一种拔牙窝填充止血材料及其制备方法与流程

1.本发明涉及医用生物材料技术领域，具体而言，涉及一种拔牙窝填充止血材料及其制备方法。


背景技术：

2.拔牙术是口腔颌面外科手术中最基本的手术，与其他手术一样，会造成局部软组织和硬组织不同程度的损伤，引起出血、肿胀、疼痛、感染、上颌窦穿孔等症状，处理不当，会引起更加严重的并发症。一般认为在拔牙术后15-20min拔牙窝位置就会形成血凝块封堵创面，血凝块对浸润上皮细胞、促进牙槽骨重建有重要作用，去除血凝块明显延迟拔牙窝愈合，因此保证拔牙窝中充足且稳定的血凝块，对于拔牙窝软组织修复至关重要。
3.目前拔牙窝止血材料除纱布、棉球等不可吸收材料外，常用的可吸收止血材料有明胶类、氧化纤维素类、纤维蛋白类、壳聚糖类、胶原蛋白类等，此类止血材料均可吸收，无需二次取出，患者接受度高，但是此类止血材料只是通过覆盖创面，达到压迫止血的作用，功能单一，既无法促进血凝块的形成，也不能够在血凝块凝结后，固定血凝块使其不易破坏和脱落，不适用于拔牙窝大量出血及凝血功能障碍得患者，同时会在短时间内降解，无法起到封闭拔牙创、填充拔牙窝的作用，不利于拔牙窝中牙槽骨的再生。


技术实现要素：

4.本发明解决的问题是现有的拔牙窝止血材料不利于拔牙窝中牙槽骨再生。
5.为解决上述问题，本发明提供一种拔牙窝止血填充材料的制备方法，包括如下步骤：
6.s1：以壳聚糖为原料制备n-羟丁基壳聚糖；
7.s2：通过所述n-羟丁基壳聚糖与醛类进行交联，得到交联n-羟丁基壳聚糖；
8.s3：以所述交联n-羟丁基壳聚糖与羟基磷灰石制备静电纺丝液；
9.s4：以所述静电纺丝液进行静电纺丝，得到静电纺丝膜；
10.s5：对所述静电纺丝膜进行粉碎，得到拔牙窝止血填充材料。
11.可选地，所述壳聚糖的脱乙酰度为80％～94％，分子量5000da～2000000da。
12.可选地，步骤s1包括如下步骤：
13.s11：以碱液与所述壳聚糖为原料制备碱化壳聚糖；
14.s12：向所述碱化壳聚糖中加入异丙醇与水，搅拌后，加入相转移催化剂，于50℃～85℃水浴加热，搅拌，得到壳聚糖预催化溶液；
15.s13：向所述壳聚糖预催化溶液中加入醚化剂，升温至50℃～85℃，反应，得到n-羟丁基壳聚糖粗产物；
16.s14：用乙醇对所述n-羟丁基壳聚糖粗产物进行洗涤，并将ph值调节至6.5～7.5，得到n-羟丁基壳聚糖初产物；
17.s15：对所述n-羟丁基壳聚糖初产物进行洗涤、透析后，于50℃～80℃进行真空干
燥，得到所述n-羟丁基壳聚糖。
18.可选地，步骤s11包括：将naoh溶于水中，冰水浴冷却至15℃～30℃，向其中加入壳聚糖，搅拌，过滤后得到碱化壳聚糖。
19.可选地，步骤s12中碱化壳聚糖、异丙醇与水的质量比为1：(2-10)：(2-15)。
20.可选地，步骤s13中的醚化剂为1,2-环氧丁烷。
21.可选地，步骤s2包括：
22.s21：将n-羟丁基壳聚糖与乙醇混合，n-羟丁基壳聚糖的质量浓度为1％-30％，得到混悬液；
23.s22：向所述混悬液中加入交联剂，搅拌交联后，抽滤，得到固化物；
24.s23：将所述固化物与醇混合清洗后，抽滤，干燥，得交联n-羟丁基壳聚糖。
25.可选地，步骤s3包括：将所述交联n-羟丁基壳聚糖溶于二氯甲烷中，并加入羟基磷灰石，交联n-羟丁基壳聚糖与羟基磷灰石质量比为(5-20)：(0.1-3)，搅拌，得到静电纺丝液。
26.可选地，步骤s4中静电纺丝的工艺条件为：电压强度25kv，流速1.0ml/h，接收材料为铝箔纸，纺丝针头距离接收位置5cm～10cm。
27.本发明的另一目的在于提供一种拔牙窝止血填充材料，通过如上所述的拔牙窝止血填充材料的制备方法进行制备。
28.与现有技术相比，本发明提供的拔牙窝止血材料的制备方法具有如下优势：
29.本发明提供的拔牙窝填充止血材料的制备方法，选择衍生化处理的天然高分子材料，进行梯度弱交联，实现瞬时止血，形成血凝块后凝胶化，封闭止血；同时通过衍生高分子材料的温敏特性裹挟羟基磷灰石，稳定成骨空间；通过静电纺丝形成纳米级纤维结构，有效引导新骨再生，促进拔牙窝中牙槽骨的形成，机械粉碎得到纳米颗粒，便于拔牙窝无死角填充。
附图说明
30.图1为本发明实施例1制备的拔牙窝止血填充材料的扫描电子显微镜图；
31.图2为壳聚糖以及本发明实施例1中的n-羟丁基壳聚糖的红外光谱图。
具体实施方式
32.现在对本发明作进一步详细的说明。下面描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制，基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
33.现有的止血填充材料，如专利cn112316209a一种口腔止血及修复材料及其制备方法，该专利中以脱钙骨颗粒作为口腔止血及修复材料的载体，其所含有的胶原结构对创面骨质的矿物沉积具有诱导作用，与生长因子及其它植骨材料结合，可有效地引发和控制矿化过程，促进新骨的形成，从而提高口腔止血及修复材料对拔牙后缺损部位处诱导新骨的再生的作用；该专利不能无死角填充，且存在降解较快的问题；专利cn111849013a一种纳米羟基磷灰石-丝素蛋白矿化支架及其制备方法和用途，通过将丝素蛋白支架浸没于矿化液中反应所得，矿化支架亲水性显著提高，生物相容性良好、可促进细胞迁移与生长，还有良
好的力学性能和良好的骨分化、诱导能力；虽然与传统纳米羟基磷灰石/丝素蛋白复合材料相比性能更好，但是该支架只能提供较好的填充及引导骨再生的作用，无法止血，需要与止血材料配合使用；专利cn110090320b一种具有抗菌活性的拔牙窝修复支架及制备方法，该专利提供的修复支架为能与拔牙窝配合的圆锥形结构，其圆锥结构由修复材料凝固形式，锥底附着一层胶原经冷冻干燥后挤压所得的致密膜，修复材料包括胶原-羟基磷灰石复合物、胶原、盐酸米诺环素；该修复支架虽然能实现拔牙窝的填充，但是圆锥形结构针对性强，可塑性差，不具有普遍适用性；专利cn112587729a一种骨修复材料，该专利通过对牛股骨进行脱脂脱蛋白去除抗原等物质后，用于提供骨修复材料，并保持骨修复材料的抗压性能及骨传导性；该骨修复材料仅能引导骨再生，需要与止血材料配合使用，同时材料在拔牙窝呈离散状态，不易塑形。
34.综上，现有的拔牙窝止血填充材料具有如下不足：功能单一，只能止血或骨修复；使用不方便，形态规则，不规则创面适应性差，不能保证无死角填充；骨修复材料易分散，不具有塑形功能，难以有效维持空间。
35.为解决现有的拔牙窝止血填充材料不利于拔牙窝中牙槽骨再生的问题，本发明提供一种拔牙窝止血填充材料的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
36.s1：以壳聚糖为原料制备n-羟丁基壳聚糖；
37.s2：通过n-羟丁基壳聚糖与醛类进行交联，得到交联n-羟丁基壳聚糖；
38.s3：以交联n-羟丁基壳聚糖与羟基磷灰石制备静电纺丝液；
39.s4：以静电纺丝液进行静电纺丝，得到静电纺丝膜；
40.s5：对静电纺丝膜进行粉碎，得到拔牙窝止血填充材料。
41.其中壳聚糖的分子结构中含有大量的活性官能团，如羟基、氨基、乙酰氨基等，本发明选择性对壳聚糖化学改性，制备一种新型的壳聚糖衍生物，从而制备一种新型拔牙窝止血填充材料；羟基磷灰石是人体和动物骨骼的主要无机成分，促进拔牙窝骨生长，与机体组织在界面上实现化学键性结合，在体内有一定的溶解度，能释放对机体无害的离子，参与体内代谢，对骨质增生有刺激或诱导作用，能促进缺损组织的修复，显示出生物活性。
42.具体的，本技术为提高止血功能，如下式所示，
[0043][0044]
首先通过在壳聚糖c
2-nh2上发生取代，引入羟丁基基团，以此获得富含羟丁基的n-羟丁基壳聚糖，并在此基础上用醛类交联，在保持壳聚糖性能的同时具有温敏性，使材料能够瞬时吸血，形成血凝块后凝胶化，形成凝胶封闭止血，同时温敏形成稳固凝胶，裹挟羟基
磷灰石，形成稳定成骨空间，保持拔牙窝良好的形态；通过静电纺丝形成纳米级纤维结构，有效引导新骨再生，促进拔牙窝中牙槽骨的形成，机械粉碎得到纳米纤维颗粒，不仅有助于增大材料与创口处的接触面积，提高吸液效率，同时能够保持填充封堵状态，实现无死角填充，便于拔牙窝填充。
[0045]
本发明提供的拔牙窝填充止血材料的制备方法，选择衍生化处理的天然高分子材料，进行梯度弱交联，实现瞬时止血，形成血凝块后凝胶化，封闭止血；同时通过衍生高分子材料的温敏特性裹挟羟基磷灰石，稳定成骨空间；通过静电纺丝形成纳米级纤维结构，有效引导新骨再生，促进拔牙窝中牙槽骨的形成，机械粉碎得到纳米颗粒，便于拔牙窝无死角填充。
[0046]
为保证拔牙窝止血填充材料的性能，本技术优选壳聚糖的脱乙酰度为80％～94％，分子量5000da～2000000da。
[0047]
本技术优选步骤s1包括如下步骤：
[0048]
s11：以碱液与壳聚糖为原料制备碱化壳聚糖；
[0049]
s12：向碱化壳聚糖中加入异丙醇与水，搅拌后，加入相转移催化剂，于50℃～85℃水浴加热，搅拌，得到壳聚糖预催化溶液；
[0050]
s13：向壳聚糖预催化溶液中加入醚化剂，升温至50℃～80℃，反应，得到n-羟丁基壳聚糖粗产物；
[0051]
s14：用乙醇对n-羟丁基壳聚糖粗产物进行洗涤，并将ph值调节至6.5～7.5，得到n-羟丁基壳聚糖初产物；
[0052]
s15：对n-羟丁基壳聚糖初产物进行洗涤、透析后，于50℃～80℃进行真空干燥，得到n-羟丁基壳聚糖。
[0053]
具体的，优选步骤s11包括：将naoh溶于水中，冰水浴冷却至15℃～30℃，向其中加入壳聚糖，充分搅拌，优选搅拌时间为3～12小时，对壳聚糖进行蓬松处理，过滤后得到碱化壳聚糖；优选该步骤中naoh、水以及壳聚糖的质量比为1：1：1。
[0054]
进一步对壳聚糖进行预催化，具体的，向碱化壳聚糖中加入异丙醇和水，优选步骤s12中碱化壳聚糖、异丙醇与水的质量比为1：(2-10)：(2-15)，充分搅拌至碱化壳聚糖均匀分散，向其中加入相转移催化剂，优选相转移催化剂为十二烷基硫酸钠，于50℃～85℃水浴加热，充分搅拌，优选搅拌3～18h，得到壳聚糖预催化溶液。
[0055]
进一步制备羟烷基化壳聚糖，向壳聚糖预催化溶液中加入醚化剂，优选步骤s13中的醚化剂为1,2-环氧丁烷，并优选逐滴加入醚化剂，滴加速度20-80滴/s，升温至50℃～80℃，进行醚化反应，控制反应时间12h-36h，在c
2-nh2上引入羟丁基基团，得到n-羟丁基壳聚糖粗产物。
[0056]
为终止反应，用乙醇(优选质量分数为75％～100％)洗涤n-羟丁基壳聚糖粗产物，并用0.1mol/l～1mol/l的盐酸调节ph至6.5-7.5，得到n-羟丁基壳聚糖初产物。
[0057]
对产物进行纯化，本技术优选产物用无水乙醇或丙酮进行离心洗涤3-5次，用截留分子量为3000的透析袋在去离子水中透析24h-72h，透析结束后将产物真空干燥，温度50-80℃，得到n-羟丁基壳聚糖。
[0058]
本技术进一步通过n-羟丁基壳聚糖的羟基基团与醛类进行弱交联，以达到瞬时吸血，同时稳定血凝块，使材料充分凝胶化封闭止血的目的，另外通过n-羟丁基壳聚糖的温敏
性裹挟纳米级羟基磷灰石，形成稳定的成骨空间；具体的，本技术优选步骤s2包括：
[0059]
s21：将n-羟丁基壳聚糖与乙醇混合，n-羟丁基壳聚糖的质量浓度为1％-30％，，得到混悬液；
[0060]
s22：向混悬液中加入交联剂，搅拌交联后，抽滤，得到固化物；优选交联剂为乙二醛，并优选搅拌交联时间为1h～6h；
[0061]
s23：将固化物与醇混合清洗后，抽滤，干燥，得交联n-羟丁基壳聚糖；优选固化物与醇按1：1-5比例混合清洗2-5次，吸附多余交联剂，清洗后抽滤除去清洗液，30-55℃烘干或真空干燥，得交联n-羟丁基壳聚糖。
[0062]
为促进牙槽骨再生，本技术优选步骤s3包括：将交联n-羟丁基壳聚糖溶于二氯甲烷中，并加入羟基磷灰石，交联n-羟丁基壳聚糖与羟基磷灰石质量比为(5-20)：(0.1-3)，搅拌，得到静电纺丝液。
[0063]
本技术优选步骤s4中静电纺丝的工艺条件为：电压强度25kv，流速1.0ml/h，接收材料为铝箔纸，纺丝针头距离接收位置5cm～10cm。
[0064]
本技术通过静电纺丝形成的纳米纤维结构，能够有效引导新骨再生，促进拔牙窝中牙槽骨的形成。
[0065]
本发明的另一目的在于提供一种拔牙窝止血填充材料，该填充材料通过如上所述的拔牙窝止血填充材料的制备方法进行制备。
[0066]
本发明提供的拔牙窝止血填充材料，选择衍生化处理的天然高分子材料，进行梯度弱交联，实现瞬时止血，形成血凝块后凝胶化，封闭止血；同时通过衍生高分子材料的温敏特性裹挟羟基磷灰石，稳定成骨空间；通过静电纺丝形成纳米级纤维结构，有效引导新骨再生，促进拔牙窝中牙槽骨的形成，机械粉碎得到纳米颗粒，便于拔牙窝无死角填充。
[0067]
具体的，本技术通过在壳聚糖c
2-nh2上发生取代，引入羟丁基基团，获得富含羟丁基的n-羟丁基壳聚糖，通过n-羟丁基壳聚糖的羟基基团与醛类进行弱交联，以达到瞬时吸血，同时稳定血凝块，使材料充分凝胶化封闭止血的目的，另外通过n-羟丁基壳聚糖的温敏性裹挟纳米级羟基磷灰石，形成稳定的成骨空间；在实用性方面，通过静电纺丝工艺，得到能够引导骨再生的纳米微丝结构，机械粉碎后，增大接触面积，使得材料可任意塑形，满足无死角填充的性能。
[0068]
本发明提供的拔牙窝填充止血材料，不仅能够止血，同时具有引导骨再生的作用；其中止血作用不仅封堵创口达到外源性止血的作用，也能够聚集血液中血小板、白细胞等有效成分，促进损伤处血凝块的形成，激发内源性止血；血凝块与止血材料在创口处形成稳定的结构，达到快速凝血、稳定血凝块，保护拔牙窝创口的作用；同时可以促进细胞生长，促进成成骨细胞分化及骨小梁的形成，进而实现拔牙窝填充，防止拔牙处出现牙龈萎缩，是一种理想的拔牙窝止血填充材料。
[0069]
实施例1
[0070]
s11：将naoh溶于等质量的纯化水中，冰水浴冷却至20℃，加入等质量壳聚糖，充分搅拌5h，对壳聚糖进行蓬松处理，得到碱化壳聚糖；其中壳聚糖的脱乙酰度为85％，分子量为1200000da；
[0071]
s12：向5g碱化壳聚糖中加入10g异丙醇与40g纯化水(碱化壳聚糖：异丙醇：纯化水＝1:2:8)，60℃水浴加热，充分搅拌5h后加入0.1g十二烷基硫酸钠，继续搅拌3h，得到壳聚
糖预催化溶液；
[0072]
s13：向壳聚糖预催化溶液中逐滴加入1,2-环氧丁烷100ml，滴加速度50滴/s，60℃醚化反应12h，得到n-羟丁基壳聚糖粗产物；
[0073]
s14：用无水乙醇对n-羟丁基壳聚糖粗产物进行洗涤，然后用0.5m盐酸溶液调节ph至7，得到n-羟丁基壳聚糖初产物；
[0074]
s15：n-羟丁基壳聚糖初产物用无水乙醇再次清洗3次，用截留分子量为3000的透析袋在去离子水中透析48h，透析结束后产物于50℃真空干燥，得n-羟丁基壳聚糖；
[0075]
s21：将n-羟丁基壳聚糖分散在无水乙醇中，n-羟丁基壳聚糖的质量浓度为15％，搅拌30min，得到混悬液；
[0076]
s22：向混悬液中加质量分数0.03％的乙二醛，搅拌交联3h，抽滤，得到固化物；
[0077]
s23：加入固化物3倍重量的乙醇清洗3次，去除多余交联剂，清洗后抽滤除去无水乙醇，50℃真空干燥，得交联n-羟丁基壳聚糖；
[0078]
s3：将交联n-羟丁基壳聚糖溶于50ml二氯甲烷中，加入1g羟基磷灰石搅拌，得到静电纺丝液；
[0079]
s4：以静电纺丝液进行静电纺丝，调节电压及纺丝间距，在电压强度25kv，流速1.0ml/h条件下进行静电纺丝，用铝箔纸进行接收得到静电纺丝膜；
[0080]
s5：于35℃真空干燥静电纺丝膜，对静电纺丝膜进行机械粉碎，获得纳米纤维颗粒，得到拔牙窝止血填充材料。
[0081]
本实施例制备的拔牙窝止血填充材料的扫描电子显微镜图见图1所示。
[0082]
实施例2
[0083]
s11：将naoh溶于等质量的纯化水中，冰水浴冷却至15℃，加入等质量壳聚糖，充分搅拌3h，对壳聚糖进行蓬松处理，得到碱化壳聚糖；其中壳聚糖的脱乙酰度为85％，分子量为50000da；
[0084]
s12：向5g碱化壳聚糖中加入25g异丙醇与60g纯化水(碱化壳聚糖：异丙醇：纯化水＝1:5:12)，75℃水浴加热，充分搅拌2h后加入0.1g十二烷基硫酸钠，继续搅拌5h，得到壳聚糖预催化溶液；
[0085]
s13：向壳聚糖预催化溶液中逐滴加入1,2-环氧丁烷80ml，滴加速度20滴/s，80℃醚化反应15h，得到n-羟丁基壳聚糖粗产物；
[0086]
s14：用95％乙醇对n-羟丁基壳聚糖粗产物进行洗涤，然后用0.5m盐酸溶液调节ph至7，得到n-羟丁基壳聚糖初产物；
[0087]
s15：n-羟丁基壳聚糖初产物用无水乙醇再次清洗3次，用截留分子量为3000的透析袋在去离子水中透析65h，透析结束后产物于70℃真空干燥，得n-羟丁基壳聚糖；
[0088]
s21：将n-羟丁基壳聚糖分散在无水乙醇中，n-羟丁基壳聚糖的质量浓度为15％，搅拌50min，得到混悬液；
[0089]
s22：向混悬液中加质量分数0.05％的乙二醛，搅拌交联2h，抽滤，得到固化物；
[0090]
s23：加入固化物5倍重量的乙醇清洗3次，去除多余交联剂，清洗后抽滤除去无水乙醇，50℃真空干燥，得交联n-羟丁基壳聚糖；
[0091]
s3：将交联n-羟丁基壳聚糖溶于50ml二氯甲烷中，加入1g羟基磷灰石搅拌，得到静电纺丝液；
[0092]
s4：以静电纺丝液进行静电纺丝，调节电压及纺丝间距，在电压强度25kv，流速1.0ml/h条件下进行静电纺丝，用铝箔纸进行接收得到静电纺丝膜；
[0093]
s5：于40℃真空干燥静电纺丝膜，对静电纺丝膜进行机械粉碎，获得纳米纤维颗粒，得到拔牙窝止血填充材料。
[0094]
实施例3
[0095]
s11：将naoh溶于等质量的纯化水中，冰水浴冷却至30℃，加入等质量壳聚糖，充分搅拌12h，对壳聚糖进行蓬松处理，得到碱化壳聚糖；其中壳聚糖的脱乙酰度为90％，分子量为300000da；
[0096]
s12：向5g碱化壳聚糖中加入50g异丙醇与10g纯化水(碱化壳聚糖：异丙醇：纯化水＝1:10:2)，50℃水浴加热，充分搅拌2h后加入0.1g十二烷基硫酸钠，继续搅拌18h，得到壳聚糖预催化溶液；
[0097]
s13：向壳聚糖预催化溶液中逐滴加入1,2-环氧丁烷80ml，滴加速度80滴/s，50℃醚化反应36h，得到n-羟丁基壳聚糖粗产物；
[0098]
s14：用95％乙醇对n-羟丁基壳聚糖粗产物进行洗涤，然后用0.5m盐酸溶液调节ph至7，得到n-羟丁基壳聚糖初产物；
[0099]
s15：n-羟丁基壳聚糖初产物用无水乙醇再次清洗3次，用截留分子量为3000的透析袋在去离子水中透析12h，透析结束后产物于80℃真空干燥，得n-羟丁基壳聚糖；
[0100]
s21：将n-羟丁基壳聚糖分散在无水乙醇中，n-羟丁基壳聚糖的质量浓度为15％，搅拌50min，得到混悬液；
[0101]
s22：向混悬液中加质量分数0.05％的乙二醛，搅拌交联2h，抽滤，得到固化物；
[0102]
s23：加入固化物5倍重量的乙醇清洗3次，去除多余交联剂，清洗后抽滤除去无水乙醇，50℃真空干燥，得交联n-羟丁基壳聚糖；
[0103]
s3：将交联n-羟丁基壳聚糖溶于40ml二氯甲烷中，加入0.5g羟基磷灰石搅拌，得到静电纺丝液；
[0104]
s4：以静电纺丝液进行静电纺丝，调节电压及纺丝间距，在电压强度25kv，流速1.0ml/h条件下进行静电纺丝，用铝箔纸进行接收得到静电纺丝膜；
[0105]
s5：于40℃真空干燥静电纺丝膜，对静电纺丝膜进行机械粉碎，获得纳米纤维颗粒，得到拔牙窝止血填充材料。
[0106]
对比例1
[0107]
s1：将壳聚糖溶于50ml二氯甲烷中，加入1g羟基磷灰石搅拌，得到静电纺丝液；
[0108]
s4：以静电纺丝液进行静电纺丝，调节电压及纺丝间距，在电压强度25kv，流速1.0ml/h条件下进行静电纺丝，用铝箔纸进行接收得到静电纺丝膜；
[0109]
s5：于35℃真空干燥静电纺丝膜，对静电纺丝膜进行机械粉碎，获得纳米纤维颗粒，得到拔牙窝止血填充材料。
[0110]
对比例2
[0111]
s11：将naoh溶于等质量的纯化水中，冰水浴冷却至20℃，加入等质量壳聚糖，充分搅拌5h，对壳聚糖进行蓬松处理，得到碱化壳聚糖；其中壳聚糖的脱乙酰度为85％，分子量为1200000da；
[0112]
s12：向5g碱化壳聚糖中加入10g异丙醇与40g纯化水(碱化壳聚糖：异丙醇：纯化水
＝1:2:8)，60℃水浴加热，充分搅拌5h后加入0.1g十二烷基硫酸钠，继续搅拌3h，得到壳聚糖预催化溶液；
[0113]
s13：向壳聚糖预催化溶液中逐滴加入1,2-环氧丁烷100ml，滴加速度50滴/s，60℃醚化反应12h，得到n-羟丁基壳聚糖粗产物；
[0114]
s14：用无水乙醇对n-羟丁基壳聚糖粗产物进行洗涤，然后用0.5m盐酸溶液调节ph至7，得到n-羟丁基壳聚糖初产物；
[0115]
s15：n-羟丁基壳聚糖初产物用无水乙醇再次清洗3次，用截留分子量为3000的透析袋在去离子水中透析48h，透析结束后产物于50℃真空干燥，得n-羟丁基壳聚糖；
[0116]
s21：将n-羟丁基壳聚糖分散在无水乙醇中，n-羟丁基壳聚糖的质量浓度为15％，，搅拌30min，得到混悬液；
[0117]
s22：向混悬液中加质量分数0.03％的乙二醛，搅拌交联3h，抽滤，得到固化物；
[0118]
s23：加入固化物3倍重量的乙醇清洗3次，去除多余交联剂，清洗后抽滤除去无水乙醇，50℃真空干燥，得交联n-羟丁基壳聚糖；
[0119]
s3：将交联n-羟丁基壳聚糖溶于50ml二氯甲烷中，得到静电纺丝液；
[0120]
s4：以静电纺丝液进行静电纺丝，调节电压及纺丝间距，在电压强度25kv，流速1.0ml/h条件下进行静电纺丝，用铝箔纸进行接收得到静电纺丝膜；
[0121]
s5：于35℃真空干燥静电纺丝膜，对静电纺丝膜进行机械粉碎，获得纳米纤维颗粒，得到拔牙窝止血填充材料。
[0122]
试验例1
[0123]
分别对各实施例及对比例止血材料的吸液倍率、吸液时间、弹性模量、粘性模量进行检测对比，测试数据详见表1所示：
[0124]
表1
[0125][0126][0127]
从上述数据看出，本发明各实施例制备的止血填充材料均具有较好的吸液性能；通过弹性模量与粘性模量可以看出材料止血后形成的凝胶对拔牙窝填塞牢固，从而证明本发明提供的止血填充材料既能够瞬时吸血，形成凝胶封闭止血，同时温敏形成稳固凝胶，裹挟羟基磷灰石，形成稳定成骨空间。
[0128]
对比例1提供的止血填充材料，与实施例1相比，未对壳聚糖进行化学改性，制备的止血填充材料仅维持壳聚糖本身所带吸液性能，无支撑性也不能起到封闭拔牙窝的功能。
[0129]
对比例2提供的止血填充材料，与实施例1相比，未添加羟基磷灰石，制备的止血填充材料在吸液能力及支撑性和封堵效果无明显差异，但是未添加羟基磷灰石，无法起到引
导骨再生的作用。
[0130]
试验例2：细胞毒试验
[0131]
将各实施例、对比例、阴性对照(聚乙烯，按照每6cm2阴性对照加1ml细胞培养液的比例，在60rpm条件下37℃浸提24h)、阳性对照(10％dmso溶液，现用现配)的浸提液及介质对照分别置于l929小鼠成纤维细胞(mef)的细胞培养板孔内培养，在5％co2，37℃细胞培养行中培养，运用mtt法进行评价，结果详见表2所示。
[0132]
在本次实验条件下，试验样品组细胞存活率均超过90％，试验样品组细胞毒性小，无潜在细胞毒性。
[0133]
表2
[0134][0135][0136]
试验例3：红外表征
[0137]
将壳聚糖及实施例1的n-羟丁基壳聚糖样品研碎后，采用kbr压片法，制成薄膜圆片，傅里叶变换红外光谱仪在波长400-4000cm-1范围内对样品进行结果分析，得红外光谱图，见图2所示。
[0138]
从图2可以看出，壳聚糖改性后3363cm-1
处的强峰依然保留，这归属于-oh的伸缩振动吸收峰和n-h的伸缩振动吸收峰的叠加；在2890cm-1
和1461cm-1
处出现明显的新的吸收峰，分别是c-h的伸缩振动和不对称形变，说明改性后增加了-ch3、-ch2，即引入羟丁基基团，在1000-1200cm-1
范围内吸收峰无明显变化，这是因为c
6-oh和c
4-oh未发生取代，吸收峰也没有明显增强或减弱，壳聚糖在1461cm-1
处的c-n吸收峰发生变化，表明反应发生在c
2-nh2上。
[0139]
虽然本公开披露如上，但本公开的保护范围并非仅限于此。本领域技术人员，在不脱离本公开的精神和范围的前提下，可进行各种变更与修改，这些变更与修改均将落入本发明的保护范围。