一种桉叶提取物、制备方法及其在制备减肥降脂产品中的应用

1.本发明涉及植物提取技术领域，尤其涉及一种桉叶提取物、制备方法及其在制备减肥降脂产品中的应用。


背景技术：

2.近年来，随着生活水平的不断提高，不健康的作息及饮食方式导致的营养性肥胖病发病率日渐增高。据报道，营养性肥胖会增加高血压、ⅱ型糖尿病、冠心病及癌症的发病风险，使机体健康受到极大影响。因此，如何有效预防和治疗肥胖症已经成为世界范围内公共安全健康问题之一。减肥药物虽然能够有效控制体重，但长期服用可能会对机体造成不良影响。因此，开发安全、无毒副作用的减肥降脂功能性天然产物的市场需求逐渐释放，未来行业发展前景良好。
3.我国桉树资源丰富，具有面积大、地域广、品种多等特点。桉叶作为桉树的副产物一直作为民间传统中草药，常用作清热解毒治感冒等用途。已有研究表明桉叶提取物含有大量多酚类物质，在体内和体外均显示出较强的抗氧化活性，其抗衰老、抗肿瘤、抗糖尿病、抗炎等一系列功效也被报道，但化学法、酶法等现有方法对桉叶有效成分的提取率较低、提取产物活性较差，限制了其在产业中的应用。目前，尚未见到采用桉叶提取物预防及治疗肥胖症的相关报道。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种桉叶提取物、制备方法及其在制备减肥降脂产品中的应用，解决了现有技术中桉叶有效成分的提取率较低、提取产物活性较差等问题。
5.为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
6.本发明提供了一种桉叶提取物的制备方法，包含如下步骤：
7.将桉叶进行粉碎，得到桉叶粉；
8.将桉叶粉进行连续相变萃取，得到提取液；
9.将提取液依次进行浓缩、喷雾干燥，得到桉叶粗提物；
10.将桉叶粗提物进行纯化，得到桉叶提取物；
11.所述连续相变萃取采用的萃取剂依次为丁烷、乙醇水溶液和水。
12.优选的，所述桉叶粉的粒径在550μm以下。
13.优选的，所述连续相变萃取的萃取压力为0.5～1.5mpa，萃取温度为55～65℃，解析温度为65～75℃，每种萃取剂的萃取时间为80～120min。
14.优选的，所述纯化采用硅胶柱分离，所述硅胶柱分离采用的硅胶柱的目数为100～300目。
15.优选的，所述硅胶柱分离过程中采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱流速为30～50ml/min。
16.优选的，所述硅胶柱分离采用的洗脱液包括组分a和组分b；
17.所述组分a为乙醇，组分b为乙酸乙酯或石油醚。
18.优选的，所述梯度洗脱的过程中，组分a和组分b的体积比依次为0:100、10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0，梯度洗脱结束后，收集组分a和组分b的体积比为60:40、70:30、80:20的洗脱产物；
19.每个体积比的洗脱液洗脱2～4个柱体积。
20.优选的，将所述洗脱产物进行浓缩、喷雾干燥，得到桉叶提取物。
21.本发明还提供了由上述制备方法制备得到的桉叶提取物，包括月见草素b10～20％，特里马素ⅰ1～2％，槲皮素-3-o-葡萄糖苷酸1～1.5％，没食子酸0.8～1.2％，特里马素ⅱ0.2～0.5％，1,2,3,4,6五没食子酰葡萄糖3～6％，所述桉叶提取物中总酚含量为50～60％。
22.本发明还提供了上述桉叶提取物在制备减肥降脂产品中的应用。
23.本发明的技术效果和优点：
24.本发明的桉叶提取物的制备方法可以实现较高除杂率，操作步骤简单且得率高。通过本发明制备方法得到的桉叶提取物多酚含量更高、总收率更高，适宜在实际工业中应用。经检测得知，通过本发明得到的桉叶提取物具有很好的减肥降脂作用，能够有效控制机体重量，调节血脂水平，有效预防及改善肥胖。此外，桉叶资源丰富价格低廉，制备方法简单、成本低廉，符合工业化生产要求，有开发作为药品或者保健品的实际意义和应用价值，也在一定程度上提高了桉叶资源的利用率。
附图说明
25.图1为液相色谱分析结果；
26.图2为小鼠血清中总甘油三酯含量测定结果；
27.图3为小鼠血清中总胆固醇含量测定结果；
28.图4为小鼠血清中低密度脂蛋白含量测定结果；
29.图5为小鼠血清中高密度脂蛋白含量测定结果。
具体实施方式
30.本发明提供了本发明提供了一种桉叶提取物的制备方法，包含如下步骤：
31.将桉叶进行粉碎，得到桉叶粉；
32.将桉叶粉进行连续相变萃取，得到提取液；
33.将提取液依次进行浓缩、喷雾干燥，得到桉叶粗提物；
34.将桉叶粗提物进行纯化，得到桉叶提取物；
35.所述连续相变萃取采用的萃取剂为丁烷、乙醇水溶液和水。
36.在本发明中，所述桉叶优选在阴凉干燥后进行粉碎得到桉叶粉，所述桉叶粉的粒径优选在550μm以下，进一步优选在350μm以下；将桉叶粉进行连续相变萃取，所述连续相变萃取优选采用连续相变萃取釜进行，所述连续相变萃取的萃取压力优选为0.5～1.5mpa，进一步优选为0.8～1.2mpa，萃取温度优选为55～65℃，进一步优选为58～62℃，解析温度优选为65～75℃，进一步优选为68～72℃，每次的萃取时间优选为80～120min，进一步优选为
90～110min；所述连续相变萃取采用的萃取剂为丁烷、乙醇水溶液和水，本发明对萃取的顺序没有要求，所述乙醇水溶液的体积浓度优选为60～80％。
37.在本发明中，所述浓缩优选采用真空减压浓缩，所述真空减压浓缩的温度优选为55～70℃、真空度优选为300～500pa，所述喷雾干燥的进风温度优选为200～250℃，进料速度优选为80～120rpm，雾化器频率优选为40～50hz。
38.在本发明中，所述纯化优选采用硅胶柱分离，所述硅胶柱分离采用的硅胶柱的目数优选为100～300目，进一步优选为150～250目；所述硅胶柱分离过程中优选采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的洗脱流速优选为30～50ml/min，进一步优选为35～45ml/min；本发明所述硅胶柱分离采用的洗脱液优选包括组分a和组分b，所述组分a优选为乙醇，组分b优选为乙酸乙酯或石油醚；所述梯度洗脱的过程中，组分a和组分b的体积比优选依次为0:100、10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0，梯度洗脱结束后，收集组分a和组分b的体积比为60:40、70:30、80:20的洗脱产物；本发明中，每个体积比的洗脱液优选洗脱2～4个柱体积，梯度洗脱结束后，优选将所述洗脱产物进行浓缩、喷雾干燥，得到桉叶提取物，所述浓缩优选采用真空浓缩，所述真空浓缩的温度优选为65～85℃、真空度优选为400～600pa，所述喷雾干燥的进风温度优选为250～300℃，进料速度优选为100～150rpm，雾化器频率优选为50～60hz。
39.本发明还提供了由上述制备方法制备得到的桉叶提取物。
40.本发明还提供了上述桉叶提取物在制备减肥降脂产品中的应用，所述减肥降脂产品优选为保健品或药物；所述产品优选的以本发明桉叶提取物为唯一活性成分；所述产品优选的还包括辅料，本发明对所述辅料的种类没有特殊限定，采用本领域常规的产品辅料即可；本发明所述的产品剂型优选为散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、注射剂、喷雾剂、气雾剂或粉雾剂等。在本发明中，所述产品包括载体，所述载体优选为口服制剂用的粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、色素、矫味剂等；可注射制剂用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。
41.下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
42.实施例1
43.将“广林9号”桉树叶原料阴凉干燥后经机械粉碎，粉碎至30目，称取桉叶粉末20kg，装入连续相变萃取釜中密封萃取，萃取压力为1.0mpa，萃取温度为65℃，解析温度为75℃，依次以丁烷、70％乙醇、水作为萃取剂，每次萃取时间为100min，得到桉叶提取液。将桉树叶提取液在60℃、400pa真空度的条件下进行真空减压浓缩，然后在进风温度200℃、进料速度100rpm、雾化器频率45hz的条件下进行喷雾干燥，得到桉叶粗提物。桉树叶粗提物过100目硅胶柱，洗脱的流速为40ml/min，用乙醇和乙酸乙酯进行梯度洗脱，乙醇和乙酸乙酯的体积配比依次为0:100、10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0，每个比例洗脱3个柱体积，在70℃、500pa的条件下真空浓缩乙醇和乙酸乙酯体积比为60:40、70:30、80:20的洗脱液，进风温度250℃、进料速度100rpm、雾化器频率50hz的条件下进行喷雾干燥，即得桉叶精提物。
44.实施例2
45.将“广林9号”桉树叶原料阴凉干燥后经机械粉碎，粉碎至40目，称取桉叶粉末
15kg，装入连续相变萃取釜中密封萃取，萃取压力为1.2mpa，萃取温度为60℃，解析温度为70℃，依次以丁烷、65％乙醇、水作为萃取剂，每次萃取时间为120min，收集桉叶提取液。将桉树叶提取液在65℃、500pa真空度的条件下进行真空减压浓缩，然后在进风温度250℃、进料速度150rpm、雾化器频率50hz的条件下进行喷雾干燥。桉树叶粗提物过200目硅胶柱，洗脱的流速为35ml/min，用乙醇和乙酸乙酯进行梯度洗脱，乙醇和乙酸乙酯的体积配比依次为0:100、10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0，每个比例洗脱3个柱体积，在70℃、500pa的条件下真空浓缩乙醇和乙酸乙酯体积比为60:40、70:30、80:20的洗脱液，进风温度300℃、进料速度150rpm、雾化器频率60hz的条件下进行喷雾干燥，即得桉叶精提物。
46.实施例3
47.将“广林9号”桉树叶原料阴凉干燥后经机械粉碎，粉碎至60目，称取桉叶粉末15kg，装入连续相变萃取釜中密封萃取，萃取压力为1.2mpa，萃取温度为65℃，解析温度为75℃，分别以丁烷、80％乙醇、水作为萃取剂，每次萃取时间为120min，收集桉叶提取液。将桉树叶提取液在60℃、400pa真空度的条件下进行真空减压浓缩，然后在进风温度200℃、进料速度100rpm、雾化器频率45hz的条件下进行喷雾干燥，得到桉叶粗提物。桉树叶粗提物过200目硅胶柱，洗脱的流速为35ml/min，用乙醇和石油醚进行梯度洗脱，乙醇和石油醚的体积配比依次为0:100、10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、100:0，每个比例洗脱3个柱体积，在70℃、500pa的条件下真空浓缩乙醇和乙酸乙酯体积比为60:40、70:30、80:20的洗脱液，进风温度250℃、进料速度100rpm、雾化器频率50hz的条件下进行喷雾干燥，即得桉叶精提物。
48.实验例1液相色谱分析
49.对实施例1制得的桉叶精提物进行液相色谱分析，液相条件为:diamonsil c18色谱柱(250
×
4.6mm，5μm)；检测波长270nm；流动相为10％-90％甲醇梯度洗脱1h，流速为1ml/mim；进样量20μl。
50.结果如图1所示，其中：1、gemin d；2、月见草素b；3、5-甲氧基糖醛；4、英国栎鞣花素；5、特里马素ⅰ；6、绿原酸；7、特里马素ⅱ；8、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖；9、没食子酸乙酯；10、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖；11、槲皮素-3-o-葡萄糖醛酸苷。
51.实验例2提取率、总酚含量测定
52.对实施例1和实施例2中的桉叶精提物质量进行测定，计算提取率(提取率＝桉叶精提物质量/桉叶粉末质量
×
100％)；
53.采用福林酚法检测总酚含量，结果如下表1所示：
54.表1桉叶提取物的提取结果
[0055] 桉叶精提物质量提取率总酚含量实施例111.2kg56％55％实施例29.0kg60％50％
[0056]
实验例3减肥降脂作用研究
[0057]
试验动物：雄性，spf级c57bl/6j小鼠，体重约(23
±
2g)，购于北京维通利华实验动物技术有限公司；
[0058]
试验药物和试剂：桉叶提取物，总酚含量约55％；生理盐水；等试剂盒；总胆固醇
(tc)、甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白(ldl-c)、高密度脂蛋白(hdl-c)等试剂盒；
[0059]
饲料：60％高脂模型饲料、10％低脂对照饲料购于南通特洛菲饲料科技有限公司；
[0060]
实验方法：适应7d后，将32只c57bl/6j小鼠分为四组，分别为正常对照组，模型对照组、桉叶提取物低剂量组(50mg/kg)和桉叶提取物高剂量组(100mg/kg)。正常对照组喂养10％低脂对照饲料，而模型组和低、高剂量桉叶提取物组喂养60％高脂模型饲料，喂养周期为10周。第1d开始，对正常对照组和模型对照组小鼠灌胃生理盐水，对低、高剂量桉叶提取物组小鼠分别灌胃50mg/kg、100mg/kg桉叶提取物。喂养周期结束后，处死小鼠，并收集血清、脏器、脂肪-80℃保存待测。
[0061]
实验对小鼠体重、摄食量、脏器系数、脂肪系数、血清脂质水平等进行了测定，结果如下。所有实验数据均使用spss 17.0统计软件分析。多组间比较采用单因素方差分析(one-wayanova)，两两比较采用duncan法。结果以均数
±
标准差表示，p《0.05为差异有显著性意义。
[0062]
试验期间，每周对各组小鼠体重进行称量并记录，各组小鼠体重及体重增长量如表2所示。
[0063]
表2小鼠体重增长量(g)
[0064][0065]
注：表中数据为样品平均值
±
标准差；与正常对照组相比，**p《0.01，与模型对照组相比##p《0.05。
[0066]
由表2可知，模型对照组小鼠体重增长率显著高于正常对照组，表明小鼠肥胖模型建立成功。与模型对照组相比，桉叶提取物低、高剂量组小鼠体重增长量均有所降低，其中，高剂量组降低体重效果极显著。结果表明，摄入一定剂量桉叶提取物能够有效抑制由高脂饮食引起的机体肥胖，具有良好的减肥效果。
[0067]
试验对各组小鼠附睾脂肪、腹股沟脂肪、肾周脂肪、棕色脂肪及肝脏进行称重，并计算其指数，结果如表3所示。
[0068]
表3小鼠肝脏系数和脂肪系数(％)
[0069][0070][0071]
注：表中数据为样品平均值
±
标准差；与正常对照组相比，**p《0.01，与模型对照组相比##p《0.05。
[0072]
由表3可知，桉叶提取物低、高剂量组小鼠肝脏系数显著低于模型对照组，表明桉
叶提取物能够缓解肥胖导致的肝脏充血肿胀、肥大增生，减轻脂肪肝程度。此外，与模型对照组相比，桉叶提取物低、高剂量组小鼠腹股沟脂肪、附睾脂肪及肾周脂肪这三种白色脂肪系数均显著降低，反映了桉叶提取物能够有效减少机体体内脂肪的堆积，起到减肥效果。
[0073]
检测小鼠血清中总甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的含量，结果如下图2～5所示。
[0074]
由图2～5可知，相较于高脂饮食对照组，桉叶提取物低、高剂量组小鼠血清中总甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白显著降低，且血清中hdl-c水平显著上升(p《0.01)，表明本发明中的桉叶提取物能够有效改善高脂饮食诱导的机体脂质代谢紊乱，具有良好的降脂功效。
[0075]
由以上实施例可知，本发明提供的桉叶提取方法提取率高，所得的桉叶提取物总酚含量高，活性物质种类多。且通过本发明制备方法得到的桉叶提取物能够有效抑制由高脂饮食引起的机体肥胖，具有良好的减肥效果，能够缓解肥胖导致的肝脏充血肿胀、肥大增生，减轻脂肪肝程度，能够有效减少机体体内脂肪的堆积，起到减肥效果，还可以有效改善高脂饮食诱导的机体脂质代谢紊乱，具有良好的降脂功效。
[0076]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。