一种酶法催化22-ene-UDCA制备UDCA的方法与流程

一种酶法催化22-ene-udca制备udca的方法
技术领域
1.本发明属于生物催化领域，尤其涉及一种酶法催化22-ene-udca制备udca的方法。


背景技术：

2.熊去氧胆酸(udca)，化学名称为3α,7β-二羟基-5β-胆烷酸，为有机化合物，无臭，味苦。医学上用于增加胆汁酸分泌，并使胆汁成分改变，降低胆汁中胆固醇及胆固醇脂，有利于胆结石中的胆固醇逐渐溶解，用于治疗胆结石、胆汁淤积性肝病、脂肪肝、各型肝炎、中毒性肝障碍、胆囊炎、胆道炎和胆汁性消化不良、胆汁返流性胃炎、眼部疾病等。
3.熊去氧胆酸在工业化生产中需要有除去杂质22-ene-udca的工序，但是22-ene-udca跟udca的理化性质非常接近，去除22-ene-udca比较困难。目前一般都是采用化学催化加氢的方法将22-ene-udca转化成udca，贵金属催化剂进行催化还原效果较好，但是催化剂价格昂贵，且利用氢气作为氢源时，增加了一定的危险性，存在安全风险。


技术实现要素：

4.本发明针对化学催化加氢法去除22-ene-udca成本高、存在危险源的技术问题，提出一种一种酶法催化22-ene-udca制备udca的方法，该方法成本低、转化率高。
5.为了达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
6.一种酶法催化22-ene-udca制备udca的方法，包括以下步骤：
7.(1)将22-ene-udca干粉或者22-ene-udca与udca的混合物溶于水中，调节ph值至弱碱性形成溶液；
8.(2)然后加入一定量的nadp 、葡萄糖、葡萄糖脱氢酶和烯还原酶，搅拌溶解得到反应液；
9.(3)将反应液调节ph值后恒温条件下反应，反应结束后调酸加热将酶灭活。
10.作为优选，步骤1)中调节ph值至7.5-8.0。
11.作为优选，步骤(2)中添加nadp 、葡萄糖、葡萄糖脱氢酶、烯还原酶的量与22-ene-udca的质量比例为：(0.001～0.01)：(0.75～1.5)：(0.1～0.25)：(0.1～0.5)：1。
12.作为优选，步骤(3)中反应温度为25～37℃。
13.作为优选，步骤(3)中ph值为7.5～8.0。
14.与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：
15.本发明通过烯还原酶实现22-ene-udca到udca的转化，并通过葡萄糖脱氢酶实现辅酶nadph的再生。该方法操作简单，常温常压反应，反应条件温和，易于放大生产。无氢气等危险源参与反应，安全系数高。辅酶添加量低，可再生，生产成本低。
附图说明
16.图1为本发明酶法催化22-ene-udca制备udca的反应原理图；
具体实施方式
17.为了更好的理解本发明，下面结合附图和实施例做具体说明。
18.实施例1：反应体系约100ml，先将2g 22-ene-udca加入到95ml纯水中搅拌混匀，37℃下用2m naoh溶液调节溶液ph值至7.9，然后加入0.002gnadp 和1.5g葡萄糖。待溶液ph值稳定后加入0.2g葡萄糖脱氢酶和0.2g烯还原酶，微调ph值至7.9,并在25℃下搅拌反应。每6h取样并用hplc检测反应体系中22-ene-udca的含量，反应30h后转化率达到99％以上，停止反应。用盐酸调节ph值至4.0，然后将溶液加热至80℃保温1h将酶灭活。此后加入100ml乙酸乙酯进行萃取，取有机相进行减压蒸馏，去除有机溶剂后得到1.71g udca，检测其中22-ene-udca的含量，为0.33％。
19.实施例2：反应体系约1l，将100g udca(其中含11.64g 22-ene-udca)加水定容至950ml，在37℃下用2mnaoh溶液调节ph值至7.6，然后加入0.11g nadp 和15g葡萄糖。待ph值稳定后加入2.90g葡萄糖脱氢酶和5.82g烯还原酶，微调ph至7.6，37℃下搅拌反应。每3h取样并用hplc检测22-ene-udca的含量，反应6h后转化率达到98％以上，停止反应。用盐酸调节ph值至4.0，并加热至80℃后保温1h将酶灭活。此后加2000ml乙酸乙酯进行萃取，分液后取有机相进行减压蒸馏，去除有机溶剂后得到90.64g udca，检测22-ene-udca含量，为0.17％。
20.本发明通过烯还原酶实现22-ene-udca到udca的转化，并通过葡萄糖脱氢酶实现辅酶nadph的再生。该方法操作简单，常温常压反应，反应条件温和，且转化率高，适合放大生产。无氢气等危险源参与反应，安全系数高。辅酶添加量低，可再生，生产成本低。
21.以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例应用于其它领域，但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。


技术特征：
1.一种酶法催化22-ene-udca制备udca的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将22-ene-udca干粉或者22-ene-udca与udca的混合物溶于水中，调节ph值至弱碱性形成溶液；(2)然后加入一定量的nadp 、葡萄糖、葡萄糖脱氢酶和烯还原酶，搅拌溶解得到反应液；(3)将反应液调节ph值后恒温条件下反应，反应结束后调酸加热将酶灭活。2.根据权利要求1所述的酶法催化22-ene-udca制备udca的方法，其特征在于：步骤1)中调节ph值至7.5-8.0。3.根据权利要求1所述的酶法催化22-ene-udca制备udca的方法，其特征在于：步骤(2)中添加nadp 、葡萄糖、葡萄糖脱氢酶、烯还原酶的量与22-ene-udca的质量比例为：(0.001～0.01)：(0.75～1.5)：(0.1～0.25)：(0.1～0.5)：1。4.根据权利要求1所述的酶法催化22-ene-udca制备udca的方法，其特征在于：步骤(3)中反应温度为25～37℃。5.根据权利要求1所述的酶法催化22-ene-udca制备udca的方法，其特征在于：步骤(3)中ph值为7.5～8.0。

技术总结
本发明一种酶法催化22-ene-UDCA制备UDCA的方法，包括以下步骤：(1)将22-ene-UDCA干粉或者22-ene-UDCA与UDCA的混合物溶于水中，调节pH值至弱碱性形成溶液；(2)然后加入一定量的NADP 、葡萄糖、葡萄糖脱氢酶和烯还原酶，搅拌溶解得到反应液；(3)将反应液调节PH值后恒温条件下反应，反应结束后调酸加热将酶灭活。本发明通过烯还原酶实现22-ene-UDCA到UDCA的转化，并通过葡萄糖脱氢酶实现辅酶NADPH的再生。该方法操作简单，反应条件温和，转化率高，易于放大生产。易于放大生产。易于放大生产。


技术研发人员：丁洪勇 周炜强
受保护的技术使用者：山东中京生物科技有限公司
技术研发日：2022.09.05
技术公布日：2022/11/29