45％，按硫酸铵与甘蔗渣质量5:100的比例加入铵盐，并搅拌均匀；装入汽爆机进行蒸汽爆破处理，处理条件设定为压力1.6mpa，维持时间5min，收集汽爆后的甘蔗渣；
84.(2)将预处理后的甘蔗渣通过复合酶酶解，复合酶为β-葡萄糖苷酶、内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶和漆酶的混合物，所述复合酶中滤纸酶活、β-葡萄糖苷酶活、果胶酶活、木聚糖酶活与漆酶活的比例为5:1:1:2:1；首先添加滤纸酶活为25fpu/g的复合酶，酶解温度为50℃，酶解36h，结束后，经过沉降、过滤，得到水解糖母液，测定溶液中葡萄糖、木糖等单糖的浓度；经测定，溶液中葡萄糖浓度达到97g/l，木糖浓度达到35g/l，此糖浓度完全达到发酵虾青素的要求；
85.(3)以大肠杆菌和红法夫酵母共培养生产虾青素；
86.(3.1)种子培养：在250ml三角瓶中种子培养基100ml，115℃灭菌30min。冷却后分别将大肠杆菌和红法夫酵母按照5％(v/v)的接种量接种于种子培养基，在ph＝6.0、22℃和200rpm的条件下培养40h得到种子液；
87.(3.2)发酵培养：5l发酵罐发酵培养基体积为3l，121℃灭菌20min，添加已高温灭菌的步骤(2)获得的水解糖母液，使发酵罐中单糖浓度为5.5％。将红法夫酵母种子液按照10％(v/v)的接种量接种于发酵培养基，在ph＝6.0、22℃和200rpm的条件下培养24h，再添加大肠杆菌种子液(接种量2％)，培养72h后得到虾青素发酵液。培养期间，利用氨水调节发酵体系ph，使其维持在6.0左右。
88.采用高效液相色谱仪对发酵液中的成分进行定量分析，经检测，虾青素产量为
0.32mg/g菌体。
89.实施例4
90.本发明提供一种利用甘蔗渣生成虾青素的方法，其方法与实施例3的区别仅在于步骤(3.2)发酵培养的过程不同：5l发酵罐发酵培养基体积为3l，121℃灭菌20min，添加已高温灭菌的步骤(2)获得的水解糖母液，使发酵罐中单糖浓度为5.5％。将红法夫酵母种子液按照10％(v/v)的接种量接种于发酵培养基，在ph＝6.0、22℃和200rpm的条件下培养96h。培养期间，利用氨水调节发酵体系ph，使其维持在6.0左右。其他操作均保持不变。
91.采用高效液相色谱仪对发酵液中的成分进行定量分析，经检测，虾青素产量为0.23mg/g菌体。
92.实施例5
93.本发明提供一种利用甘蔗渣生成虾青素的方法，其方法与实施例3的区别仅在于步骤(3.2)中大肠杆菌种子液的接种量为8％，其他操作均保持不变。
94.采用高效液相色谱仪对发酵液中的成分进行定量分析，经检测，虾青素产量为0.19mg/g菌体。
95.实施例6
96.本发明提供一种利用甘蔗渣生成虾青素的方法，其方法与实施例3的区别仅在于步骤(3.2)中在ph＝6.0、22℃和200rpm的条件下培养24h替换为在ph＝7.5、37℃和200rpm的条件下培养24h，其他操作均保持不变。
97.采用高效液相色谱仪对发酵液中的成分进行定量分析，经检测，虾青素产量为0.25mg/g菌体。
98.实施例7
99.本发明提供一种利用甘蔗渣生成虾青素的方法，其方法与实施例3的区别仅在于步骤(3.2)发酵培养的过程不同：5l发酵罐发酵培养基体积为3l，121℃灭菌20min，添加已高温灭菌的步骤(2)获得的水解糖母液，使发酵罐中单糖浓度为5.5％。将红法夫酵母种子液按照10％(v/v)的接种量和大肠杆菌种子液(接种量2％)同时接种于发酵培养基，在ph＝6.0、22℃和200rpm的条件下培养96h，得到虾青素发酵液。培养期间，利用氨水调节发酵体系ph，使其维持在6.0左右。其他操作均保持不变。
100.采用高效液相色谱仪对发酵液中的成分进行定量分析，经检测，虾青素产量为0.09mg/g菌体。
101.实施例8
102.本发明提供一种利用甘蔗渣生成虾青素的方法，其方法与实施例3的区别仅在于步骤(1)中的按硫酸铵与甘蔗渣质量5:100的比例加入铵盐替换为按硫酸与甘蔗渣质量1:100的比例加入浓度为5％的硫酸。其他操作均保持不变。
103.采用高效液相色谱仪对发酵液中的成分进行定量分析，经检测，虾青素产量为0.21mg/g菌体。
104.申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种利用木质纤维素类原料生产虾青素的方法，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开
范围之内。
105.以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
106.另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。